專利名稱：從中藥黃連中分離純化單體化合物的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于化工領(lǐng)域，具體是涉及一種從中藥黃連中分離純化單體化合物(表小檗堿、黃連堿、巴馬汀和小檗堿)的方法。
背景技術(shù)：
黃連是毛茛科植物黃連、三角葉黃連或云連的干燥根莖，三者分別習(xí)稱“味連”、 “雅連”、“云連”，為著名常用中藥，在方劑中的應(yīng)用頻率非常高。黃連苦、寒、歸心、脾、胃、 肝、膽、大腸經(jīng)，具有清熱燥濕、瀉火解毒的功效。黃連藥材的主要成分是生物堿，其中所含的生物堿主要有小檗堿、巴馬汀、黃連堿、表小檗堿和藥根堿等小檗堿型生物堿?，F(xiàn)已有文獻(xiàn)報道從黃連中提取純化生物堿成分的方法。楊異卉等[黃連化學(xué)成分的分離與鑒定，黑龍江醫(yī)藥，2009年04期]用多種色譜手段對黃連中的化學(xué)成分進(jìn)行分離，根據(jù)理化性質(zhì)和光譜數(shù)據(jù)進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定，從黃連中分離得到小檗堿，coptisin, 巴馬汀。席國萍等[大孔吸附樹脂分離純化黃連小檗堿研究，中國醫(yī)藥導(dǎo)報，2011年 05期]選用DlOl大孔吸附樹脂，先水洗除雜，再用4 5倍樹脂體積的60%乙醇洗脫，濃縮干燥，得到小檗堿的含量為30.0 和產(chǎn)品。劉朝亮等[高速逆流色譜法制備巖黃連中的脂溶性生物堿，時珍國醫(yī)國藥，2010年11期]采用正己烷-醋酸乙酯-甲醇-水(3 7 5 5;1.5 5 1.5 5)、正己烷-醋酸乙酯-甲醇-0. 2 mol/L鹽酸 (1 3.5 2.5 4.5)，上相作固定相，下相作流動相，用高速逆流色譜法對巖黃連中的脂溶性生物堿進(jìn)行制備分離，從巖黃連的醋酸乙酯粗提物中得到Cheilan-thifoline (純 it :76. 1%)> Thalictrifoline( ^ & :83. 1%) > Tetrahydropalmatine ( ^ & 85. 5%) > Cana-dine (純度78. 5%) 4個純度較高的脂溶性生物堿。褚建軍等[制備型高速逆流色譜分離中藥中的生物堿，浙江工業(yè)大學(xué)學(xué)報，2006年01期]以氯仿甲醇0. 1 mol/ L稀鹽酸=2 1 1為溶劑體系，用高速逆流色譜從黃連中分離得到巴馬汀、小檗堿、表小檗堿、黃連堿。近年來也出現(xiàn)了一些有關(guān)制備黃連生物堿單體成分的專利文獻(xiàn)?！饵S連堿的提取方法》(中國專利，申請?zhí)?00910191620. 7)公開了一種黃連堿的提取方法，以黃連作為原料，結(jié)合黃連生物堿中各種成分的物理化學(xué)特性，在小檗堿提取的基礎(chǔ)上，進(jìn)一步通過層析操作實現(xiàn)藥根堿、黃連堿和巴馬汀的有效分離，制得的產(chǎn)品中黃連堿純度可達(dá)90%以上?！兑环N黃連堿單體的分離純化方法》(中國專利，申請?zhí)?00910311352. 