胰腫瘤的檢測(cè)方法、抗體和胰腫瘤檢測(cè)用試劑盒的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及胰腫瘤、即胰癌或胰良性腫瘤的檢測(cè)方法、用于該方法的抗AP0A2抗體 和包含該抗體的胰癌或胰良性腫瘤檢測(cè)用試劑盒，所述檢測(cè)方法包括使用與AP0A2蛋白質(zhì) 特異性結(jié)合的抗體(抗AP0A2抗體)來測(cè)定受試體樣品中的AP0A2蛋白質(zhì)變異體的量。
【背景技術(shù)】
[0002] 根據(jù)2012年的統(tǒng)計(jì)，在日本主要的死亡原因的第1位是癌。癌的特征在于，從正常 組織產(chǎn)生、由癌細(xì)胞的異常增殖引起的腫瘤塊的形成，形成腫瘤塊的癌細(xì)胞向鄰近組織的 浸潤(rùn)，以及經(jīng)由血管、淋巴管向多種臟器的遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。已知在這樣的癌發(fā)病和發(fā)展時(shí)，血液、 尿等患者的體液中各種蛋白質(zhì)的濃度發(fā)生變動(dòng)，這樣的蛋白質(zhì)被稱為腫瘤標(biāo)志物(癌檢測(cè) 用標(biāo)志物），被期待在癌的早期發(fā)現(xiàn)、治療后的經(jīng)過觀察等各種診斷用途中應(yīng)用(例如，專利 文獻(xiàn)1~3)。然而，可用于臨床診斷的以往的腫瘤標(biāo)志物大多陽性率為50~70%程度，特別 是在早期癌中，存在大部分腫瘤標(biāo)志物顯示假陰性這樣的問題。由于以向鄰近組織的浸潤(rùn)、 遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移為特征的晚期癌、末期癌會(huì)預(yù)后不良，因此早期發(fā)現(xiàn)對(duì)于癌的有效治療是重要的。 因此，期待發(fā)現(xiàn)能夠檢測(cè)早期癌、靈敏度優(yōu)異的腫瘤標(biāo)志物。
[0003] 胰腫瘤是指在胰臟形成的全部腫瘤，分為作為惡性腫瘤的胰癌、和作為良性腫瘤 的胰良性腫瘤。
[0004] 胰癌在眾多癌癥中作為難治性癌癥的一種而為人所知，尚未確立除了外科手術(shù)以 外的有效的治療法，因此早期發(fā)現(xiàn)、防止其發(fā)病于未然變得特別重要。作為胰癌的診斷方 法，可使用血清腫瘤標(biāo)志物、螺旋CT、磁共振裝置(MRI)、超聲內(nèi)鏡檢查法(EUS)等(非專利文 獻(xiàn)1)。然而，胰癌在早期階段缺乏癥狀，在大多數(shù)情況下，已經(jīng)形成晚期癌才被發(fā)現(xiàn)，因此一 般來說治療困難。因此，期望開發(fā)能夠準(zhǔn)確且簡(jiǎn)易地發(fā)現(xiàn)胰癌的新的診斷技術(shù)。
[0005] 另一方面，胰良性腫瘤是胰癌前階段的病態(tài)，暗示了與胰癌發(fā)病相關(guān)。但是，與胰 癌相比，胰良性腫瘤預(yù)后良好，期待通過利用外科手術(shù)摘出來防止胰癌的發(fā)病。因此，可以 認(rèn)為胰良性腫瘤的早期發(fā)現(xiàn)也重要。
