α-氰基-4-羥基肉桂酸正丙酯、制備方法及應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】α-氰基-4-羥基肉桂酸正丙酯、制備方法及應(yīng)用，屬于基質(zhì)輔助激光解吸電離質(zhì)譜（MALDI）【技術(shù)領(lǐng)域】。是在室溫?cái)嚢柘?，向反?yīng)溶劑中加入哌啶，再加入氰基乙酸丙酯和4-羥基苯甲醛，待藥品溶解后再加入甲苯，升溫回流除水后停止反應(yīng)，然后冷卻至室溫后，旋蒸得含α-氰基-4-羥基肉桂酸正丙酯的濃縮液；產(chǎn)物純化：將所得濃縮液倒入大量去離子水中，立即有固體析出，抽濾得濾餅；再將濾餅用乙醇重結(jié)晶1～5次，得微黃色產(chǎn)物，即α-氰基-4-羥基肉桂酸正丙酯。采用本發(fā)明的質(zhì)譜分析方法檢測(cè)各類樣品，靈敏度與檢測(cè)限與傳統(tǒng)基質(zhì)（α-氰基-4-羥基肉桂酸）相比，具有更好的測(cè)試效果。
【專利說明】α -氰基-4-羥基肉桂酸正丙酯、制備方法及應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于基質(zhì)輔助激光解吸電離質(zhì)譜(MALDI)【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及α-氰基-4-羥基肉桂酸正丙酯、制備方法及在作為MALDI的基質(zhì)方面的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002]基質(zhì)輔助激光解吸電離(MALDI)質(zhì)譜技術(shù)自1988年Tanaka等人報(bào)道以來，就備受各國(guó)研究者的青睞?；|(zhì)在MALDI分析中充當(dāng)十分重要的角色，它們不僅能吸收和傳遞激光能量，同時(shí)也能將待測(cè)物分子分離開防止它們聚集成簇免遭強(qiáng)烈激光照射使待測(cè)物分子發(fā)生碎裂。一個(gè)“好的”基質(zhì)需要滿足幾個(gè)條件，包括其要在所用激光波長(zhǎng)處有較強(qiáng)的吸收能力，并且能夠與待測(cè)物互溶從而能夠很好的共同均勻結(jié)晶。事實(shí)上，一種基質(zhì)可能不同時(shí)具備滿足一個(gè)樣品中各種各樣的待測(cè)物的要求，因此經(jīng)常使用混合基質(zhì)即在基質(zhì)的溶液中加入適當(dāng)?shù)妮o助基質(zhì)。然而因?yàn)槿狈?yán)格的指導(dǎo)性規(guī)則，在MALDI中找到一種適合作為基質(zhì)或是輔助基質(zhì)的化合物是一個(gè)需要大量的勞動(dòng)和時(shí)間的工作。幸運(yùn)的是，近年來在生物樣品MALDI分析中基質(zhì)添加物或是新基質(zhì)的研究取得很大進(jìn)展。
[0003]因?yàn)槊糠N基質(zhì)都有其特定的“能力閥值”，而電離不同類型的樣品需要不同的能量。同時(shí)，在檢測(cè)過程中要保持樣品的穩(wěn)定性，太“熱”(能量傳遞太高、太快)的基質(zhì)會(huì)導(dǎo)致樣品不可預(yù)測(cè)的解離，因此在MALDI的使用中，不同類型的樣品要用不同的基質(zhì)。在選用好適用于待測(cè)樣品的基質(zhì)后便可以使用MALDI MS進(jìn)行樣品制備分析，其流程主要包括:(I)選擇適合樣品類型的基質(zhì)后，將樣品與基質(zhì)按照適當(dāng)?shù)谋壤鶆虻幕旌?，一般為混合溶液?br> (2)用微量移液槍取約0.5ul上述的混合溶液使其自由滴落在靶板上。(3)使液滴自然結(jié)晶。(4)打開質(zhì)譜儀取下靶板，將樣品靶放進(jìn)質(zhì)譜儀，此時(shí)質(zhì)譜儀處于高真空工作狀態(tài)。(5)待質(zhì)譜儀顯示準(zhǔn)備好后，點(diǎn)擊樣品點(diǎn)的不同位置，用激光照射樣品，產(chǎn)生離子。MALDI產(chǎn)生的離子基本上均帶一個(gè)電荷，為準(zhǔn)分子離子。
