一種新的倍半萜活性成分及其制備方法與應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種新的倍半萜化合物及其制備方法和應(yīng)用。該發(fā)明具體公開了從犬問荊中經(jīng)提取、萃取、柱層析分離以及重結(jié)晶純化得到一種新的倍半萜化合物的制備方法，并采用光譜技術(shù)確定其分子式為C15H24O6，分子量為300，稱為犬問荊內(nèi)酯。通過瓊脂擴(kuò)散法檢測(cè)該化學(xué)成分的抗菌活性，結(jié)果表明該活性成分對(duì)枯草芽孢桿菌具有明顯的抑制活性。本發(fā)明中犬問荊內(nèi)酯的制備方法簡(jiǎn)單、易行，短周期內(nèi)即可獲得高純度、高收率和高附加值的產(chǎn)品，適用于產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)和應(yīng)用，可為醫(yī)藥工業(yè)提供有藥用價(jià)值的新化合物或先導(dǎo)化合物。
【專利說明】一種新的倍半疏活性成分及其制備方法與應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種從植物中提取、分離純化具有生物活性的化合物，具體是從犬問荊[Equisetum palustre L.]全草中提取、分離純化一種新的具有生物活性的內(nèi)酯化合物及其提取方法，屬于植物次生代謝產(chǎn)物分離純化領(lǐng)域。該化合物為犬問荊內(nèi)酯，化學(xué)名為:
IS,2R, 7S, 8R-四羥基-丁香烷 _[4，7]_4，5-內(nèi)酯。
【背景技術(shù)】
[0002]犬問荊[Equisetumpalustre L.],為木賊科(Equisetaceae)、問荊(Equisetum)屬藥用植物。廣泛分布于全國(guó)各地海拔200-4000米地區(qū)。在國(guó)內(nèi)外民間被廣泛用于治療潰瘍、痔瘡、腎結(jié)石等癥，并具有鎮(zhèn)靜、保肝解毒、降血壓、降血脂作用(于榮敏等，1986; Yesilada E.et al, 1995; Honda G.et al, 1996;李德坤等，2000; Ji Y.B.etal，2003)。兼具問荊的功效，在我國(guó)也經(jīng)常將其作為問荊使用。犬問荊全草入藥?！堕}東本草》記載，犬問荊具有治療“腸風(fēng)痔漏”之功效。國(guó)內(nèi)外民間驗(yàn)方中將其廣泛應(yīng)用于消化道潰瘍疾病的治療?，F(xiàn)代藥理研究表明，犬問荊具有抗泌尿系統(tǒng)、心血管系統(tǒng)、胃腸功能紊亂疾病、抗氧化、抗菌、抗腫瘤等多種生物學(xué)活性，資源豐富具有很高的應(yīng)用價(jià)值。
[0003]犬問荊中已知的 次生代謝產(chǎn)物包括犬問荊堿,犬問荊定堿,煙堿，山柰酹-3-雙葡萄糖-7-葡萄糖式，山柰酌.-3-鼠李糖葡萄糖式，山柰酌.-3-氧-蘆丁式-7-氧-槐糖式，山柰酚-3-氧(6-氧-丙二酰基葡萄糖甙)-7-氧-葡萄糖甙，山柰酚-3，7-雙葡萄糖甙，山柰酌._3_鼠李糖葡萄糖-7-葡萄糖式，山柰酌.-3-蕓香糖-7-葡萄糖式，槲皮素-3-蕓香糖-7-葡萄糖甙，烏頭酸等(楊純瑜等，1997;Gurbuz 1.et al，2009;周榮漢等，1985)?？傮w上，涉及生物堿、黃酮類和有機(jī)酸類。
[0004]本發(fā)明中的倍半萜化合物為首次從犬問荊中提取、分離純化得到的萜類，并且為一種新化合物，在已有文獻(xiàn)中未有報(bào)道。實(shí)驗(yàn)證明該化合物具有明顯的抗菌活性，可在制備抗菌藥物中應(yīng)用。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明的一個(gè)目的在于提供從犬問荊全草中提取分離得到的一種新的倍半萜化合物犬問荊內(nèi)酯。
[0006]本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供上述倍半萜化合物犬問荊內(nèi)酯的制備方法。
[0007]本發(fā)明的再一個(gè)目的是提供上述倍半萜化合物犬問荊內(nèi)酯在抗菌藥物中的應(yīng)用。