[0006] AP0A2(Apolipoprotein A2(載脂蛋白A2)或Apolipoprotein A-II(載脂蛋白A-Π ))蛋白質(zhì)(GenBank登錄號(hào)NP_001634.1)是構(gòu)成血楽;脂蛋白的載脂蛋白家族的一種。載脂 蛋白迄今為止已知10種以上，它們的主要功能是脂蛋白的結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定化、與脂蛋白代謝相 關(guān)的酶的活化、作為針對(duì)細(xì)胞表面存在的脂蛋白受體的配體的作用等。AP0A2蛋白質(zhì)在肝臟 組織中作為包含信號(hào)肽的100個(gè)氨基酸的前體被合成，血液中存在的成熟型包含77個(gè)氨基 酸。成熟型AP0A2蛋白質(zhì)，其氨基末端(N末端)有谷氨酰胺殘基(Q)、從N末端數(shù)第76位有蘇氨 酸殘基(T)、第77位的C末端有谷氨酰胺殘基(Q)，是構(gòu)成高密度脂蛋白（HDL)的載脂蛋白之 一。此外，報(bào)告了AP0A2蛋白質(zhì)中存在作為完全長(zhǎng)度AP0A2蛋白質(zhì)的AP0A2-ATQ蛋白質(zhì)、作為 缺失了 C末端的谷氨酰胺殘基(Q)的AP0A2蛋白質(zhì)的AP0A2-AT蛋白質(zhì)、作為缺失了 C末端的蘇 氨酸·谷氨酰胺殘基(TQ)的AP0A2蛋白質(zhì)的AP0A2-A蛋白質(zhì)等質(zhì)量不同的變異體(非專利文 獻(xiàn)2)。
[0007] 根據(jù)基于登錄在蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)數(shù)據(jù)庫(kù)（PDB;Protein Data Bank;http:// www.rcsb. org/pdb/home. do)的AP0A2蛋白質(zhì)的立體結(jié)構(gòu)數(shù)據(jù)(PDB ID: 1L6L)的解析，認(rèn)為 AP0A2蛋白質(zhì)通過介由N末端側(cè)的半胱氨酸殘基的二硫鍵(SS鍵)而形成二聚體。因此，已知 AP0A2蛋白質(zhì)在血液中作為由前述3種變異體的組合產(chǎn)生的各種分子量的二聚體而存在。具 體而言，已知由完全長(zhǎng)度的AP0A2-ATQ蛋白質(zhì)組成的二聚體(AP0A2-ATQ/ATQ蛋白質(zhì)二聚 體）、AP0A2-ATQ蛋白質(zhì)和AP0A2-AT蛋白質(zhì)的二聚體(AP0A2-ATQ/AT蛋白質(zhì)二聚體）、由 AP0A2-AT蛋白質(zhì)組成的二聚體(AP0A2-AT/AT蛋白質(zhì)二聚體）、AP0A2-AT蛋白質(zhì)和AP0A2-A蛋 白質(zhì)的二聚體(AP0A2-AT/A蛋白質(zhì)二聚體）、由AP0A2-A蛋白質(zhì)組成的二聚體(AP0A2-A/A蛋 白質(zhì)二聚體)等。此外，除此以外，還已知AP0A2蛋白質(zhì)通過二硫鍵與APOD蛋白質(zhì)、APOE蛋白 質(zhì)、APOAl-M蛋白質(zhì)等其他蛋白質(zhì)形成二聚體，或者作為單體而存在(非專利文獻(xiàn)3、4)。
[0008] 已知對(duì)于上述各種AP0A2蛋白質(zhì)二聚體，與健常者相比，在胰癌患者的血中顯示量 的變動(dòng)。特別是AP0A2-ATQ/AT蛋白質(zhì)二聚體，質(zhì)量分析的結(jié)果作為具有分子量17253±9(m/ z)的質(zhì)量值的蛋白質(zhì)被發(fā)現(xiàn)，已經(jīng)明確與健常者相比在胰癌患者中顯著減少，以及通過利 用該蛋白質(zhì)二聚體作為胰癌標(biāo)志物，能夠以AUC(area under the curve:曲線下面積)值為 0.85以上的高精度檢測(cè)出胰癌(專利文獻(xiàn)4、5，非專利文獻(xiàn)5)。
