用于治療炎性病癥的il17c拮抗劑的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了用于在治療炎性病癥中使用的IL17C拮抗劑。
【專利說明】用于治療炎性病癥的IL17C拮抗劑
[0001]相關(guān)申請(qǐng)的交叉引用
[0002]本申請(qǐng)要求于2011年10月19日提交的美國臨時(shí)專利申請(qǐng)?zhí)?1/548，744的權(quán)益，其全文通過引用結(jié)合在此。
發(fā)明領(lǐng)域
[0003]本申請(qǐng)涉及用于對(duì)如關(guān)節(jié)炎等炎性病癥進(jìn)行治療的IL17C拮抗劑。示例性的IL17C拮抗劑是IL17C特異性抗體或其片段，如人抗IL17C抗體。
[0004]背景
[0005]IL17C是IL17蛋白質(zhì)家族的一種分泌型二硫鍵連接的同型二聚體。已經(jīng)顯示，IL17C在體內(nèi)刺激單核細(xì)胞系THP-1釋放TNF-α和IL-1 β (Li等人(2000)《美國科學(xué)院院刊》(Proc.Natl.Acad.Sc1.USA) 97，773-8)。IL17C 可誘導(dǎo)炎性細(xì)胞因子，如 IL-1 β、IL-6和IL-23在腹腔滲出細(xì)胞(PECS)和3Τ3細(xì)胞系中的mRNA表達(dá)(Yamaguchi等人(2007 )《免疫學(xué)雜志》(J.1mmunol) 179，7128-36。在體內(nèi)，IL17C轉(zhuǎn)導(dǎo)的⑶4+T細(xì)胞可加重小鼠的膠原誘導(dǎo)性關(guān)節(jié)炎(CIA)，并且IL17C轉(zhuǎn)導(dǎo)的骨髓細(xì)胞重建的小鼠可遭受嚴(yán)重的膠原誘導(dǎo)性關(guān)節(jié)炎。據(jù)報(bào)告，IL17C可與IL-17受體E (IL17RE/Fc)結(jié)合，并且似乎可激活NF-κ B(Calhoun (2007)本科畢業(yè)論文:概念分子的證明的產(chǎn)生:中和IL17C的單克隆抗體；美國俄勒岡州立大學(xué)，大學(xué)榮譽(yù)學(xué)院；Gaffen (2009)《免疫學(xué)自然評(píng)論》(Nat Rev Immunol)9，556-67)，并且還有報(bào)告在IL17C缺陷型小鼠中可影響核IkappaB家族成員——IkB ζ對(duì)Thl7細(xì)胞的激活。(Chang等人(2011)《免疫學(xué)雜志》(Immunity) 35，1-11)。IL17C在正常組織中的表達(dá)似乎受到成人和胎兒腎臟地限制。IL17C在CIA小鼠的關(guān)節(jié)爪中的mRNA表達(dá)大大上升的。Hwang等人對(duì)類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者的滑液和周圍血液的單核細(xì)胞中的IL17C表達(dá)進(jìn)行了描述(Hwang和Kim (2005)《分子與細(xì)胞》(Mol Cells) 19，180-184)。
[0006]W099/060127 對(duì) IL17C 的克隆進(jìn)行了說明(PR01122)。W099/060127 將某些病癥與IL17C松散地相關(guān)聯(lián)，這些病癥包括關(guān)節(jié)炎(例如骨關(guān)節(jié)炎、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、銀屑病關(guān)節(jié)炎)、膿毒病、潰瘍性結(jié)腸炎、銀屑病、多發(fā)性硬化癥、I型糖尿病、巨細(xì)胞動(dòng)脈炎、系統(tǒng)性紅斑性狼瘡和修格蘭氏綜合征。在此考慮，W099/060127的化合物可被用于治療多種病情，包括以在此明確的疾病相關(guān)基因的過量表達(dá)和/或激活為特征的病情。然而，對(duì)IL17C的推測(cè)的功能還沒有實(shí)驗(yàn)證明。對(duì)于W02005/065711，也是如此。
[0007]本發(fā)明首次說明了，在體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中，IL17C拮抗劑在炎性病癥的治療中非常有效。
【發(fā)明內(nèi)容】

[0008]本發(fā)明提供了用于治療炎性病癥的IL17C拮抗劑。
[0009] 用本發(fā)明的拮抗劑進(jìn)行治療的炎性病癥可以是任何選自于下述疾病的炎性病癥，即:關(guān)節(jié)炎(如類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎)、哮喘、膿毒病、自身免疫性疾病(如炎癥性腸病)、COPD (慢性阻塞性肺病)、系統(tǒng)性紅斑性狼瘡(SLE)和結(jié)節(jié)病。在具體實(shí)施例中，所述炎性病癥是關(guān)節(jié)炎。[0010]本發(fā)明的IL17C拮抗劑可以是任何拮抗劑。優(yōu)選的是，所述拮抗劑是一種抗體或抗體片段，如單克隆抗體。所述抗體可以是一種IL17C特異性抗體或其片段或一種IL17C受體特異性抗體或其片段。