[0004]MALDI質(zhì)譜技術(shù)常用的基質(zhì)，如α -氰基-4-羥基肉桂酸(CHCA)、2，5_ 二羥基苯甲醛(DHB)和芥子酸(SA)等測(cè)試樣品時(shí)往往遇到以下問題:(I)質(zhì)量范圍與樣品類型不廣:CHCA 一般只適用于分子量500~1000ODa, DHB 一般適用于分子量小于5000的多肽,多糖和糖肽；而SA —般適用于分子量大于10000的蛋白。(2)待分析的樣品，尤其是生物樣品如蛋白組學(xué)研究的實(shí)際樣品，往往存在大量的雜質(zhì)和其他非蛋白成分，這使得質(zhì)譜檢測(cè)靈敏度大大降低，且嚴(yán)重抑制樣品信號(hào)，因此需要加入額外的除鹽步驟和除雜質(zhì)操作，導(dǎo)致樣品大量損失，而低的樣品含量給后續(xù)質(zhì)譜分析和檢測(cè)帶來困難。(3) CHCA在合成制備上不易得到純品，商業(yè)化產(chǎn)品價(jià)格高。因此，開發(fā)一些同時(shí)具有CHCA、DHB和SA三種傳統(tǒng)基質(zhì)優(yōu)良性能，且相對(duì)靈敏度更高，應(yīng)用范圍更廣，易獲取的基質(zhì)材料是對(duì)當(dāng)前基于MALDI的質(zhì)譜分析的重要和有力補(bǔ)充，具有良好的實(shí)用價(jià)值和應(yīng)用前景。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明的一個(gè)目的是提供α -氰基-4-羥基肉桂酸正丙酯、制備方法及在作為MALDI的基質(zhì)方面的應(yīng)用。
[0006]本發(fā)明所述的α-氰基-4-羥基肉桂酸正丙酯的結(jié)構(gòu)式如式(I)所示:
[0007]
【權(quán)利要求】
1.α -氰基-4-羥基肉桂酸正丙酯，其結(jié)構(gòu)式如式(I)所示:






。(1)
2.權(quán)利要求1所述的α-氰基-4-羥基肉桂酸正丙酯的制備方法，其步驟如下: 1)室溫?cái)嚢柘?，向反?yīng)溶劑中加入哌啶，再加入氰基乙酸丙酯和4-羥基苯甲醛，待藥品溶解后再加入甲苯，升溫回流除水后停止反應(yīng)，冷卻至室溫后，旋蒸得含α -氰基-4-羥基肉桂酸正丙酯的濃縮液； 2)產(chǎn)物純化:將上面步驟所得濃縮液倒入到大量去離子水中，抽濾得濾餅；再將濾餅用乙醇重結(jié)晶I~5次，得微黃色產(chǎn)物，即α -氰基-4-羥基肉桂酸正丙酯。
3.如權(quán)利要求2所述的α-氰基-4-羥基肉桂酸正丙酯的制備方法，其特征在于:步驟I)中哌啶的加入量為4-羥基苯甲醛摩爾數(shù)的1%~10%。
4.如權(quán)利要求2所述的α-氰基-4-羥基肉桂酸正丙酯的制備方法，其特征在于:步驟I)中氰基乙酸丙酯與4-羥基苯甲醛的摩爾比為1:0.5~5。
5.如權(quán)利要求2所述的α-氰基-4-羥基肉桂酸正丙酯的制備方法，其特征在于:步驟I)中反應(yīng)溶劑為乙醇，氰基乙酸丙酯與乙醇的摩爾比為1:1~1000 ;乙醇與甲苯的摩爾比為1:0.5~10。
6.如權(quán)利要求2所述的α-氰基-4-羥基肉桂酸正丙酯的制備方法，其特征在于:步驟I)中反應(yīng)溫度為40~1 50攝氏度，反應(yīng)時(shí)間為0.5~24小時(shí)。
7.如權(quán)利要求2所述的α-氰基-4-羥基肉桂酸正丙酯的制備方法，其特征在于:步驟2)中濃縮液與去離子水的體積比為1:10~1000，濾餅與乙醇質(zhì)量比為1:10~1000。
8.權(quán)利要求1所述的α-氰基-4-羥基肉桂酸正丙酯在作為MALDI的基質(zhì)方面的應(yīng)用。
【文檔編號(hào)】C07C253/30GK103483223SQ201310414668
【公開日】2014年1月1日 申請(qǐng)日期:2013年9月12日 優(yōu)先權(quán)日:2013年9月12日
【發(fā)明者】國(guó)新華, 肖朝輝, 劉超, 王晟 申請(qǐng)人:吉林大學(xué)