[0009] 然而，為了達(dá)到前述AUC值的判別精度，需要包括利用質(zhì)量分析器進(jìn)行測(cè)定在內(nèi)的 3個(gè)繁雜的工序。例如，在最初的工序中，對(duì)質(zhì)量分析中使用的血液樣品使用9M尿素、2 % CHAPS進(jìn)行前處理。然而，尿素容易分解、不適合長(zhǎng)期的保存，因此為了備齊前處理?xiàng)l件，需 要在每次測(cè)定時(shí)調(diào)制包含尿素的溶液。此外，在接下來的工序中，將進(jìn)行了前處理的樣品捕 獲在蛋白質(zhì)芯片（f7 7 - 工^，彳才シ只于A社制）的表面。在該捕獲工序中，利用 蛋白質(zhì)芯片表面的帶電狀態(tài)、疏水性等特性進(jìn)行吸附，因此可知洗滌條件、試劑的調(diào)制條件 較大地影響捕獲效率。在最后的工序中，利用質(zhì)量分析器來進(jìn)行捕獲樣品的測(cè)定。質(zhì)量分析 器要求對(duì)激光強(qiáng)度的調(diào)整等操作熟練，而且在處理受試體上的通量低。進(jìn)而，在樣品中包含 眾多不同的蛋白質(zhì)的情況下，從各蛋白質(zhì)得到的信號(hào)彼此相互干擾，因而信號(hào)的歸屬變得 困難。而且，由于定量性也存在問題，因此不適合需要高精度測(cè)定的診斷用途。因此，存在實(shí) 用化障礙高這樣的問題。
[0010] ELISA法作為與質(zhì)量分析法相比在評(píng)價(jià)大量的樣品上通量高、便宜且實(shí)用的方法 而為人所知。此外，ELISA法是通用的方法，因此不需要對(duì)操作熟練，而且，由于使用2種抗 體，因此特異性高，使用標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)能夠?qū)崿F(xiàn)再現(xiàn)性好的定量。因此，能夠全面且定量性高地 解析在樣品中以各種分子量存在的AP0A2蛋白質(zhì)變異體。
[0011]在先技術(shù)文獻(xiàn) [0012]專利文獻(xiàn)
[0013] 專利文獻(xiàn)1:日本特開2001-289861號(hào)公報(bào) [0014] 專利文獻(xiàn)2:日本特開2002-323499號(hào)公報(bào) [0015] 專利文獻(xiàn)3:日本特開2009-034071號(hào)公報(bào)
[0016] 專利文獻(xiàn)4:國(guó)際公開第2006/098087號(hào)
[0017] 專利文獻(xiàn)5:日本特開2010-175452號(hào)公報(bào) [0018]非專利文獻(xiàn)
[0019]非專利文獻(xiàn)1:科學(xué)的根拠 K基d〈脾癌診療力' Y K y 基于科學(xué)的根據(jù)的胰 癌診療指南)2009年版、日本脾臓學(xué)會(huì)脾癌診療力' Y K y Y ^改訂委員（日本胰臟學(xué)會(huì)胰癌 診療指南改訂委員），金原出版
[0020] 非專利文獻(xiàn)2:Pankhurst G.等，2003年，J Lipid Res，第44卷，P.349-355
[0021] 非專利文獻(xiàn)3:Blanc〇-Vaca F.等，2001 年，J Lipid Res，第42卷，ρ·1727-1739
[0022] 非專利文獻(xiàn)4:Rocco AG.等，2006年，Biophys J，第91 卷，ρ·3043-3049
[0023] 非專利文獻(xiàn)5:Honda K.等，2012年，PLoS One，第7卷，p.e46908

【發(fā)明內(nèi)容】

[0024]發(fā)明所要解決的課題
[0025]通常，腫瘤的檢測(cè)使用腫瘤標(biāo)志物，但是已知胰腫瘤難以利用腫瘤標(biāo)志物進(jìn)行檢 測(cè)。胰腫瘤中，特別是早期的胰癌患者與健常者難以辨別，因此使用腫瘤標(biāo)志物的胰癌的早 期檢測(cè)非常困難。此外，關(guān)于能夠檢測(cè)胰良性腫瘤的腫瘤標(biāo)志物，迄今為止基本未知。