[0011]圖例
[0012]MlA顯示了一種受體相互作用分析的測(cè)定設(shè)定。在Mult1-array? 384孔板上包被IL17受體的E⑶融合蛋白。加入生物素酰化的小鼠IL17C，并通過鏈親和素進(jìn)行檢測(cè)。
[0013]圖1B顯示了如圖1A所示的受體相互作用測(cè)定的結(jié)果。清楚地看到，IL17C是結(jié)合到小鼠IL17RE/FC上的，但是不結(jié)合到小鼠IL-17RB或另一種不相關(guān)的受體上。
[0014]凰1￡顯示了如圖1A所示的受體相互作用測(cè)定的結(jié)果。三種現(xiàn)有技術(shù)抗體均不能抑制小鼠IL17C與小鼠IL17RE/FC的結(jié)合。
[0015]圖2顯示了基于尺寸排阻色譜法(SEC)的質(zhì)量控制結(jié)果。
[0016]M3顯示了 ELISA中的EC5tl的確定結(jié)果。以IOOnM作為起始濃度，將所有純化的嵌合的人-小鼠嵌合IgG2a抗體滴定到小鼠IL17C上。
[0017]Mi顯示了抗IL17C抗體的單價(jià)親和力。通過溶液平衡滴定法(SET)，使用Fab片段對(duì)親和力進(jìn)行確定。
[0018]顯示了在實(shí)例11中所描述的IL-17受體E抑制試驗(yàn)中所確定的IC5tl值。
[0019]圖6顯示了小鼠血清穩(wěn)定件測(cè)定的結(jié)果。在小鼠血清孵育24h之后，11種純化IgG顯示出具有可接受的產(chǎn)量并且與小鼠IL17C的特異性結(jié)合。
[0020]Ml顯示了 M0R12743和M0R12762給藥對(duì)于小鼠CIA模型的治療方案的臨床評(píng)分與載體Enbrc丨⑩(依那西普)以及與對(duì)照抗體(M0R03207)相比較的結(jié)果。
[0021]_顯示了 M0R12743和M0R12762給藥對(duì)于小鼠CIA模型的治療方案的AUC臨床評(píng)分與載體Enbrehi?:(依那西普)以及與對(duì)照抗體(M0R03207)相比較的結(jié)果。
[0022]_顯示了 M0R12762給藥對(duì)于小鼠CIA模 型的預(yù)防方案的Larsen評(píng)分與對(duì)照抗體(M0R03207)相比較的結(jié)果。
[0023]圖10顯示了在急件肺中件白細(xì)朐增多癥小鼠樽型中，M0R12762或M0R12743給藥對(duì)于炎性細(xì)胞進(jìn)入BALF的募集反應(yīng)與對(duì)照抗體(M0R03207)相比較的結(jié)果。
[0024]ail顯示了使用qRT-PCR的IL17C表達(dá)譜的結(jié)果。與對(duì)照樣品的IL17C表達(dá)水平相比較，在來源于診斷為炎性呼吸道疾病的供體的肺組織樣品中檢測(cè)到增加的IL17C表達(dá)水平。對(duì)每組的5個(gè)單獨(dú)的供體樣品進(jìn)行分析。
[0025]圖12顯示了在瞇喹草特GMQ)銀屑病樣小鼠模型中，M0R1243中和抗體對(duì)于表皮厚度的效應(yīng)。
[0026]圖 13A 顯示了在單用培養(yǎng)基、IL-1 (10ng/mL)、TNF (10ng/mL)、IL-17A (250ng/mL)或這些引發(fā)劑的組合進(jìn)行處理2h、6h、24h或48h的人表皮角化細(xì)胞中的IL17C mRNA表達(dá)的定量RT-PCR分析的結(jié)果。
[0027]圖13B顯示了單用培養(yǎng)基或多種TLR配體:TLR4配體LPS (I μ g/mL)、TLR5配體鞭毛蛋白(I P g/mL)、TLR7 配體保衛(wèi)性喹莫(guardiquimod) (4 μ g/mL)、TLR7/8 配體 CL097(10 μ g/mL)與TLR9配體CpG 0DN2116 (10 μ Μ)進(jìn)行處理2h、6h或24h的人表皮角化細(xì)胞中的IL-17C mRNA表達(dá)的定量RT-PCR分析的結(jié)果。[0028]本發(fā)明的詳細(xì)說明
[0029]本發(fā)明說明，IL17C是一種炎性病癥治療的有效靶標(biāo)。在這方面，在一方面，本發(fā)明提供了在炎性病癥治療中使用IL17C拮抗劑的預(yù)防或治療益處。
[0030]本發(fā)明提供了治療方法，這些方法包括對(duì)需要這種治療的受試者給予治療有效量的IL17C拮抗劑。在此所用的“治療有效量”或“有效量”是指引發(fā)理想的生物反應(yīng)所必需的IL17C拮抗劑的用量。根據(jù)本發(fā)明，治療有效量是治療和/或預(yù)防炎性病癥所必需的IL17C拮抗劑的用量。