8)公開了一種黃連堿單體的分離純化方法，包括提取、濃縮、萃取、溶解過濾、高效制備液相色譜分離、 產(chǎn)品回收等步驟，得到黃連堿?！兑环N黃連中主要生物堿的提取方法》(中國專利，申請?zhí)?201010M6611.6)公開了一種黃連中主要生物堿的提取方法，提取步驟包括提取黃連滲漉液、酸性條件下初提生物堿、初提生物堿母液上大孔樹脂除雜得到生物堿混合物、生物堿混合物上色譜柱粗分離和結(jié)晶分離精制；反相色譜柱在常壓條件下分離，得到鹽酸藥根堿、鹽酸表小檗堿、鹽酸黃連堿和鹽酸巴馬汀。上述各種方法或僅能得到單一成分產(chǎn)品，或得到的產(chǎn)品純度較低，或使用對環(huán)境和人體有害的溶劑體系，或溶劑體系比較復(fù)雜，有的生產(chǎn)成本較高，生產(chǎn)規(guī)模較小，不能滿足市場需求。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種操作簡便、綠色環(huán)保、分離量大、綜合成本低、生產(chǎn)周期短的快速從中藥黃連中分離純化表小檗堿、黃連堿、巴馬汀和小檗堿的方法。本發(fā)明從中藥黃連中分離純化表小檗堿、黃連堿、巴馬汀和小檗堿的方法，是以黃連為原料，經(jīng)過下述步驟(1)粗提取物浸膏的制備；(2)酸溶堿沉預(yù)分離；(3)高速逆流色譜純化，得純度在98 %以上的表小檗堿、黃連堿、巴馬汀和小檗堿。所述步驟(1)粗提取物浸膏的制備①將粉碎好的黃連，加2-20倍量(質(zhì)量)的 40-95% (質(zhì)量濃度)乙醇，回流30-120分鐘(優(yōu)選的，加2. 5-15倍量(質(zhì)量)的52-83% (質(zhì)量濃度)乙醇，回流30-120分鐘)，分離殘渣和提取液；②將上述殘渣再加2-10倍(質(zhì)量)的 40-95% (質(zhì)量濃度)乙醇回流2次，每次回流提取20-100分鐘，分離殘渣和提取液；③合并上述3次回流所得提取液，減壓蒸餾回收乙醇，得黃連粗提取物浸膏。所述步驟(2)酸溶堿沉預(yù)分離①將黃連粗提取物浸膏以10-100倍量(質(zhì)量)的 0. 1-10% (質(zhì)量濃度)的鹽酸溶解，靜置2-4 后過濾除去沉淀，得到溶液；②將上述溶液用氨水調(diào)pH至8-10，向其中加入碳酸鈉至碳酸鈉濃度為0. 2-10%(質(zhì)量濃度)，靜置12-4 后過濾得沉淀(優(yōu)選的，向其中加入碳酸鈉至碳酸鈉濃度為0. 25-8%(質(zhì)量濃度)，靜置12-3 后過濾得沉淀)，將沉淀晾干，即得黃連生物堿粗提物。所述步驟(3)高速逆流色譜純化以正丁醇-磷酸鹽緩沖液為溶劑系統(tǒng)，將步驟 (2)得到的黃連生物堿粗提物用高速逆流色譜法進(jìn)行純化，分別收集不同餾分，即得表小檗堿、黃連堿、巴馬汀和小檗堿。較為優(yōu)選的方案是所述步驟(1)粗提取物浸膏的制備①將粉碎好的黃連，加 3-10倍量的55-85%乙醇，回流60-120分鐘，分離殘渣和提取液；②將上述殘渣再加3_10倍的55-85%乙醇回流2次，每次回流提取40-60分鐘，分離殘渣和提取液；③合并上述3次回流所得提取液，減壓蒸餾回收乙醇，得黃連粗提取物浸膏。