一種抗體試劑保存液的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種抗體試劑保存液，包括氯化鈉、磷酸氫二鉀、磷酸二氫鈉、硫酸卡那霉素、牛血清白蛋白、SOD等成分。保存液中各組分合理配比，有利于抗體的保存，特別是用于血型檢測的單克隆抗體，使其在常溫下保存期更長，最長可達(dá)2年。本發(fā)明能夠提供抗體試劑保存的適宜環(huán)境，同時解決了抗體試劑室溫不易長期保存的問題。應(yīng)用本發(fā)明保存的抗體試劑用于微柱凝膠免疫檢測試劑卡的生產(chǎn)中，使得微柱凝膠免疫檢測試劑卡能夠?qū)崿F(xiàn)常溫長期保存，有利于凝膠免疫檢測試劑卡的廣泛應(yīng)用。
【專利說明】一種抗體試劑保存液
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明公開一種抗體試劑保存液，用于生物制品的保護(hù)，屬于生物【技術(shù)領(lǐng)域】。
【背景技術(shù)】
[0002]抗體保存得當(dāng)與否，直接決定了抗體的活性和使用效果。對于大多數(shù)抗體而言，一般需要在-20°C長期保存，很難實(shí)現(xiàn)常溫長期保存，同時反復(fù)凍融會導(dǎo)致抗體變性和多聚體形成，從而降低抗體的活性。在大多數(shù)情況下，抗體在4°C條件下可保存一至兩周，并避免了反復(fù)凍融對抗體活性的損害。但是抗體在稀釋至工作濃度后應(yīng)避免在4°C條件下保存超過一天。同時蛋白質(zhì)在高濃度下保存時一般不易降解，因此在抗體溶液中加入一定量的蛋白質(zhì)作為穩(wěn)定劑有利于抗體的保存。為了防止微生物污染，可將疊氮鈉加入抗體制備品中，但是疊氮化鈉屬于有毒藥品，使用過程中應(yīng)注意防護(hù)?，F(xiàn)在廣泛應(yīng)用的抗體保存液一般為1%牛血清白蛋白和ph值7.0左右緩沖液配制而成，使得抗體保存期限明顯延長。
[0003]超氧化物歧化酶(SOD)是一種源于生命體的活性物質(zhì)，能消除生物體在新陳代謝過程中產(chǎn)生的有害物質(zhì)。SOD是1938年Marn等人首次從牛紅血球中分離得到超氧化物歧化酶開始算起，人們對其的研究已經(jīng)有70多年的歷史了。1969年McCord等重新發(fā)現(xiàn)這種蛋白，并且發(fā)現(xiàn)了他們的生物活性，弄清了它催化過氧陰離子發(fā)生歧化反應(yīng)的性質(zhì)，所以正式將其命名為超氧化物歧化酶。SOD是中國衛(wèi)生部批準(zhǔn)的具有抗衰老、免疫調(diào)節(jié)、調(diào)節(jié)血脂、抗輻射、美容功能的物質(zhì)之一；美國注冊專利號為(CN1152337A)認(rèn)定SOD用于預(yù)防和治療大腦局部出血、潰瘍、消除炎癥、心律失常、浮腫、中毒、風(fēng)濕、類風(fēng)濕、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、放射性損傷、藥物中毒等癥；歐洲注冊專利號為(499621)認(rèn)定SOD用于預(yù)防和治療癌癥及術(shù)后放、化療帶來的腦損傷，抑制癌細(xì)胞再形成或擴(kuò)散；日本注冊專利號為(4327541，4312533)認(rèn)定SOD用于治療器官移植后抗免疫反應(yīng)具有奇效，用于治療大腦局部出血導(dǎo)致神經(jīng)壞死，防止半身不遂的治療藥物。綜上，SOD目前國內(nèi)外主要內(nèi)容將其用于治療和美容方面，可能由于本發(fā)明應(yīng)用領(lǐng)域不是市場熱捧領(lǐng)域并且本發(fā)明應(yīng)用范圍和經(jīng)濟(jì)效益不如其他領(lǐng)域，故而在本發(fā)明所涉及的領(lǐng)域沒有人研究和關(guān)注。