[0026]本發(fā)明的課題是提供利用胰腫瘤標(biāo)志物AP0A2蛋白質(zhì)變異體，具有胰腫瘤、即胰癌 或胰良性腫瘤的高檢測(cè)靈敏度，并且比前述專利文獻(xiàn)4、5和非專利文獻(xiàn)5中記載的檢測(cè)方法 簡(jiǎn)便、通量高的胰腫瘤的檢測(cè)方法和胰腫瘤檢測(cè)用試劑盒。
[0027]用于解決課題的方法
[0028]為了解決上述課題，本發(fā)明者們首先旨在開發(fā)以AP0A2-ATQ/AT蛋白質(zhì)二聚體為對(duì) 象利用了 ELISA測(cè)定法的胰癌的檢測(cè)方法。然后，嘗試了基于通常進(jìn)行的方法，使用針對(duì)構(gòu) 成AP0A2-ATQ/AT蛋白質(zhì)二聚體的AP0A2-ATQ蛋白質(zhì)和AP0A2-AT蛋白質(zhì)各自的C末端區(qū)域的 抗體(抗AP0A2蛋白質(zhì)末端抗體），來檢測(cè)AP0A2-ATQ/AT蛋白質(zhì)二聚體。然而，可能由于血中 存在的妨礙物質(zhì)、在2種抗體結(jié)合于同一抗原時(shí)引起的空間位阻的影響，判明了不能高精度 地檢測(cè)該二聚體。
[0029]因此，本發(fā)明者們反復(fù)進(jìn)行了深入研究，確立了通過應(yīng)用夾心ELISA法，來分別測(cè) 定AP0A2-ATQ蛋白質(zhì)的總量和AP0A2-AT蛋白質(zhì)的總量的方法，所述夾心ELISA法組合了與前 述C末端區(qū)域特異性結(jié)合的抗AP0A2蛋白質(zhì)末端抗體、和與AP0A2蛋白質(zhì)的除了 C末端區(qū)域以 外的區(qū)域特異性結(jié)合的抗體(抗AP0A2蛋白質(zhì)非末端抗體）。進(jìn)而，通過適用分別測(cè)定AP0A2-ATQ蛋白質(zhì)的總量的測(cè)定值和AP0A2-AT蛋白質(zhì)的總量的測(cè)定值，將其結(jié)果進(jìn)行組合的解析 法，而不是以往進(jìn)行的測(cè)定AP0A2-ATQ/AT蛋白質(zhì)二聚體的量，能夠高精度地判別胰癌患者 與健常者。進(jìn)而，通過使用該解析法，發(fā)現(xiàn)了通過迄今為止報(bào)告的腫瘤標(biāo)志物不可能實(shí)現(xiàn)的 胰良性腫瘤的檢測(cè)這樣預(yù)料不到的效果。發(fā)現(xiàn)了基于該技術(shù)，能夠以極高靈敏度檢測(cè)出包 含胰良性腫瘤、早期胰癌在內(nèi)的胰腫瘤，從而完成了本發(fā)明。
[0030] 本發(fā)明包含以下的發(fā)明。
[0031] (1)胰腫瘤的檢測(cè)方法，是測(cè)定受試體的體液樣品中AP0A2蛋白質(zhì)變異體的量來檢 測(cè)胰腫瘤的方法，包括：
[0032] (A)第1工序，使用與AP0A2-ATQ蛋白質(zhì)的C末端區(qū)域特異性結(jié)合的抗AP0A2-ATQ末 端抗體、和與除了該C末端區(qū)域以外的氨基酸序列結(jié)合的抗AP0A2-ATQ非末端抗體，來測(cè)定 樣品中的AP0A2-ATQ蛋白質(zhì)的量，所述AP0A2-ATQ蛋白質(zhì)由序列號(hào)1所示的氨基酸序列組成， [0033] (B)第2工序，使用與AP0A2-AT蛋白質(zhì)的C末端區(qū)域特異性結(jié)合的抗AP0A2-AT末端 抗體、和與除了該C末端區(qū)域以外的氨基酸序列結(jié)合的抗AP0A2-AT非末端抗體，來測(cè)定樣品 中的AP0A2-AT蛋白質(zhì)的量，所述AP0A2-AT蛋白質(zhì)由序列號(hào)2所示的氨基酸序列組成，