[0031]術(shù)語“炎性病癥(inflammatorydisorder)” 或“炎性疾病(inflammatorydisease)”可互換使用，并且在此所用是指任何與炎癥相關(guān)聯(lián)的異常。與炎癥相關(guān)聯(lián)的疾病的實(shí)例包括尋常痤瘡、關(guān)節(jié)炎、如類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、哮喘、自身免疫性疾病、慢性前列腺炎、COPD (慢性阻塞性肺病)、腎小球腎炎、超敏反應(yīng)、炎癥性腸病、盆腔炎、再灌注損傷、結(jié)節(jié)病、移植排斥、血管炎、間質(zhì)性膀胱炎和膿毒病。炎性病癥可以是慢性的或者是急性的。自身免疫性疾病的實(shí)例包括強(qiáng)直性脊柱炎、克羅恩氏病(Crohn’ s Disease), II型糖尿病、胃炎、格-巴二氏綜合征(Guillain-Barr6 syndrome)、特發(fā)性血小板減少性紫癜、紅斑狼瘡、多發(fā)性硬化癥、銀屑病、銀屑病關(guān)節(jié)炎、下肢不寧綜合征、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、結(jié)節(jié)病、硬皮病、系統(tǒng)性紅斑性狼瘡和潰瘍性結(jié)腸炎。
[0032]關(guān)節(jié)炎可以表現(xiàn)為其自身是疾病的主要形式。這是例如在骨關(guān)節(jié)炎、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、膿毒性關(guān)節(jié)炎、痛風(fēng)和假痛風(fēng)、幼年型特發(fā)性關(guān)節(jié)炎、斯蒂爾病和強(qiáng)直性脊柱炎的情況下。其他形式的關(guān)節(jié)炎是繼發(fā)于其他疾病的，例如埃勒斯-當(dāng)洛斯綜合征、結(jié)節(jié)病、過敏性紫癜、銀屑病關(guān)節(jié)炎 、反應(yīng)性關(guān)節(jié)炎、血色素沉著癥、肝炎、韋格納氏肉芽腫病(Wegener’sgranulomatosis)(以及其他血管炎綜合征)、萊姆病(Lyme disease)、家族性地中海熱、伴有回歸熱的高免疫球蛋白血癥D、TNF受體相關(guān)性周期性綜合癥和炎癥性腸病(包括克羅恩氏病和潰瘍性結(jié)腸炎)。
[0033]術(shù)語“肺部炎癥”包括任何炎癥性肺部疾病、急慢性支氣管炎、慢性阻塞性肺疾病、肺纖維化、古德帕斯徹氏綜合征(Goodpasture’s syndrome)和其他白細(xì)胞起作用的肺部病癥，包括但不限于特發(fā)性肺纖維化和任何其他自身免疫性肺部疾病。
[0034]術(shù)語“IL17C”是指一種已知為白細(xì)胞介素17C的蛋白質(zhì)(在HUGO基因命名委員會(huì)(HGNC)中以ID5983進(jìn)行標(biāo)明，在小鼠基因組信息學(xué)(MGI)數(shù)據(jù)庫中以ID2446486進(jìn)行標(biāo)明)。IL17C在某些較老的出版物中是指CX2或IL-21，然而，它不能與IL-21細(xì)胞因子相混淆，IL-21細(xì)胞因子是在活化⑶4+T細(xì)胞中特異性表達(dá)的，而不在大多數(shù)其他組織中表達(dá)(Parrish-Novak 等人(2000)，《自然雜志》(Nature) 408 (6808):57 - 63)。人 IL-21 位于4號(hào)染色體上，可在HGNC數(shù)據(jù)庫中被ID6005識(shí)別。人IL17C位于16號(hào)染色體上，具有氨基酸序列(UniProt Q9P0M4)如下:
[0035]MTLLPGLLFLTWLHTCLAHHDPSLRGHPHSHGTPHCYSAEELPLGQAPPHLLARGAKWGQALPVALVSSLEAASHRGRHERPSATTQCPVLRPEEVLEADTHQRSISPWRYRVDTDEDRYPQKLAFAECLCRGCIDARTGRETAALNSVRLLQSLLVLRRRPCSRDGSGLPTPGAFAFHTEFIHVPVGCTCVLPRSV (SEQ ID N0.:181)
[0036]術(shù)語“IL17RA”是指一種已知為白細(xì)胞介素17受體A的蛋白質(zhì)。人IL17RA的氨基酸序列(UniProt Q96F46)如下:
[0037]MGAARSPPSAVPGPLLGLLLLLLGVLAPGGASLRLLDHRALVCSQPGLNCTVKNSTCLDDSWIHPRNLTPSSPKDLQIQLHFAHTQQ⑶LFPVAHIEWTLQTDASILYLEGAELSVLQLNTNERLCVRFEFLSKLRHHHRRWRFTFSHFWDPDQEYEVTVHHLPKPIPD⑶PNHQSKNFLVPDCEHARMKVTTPCMSSGSLWDPNITVETLEAHQLRVSFTLWNESTHYQILLTSFPHMENHSCFEHMHHIPAPRPEEFHQRSNVTLTLRNLKGCCRHQVQIQPFFSSCLNDCLRHSATVSCPEMPDTPEPIPDYMPLWVYWFITGISILLVGSVILLIVCMTWRLAGPGSEKYSDDTKYTDGLPAADLIPPPLKPRKVWIIYSADHPLYVDVVLKFAQFLLTACGTEVALDLLEEQAISEAGVMTWVGRQKQEMVESNSKIIVLCSRGTRAKWQALLGRGAPVRLRCDHGKPVGDLFTAAMNMILPDFKRPACFGTYVVCYFSEVSCD⑶VPDLFGAAPRYPLMDRFEEVYFRIQDLEMFQPGRMHRVGELS⑶NYLRSPGGRQLRAALDRFRDWQVRCPDWFECENLYSADDQDAPSLDEEVFEEPLLPPGTGIVKRAPLVREPGSQACLAIDPLVGEEGGAAVAKLEPHLQPRGQPAPQPLHTLVLAAEEGALVAAVEPGPLADGAAVRLALAGEGEACPLLGSPGAGRNSVLFLPVDPEDSPLGSSTPMASPDLLPEDVREHLEGLMLSLFEQSLSCQAQGGCSRPAMVLTDPHTPYEEEQRQSVQSDQGYISRSSPQPPEGLTEMEEEEEEEQDPGKPALPLSPEDLESLRSLQRQLLFRQLQKNSGffDTMGSESEGPSA (SEQ ID N0.:182) [0038]術(shù)語“IL17RE”是指一種已知為白細(xì)胞介素17受體E的蛋白質(zhì)。人IL17RE的氨基酸序列(UniProt Q8NFR9)如下:
[0039]MGSSRLAALLLPLLLIVIDLSDSAGIGFRHLPHWNTRCPLASHTDDSFTGSSAYIPCRTWWALFSTKPffCVRVWHCSRCLCQHLLSGGSGLQRGLFHLLVQKSKKSSTFKFYRRHKMPAPAQRKLLPRRHLSEKSHHISIPSPDISHKGLRSKRTQPSDPETWESLPRLDSQRHGGPEFSFDLLPEARAIRVTISSGPEVSVRLCHQWALECEELSSPYDVQKIVSGGHTVELPYEFLLPCLCIEASYLQEDTVRRKKCPFQSWPEAYGSDFWKSVHFTDYSQHTQMVMALTLRCPLKLEAALCQRHDWHTLCKDLPNATARESDGWYVLEKVDLHPQLCFKFSFGNSSHVECPHQTGSLTSWNVSMDTQAQQLILHFSSRMHATFSAAWSLPGLGQDTLVPPVYTVSQARGSSPVSLDLIIPFLRPGCCVLVWRSDVQFAWKHLLCPDVSYRHLGLLILALLALLTLLGVVLALTCRRPQSGPGPARPVLLLHAADSEAQRRLVGALAELLRAALGGGRDVIVDLWEGRHVARVGPLPWLWAARTRVAREQGTVLLLWSGADLRPVSGPDPRAAPLLALLHAAPRPLLLLAYFSRLCAKGDIPPPLRALPRYRLLRDLPRLLRALDARPFAEATSWGRLGARQRRQSRLELCSRLEREAARLADLG (SEQ ID N0.:183)
[0040]在此所用的“IL17C 拮抗劑(antagonist of IL17C)” 和 “IL17C 拮抗劑(IL17Cantagonist)”是指廣義上的IL17C拮抗劑。包括任何抑制IL17C的活性或功能的分子或以任何其他方式對(duì)IL17C產(chǎn)生效應(yīng)的分子。術(shù)語IL17C拮抗劑包括但不限于與IL17C特異性結(jié)合的抗體或抗體片段、IL17C特異性抑制性核酸或IL17C特異性有機(jī)小分子。在術(shù)語IL17C拮抗劑的意義范圍內(nèi)還包括與IL17C受體特異性結(jié)合的抗體或抗體片段、IL17C受體特異性抑制性核酸或IL17C受體特異性有機(jī)小分子。術(shù)語IL17C拮抗劑還指非抗體骨架分子，如纖維連接蛋白骨架、錨蛋白、maxybodies/avimers、A蛋白源分子、anticalins、人泛素(affi I ins)、蛋白表位模擬物(PEMs)等等。
[0041]抑制性核酸包括但不限于反義DNA、三鏈形成寡核苷酸、外部指導(dǎo)序列、SiRNA和microRNA。有用的抑制性核酸包括與對(duì)照相比可減少編碼IL17C的RNA的表達(dá)至少20、30、40、50、60、70、80、90或95%的那些。抑制性核酸及其生成方法是本領(lǐng)域眾所周知的。siRNA設(shè)計(jì)軟件可供使用。
[0042]通過天然產(chǎn)物篩選或化學(xué)品文庫篩選，可鑒定IL17C或IL17C受體特異性有機(jī)小分子(SMOLs)。典型地，SMOL的分子量低于500道爾頓，更典型地是從160到480道爾頓。SMOL的其他典型特性包括下述的一種或多種:
[0043]?分配系數(shù)log P的范圍是從-0.4到+5.6
[0044]?摩爾折射率是從40到130[0045]?原子數(shù)是從20到70
[0046]其評(píng)論見Ghose等人(1999)《組合化學(xué)雜志》(J Combin Chem):1，55-68以及Lipinski 等人(1997)《先進(jìn)藥物遞送評(píng)論》(Adv.Drug Del.Rev.):23, 3-25。
