相互作用的一種檢測(cè)方法。
[0027] 本發(fā)明還公開了一種藥物組合物，其包括式（I)臭椿酮化合物或其水合物或藥學(xué) 上可接受的鹽或藥學(xué)上可接受的載體。
[0028] 本發(fā)明還公開了式（I)臭椿酮化合物或其水合物或藥學(xué)上可接受的鹽或藥學(xué)上 可接受的載體、以及含有式（I)臭椿酮化合物的組合物在制備治療與雄激素受體突變和異 常擴(kuò)增相關(guān)的惡性腫瘤疾病的藥物中的應(yīng)用。
[0029] 本發(fā)明中，所述惡性腫瘤為雄激素受體異常擴(kuò)增和突變的惡性腫瘤，包括前列腺 癌、乳腺癌、肺癌、結(jié)腸癌、腦癌、皮膚癌、膀胱癌、腎癌等。
[0030] 本發(fā)明通過(guò)雄激素受體熒光素酶報(bào)告基因方法從多種中草藥單體中篩選得到了 臭椿酮（Ailanthone)。臭椿酮，又名臭椿苦酮，分子式：C2qH24O7,分子量：376. 405,CAS登錄 號(hào)：981-15-7,主要存在于苦木科植物臭椿Ailanthusaltissima(Mill.)Swingle的種子、 根皮、樹皮中?，F(xiàn)代研究表明，臭椿酮具有抗阿米巴痢、抗瘧疾、抗?jié)兊茸饔茫ㄒ环N臭椿酮 的制備方法，中華人民共和國(guó)專利，專利號(hào)：201010170495. 4)。但是至今尚沒(méi)有臭椿酮可以 抗前列腺癌的報(bào)道。本發(fā)明從體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)證明該化合物能夠有效抑制前列腺癌細(xì)胞的生長(zhǎng) 和轉(zhuǎn)移。與上述兩種FDA最新批準(zhǔn)的抗前列腺癌藥物相比的優(yōu)點(diǎn)在于：本發(fā)明應(yīng)用中所采 用的化合物臭椿酮來(lái)源廣泛，提取該化合物的臭椿樹在我國(guó)廣泛存在，并且所屬中藥已納 入《中國(guó)藥典》，我國(guó)民間使用多年，具有研發(fā)中成藥（復(fù)方）的潛能。其次，目前臨床上的 藥物對(duì)于雄激素受體突變的前列腺癌細(xì)胞療效不佳，而實(shí)驗(yàn)證明本發(fā)明應(yīng)用中所采用的化 合物對(duì)耐MDV3100的前列腺癌細(xì)胞仍具有很好的殺傷效果，說(shuō)明對(duì)于MDV3100治療無(wú)效的 前列腺癌，應(yīng)用本發(fā)明則仍然有效。此外，本發(fā)明應(yīng)用中所采用的化合物機(jī)理比較明確，揭 示了該化合物抗前列腺癌的分子機(jī)制，實(shí)驗(yàn)表明該化合物在低濃度（〈1PM)能顯著抑制前 列腺癌細(xì)胞的體外生長(zhǎng)和遷移；在小鼠動(dòng)物模型中，劑量為2mg/kg的該小分子單體化合物 能有效抑制前列腺癌細(xì)胞體內(nèi)生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移，實(shí)驗(yàn)證明臭椿酮能夠抑制雄激素受體與分子伴 侶Hsp90的結(jié)合，并誘導(dǎo)雄激素受體的降解而下調(diào)雄激素受體的蛋白水平，抑制下游基因 的表達(dá)，抑制雄激素受體信號(hào)通路，從而實(shí)現(xiàn)抑制前列腺癌的目的。目前我國(guó)前列腺癌用藥 基本依賴于進(jìn)口藥物，而本發(fā)明在前列腺癌治療方面取得的新突破，正是成功填補(bǔ)了國(guó)內(nèi) 該領(lǐng)域的空白。
【附圖說(shuō)明】
[0031] 圖1所示為熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)各前列腺癌細(xì)胞株中式（I)臭椿酮對(duì)雄激素受 體活性的抑制效果。
[0032] 圖I(A)表示式（I)臭椿酮在前列腺癌細(xì)胞LNCaP中抑制雙氫睪酮（DHT)所誘導(dǎo) 的雄激素受體（AR)轉(zhuǎn)錄活性。
[0033] 圖I(B)表示式（I)臭椿酮在前列腺癌細(xì)胞22RV1中抑制雙氫睪酮（DHT)所誘導(dǎo) 的雄激素受體（AR)轉(zhuǎn)錄活性。