[0034] (C)第3工序，將由第1工序獲得的AP0A2-ATQ蛋白質(zhì)的量的測(cè)定值和由第2工序獲 得的AP0A2-AT蛋白質(zhì)的量的測(cè)定值輸入預(yù)先設(shè)定的判別式而獲得受試體的判別值，在該受 試體的判別值與健常體的測(cè)定值或判別值相比在統(tǒng)計(jì)學(xué)上有顯著性差異時(shí)，確定受試體罹 患胰腫瘤。
[0035] (2)根據(jù)（1)所述的檢測(cè)方法，AP0A2-ATQ蛋白質(zhì)和AP0A2-AT蛋白質(zhì)的所述C末端區(qū) 域分別由包含6個(gè)以上連續(xù)氨基酸的序列組成，所述6個(gè)以上連續(xù)氨基酸包含C末端在內(nèi)。 [0036] (3)根據(jù)（1)或(2)所述的檢測(cè)方法，前述判別式是選自邏輯回歸式、利用支持向量 機(jī)的解析制作的判別式、利用神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)的解析制作的判別式以及利用判別分析的解析制作 的判別式中的任一種。
[0037] (4)根據(jù)（3)所述的檢測(cè)方法，前述邏輯回歸式包含AP0A2-ATQ蛋白質(zhì)的前述測(cè)定 值、和/或AP0A2-AT蛋白質(zhì)的前述測(cè)定值、和/或AP0A2-ATQ蛋白質(zhì)的前述測(cè)定值與AP0A2-AT 蛋白質(zhì)的前述測(cè)定值的積作為變量。
[0038] (5)根據(jù)(4)所述的方法，由前述邏輯回歸式獲得的受試體的判別值是健常體的判 別值的三分之二以下。
[0039] (6)根據(jù)(1)~(5)中任一項(xiàng)所述的檢測(cè)方法，前述胰腫瘤是胰癌或胰良性腫瘤。
[0040] (7)根據(jù)(6)所述的檢測(cè)方法，還包括第4工序:對(duì)于在前述第3工序中已確定罹患 胰腫瘤的受試體，測(cè)定該受試體的體液樣品中的胰癌標(biāo)志物CA19-9或DU-PAN-2的量，在其 測(cè)定值超過規(guī)定基準(zhǔn)值的情況下，確定受試體罹患胰癌;在其測(cè)定值為該基準(zhǔn)值以下的情 況下，確定受試體罹患胰良性腫瘤。
[0041] (8)根據(jù)(1)~(7)中任一項(xiàng)所述的檢測(cè)方法，前述體液樣品是血液、血漿、或血清。
[0042] (9)根據(jù)(1)~(8)中任一項(xiàng)所述的檢測(cè)方法，前述胰癌是早期胰癌。
[0043] (10)單克隆抗體或其片段，該單克隆抗體是與AP0A2-ATQ蛋白質(zhì)的C末端區(qū)域特異 性結(jié)合的抗AP0A2-ATQ末端抗體，所述AP0A2-ATQ蛋白質(zhì)由序列號(hào)1所示的氨基酸序列組成， 該單克隆抗體的重鏈的⑶Rl、CDR2和⑶R3分別由序列號(hào)4、5和6所示的氨基酸序列組成，且 輕鏈的⑶Rl、⑶R2和⑶R3分別由序列號(hào)7、8和9所示的氨基酸序列組成。
[0044] (11)單克隆抗體或其片段，該單克隆抗體是與AP0A2-ATQ蛋白質(zhì)的C末端區(qū)域特異 性結(jié)合的抗AP0A2-ATQ末端抗體，所述AP0A2-ATQ蛋白質(zhì)由序列號(hào)1所示的氨基酸序列組成， 該單克隆抗體的重鏈的⑶R1XDR2和⑶R3分別由序列號(hào)10、11和12所示的氨基酸序列組成， 且輕鏈的⑶RU⑶R2和⑶R3分別由序列號(hào)13、14和15所示的氨基酸序列組成。