更優(yōu)選的方案是所述步驟(1) 粗提取物浸膏的制備①將粉碎好的黃連，加10倍量的60%乙醇，回流60分鐘，離心或過濾分離殘渣和提取液；②將上述殘渣再加8倍的60%乙醇回流2次，每次回流提取40分鐘，離心或過濾分離，得殘渣和提取液；③合并上述3次回流所得提取液，減壓蒸餾回收乙醇，得黃連粗提取物浸膏。較為優(yōu)選的方案是所述步驟(2)酸溶堿沉預(yù)分離①將黃連粗提取物浸膏以 15-50倍量的0. 5-5%的鹽酸溶解，靜置12-3 后過濾除去沉淀，得到溶液；②將上述溶液用氨水調(diào)PH至8-10，向其中加入碳酸鈉至碳酸鈉濃度為0. 5-5%，靜置12-3 后過濾得沉淀，將沉淀晾干，即得黃連生物堿粗提物。更加優(yōu)選的方案是所述步驟(2)酸溶堿沉預(yù)分離①將黃連粗提取物浸膏以20倍量的1%的鹽酸溶解，靜置24h后過濾除去沉淀，得到溶液；②將上述溶液用氨水調(diào)PH至9，向其中加入碳酸鈉至碳酸鈉濃度為2%，靜置24h后過濾得沉淀，將沉淀晾干，即得黃連生物堿粗提物。前面所述的方法，優(yōu)選的方案在于所述正丁醇-磷酸鹽緩沖液溶劑系統(tǒng)是，固定相為正丁醇，流動相為PH在5. 5-9. 0之間的磷酸鹽緩沖溶液(優(yōu)選的，所述流動相為pH在 7. 0-8. 5之間的磷酸鹽緩沖溶液)，采用單一 pH值緩沖溶液洗脫或采用不同pH緩沖溶液梯度洗脫。本發(fā)明的方法與現(xiàn)有分離純化黃連生物堿成分的方法相比，具有如下優(yōu)勢
(1)本發(fā)明以乙醇提取黃連藥材中的生物堿，以酸溶堿沉預(yù)分離，以高速逆流色譜進(jìn)行純化，工藝過程綠色環(huán)保，對環(huán)境無嚴(yán)重危害。(2)本發(fā)明操作簡單，分離純化的工藝周期短，節(jié)省試劑，洗脫劑可回收重復(fù)利用， 降低了生產(chǎn)成本，所制備的表小檗堿、黃連堿、巴馬汀和小檗堿純度高，經(jīng)HPLC分析達(dá)98% 以上，可作為對照品使用。(3)本發(fā)明酸溶堿沉預(yù)分離的方法除去了大量非生物堿雜質(zhì)，大大提高了后續(xù)的分離效率。(4)表小檗堿、黃連堿、巴馬汀和小檗堿具有不同的堿性和極性，本發(fā)明通過改變?nèi)芤旱腜H值來改變它們的存在形態(tài)，從而調(diào)整表小檗堿、黃連堿、巴馬汀和小檗堿在有機(jī)溶劑中的分配，實現(xiàn)其分離。利用PH梯度洗脫，可以保證有更好的分離效果，同時還可以縮短分離時間。(5)本發(fā)明采用單一有機(jī)溶劑與無機(jī)鹽緩沖溶液組成高速逆流色譜的溶劑系統(tǒng)進(jìn)行表小檗堿、黃連堿、巴馬汀和小檗堿的分離純化，有機(jī)溶劑易于回收，成本低，對環(huán)境無不利影響。


圖1是實施例6經(jīng)酸溶堿沉預(yù)分離后得到的黃連提取物的高效液相色譜圖。圖2是實施例6采用正丁醇為固定相，用pH=8. 0的磷酸鹽緩沖液和pH=6. 3的磷酸鹽緩沖液進(jìn)行梯度洗脫時的高速逆流色譜分離純化黃連提取物的高速逆流色譜圖。圖3是實施例6分離純化得到的表小檗堿的高效液相色譜圖。圖4是實施例6分離純化得到的黃連堿的高效液相色譜圖。圖5是實施例6分離純化得到的巴馬汀的高效液相色譜圖。圖6是實施例6分離純化得到的小檗堿的高效液相色譜圖。