[0047]優(yōu)選的是，用于本發(fā)明的IL17C拮抗劑是一種IL17C特異性抗體或IL17C受體特異性抗體。這種抗體可以是任何類型的，如鼠類、大鼠、嵌合體、人源化或人源抗體。“人源”抗體或功能性人源抗體片段在此定義是一種非嵌合體的(例如不是“人源化的”)抗體，并且不是來自于(全部或部分地)一種非人物種。人源抗體或功能性抗體片段可來源于人類，可者可以是一種合成人源抗體?！昂铣扇嗽纯贵w”在此定義為，是一種具有經(jīng)由電腦模擬地全部或部分地來源于基于已知的人源抗體序列分析的合成序列的抗體?？赏ㄟ^對(duì)人源抗體或抗體片段序列數(shù)據(jù)庫進(jìn)行分析并且利用從其得到的數(shù)據(jù)對(duì)多肽序列進(jìn)行設(shè)計(jì)，而達(dá)到人源抗體序列或其片段的電腦模擬設(shè)計(jì)。人源抗體或功能性抗體片段的另一個(gè)實(shí)例是由人類起源的抗體序列文庫中分離出來的一種核酸所編碼的抗體或抗體片段(即這種文庫基于從人類天然來源中采離的抗體)。
[0048]“人源化抗體”或功能性人源化抗體片段在此定義為，是一種(i )來源于一種非人類來源(例如帶有異源性免疫系統(tǒng)的轉(zhuǎn)基因小鼠)的抗體，這種抗體是基于人類種系序列的；或(^)嵌合的抗體，其中可變域來源于一種非人類來源，并且恒定域來源于一種人類來源，或(iii ) CDR-移植抗體，其中可變域的CDR來源于非人類來源，而可變域的一個(gè)或多個(gè)構(gòu)架是人類來源的，恒定域(如果有)是人類來源的。
[0049]術(shù)語“嵌合的抗體”或功能性嵌合的抗體片段在此定義為，是一種具有恒定抗體區(qū)域和可變抗體區(qū)域的抗體分子，該恒定抗體區(qū)域是來源于或?qū)?yīng)于在一種物種中發(fā)現(xiàn)的序列，該可變抗體區(qū)域來源于另一種物種。優(yōu)選的是，恒定抗體區(qū)域是來源于或?qū)?yīng)于在人類中，例如在人類種系或體細(xì)胞中，發(fā)現(xiàn)的序列，可變抗體區(qū)域(例如VH、VL、CDR或FR區(qū)域)來源于在非人類動(dòng)物中，例如在小鼠、大鼠、兔或倉鼠中，發(fā)現(xiàn)的序列。
[0050]一方面，可通過一個(gè)完整抗體的“片段”來進(jìn)行抗原結(jié)合。在抗體的術(shù)語“抗體片段”中包括的結(jié)合片段的實(shí)例包括:Fab片段，是一種由VL、VH、CL和CHl結(jié)構(gòu)域組成的單價(jià)片段；F(ab)2片段，是一種包含由二硫鍵在鉸鏈區(qū)連接的兩個(gè)Fab片段的二價(jià)片段；由VH和CHl結(jié)構(gòu)域組成的Fd片段；由抗體單臂的VL和VH結(jié)構(gòu)域組成的Fv片段；由VH結(jié)構(gòu)域組成的單域抗體(dAb)片段(Ward等人，(1989)《自然雜志》(Nature) 341:544-546);以及分離的互補(bǔ)性決定區(qū)(⑶R)。
[0051]“單鏈片段(scFv)”是一種蛋白質(zhì)單鏈，其中VL和VH區(qū)域配對(duì)形成了單價(jià)分子(已知為單鏈Fv (scFv);參見，例如Bird等人，(1988)《科學(xué)雜志》(Science) 242 =423-426 ；以及 Huston 等人，(1988)《美國科學(xué)院院刊》(Proc.Natl.Acad.Sc1.)85:5879_5883)。盡管VL和VH這兩個(gè)結(jié)構(gòu)域是用單獨(dú)的基因進(jìn)行編碼的，它們可以用重組方法或用人工肽連接子進(jìn)行連接，使它們可以一個(gè)蛋白質(zhì)單鏈來制成。這類單鏈抗體包括一種或多種抗原結(jié)合部分。這些抗體片段可以通過本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的常規(guī)方法獲得，并且對(duì)這些片段采用與完整抗體相同的方式進(jìn)行有用性篩。
[0052]術(shù)語“分離的”是指一種可以是如抗體或抗體片段化合物，基本上不含其他的具有不同的抗原特異性的抗體或抗體片段。此外，分離的抗體或抗體片段可以是基本上不含其他細(xì)胞材料和/或化學(xué)品的。[0053]如在此使用的術(shù)語“單克隆抗體”是指具有單一分子構(gòu)成的抗體分子的制劑。單克隆抗體組合物展示了一個(gè)對(duì)于特定表位的具有獨(dú)特的結(jié)合特異性和親和力的獨(dú)特的結(jié)合位點(diǎn)。