[0008]本發(fā)明提供的倍半萜活性成分——犬問荊內(nèi)酯是通過以下方案獲得的:
[0009](I)提取:將犬問荊全草原料粉碎后，按質(zhì)量體積比加入5~20倍原料質(zhì)量的丙酮、甲醇、乙醇或醇水混合溶液進(jìn)行熱回流、負(fù)壓空化或超聲波輔助提取，共提取2~5次，每次20min~60min,合并提取液,濃縮至干,得到犬問荊全草提取物；
[0010](2)負(fù)壓空化混懸液液萃取:將犬問荊全草提取物分散于按質(zhì)量體積比3~5倍的40~50° C水中，然后裝入負(fù)壓空化萃取柱，分別用和水等體積的石油醚或正己烷負(fù)壓空化混懸液液萃取2~4次，萃取后的水相再分別用與水等體積的乙酸乙酯負(fù)壓空化混懸液液萃取2~4次，合并乙酸乙酯萃取液，濃縮至干，得到乙酸乙酯萃取物；
[0011](3)柱層析分離:將乙酸乙酯萃取物用甲醇溶解，加入與乙酸乙酯萃取物等質(zhì)量的目數(shù)為300~400的層析硅膠拌勻、40° C減壓蒸干，預(yù)先稱取乙酸乙酯萃取物質(zhì)量4~5倍的500~800目層析硅膠，采用體積比為4:1的正己烷-乙酸乙酯混合溶劑濕法裝柱，將拌好樣品的硅膠裝入層析柱內(nèi)，以體積比為4:1~1:1的正己烷-乙酸乙酯混合溶劑洗脫，薄層層析檢測(cè)，合并含化合物犬問荊內(nèi)酯的流份，濃縮至干，得到犬問荊內(nèi)酯粗品；
[0012](4)重結(jié)晶:上述犬問荊內(nèi)酯粗品用乙酸乙酯重結(jié)晶得犬問荊內(nèi)酯純品。
[0013]本發(fā)明產(chǎn)品經(jīng)質(zhì)譜、紅外光譜、核磁共振波譜和X射線單晶衍射等多種手段檢測(cè)，確定了犬問荊內(nèi)酯的分子式為C15H24O6，化學(xué)結(jié)構(gòu)式為:
[0014]
【權(quán)利要求】
1.一種倍半萜生物活性成分，其特征在于:以犬問荊為原料，經(jīng)提取、負(fù)壓空化混懸液液萃取、柱層析分離和重結(jié)晶得到，并采用質(zhì)譜和核磁共振等光譜分析技術(shù)，確定該化合物為犬問荊內(nèi)酯:1s，2R, 7S, SR-四羥基-丁香烷-[4，7]_4，5-內(nèi)酯，其化學(xué)結(jié)構(gòu)式如下:
2.按照權(quán)利要求1所述的一種倍半萜活性成分的制備方法，其特征在于具體制備步驟如下: (1)提取:以犬問荊全草為原料，經(jīng)粉碎后，按質(zhì)量體積比加入5~20倍原料質(zhì)量的丙酮、甲醇、乙醇或醇水混合溶液進(jìn)行熱回流、負(fù)壓空化或超聲波輔助提取，共提取2~5次，每次20min~60min,合并提取液,濃縮至干,得到犬問荊全草提取物； (2)負(fù)壓空化混懸液液萃取:將犬問荊全草提取物分散于按質(zhì)量體積比3~5倍的40~50° C水中，然后裝入負(fù)壓空化萃取柱，分別用和水等體積的石油醚或正己烷負(fù)壓空化混懸液液萃取2~4次，萃取后的水相再分別用與水等體積的乙酸乙酯負(fù)壓空化混懸液液萃取2~4次，合并乙酸乙酯萃取液，濃縮至干，得到乙酸乙酯萃取物； (3)柱層析分離:將乙酸乙酯萃取物用甲醇溶解，加入與乙酸乙酯萃取物等質(zhì)量的目數(shù)為300~400的層析硅膠拌勻、40° C減壓蒸干，預(yù)先稱取乙酸乙酯萃取物質(zhì)量4~5倍的500~800目層析硅膠，采用體積比為4:1的正己烷-乙酸乙酯混合溶劑濕法裝柱，將拌好樣品的硅膠裝入層析柱內(nèi)，以體積比為4:1~1:1的正己烷-乙酸乙酯混合溶劑洗脫，薄層層析檢測(cè)，合并含化合物犬問荊內(nèi)酯的流份，濃縮至干，得到犬問荊內(nèi)酯粗品； (4)重結(jié)晶:犬問荊內(nèi)酯粗品用乙酸乙酯重結(jié)晶得犬問荊內(nèi)酯純品。
3.權(quán)利要求1中所述的倍半萜化學(xué)成分在制備抗菌藥物中的應(yīng)用。
【文檔編號(hào)】C07D307/93GK104016952SQ201310063103
【公開日】2014年9月3日 申請(qǐng)日期:2013年2月28日 優(yōu)先權(quán)日:2013年2月28日
【發(fā)明者】付玉杰, 祖元?jiǎng)? 魏作富, 張芳榮, 陳永軒, 王微, 羅猛, 牟璠松, 彭霄 申請(qǐng)人:東北林業(yè)大學(xué), 付玉杰