具體實施例方式下面結(jié)合實施例和附圖詳細(xì)說明本發(fā)明的技術(shù)方案，但保護(hù)范圍不被此限制。實施例中所用設(shè)備或原料皆可從市場獲得。所用正丁醇購自天津試劑四廠，磷酸鹽緩沖液采用磷酸二氫鈉和磷酸氫二鈉(購自天津試劑四廠)配制。本發(fā)明從黃連中分離純化表小檗堿、黃連堿、巴馬汀和小檗堿的方法，是以黃連為原料，經(jīng)過下述步驟(1)粗提取物浸膏的制備；(2 )酸溶堿沉預(yù)分離；(3 )高速逆流色譜純化，得純度在98 %以上的表小檗堿、黃連堿、巴馬汀和小檗堿。實施例1
取粉碎好的黃連藥材500g，加人8L 40%的乙醇，加熱回流120分鐘，分離殘渣和提取液；將殘渣再加6L 40%乙醇回流2次，每次回流90分鐘，分離殘渣和提取液；合并上述3次回流所得提取液，減壓蒸餾回收乙醇，得黃連粗提取物浸膏。
將黃連粗提取物浸膏以0. 2L的8. 0%的鹽酸溶解，靜置3 后過濾除去沉淀，得到溶液；將上述溶液用氨水調(diào)PH至8，向其中加入碳酸鈉至碳酸鈉濃度為4%，靜置24h后過濾得沉淀，將沉淀晾干，即得黃連生物堿粗提物。采用正丁醇-磷酸鹽緩沖液為高速逆流色譜兩相溶劑系統(tǒng)分離純化黃連提取物， 固定相為正丁醇，流動相為PH=8. 5的磷酸鹽緩沖液。根據(jù)色譜圖收集相應(yīng)峰組分，調(diào)pH為 9.0，用正丁醇萃取，回收正丁醇，即可得到相應(yīng)高純度化合物。經(jīng)1H-NMR和13C-NMR鑒定， 所得單體化合物分別為表小檗堿、黃連堿、巴馬汀和小檗堿。經(jīng)色譜面積歸一化法計算，表小檗堿純度為98. 1%，黃連堿純度為99. 0%，巴馬汀純度為98. 3%，小檗堿純度為99. 1%。實施例2
取粉碎好的黃連藥材500g，加人6L 55%的乙醇，加熱回流90分鐘，分離殘渣和提取液； 將殘渣再加6L 55%乙醇回流2次，每次回流50分鐘，分離殘渣和提取液；合并上述3次回流所得提取液，減壓蒸餾回收乙醇，得黃連堿粗提取物浸膏。將黃連粗提取物浸膏以0. 3L的5. 0%的鹽酸溶解，靜置3 后過濾除去沉淀，得到溶液；將上述溶液用氨水調(diào)PH至10，向其中加入碳酸鈉至碳酸鈉濃度為0. 5%，靜置3 后過濾得沉淀，將沉淀晾干，即得黃連生物堿粗提物。采用正丁醇-磷酸鹽緩沖液為高速逆流色譜兩相溶劑系統(tǒng)分離純化黃連提取物， 固定相為正丁醇，流動相為PH=8.0的磷酸鹽緩沖液。根據(jù)色譜圖收集相應(yīng)峰組分，調(diào)pH為 9.0，用正丁醇萃取，回收正丁醇，即可得到相應(yīng)高純度化合物。經(jīng)1H-NMR和13C-NMR鑒定， 所得單體化合物分別為表小檗堿、黃連堿、巴馬汀和小檗堿。經(jīng)色譜面積歸一化法計算，表小檗堿純度為99. 1%，黃連堿純度為98. 2%，巴馬汀純度為98. 8%，小檗堿純度為99. 4%。實施例3