[0054] 如在此所用的,一種“特異性結(jié)合到(binds specifically to)”、“特異性結(jié)合到(specifically binds to)”的抗體,是對(duì)于一種抗原“具有特異性”或?qū)ζ洹疤禺愋宰R(shí)別”(在這里是IL17C，或者是IL17C受體)，如果這種抗體能夠區(qū)別這種抗原與一種或多種參考抗原，因?yàn)榻Y(jié)合特異性不是一種絕對(duì)的，而是一種相對(duì)的特性。這類參考抗原可能是一種或多種密切相關(guān)的抗原，其可用作參考點(diǎn)，例如IL17A或IL17B。在其最常用的形式中(并且當(dāng)未提及定義的參考)，“特異性結(jié)合”是指該抗體可區(qū)別感興趣的抗原與無關(guān)抗原的能力，如所確定的，例如，根據(jù)下述方法中的一種。這類方法包括但不限于蛋白質(zhì)印跡、ELISA-,RIA-、ECL-、IRMA-檢驗(yàn)和肽掃描方法。例如，可以進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)ELISA檢驗(yàn)。通過標(biāo)準(zhǔn)顯色可進(jìn)行評(píng)分(例如帶有辣根過氧化物酶的第二抗體，以及帶有過氧化氫的四甲基聯(lián)苯胺)。通過光密度，例如在450nm，對(duì)某些孔內(nèi)的反應(yīng)進(jìn)行評(píng)分。典型背景(=陰性反應(yīng))可以是0.1OD ；典型的陽性反應(yīng)可以是10D。意思是陽性/陰性差可以超過10倍。典型地，可以使用一組大約三到五種非相關(guān)抗原，如奶粉、BSA、轉(zhuǎn)鐵蛋白等等，而不是一種單一的參考抗原，來確定結(jié)合特異性。另外地，“特異性結(jié)合”可以涉及抗體對(duì)其靶抗原的不同部分(例如IL17C或IL17C受體的不同的結(jié)構(gòu)域或區(qū)域)之間進(jìn)行區(qū)別的能力，或抗體對(duì)IL17C或IL17C受體的一種或多種關(guān)鍵氨基酸殘基或氨基酸殘基的延伸片段之間進(jìn)行區(qū)別的能力。
[0055]“交叉競(jìng)爭(zhēng)”的意思是在標(biāo)準(zhǔn)競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合測(cè)定中，一種抗體、抗體片段或其他抗原-結(jié)合部分對(duì)干擾其他抗體、抗體片段或抗原-結(jié)合部分與特異性抗原的結(jié)合的能力?？刹捎脴?biāo)準(zhǔn)競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合測(cè)定來確定一種抗體、抗體片段或其他抗原-結(jié)合部分能夠干擾另一種抗體、抗體片段或其他抗原-結(jié)合部分與特異性抗原的結(jié)合并由此根據(jù)本發(fā)明進(jìn)行交叉競(jìng)爭(zhēng)的能力或程度。一種合適的測(cè)定包括應(yīng)用Biacore技術(shù)(例如通過使用BIAcore3000儀器(Biacore，烏普薩拉，瑞典))，該技術(shù)可采用表面等離振子共振技術(shù)對(duì)相互作用的程度進(jìn)行測(cè)量。另一種用于對(duì)交叉競(jìng)爭(zhēng)進(jìn)行測(cè)量的測(cè)定是使用基于ELISA的方法。在國際專利申請(qǐng)?zhí)朤O2003/48731中描述了一種用于“表位結(jié)合”抗體的基于其交叉競(jìng)爭(zhēng)的高通量方法。如果接受研究的抗體或抗體片段可將如表1中所述的抗體之一與IL17C的結(jié)合減少60%或以上，具體地說是減少70%或以上，更具體地說是減少80%或以上，并且如果如表1中所述的抗體之一將所述抗體或抗體片段與IL17C的結(jié)合減少60%或以上，具體地說是減少70%或以上，更具體地說是減少80%或以上，則存在交叉競(jìng)爭(zhēng)。
[0056]術(shù)語“表位”包括任何可被免疫球蛋白或T-細(xì)胞受體特異性識(shí)別的或以另外的方式與一種分子相互作用的蛋白質(zhì)的區(qū)域。通常，表位是如氨基酸或碳水化合物或糖側(cè)鏈等的分子的化學(xué)活性表面組群，并且通?？删哂刑禺愋缘娜S結(jié)構(gòu)特征以及特異性電荷特征。本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員會(huì)贊同，事實(shí)上抗體可特異性結(jié)合的幾乎任何東西都是表位。表位可包括與抗體結(jié)合的殘基，并且可以是“線性的”或“構(gòu)象的”。術(shù)語“線性表位”指的是在表位中，蛋白與相互作用分子(如抗體)之間的所有相互作用點(diǎn)是沿著該蛋白的初級(jí)氨基酸序列而線性發(fā)生的(連續(xù)的)。術(shù)語“構(gòu)象表位”是指在表位中，不連續(xù)的氨基酸在三維構(gòu)象中聚在一起。在構(gòu)象表位中，相互作用點(diǎn)發(fā)生在蛋白上的彼此分離的氨基酸殘基上。