[0004]用于血型檢測的抗A、抗B、抗D等單克隆抗體的室溫長期保存直接決定了用其生產(chǎn)的微柱凝膠免疫檢測試劑卡的使用效期。本發(fā)明創(chuàng)造性的將SOD應(yīng)用于抗體保護(hù)中，能夠提高抗體保存過程中的抗氧化能力，使得抗體保存期限明顯延長。同時再加入SOD之后，與牛血清白蛋白協(xié)同發(fā)揮作用，使得抗體保存期限明顯延長，并且使得牛血清白蛋白的用量明顯減少。解決了抗A、抗B、抗D等單克隆抗體室溫長期保存的問題，使得抗體室溫保存可達(dá)2年。從而解決了微柱凝膠免疫檢測試劑卡室溫長期保存的難題，使得微柱凝膠免疫檢測試劑卡得意廣泛應(yīng)用，從而滿足臨床檢測需要。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明通過一種抗體試劑保存液，的目的是為了解決抗A、抗B、抗D等單克隆抗體室溫長期保存的問題，從而解決了微柱凝膠免疫檢測試劑卡生產(chǎn)的難題，使得微柱凝膠免疫檢測試劑卡的生產(chǎn)得以實(shí)現(xiàn)并且使其室溫保存效期達(dá)到一年，仍能夠滿足臨床檢測需要，而提供一種抗體保存時間長、性價(jià)比更高的抗體試劑保存液。
[0006]本發(fā)明提供的一種抗體試劑保存液，是由以下原料按質(zhì)量體積比制成的:
氯化鈉0.7~0.9% ;磷酸氫二鉀3.5% ;磷酸二氫鈉3.9% ;硫酸卡那霉素0.1~0.5% ；
牛血清白蛋白0.5~0.8% ；S0D 0.1~0.5%。
[0007]本發(fā)明所述的抗體試劑保存液的制備方法，其特征在于:
按比例稱取氯化鈉、磷酸氫二鉀、磷酸二氫鈉、硫酸卡那霉素、牛血清白蛋白、SOD加蒸餾水溶解定容后，調(diào)整Ph值至6.80~7.05即得。
[0008]本發(fā)明現(xiàn)有技術(shù)相比具有以下積極效果:
作為復(fù)方制劑含有氯化鈉作為滲透壓穩(wěn)定劑保持溶液的合理滲透壓；磷酸氫二鉀和磷酸氫二鈉作為緩沖系統(tǒng)為溶液提供合理的緩沖；硫酸卡那霉素作為抗微生物劑，保證溶液不被微生物污染；牛血清白蛋白最為蛋白穩(wěn)定劑，為抗體長期保存提供適當(dāng)?shù)谋Ｗo(hù)；最后本發(fā)明創(chuàng)造性的將SOD應(yīng)用于抗體保護(hù)中，SOD是抗氧化劑，能夠提高抗體保存過程中的抗氧化能力，使得抗體保存期限明顯延長。同時再加入SOD之后，與牛血清白蛋白協(xié)同發(fā)揮作用，使得抗體保存期限明顯延長，并且使得牛血清白蛋白的用量明顯減少。
[0009]本發(fā)明應(yīng)用于微柱凝膠免疫檢測試劑卡生產(chǎn)中抗A、抗B、抗D等單克隆抗體的保存。
[0010]【專利附圖】

【附圖說明】:` 圖1:本發(fā)明保存的抗A、抗B、抗D單克隆抗體用于微柱凝膠免疫檢測卡(ABO、RhD血型定型檢測卡(單克隆抗體))生產(chǎn)當(dāng)時檢測結(jié)果示意圖。
[0011]圖2:用牛血清白蛋白保存的抗A、抗B、抗D單克隆抗體用于微柱凝膠免疫檢測卡(ABO、RhD血型定型檢測卡(單克隆抗體))生產(chǎn)當(dāng)時檢測結(jié)果示意圖。
[0012]圖3:用SOD保存的抗A、抗B、抗D單克隆抗體用于微柱凝膠免疫檢測卡(AB0、RhD血型定型檢測卡(單克隆抗體))生產(chǎn)當(dāng)時檢測結(jié)果示意圖。