取粉碎好的黃連藥材500g，加人3L 80%的乙醇，加熱回流80分鐘，分離殘渣和提取液； 將殘渣再加3L 80%乙醇回流2次，每次回流50分鐘，分離殘渣和提取液；合并上述3次回流所得提取液，減壓蒸餾回收乙醇，得黃連堿粗提取物浸膏。將黃連粗提取物浸膏以2. OL的0. 4%的鹽酸溶解，靜置1 后過濾除去沉淀，得到溶液；將上述溶液用氨水調(diào)PH至8，向其中加入碳酸鈉至碳酸鈉濃度為0. 4%，靜置24h后過濾得沉淀，將沉淀晾干，即得黃連生物堿粗提物。采用正丁醇-磷酸鹽緩沖液為高速逆流色譜兩相溶劑系統(tǒng)分離純化黃連提取物， 固定相為正丁醇，流動相為PH=7. 5的磷酸鹽緩沖液。根據(jù)色譜圖收集相應(yīng)峰組分，調(diào)pH為 9.0，用正丁醇萃取，回收正丁醇，即可得到相應(yīng)高純度化合物。經(jīng)1H-NMR和13C-NMR鑒定， 所得單體化合物分別為表小檗堿、黃連堿、巴馬汀和小檗堿。經(jīng)色譜面積歸一化法計算，表小檗堿純度為99. 2%，黃連堿純度為98. 7%，巴馬汀純度為98. 7%，小檗堿純度為98. 9%。實施例4
取粉碎好的黃連藥材500g，加人4L 75%的乙醇，加熱回流70分鐘，分離殘渣和提取液； 將殘渣再加4L 75%乙醇回流2次，每次回流45分鐘，分離殘渣和提取液；合并上述3次回流所得提取液，減壓蒸餾回收乙醇，得黃連堿粗提取物浸膏。將黃連粗提取物浸膏以0. 35L的4. 0%的鹽酸溶解，靜置1 后過濾除去沉淀，得到溶液；將上述溶液用氨水調(diào)PH至10，向其中加入碳酸鈉至碳酸鈉濃度為3%，靜置3 后過濾得沉淀，將沉淀晾干，即得黃連生物堿粗提物。
采用正丁醇-磷酸鹽緩沖液為高速逆流色譜兩相溶劑系統(tǒng)分離純化黃連提取物， 固定相為正丁醇，流動相為PH=7. 5的磷酸鹽緩沖液。根據(jù)色譜圖收集相應(yīng)峰組分，調(diào)pH為 9.0，用正丁醇萃取，回收正丁醇，即可得到相應(yīng)高純度化合物。經(jīng)1H-NMR和13C-NMR鑒定， 所得單體化合物分別為表小檗堿、黃連堿、巴馬汀和小檗堿。經(jīng)色譜面積歸一化法計算，表小檗堿純度為99. 1%，黃連堿純度為98. 8%，巴馬汀純度為98. 8%，小檗堿純度為98. 8%。實施例5
取粉碎好的黃連藥材500g，加人4L 70%的乙醇，加熱回流45分鐘，分離殘渣和提取液； 將殘渣再加4L乙醇回流2次，每次回流30分鐘，分離殘渣和提取液；合并上述3次回流所得提取液，減壓蒸餾回收乙醇，得黃連粗提取物浸膏。將黃連粗提取物浸膏以1. OL的0. 6%的鹽酸溶解，靜置3 后過濾除去沉淀，得到溶液；將上述溶液用氨水調(diào)PH至8，向其中加入碳酸鈉至碳酸鈉濃度為1%，靜置24h后過濾得沉淀，將沉淀晾干，即得黃連生物堿粗提物。采用正丁醇-磷酸鹽緩沖液為高速逆流色譜兩相溶劑系統(tǒng)分離純化黃連提取物， 固定相為正丁醇，流動相為PH=6. 5的磷酸鹽緩沖液。根據(jù)色譜圖收集相應(yīng)峰組分，調(diào)pH為 9.0，用正丁醇萃取，回收正丁醇，即可得到相應(yīng)高純度化合物。經(jīng)1H-NMR和13C-NMR鑒定， 所得單體化合物分別為表小檗堿、黃連堿、巴馬汀和小檗堿。經(jīng)色譜面積歸一化法計算，表小檗堿純度為98. 7%，黃連堿純度為99. 3%，巴馬汀純度為98. 4%，小檗堿純度為99. 0%。實施例6