[0045] (12)單克隆抗體或其片段，該單克隆抗體是識(shí)別AP0A2蛋白質(zhì)的除C末端區(qū)域以外 的氨基酸序列的抗AP0A2蛋白質(zhì)非末端抗體，所述AP0A2蛋白質(zhì)由序列號(hào)1~3中任一項(xiàng)所示 的氨基酸序列組成，該單克隆抗體的重鏈的⑶Rl、⑶R2和⑶R3分別由序列號(hào)16、17和18所示 的氨基酸序列組成，且輕鏈的⑶Rl、CDR2和⑶R3分別由序列號(hào)19、20和21所示的氨基酸序列 組成。
[0046] (13)單克隆抗體或其片段，該單克隆抗體是識(shí)別AP0A2蛋白質(zhì)的除C末端區(qū)域以外 的氨基酸序列的抗AP0A2蛋白質(zhì)非末端抗體，所述AP0A2蛋白質(zhì)由序列號(hào)1~3中任一項(xiàng)所示 的氨基酸序列組成，該單克隆抗體的重鏈的⑶Rl、⑶R2和⑶R3分別由序列號(hào)22、23和24所示 的氨基酸序列組成，且輕鏈的⑶Rl、CDR2和⑶R3分別由序列號(hào)25、26和27所示的氨基酸序列 組成。
[0047] (14)胰腫瘤的檢測(cè)用試劑盒，包含1種以上前述(10)~（13)所述的抗體或其片段。
[0048]本說明書包含作為本申請(qǐng)的優(yōu)先權(quán)基礎(chǔ)的日本專利申請(qǐng)2013-206682號(hào)、2014-166188號(hào)的說明書和/或附圖所記載的內(nèi)容。
[0049]發(fā)明的效果
[0050]根據(jù)本發(fā)明，能夠通過測(cè)定血中的胰腫瘤標(biāo)志物AP0A2蛋白質(zhì)變異體，來簡(jiǎn)便、高 通量且高靈敏度地檢測(cè)胰腫瘤。例如，僅通過測(cè)定從患者采集的血液等體液樣品中包含的 特定的AP0A2蛋白質(zhì)變異體的量，就能夠確定該患者是否罹患胰腫瘤、或者評(píng)價(jià)罹患的可能 性。
【附圖說明】
[0051 ]圖I(A)是測(cè)定作為抗AP0A2-ATQ末端單克隆抗體的克隆7F2對(duì)AP0A2蛋白質(zhì)的各種 變異體的結(jié)合活性而得的圖。圖I(B)是測(cè)定作為抗AP0A2-ATQ末端單克隆抗體的克隆6G2對(duì) AP0A2蛋白質(zhì)的各種變異體的結(jié)合活性而得的圖。
[0052] 圖2(A)是測(cè)定抗AP0A2-ATQ末端單克隆抗體7F2、6G2或抗AP0A2-ATQ末端多克隆抗 體（圖中標(biāo)記為多抗)對(duì)AP0A2-ATQ蛋白質(zhì)或AP0A2-AT蛋白質(zhì)的結(jié)合活性而得的圖。圖2(B) 是用由（A)獲得的前述抗體對(duì)AP0A2-ATQ蛋白質(zhì)的結(jié)合活性的測(cè)定值除以對(duì)AP0A2-AT蛋白 質(zhì)的結(jié)合活性的測(cè)定值，來評(píng)價(jià)抗體的結(jié)合特異性的圖。
[0053]圖3是測(cè)定抗AP0A2-AT末端多克隆抗體對(duì)AP0A2蛋白質(zhì)的各種變異體的結(jié)合活性 而得的圖。
[0054]圖4(A)是測(cè)定作為抗AP0A2蛋白質(zhì)非末端單克隆抗體的MABl對(duì)AP0A2蛋白質(zhì)的各 種變異體的結(jié)合活性而得的圖。圖4(B)是測(cè)定作為抗AP0A2蛋白質(zhì)非末端單克隆抗體的 MAB2對(duì)AP0A2蛋白質(zhì)的各種變異體的結(jié)合活性而得的圖。
[0055]圖5是通過質(zhì)量分析法測(cè)定胰癌患者和健常者各40名的血漿中包含的AP0A2蛋白 質(zhì)二聚體(AP0A2-ATQ/AT)而得的圖。
