一種皂苷類化合物的分離方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于天然藥物提取的技術(shù)領(lǐng)域,具體涉及一種皂苷類化合物的分離方法。
【背景技術(shù)】
[0002]筠篛薯科(拉丁學名:TACCACEAE)植物為多年生草本,具圓柱形或球形的根狀莖或塊莖。葉全部基生,有柄,直立,基部有鞘;葉片全緣或各式分裂?;▋尚裕椛鋵ΨQ,排成傘形花序,生在長的花葶上;本科的模式屬:蒴篛薯屬Tacca J.R.Forster et J.G.A.Forster,蒴篛薯科有2屬,10余種,分布于熱帶地區(qū)。我國產(chǎn)2屬6種,分布于東南至西南部。筠篛薯科植物成分復雜,目前大部分成分已成功分離,發(fā)現(xiàn)筠篛薯科植物中富含皂苷類與箭根酮類物質(zhì),該類物質(zhì)均具有良好的生物活性,其中箭根酮類被發(fā)現(xiàn)具有抗腫瘤作用,并且能夠調(diào)控腫瘤細胞的微管形成。皂苷類化合物被發(fā)現(xiàn)具有良好的抗腫瘤活性。皂苷類化合物(CAS =290809-72-2)為日本人Akihito Yokosuka首次分離(Akihito Yokosuka, Yoshihiro Mimaki, Yutaka Sashida.Spirostanol saponins fromthe rhizomes of Tacca chantrieri and their cytotoxic activity[J].Phytochemistry61 (2002): 73-78),該分離方法成本較高產(chǎn)率較低,并非針對性的對該皂苷單體進行提取分離,且僅適用于實驗室研究。
【發(fā)明內(nèi)容】
[0003]本發(fā)明的目的在于提供一種皂苷類化合物的分離方法,具體而言是對筠篛薯科植物所含有的一種皂苷類化合物(CAS =290809-72-2)建立分離方法,該方法所用的材料經(jīng)濟且可回收利用,為皂苷化合物的開發(fā)利用打下基礎(chǔ)。
[0004]為實現(xiàn)本發(fā)明的目的,本發(fā)明采用如下技術(shù)方案:
皂苷類化合物的分離方法,其特征在于,包括以下步驟:
Α、?|篛署科植物瞭干后進行粉粹,然后按重量加入9_12倍量、體積濃度為50%_100%的乙醇,加熱回流提取3次,每次提取2-2.5h,過濾,合并提取液,旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)回收溶劑,得粗提取物;
B、按照粗提取物:純化水重量比為1:10的比例在粗提取物中加入純化水,得到懸浮混合物,然后,依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取,旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)回收溶劑,得到石油醚部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位和水部位四個部位萃取物;
C、正丁醇部位過DlOl大孔吸附樹脂柱,樣品用體積濃度為10%-50%的乙醇溶解上樣,然后依次用體積濃度為50%-60%,70%-100%乙醇進行洗脫,得到50%-60%組段與70%_100%組段;
D、70%-100%組段進行硅膠柱色譜分離,填料用硅膠H,用300-400目柱層析硅膠拌樣,然后用二氯甲烷-甲醇溶液梯度洗脫,得到目標單體混合物,單體混合物經(jīng)過SephadexLH-20凝膠柱色譜分離,氯仿-甲醇溶液洗脫分離進一步純化;
E、重復步驟D,得到皂苷單體。
[0005]上述的步驟D中二氯甲烷-甲醇溶液的的配比為:二氯甲烷:甲醇的體積比為1:5-5:1,每10ml 二氯甲烷-甲醇混合溶劑加Iml水;氯仿-甲醇溶液的的配比為:氯仿:甲醇的體積比為1:3-3:1。
[0006]本發(fā)明一種皂苷類化合物的分離方法,分離得到的皂苷單體為無定形白色粉末,純度達90%以上。
[0007]本發(fā)明突出的實質(zhì)性特點和顯著的進步是:
1、本發(fā)明首次建立了分離皂苷單體化合物的方法,該方法以筠篛薯科(拉丁學名:TACCACEAE)植物為原料,通過粉碎、乙醇提取、石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取、DlOl大孔樹脂洗脫,硅膠柱與凝膠柱洗脫,最終得到純度達90%以上的皂苷單體。
[0008]2、本發(fā)明對筠篛薯科植物所含有的一種皂苷類化合物(CAS =290809-72-2)建立分離方法,該方法操作簡單、分離效率高、純化度高、工藝穩(wěn)定、成本低、材料經(jīng)濟且可回收利用,為該皂苷化合物的開發(fā)利用打下基礎(chǔ)。
【具體實施方式】
[0009]實施例1
一種皂苷類化合物的分離方法,其特征在于,包括以下步驟:
A、||篛薯科植物裂果薯(拉丁學名:Taccaplantaginea (Hance) Drenth)瞭干后進行粉粹,然后按重量加入9倍量、體積濃度為100%的乙醇,加熱回流提取3次,每次提取2h,過濾,合并提取液,旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)回收溶劑,得裂果薯粗提取物;
B、按照粗提取物:純化水重量比為1:10的比例在粗提取物中加入純化水,得到懸浮混合物,然后,依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取,旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)回收溶劑,得到石油醚部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位和水部位四個部位萃取物;
C、正丁醇部位過DlOl大孔吸附樹脂柱,樣品用體積濃度為50%的乙醇溶解上樣,然后依次用體積濃度為50%-60%,70%-100%乙醇進行洗脫,得到50%-60%組段與70%_100%組段;
D、70%-100%組段進行硅膠柱色譜分離,填料用硅膠H,用300-400目柱層析硅膠拌樣,用二氯甲烷-甲醇梯度洗脫(每10ml 二氯甲烷-甲醇混合溶劑加Iml水,二氯甲烷:甲醇的體積比為1:5 ),得到目標單體混合物;目標單體混合物經(jīng)Sephadex LH-20凝膠柱色譜分離,用氯仿-甲醇(氯仿:甲醇的體積比為1:3)洗脫分離進一步純化;
E、重復步驟D(再經(jīng)硅膠柱色譜分離、二氯甲烷-甲醇梯度洗脫、經(jīng)S印hadexLH-20凝膠柱色譜分離,氯仿-甲醇洗脫)得裂果薯皂苷單體,為無定形白色粉末,純度可達90%。
[0010]實施例2
一種皂苷類化合物的分離方法,其特征在于,包括以下步驟:
A、||篛薯科植物裂果薯(拉丁學名:Taccaplantaginea (Hance) Drenth)瞭干后進行粉粹,然后按重量加入10倍量、體積濃度為80%的乙醇,加熱回流提取3次,每次提取2.2h,過濾,合并提取液,旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)回收溶劑,得箭根薯粗提取物;
B、按照粗提取物:純化水重量比為1:10的比例在粗提取物中加入純化水,得到懸浮混合物,然后,依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取,旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)回收溶劑,得到石油醚部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位和水部位四個部位萃取物;
C、正