取粉碎好的黃連藥材500g，加人5L 60%的乙醇，加熱回流60分鐘，分離殘渣和提取液； 將殘渣再加4L 80%乙醇回流2次，每次回流40分鐘，分離殘渣和提取液；合并上述3次回流所得提取液，減壓蒸餾回收乙醇，得黃連粗提取物浸膏。將黃連粗提取物浸膏以0. 5L的1. 0%的鹽酸溶解，靜置24h后過濾除去沉淀，得到溶液；將上述溶液用氨水調(diào)PH至9，向其中加入碳酸鈉至碳酸鈉濃度為2%，靜置24h后過濾得沉淀，將沉淀晾干，即得黃連生物堿粗提物。圖1是經(jīng)酸溶堿沉預(yù)分離后得到的黃連提取物浸膏的高效液相色譜圖。由圖1可以看出黃連提取物經(jīng)過酸溶堿沉預(yù)分離純化后，提取物主要成分為表小檗堿、黃連堿、巴馬汀和小檗堿。采用正丁醇-磷酸鹽緩沖液為高速逆流色譜兩相溶劑系統(tǒng)分離純化黃連提取物， 固定相為正丁醇，流動相為PH=8. 5的磷酸鹽緩沖液和pH=7. 0的磷酸鹽緩沖液進(jìn)行梯度洗脫。圖2是進(jìn)行梯度洗脫時的高速逆流色譜分離純化黃連提取物的高速逆流色譜圖。由圖 2可以看出在高速逆流色譜分離純化過程中，提取物中的各個組分能在300分鐘內(nèi)實現(xiàn)分離，分離效果良好。根據(jù)色譜圖收集相應(yīng)峰組分，調(diào)pH為9. 0，用正丁醇萃取，回收正丁醇，即可得到相應(yīng)高純度化合物。經(jīng)1H-NMR和13C-NMR鑒定，所得單體化合物分別為表小檗堿、黃連堿、 巴馬汀和小檗堿。圖3是分離純化得到的表小檗堿的高效液相色譜圖。圖4是分離純化得到的黃連堿的高效液相色譜圖，圖5是分離純化得到的巴馬汀的高效液相色譜圖，圖6是分離純化得到的小檗堿的高效液相色譜圖。由圖3-圖6可以看出所得到的各個組分的純度很高，經(jīng)色譜面積歸一化法計算，表小檗堿純度為99. 4%，黃連堿純度為99. 7%，巴馬汀純度為98. 8%，小檗堿純度為99. 5%。經(jīng)現(xiàn)代波譜數(shù)據(jù)證實所提取純化得到的表小檗堿、黃連堿、巴馬汀和小檗堿結(jié)構(gòu)式如下
權(quán)利要求
1.從中藥黃連中分離純化單體化合物的方法，其特征是，以黃連為原料，經(jīng)過下述步驟(1)粗提取物浸膏的制備；(2)酸溶堿沉預(yù)分離；(3)高速逆流色譜純化，得純度在98 % 以上的表小檗堿、黃連堿、巴馬汀和小檗堿；所述步驟(1)粗提取物浸膏的制備①將粉碎好的黃連，加2-20倍量的40-95%乙醇， 回流30-120分鐘，分離殘渣和提取液；②將上述殘渣再加2-10倍的40-95%乙醇回流2次， 每次回流提取20-100分鐘，分離殘渣和提取液；③合并上述3次回流所得提取液，減壓蒸餾回收乙醇，得黃連粗提取物浸膏；所述步驟(2)酸溶堿沉預(yù)分離①將黃連粗提取物浸膏以10-100倍量的0. 1-10%的鹽酸溶解，靜置2-4 后過濾除去沉淀，得到溶液；②將上述溶液用氨水調(diào)pH至8-10，向其中加入碳酸鈉至碳酸鈉濃度為0. 2-10%，靜置12-4 后過濾得沉淀，將沉淀晾干，即得黃連生物堿粗提物；所述步驟(3 )高速逆流色譜純化以正丁醇-磷酸鹽緩沖液為溶劑系統(tǒng)，將步驟(2 )得到的黃連生物堿粗提物用高速逆流色譜法進(jìn)行純化，分別收集不同餾分，即得單體化合物表小檗堿、黃連堿、巴馬汀和小檗堿。