[0057]“將相同的表位結(jié)合作為”意思是抗體、抗體片段或其他抗原-結(jié)合部位與特異性抗原相結(jié)合并將相同的表位作為示例抗體的能力?？墒褂帽砦蛔鲌D技術(shù)對(duì)示例抗體及其他抗體的表位進(jìn)行確定。表位作圖技術(shù)是在本領(lǐng)域中所熟知的。例如，通過確定氨基酸的空間構(gòu)象易于鑒定構(gòu)象表位，例如通過如氫-氘交換、X射線的結(jié)晶以及二維核磁共振。
[0058]還有，如在此所用的，“免疫球蛋白”(Ig)在此是定義為一種屬于IgG、IgM、IgE、IgA或IgD(或其任何亞類)類的蛋白質(zhì)，并且包括所有常規(guī)的已知的抗體及其功能片段?？贵w/免疫球蛋白的“功能片段”由此被定義為是一種保留了抗原結(jié)合區(qū)的抗體/免疫球蛋白的片段(例如一種IgG的可變區(qū))。典型地，可在抗體的一種或多種高變區(qū)中，即在⑶R-1、CDR-2和/或-CDR-3區(qū)中，發(fā)現(xiàn)抗體的“抗原結(jié)合區(qū)”;然而，可變“構(gòu)架”區(qū)也在抗原結(jié)合中起到了重要的作用，如通過為CDR提供骨架。優(yōu)選的是，“抗原結(jié)合區(qū)”包括可變輕鏈(VL)的至少氨基酸殘基4至103和可變重鏈(VH)的5至109，更優(yōu)選的是VL的3至107和VH的4至111，特別優(yōu)選的是完全VL和VH鏈(VL的氨基酸位置I至109和VH的I至113 ;根據(jù)TO97/08320確定其數(shù)目)。在本發(fā)明中所用的優(yōu)選的免疫球蛋白類是IgG。本發(fā)明的“功能片段”包括F (ab’)2片段、Fab片段、scFv或包含單一免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域或單一結(jié)構(gòu)域抗體多肽的構(gòu)建體的結(jié)構(gòu)域，例如單一重鏈可變結(jié)構(gòu)域或單一輕鏈可變結(jié)構(gòu)域。F(ab’)2或Fab可被工程化而使 在CHl與CL結(jié)構(gòu)域之間發(fā)生的分子間二硫化物的相互作用可被最小化或完全除去。
[0059]本發(fā)明的抗體可來源于基于被電腦模擬設(shè)計(jì)的并且由合成生成的核酸所編碼的氨基酸序列的重組抗體文庫。例如通過對(duì)人源序列數(shù)據(jù)庫進(jìn)行分析并且利用從其得到的數(shù)據(jù)對(duì)多肽序列進(jìn)行設(shè)計(jì)，可得到抗體序列的電腦模擬設(shè)計(jì)。對(duì)設(shè)計(jì)并得到電腦模擬生成的序列的方法進(jìn)行了描述，例如，Knappik等人，《分子生物學(xué)雜志》(J.Mol.Biol.) (2000)296:57 ；Krebs 等人，《免疫學(xué)方法雜志》(J.1mmunol.Methods) (2001) 254:67, Rothe 等人，《分子生物學(xué)雜志》(J.Mol.Biol.) (2008)376:1182 ;以及由Knappik等人等人發(fā)布的美國專利號(hào)6，300, 064，將其通過引用以其全文結(jié)合在此。
[0060]本發(fā)明可使用任何IL17C特異性抗體。示例性的抗體包括本領(lǐng)域中的抗體，如
[0061]A:大鼠IgG2A單克隆抗小鼠IL17C抗體(安迪生物科技公司(R&D Systems);克隆311522，#MAB23061),
[0062]B:大鼠IgG2A單克隆抗小鼠IL17C抗體(安迪生物科技公司(R&D Systems);克隆311523，#MAB2306),以及
[0063]C:大鼠抗小鼠 IL17C (美國 US Biological 公司；克隆:8B28, #I8439_20R3)(實(shí)例4接受)。
[0064]其他可用于實(shí)踐本發(fā)明的抗體包括Abnova供應(yīng)的抗IL17C抗體(Walnut,CA,USA ；目錄 #H00027189-B01P、#H00027189-D01 和 #H00027189-D01P)以及 antibodies-onlineGmbH 供應(yīng)的抗 IL17C 抗體(亞琢(Aachen)，德國；目錄 #ABIN525892、#ABIN327411、#ABIN525893、#ABIN221340、#ABIN22134U #ABIN221342 和 #ABIN525891 )。本發(fā)明可使用的其他IL17C特異性抗體是本發(fā)明自身所分離并描述的，即表1中所列的抗體。
[0065]本發(fā)明的組合物可用于治療或預(yù)防應(yīng)用。本發(fā)明因此包括一種藥物組合物，該藥物組合物包含一種本發(fā)明的抗體(或功能性抗體片段)的以及一種藥理學(xué)上可接受的載體或其賦形劑。在相關(guān)的方面中，本發(fā)明提供了一種用于治療炎性病癥的方法。這種方法含有以下步驟:給予需要的受試者一種有效量的含有在此所述的或設(shè)計(jì)的本發(fā)明的抗體的藥物組合物。