[0013]圖4:本發(fā)明保存的抗A、抗B、抗D單克隆抗體用于微柱凝膠免疫檢測卡(AB0、RhD血型定型檢測卡(單克隆抗體))室溫保存0.5年后檢測結(jié)果示意圖。
[0014]圖5:用牛血清白蛋白保存的抗A、抗B、抗D單克隆抗體用于微柱凝膠免疫檢測卡(ABO, RhD血型定型檢測卡(單克隆抗體))室溫保存0.5年后檢測結(jié)果示意圖。
[0015]圖6:用SOD保存的抗A、抗B、抗D單克隆抗體用于微柱凝膠免疫檢測卡(AB0、RhD血型定型檢測卡(單克隆抗體))室溫保存0.5年后檢測結(jié)果示意圖。
[0016]圖7:本發(fā)明保存的抗A、抗B、抗D單克隆抗體用于微柱凝膠免疫檢測卡(AB0、RhD血型定型檢測卡(單克隆抗體))室溫保存I年后檢測結(jié)果示意圖。
[0017]圖8:用牛血清白蛋白保存的抗A、抗B、抗D單克隆抗體用于微柱凝膠免疫檢測卡(ABO、RhD血型定型檢測卡(單克隆抗體))室溫保存I年后檢測結(jié)果示意圖。
[0018]圖9:用SOD保存的抗A、抗B、抗D單克隆抗體用于微柱凝膠免疫檢測卡(AB0、RhD血型定型檢測卡(單克隆抗體))室溫保存I年后檢測結(jié)果示意圖。
[0019]圖10:本發(fā)明保存的抗A、抗B、抗D單克隆抗體用于微柱凝膠免疫檢測卡(ΑΒ0、RhD血型定型檢測卡(單克隆抗體))室溫保存2年后檢測結(jié)果示意圖。
[0020]圖11:用牛血清白蛋白保存的抗A、抗B、抗D單克隆抗體用于微柱凝膠免疫檢測卡(ABO、RhD血型定型檢測卡(單克隆抗體))室溫保存2年后檢測結(jié)果示意圖。
[0021]圖12:用SOD保存的抗A、抗B、抗D單克隆抗體用于微柱凝膠免疫檢測卡(AB0、RhD血型定型檢測卡(單克隆抗體))室溫保存2年后檢測結(jié)果示意圖。
【具體實(shí)施方式】
[0022]實(shí)施例1
a.用分析天平精確稱量氯化鈉7g ;磷酸氫二鉀0.35g ;磷酸二氫鈉0.4g ;硫酸卡那霉素Ig ;牛血清白蛋白5g ；S0D Ig0
[0023]b.加入適量蒸餾水將上述藥品充分溶解，定容至1000ml，用NaOH或HCL調(diào)整Ph至 6.80。
[0024]實(shí)施例2
a.用分析天平精確稱量氯化鈉8.5g ;磷酸氫二鉀0.35g ;磷酸二氫鈉0.4g ;硫酸卡那霉素3g ;牛血清白蛋白7g ；S0D 3g。
[0025]b.加入適量蒸餾水將上述藥品充分溶解，定容至1000ml，用NaOH或HCL調(diào)整Ph至 6.90。
[0026]實(shí)施例3
a.用分析天平精確稱量氯化鈉9g;磷酸氫二鉀0.35g ;磷酸二氫鈉0.4g ;硫酸卡那霉素5g ;牛血清白蛋白8g ；S0D 5g。
[0027]b.加入適量蒸餾水將上述藥品充分溶解，定容至1000ml，用NaOH或HCL調(diào)整Ph至 7.05。
[0028]試驗(yàn)例
將實(shí)施例1~3的保存液以及對照組(對照組1:只加牛白作為保護(hù)劑；對照組:2:只加SOD作為保護(hù)劑)保存的抗A、抗B、抗D單克隆抗體用于微柱凝膠免疫檢測卡(AB0、RhD血型定型檢測卡(單克隆抗體))生產(chǎn)，并將生產(chǎn)的ABO、RhD血型定型檢測卡(單克隆抗體)放置于室溫，不同時間進(jìn)行檢測，檢測結(jié)果表明本發(fā)明保存的抗體生產(chǎn)的試劑卡，在室溫能夠保存2年檢測結(jié)果仍然合格，而對照組則在半年時檢測結(jié)果就已經(jīng)不合格了(參見圖f 12)，可見本發(fā)明保存抗體的效果明顯，使得抗體室溫保存時間大大延長4倍。
[0029]具體實(shí)施如下:
1.本發(fā)明保存的抗A、抗B單克隆抗體用于微柱凝膠免疫檢測卡(AB0、RhD血型定型檢測卡(單克隆抗體))生產(chǎn)。
[0030]a.將效價(jià)> 128的抗A、抗B單克隆抗體與抗體保存液按照1:1比例進(jìn)行混合，并攪拌均勻；
b.凝膠的制備:選擇顆粒大小適中的葡聚糖凝膠。將葡聚糖凝膠干粉，用3倍體積的步驟一中的凝膠懸浮溶液浸泡24小時，待凝膠充分膨脹后，用凝膠懸浮溶液洗滌5次，然后再用蒸餾水洗滌5次。除去凝膠破損碎片和聚集的凝膠顆粒以及凝膠中過多的鹽離子。收集得到顆粒大小均勻的、且完整呈球形凝膠顆粒。
[0031]c.特異性膠及中性膠的配制
特異性膠配制:分別取抗A單克隆抗體、抗B單克隆抗體和抗D單克隆抗體與已溶脹的葡聚糖凝膠按照1:1比例混合，間斷攪拌均勻15~40分鐘，即為半成品特異性膠。[0032]中性膠配制:用生理氯化鈉溶液與溶脹葡聚糖凝膠按照2:1比例混合，間斷攪拌均勻15~40分鐘，即為半成品的中性膠。
[0033]d.半成品檢定 1.特異性檢定
1.1材料
(I)試劑:AB0、RhD血型定型檢測卡(單克隆抗體)。
[0034](2)紅細(xì)胞標(biāo)本:健康人 Al、A1B、A2、A2B、O、B、ODCe/Dce (ORlRl)、OdcE/DcE(0R2R2) ；0dce/dee (ROr) ODCe/dee (Rlr) Odce/dee (Or，r) Odce/dce (Orr)分別用生理鹽水溶液配制成0.5%紅細(xì)胞懸液。
[0035](3)已知A型和B型血清用于反定型。
[0036]1.2 試驗(yàn)
每型0.5%紅細(xì)胞懸液加入一個卡的第一至第四支微管中各50 μ I ;向第五、六支微管中加入已知A型和B型血清各50 μ 1，再向第五支微管中加入A型0.5%紅細(xì)胞懸液50 μ 1，第六支微管中加入B型0.5%紅細(xì)胞懸液50 μ I。用專用離心機(jī)離心5分鐘，900 rpm 2分鐘，1,500 rpm 3分鐘，肉眼觀察結(jié)果。
[0037]1.3結(jié)果判定
(I)陽性結(jié)果和陰性結(jié)果判定:
陽性結(jié)果:紅細(xì)胞抗原與相應(yīng)抗體在微柱凝膠中形成的特異性抗原抗體復(fù)合物浮在凝膠表面或膠中，為陽性反應(yīng)。
[0038]陰性結(jié)果:被檢紅細(xì)胞抗原無相應(yīng)的抗體結(jié)合，不出現(xiàn)特異性抗原抗體復(fù)合物，紅細(xì)胞沉于微柱凝膠的尖底部。
[0039](2)特異性結(jié)果判定，見表1。
[0040]表1 ABO、RhD血型檢定微柱凝膠試劑特異性檢測
【權(quán)利要求】
1.一種抗體試劑保存液，是由以下原料按質(zhì)量體積比制成的: 氯化鈉0.7~0.9% ;磷酸氫二鉀3.5% ;磷酸二氫鈉3.9% ;硫酸卡那霉素0.1~0.5% ；牛血清白蛋白0.5~0.8% ；SOD 0.1~0.5%。
2.權(quán)利要求1所述抗體試劑保存液的制備方法，其特征在于: 按比例稱取氯化鈉、磷酸氫二鉀、磷酸二氫鈉、硫酸卡那霉素、牛血清白蛋白、SOD加蒸餾水溶解定容后，調(diào)整Ph值`至6.80~7.05即得。
【文檔編號】C07K16/34GK103772505SQ201310694149
【公開日】2014年5月7日 申請日期:2013年12月18日 優(yōu)先權(quán)日:2013年12月18日
【發(fā)明者】楊明, 宋相偉, 王冬倩, 楊洪存, 李凌波, 李秋生, 馮立崗, 李旺, 賈天冰, 萬俊波, 喬健, 夏坤, 孫啟和, 徐飛飛, 莊賈明 申請人:長春博迅生物技術(shù)有限責(zé)任公司