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征是所述步驟(1)粗提取物浸膏的制備①將粉碎好的黃連，加3-10倍量的55-85%乙醇，回流60-120分鐘，分離殘渣和提取液；②將上述殘渣再加3-10倍的55-85%乙醇回流2次，每次回流提取40-60分鐘，分離殘渣和提取液； ③合并上述3次回流所得提取液，減壓蒸餾回收乙醇，得黃連粗提取物浸膏。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征是所述步驟(1)粗提取物浸膏的制備①將粉碎好的黃連，加10倍量的60%乙醇，回流60分鐘，離心或過濾分離殘渣和提取液；②將上述殘渣再加8倍的60%乙醇回流2次，每次回流提取40分鐘，離心或過濾分離，得殘渣和提取液；③合并上述3次回流所得提取液，減壓蒸餾回收乙醇，得黃連粗提取物浸膏。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征是所述步驟(2)酸溶堿沉預(yù)分離①將黃連粗提取物浸膏以15-50倍量的0. 5-5%的鹽酸溶解，靜置12-3 后過濾除去沉淀，得到溶液； ②將上述溶液用氨水調(diào)PH至8-10，向其中加入碳酸鈉至碳酸鈉濃度為0. 5-5%，靜置12-3 后過濾得沉淀，將沉淀晾干，即得黃連生物堿粗提物。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其特征是所述步驟(2)酸溶堿沉預(yù)分離①將黃連粗提取物浸膏以20倍量的1%的鹽酸溶解，靜置24h后過濾除去沉淀，得到溶液；②將上述溶液用氨水調(diào)PH至9，向其中加入碳酸鈉至碳酸鈉濃度為2%，靜置24h后過濾得沉淀，將沉淀晾干，即得黃連生物堿粗提物。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征是所述正丁醇-磷酸鹽緩沖液溶劑系統(tǒng)是固定相為正丁醇，流動相為PH在5. 5-9. 0之間的磷酸鹽緩沖溶液，采用單一 pH值緩沖溶液洗脫或采用不同PH緩沖溶液梯度洗脫。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其特征是所述流動相為pH在7.0-8. 5之間的磷酸鹽緩沖溶液。
全文摘要
本發(fā)明涉及從黃連中提取防表小檗堿、黃連堿、巴馬汀和小檗堿的方法，是以黃連為原料，經(jīng)過下述步驟(1)粗提取物浸膏的制備；(2)酸溶堿沉預(yù)分離；(3)高速逆流色譜純化，得純度在98℅以上的表小檗堿、黃連堿、巴馬汀和小檗堿。本發(fā)明以乙醇提取黃連藥材中的生物堿，以酸溶堿沉預(yù)分離，以高速逆流色譜進(jìn)行純化，工藝過程綠色環(huán)保，對環(huán)境無嚴(yán)重危害。
文檔編號C07D455/03GK102285982SQ20111025092
公開日2011年12月21日 申請日期2011年8月30日 優(yōu)先權(quán)日2011年8月30日
發(fā)明者孫愛玲, 柳仁民, 汪海兵 申請人:聊城大學(xué)