[0056]圖6是通過夾心ELISA法測(cè)定胰癌患者和健常者各40名的血漿中包含的AP0A2蛋白 質(zhì)二聚體(AP0A2-ATQ/AT)而得的圖，所述夾心ELISA法使用了特異性識(shí)別AP0A2-ATQ蛋白質(zhì) 的C末端區(qū)域的氨基酸序列的單克隆抗體(抗AP0A2-ATQ末端單克隆抗體）和特異性識(shí)別 AP0A2-AT的C末端區(qū)域的氨基酸序列的多克隆抗體(抗AP0A2-AT末端多克隆抗體抗體）。 [0057]圖7是通過夾心ELISA法測(cè)定胰癌患者和健常者各40名的血漿中包含的AP0A2-ATQ 蛋白質(zhì)而得的圖，所述夾心ELISA法使用了特異性識(shí)另UAP0A2-ATQ蛋白質(zhì)的C末端區(qū)域的氨 基酸序列的單克隆抗體(抗AP0A2-ATQ末端單克隆抗體)和特異性識(shí)別除了 C末端區(qū)域以外 的氨基酸序列的抗體(抗AP0A2-ATQ非末端抗體）。
[0058]圖8是通過夾心ELISA法測(cè)定胰癌患者和健常者各40名的血漿中包含的AP0A2-AT 蛋白質(zhì)而得的圖，所述夾心ELISA法使用了特異性識(shí)別AP0A2-AT蛋白質(zhì)的C末端區(qū)域的氨基 酸序列的多克隆抗體(抗AP0A2-AT末端多克隆抗體)和特異性識(shí)別除了 C末端區(qū)域以外的氨 基酸序列的抗體(抗AP0A2-AT非末端抗體）。
[0059]圖9是將胰癌患者和健常者各40名的血漿中包含的2種AP0A2蛋白質(zhì)變異體 (AP0A2-ATQ蛋白質(zhì)和AP0A2-AT蛋白質(zhì)）的量的積作圖而得的圖。
[0060] 圖10是將胰癌患者244名和健常者109名的血漿中包含的2種AP0A2蛋白質(zhì)變異體 (AP0A2-ATQ蛋白質(zhì)和AP0A2-AT蛋白質(zhì)）的濃度作圖而得的圖。
[0061] 圖11是將胰癌患者(UICC分類中的I期、II期)和健常者的測(cè)定值代入邏輯回歸式， 制作ROC曲線而得的圖。（A)表示對(duì)于2種AP0A2蛋白質(zhì)變異體(AP0A2-ATQ蛋白質(zhì)和AP0A2-AT 蛋白質(zhì)）的夾心ELISA法測(cè)定值的積進(jìn)行解析而得的結(jié)果，（B)表示通過質(zhì)量分析法對(duì)于 AP0A2蛋白質(zhì)二聚體(AP0A2-ATQ/AT)進(jìn)行解析而得的結(jié)果。
[0062]圖12是將胰良性腫瘤患者和健常者的測(cè)定值代入邏輯回歸式，制作ROC曲線而得 的圖。（A)表示對(duì)于利用夾心ELISA法測(cè)定的、2種AP0A2蛋白質(zhì)變異體(AP0A2-ATQ蛋白質(zhì)和 AP0A2-AT蛋白質(zhì)）的測(cè)定值的積進(jìn)行解析而得的的結(jié)果，（B)表示對(duì)于CA19-9的測(cè)定值進(jìn)行 解析而得的結(jié)果。
【具體實(shí)施方式】
[0063]成為本發(fā)明的測(cè)定對(duì)象的是胰腫瘤。在本說明書中，"胰腫瘤"是指在胰臟中形成 的全部腫瘤。具體而言，是作為惡性腫瘤的"胰癌"和作為良性腫瘤的"胰良性腫瘤"。
[0064] 在本說明書中，所謂"胰癌"，是指在胰臟中形成的全部惡性腫瘤。具體而言，包含 浸潤(rùn)性胰導(dǎo)管癌、胰導(dǎo)管內(nèi)管狀腺癌、胰腺房細(xì)胞癌、胰漿液性囊胞腺癌、胰粘液性囊胞腫 瘤(胰粘液性囊胞腫瘤的一種）、胰導(dǎo)管內(nèi)乳頭粘液性腫瘤(胰導(dǎo)管內(nèi)乳頭粘液性腫瘤的一 種）、胰神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤(胰內(nèi)分