[0034] 圖I(C)表示式（I)臭椿酮在前列腺癌細(xì)胞LAPC4中抑制雙氫睪酮（DHT)所誘導(dǎo) 的雄激素受體轉(zhuǎn)錄活性。
[0035] 圖I(D)表示式⑴臭椿酮在前列腺癌細(xì)胞PC3(轉(zhuǎn)染了外源野生型雄激素受體 AR)中抑制雙氫睪酮（DHT)所誘導(dǎo)的雄激素受體轉(zhuǎn)錄活性。
[0036] 圖I(E)表示式⑴臭椿酮在前列腺癌細(xì)胞22RV1中抑制缺失配體結(jié)構(gòu)域的雄激 素受體（AR1 651)所誘導(dǎo)的雄激素受體（AR)轉(zhuǎn)錄活性。
[0037] 圖2所示為式（I)臭椿酮對(duì)各前列腺癌細(xì)胞株增殖活性的抑制效果。
[0038] 圖2 (A)表示式⑴臭椿酮抑制前列腺癌細(xì)胞LNCaP增殖活性。
[0039] 圖2 (B)表示式（I)臭椿酮抑制前列腺癌細(xì)胞22RV1增殖活性。
[0040] 圖2 (C)表示式（I)臭椿酮抑制前列腺癌細(xì)胞DU145增殖活性。
[0041] 圖2 (D)表示式（I)臭椿酮抑制前列腺癌細(xì)胞PC3增殖活性。
[0042] 圖2(E)表示式（I)臭椿酮抑制前列腺癌病人原代細(xì)胞增殖活性。
[0043] 圖3所示為式（I)臭椿酮對(duì)各前列腺癌細(xì)胞株克隆形成的抑制效果。
[0044] 圖3 (A)表示式（I)臭椿酮抑制前列腺癌細(xì)胞PC3、DU145、LNCaP、22RVl克隆形成 效果圖。
[0045] 圖3 (B)表示式（I)臭椿酮抑制前列腺癌細(xì)胞PC3克隆形成統(tǒng)計(jì)圖。
[0046] 圖3 (C)表示式（I)臭椿酮抑制前列腺癌細(xì)胞DU145克隆形成統(tǒng)計(jì)圖。
[0047] 圖3(D)表示式（I)臭椿酮抑制前列腺癌細(xì)胞22RV1克隆形成統(tǒng)計(jì)圖。
[0048] 圖3 (E)表示式⑴臭椿酮抑制前列腺癌細(xì)胞LNCaP克隆形成統(tǒng)計(jì)圖。
[0049] 圖4所示為式⑴臭椿酮對(duì)各前列腺癌細(xì)胞株增殖抑制敏感性的比較。
[0050] 圖4(A)表示式⑴臭椿酮對(duì)雄激素受體表達(dá)陰性細(xì)胞株（PC3、DU145、WPMY-1)和 雄激素受體表達(dá)陽(yáng)性株（LNCaP、22RVl、LAPC4、c4-2b)增殖活性抑制效果比較。
[0051]圖4 (B)表示式⑴臭椿酮對(duì)前列腺正常細(xì)胞（WPMY-I)、雄激素受體表達(dá)陰性前列 腺癌細(xì)胞（PC3)和雄激素受體表達(dá)陽(yáng)性前列腺癌細(xì)胞（LNCaP)細(xì)胞形態(tài)影響效果比較。
[0052] 圖4(C)表示式⑴臭椿酮對(duì)雄激素受體表達(dá)陰性前列腺癌細(xì)胞株（PC3、DU145) 和雄激素受體表達(dá)陽(yáng)性前列腺癌細(xì)胞株（LNCaP、22RVl)克隆形成抑制效果比較（統(tǒng)計(jì)圖）。
[0053] 圖4(D)表示式⑴臭椿酮對(duì)雄激素受體表達(dá)陰性前列腺癌細(xì)胞株（PC3、DU145) 和雄激素受體表達(dá)陽(yáng)性前列腺癌細(xì)胞株（LNCaP、22RVl)克隆形成抑制效果比較（形態(tài)圖）。
[0054] 圖5所示為式（I)臭椿酮對(duì)圖列中前列腺癌細(xì)胞22RV1細(xì)胞凋亡促進(jìn)效果。
[0055] 圖6所示為式⑴臭椿酮對(duì)圖列中前列腺癌細(xì)胞遷移、浸潤(rùn)影響。
[0056] 圖6 (A和B)表示式（I)臭椿酮抑制前列腺癌細(xì)胞株P(guān)C3M細(xì)胞遷移效果。
[0057] 圖6 (C和D)表示式（I)臭椿酮抑制前列腺癌細(xì)胞株DU145細(xì)胞侵襲效果。
[0058] 圖6 (E和F)表示式（I)臭椿酮抑制前列腺癌細(xì)胞株LNCaP細(xì)胞侵襲效果。
[0059] 圖7所示為式（I)臭椿酮對(duì)雄激素受體表達(dá)及其靶基因表達(dá)的影響。
[0060] 圖7 (A)表示式（I)臭椿酮抑制前列腺癌細(xì)胞株LNCaP和22RV1細(xì)胞中雄激素受 體蛋白水平效果。
[0061] 圖7(B)表示式⑴臭椿酮抑制在雄激素R1881刺激的條件下的前列腺癌細(xì)胞株 LNCaP、22RVl和c4-2b細(xì)胞中雄激素蛋白水平效果。
[0062]圖7(C)表示式（I)臭椿酮抑制雄激素受體下游靶基因效果。
[0063] 圖8所示為式（I)臭椿酮下調(diào)雄激素受體的作用機(jī)理。
[0064] 圖8 (A)表示式（I)臭椿酮抑制雄激素受體下游基因PSA的同時(shí)對(duì)本身mRNA抑制 效果并不顯著。
[0065]圖8 (B)表示式（I)臭椿酮影響雄激素受體蛋白穩(wěn)定性效果。
[0066]圖8 (C)表示式⑴臭椿酮對(duì)雄激素受體蛋白水平的下降被蛋白酶體抑制劑MG132 所抑制。
[0067]圖8 (D)表示式⑴臭椿酮誘導(dǎo)雄激素受體蛋白泛素化。
[0068] 圖8 (E)表示式（I)臭椿酮阻斷雄激素受體與其分子伴侶HSP90、HSP70之間的結(jié) 合。
[0069]圖9所示為式⑴臭椿酮在體內(nèi)對(duì)前列腺癌細(xì)胞株生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移的抑制效果。
[0070]圖9 (A)和⑶表示式⑴臭椿酮在小鼠動(dòng)物模型中抑制比卡魯胺 (bicalutamide)耐藥性前列腺癌細(xì)胞22RV1生長(zhǎng)效果。
[0071] 圖9(C)和⑶表示式⑴臭椿酮在小鼠動(dòng)物模型中抑制比卡魯胺 (bicalutamide)敏感性前列腺癌細(xì)胞LNCaP生長(zhǎng)效果。
[0072] 圖9 (E)和（F)表示式（I)臭椿酮在小鼠動(dòng)物模型中抑制前列腺癌細(xì)胞LNCaP轉(zhuǎn) 移效果。
[0073] 圖9(G)表示式⑴臭椿酮和比卡魯胺對(duì)小鼠體重的影響。
[0074] 圖10所示為式⑴臭椿酮在體內(nèi)對(duì)去勢(shì)抵抗性前列腺癌細(xì)胞株生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移的抑 制效果。
[0075] 圖10(A)和（B)表示式（I)臭椿酮在去勢(shì)小鼠模型抑制比卡魯胺耐藥的前列腺癌 細(xì)胞22RV1生長(zhǎng)的效果。
[0076] 圖10(C)和（D)表示式（I)臭椿酮在去勢(shì)小鼠模型抑制比卡魯胺耐藥的前列腺癌 細(xì)胞22RV1轉(zhuǎn)移的效果。
【具體實(shí)施方式】
[0077] 結(jié)合以下具體實(shí)施例和附圖，對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的詳細(xì)說(shuō)明，本發(fā)明的保護(hù)內(nèi)容 不局限于以下實(shí)施例。在不背離發(fā)明構(gòu)思的精神和范圍下，本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠想到的變 化和優(yōu)點(diǎn)都被包括在本發(fā)明中，并且以所附的權(quán)利要求書為保護(hù)范圍。實(shí)施本發(fā)明的過(guò)程、 條件、試劑、實(shí)驗(yàn)方法等，除以下專門提及的內(nèi)容之外，均為本領(lǐng)域的普遍知識(shí)和公知常識(shí)， 本發(fā)明沒(méi)有特別限制內(nèi)容。
[0078]實(shí)施例1 :式⑴臭椿酮體外抑制雄激素受體的轉(zhuǎn)錄活性[0079] 技術(shù)方法：
[0080] 1 ?細(xì)胞的培養(yǎng)
[0081] 本實(shí)驗(yàn)中所用細(xì)胞購(gòu)自中科院上海細(xì)胞庫(kù)，部分細(xì)胞來(lái)自上海市調(diào)控生物學(xué)重點(diǎn) 實(shí)驗(yàn)室翁杰敏教授實(shí)驗(yàn)室；另有一株細(xì)胞來(lái)自于第