[0066]在某些方面中，本發(fā)明提供了用于治療受試者的炎性病癥的方法，所述方法包括以下步驟:對(duì)所述受試者給予一種IL17C拮抗劑?！笆茉囌摺?，如在此上下文中所用的，是指任何哺乳動(dòng)物，包括嚙齒類，如小鼠或大鼠，以及靈長類，如食蟹猴(Macacafascicularis),羅猴(Macaca mulatta)或人類(Homo sapiens)。優(yōu)選地受試者是一種靈長類，最優(yōu)選的是人類。
[0067]在某些方面中，本發(fā)明提供了用于治療炎性病癥的方法，所述方法包括以下步驟:向受試者給予一種IL17C拮抗劑，其中所述IL17C拮抗劑可與IL17C相結(jié)合，其親和力是大約小于IOOnM,更優(yōu)選的是小于大約60nM,并且仍更優(yōu)選的是小于大約30nM。更優(yōu)選的是可與IL17C相結(jié)合的抗體或抗體片段，其親和力小于大約ΙΟηΜ，并且更優(yōu)選的是小于大約3nM0
[0068]在某些方面中，所述的IL17C拮抗劑是一種IL17C特異性抗體或抗體片段，并且所述抗體或抗體片段與另一物種的IL17C (如從小鼠、大鼠、羅猴和/或食蟹猴的IL17C)可交叉反應(yīng)。在某些方面中，所述IL17C抗體或抗體片段是一種IL17C特異性分離抗體或抗體片段。在另一個(gè)實(shí)施例中，所述的IL17C特異性分離抗體或抗體片段是一種單克隆抗體或抗體片段。在一個(gè)另外的實(shí)施例中，所述的分離單克隆抗體或抗體片段是一種對(duì)包含SEQID N0.:181的氨基酸序列的多肽具有特異性的分離單克隆抗體。在一個(gè)另外的實(shí)施例中，所述的分離單克隆抗體或抗體片段是一種對(duì)由SEQ ID N0.:181的氨基酸序列組成的多肽具有特異性的分離單克隆抗體。在一個(gè)另外的實(shí)施例中，所述的分離單克隆抗體或抗體片段與另一物種的IL17C (小鼠、大鼠、羅猴和/或食蟹猴的IL17C)可交叉反應(yīng)。
[0069]在某些方面中，所述的IL17C特異性抗體或抗體片段是人源、人源化或嵌合的抗體。在某些方面中，所述的IL17C特異性抗體或抗體片段是一種人源合成抗體。在某些方面中，本發(fā)明提供了一種對(duì)于包含SEQ ID N0.:181的氨基酸序列的多肽具有特異性的分離單克隆抗體或抗體片段，其中所述抗體或抗體片段是人源的、人源化的或嵌合的抗體。在某些方面中，本發(fā)明提供了一種對(duì)于由SEQ ID N0.:181的氨基酸序列所組成的多肽具有特異性的分離單克隆抗體或抗體片段，其中所述抗體或抗體片段是人源的、人源化的或嵌合的抗體。在某些方面中，所述的對(duì)由SEQ ID N0.:181的氨基酸序列所組成的多肽具有特異性的抗體或抗體片段是一種人源合成抗體或抗體片段。
[0070]在一個(gè)特定的方面中，本發(fā)明提供了一種組合物，該組合物包括一種能夠拮抗炎性病癥中的IL17C的IL17C拮抗劑，所述組合物進(jìn)一步包括一種或多種藥理學(xué)上可接受的載體和/或稀釋劑。在某些方面中，IL17C拮抗劑，如IL17C特異性抗體，可拮抗任何IL17C在炎性病癥中的作用。
[0071]在另一個(gè)方面中，本發(fā)明提供了一種用于對(duì)受試者的炎性病癥進(jìn)行預(yù)防的方法，所述包括對(duì)所述受試者給予一種IL17C拮抗劑。在此上下文中所用的“預(yù)防”是指以預(yù)防疾病的發(fā)生或延緩疾病的發(fā)生為目的的方法。
[0072]在某些方面中，本發(fā)明提供了一種包括有用于對(duì)炎性病癥的治療的IL17C拮抗劑的組合物，所述組合物進(jìn)一步包括一種或多種藥理學(xué)上可接受的載體和/或稀釋劑。
[0073]在某些方面中，本發(fā)明提供了用于治療炎性病癥的IL17C拮抗劑。
[0074]在其他方面中，本發(fā)明提供了 IL17C拮抗劑在制備用于治療炎性病癥的藥物中的應(yīng)用。
[0075]在其他方面中，本發(fā)明提供了一種用于治療受試者的炎性病癥的方法，該方法包括向受試者給予一種IL17C拮抗劑。
[0076]在特定的方面中，本發(fā)明的IL17C拮抗劑可皮下給藥。在其他方面中，本發(fā)明的IL17C拮抗劑可靜脈內(nèi)給藥、動(dòng)脈內(nèi)給藥或椎管內(nèi)給藥。
[0077]本發(fā)明的組合物優(yōu)選的是包括一種IL17C拮抗劑以及一種藥理學(xué)上可接受的載體、稀釋劑或賦形劑的用于治療炎性病癥的藥物組合物。這類載體、稀釋劑和賦形劑是本領(lǐng)域所熟知的，并且熟練的業(yè)內(nèi)人士會(huì)發(fā)現(xiàn)采用本發(fā)明的IL17C拮抗劑對(duì)受試者的最適合的制劑及給藥途徑。
[0078]在某些方面中，本發(fā)明提供了一種用于治療或預(yù)防受試者的炎性病癥的方法，該方法包括以下步驟:對(duì)受試者給予一種有效量的IL17C拮抗劑。在某些方面中，所述受試者是人類。在另外替代的方面中，所述受試者是嚙齒類，如大鼠或小鼠。
[0079]在某些方面中，所述IL17C拮抗劑是一種IL17C特異性抗體或抗體片段。在某些方面中，所述拮抗劑是一種對(duì)于包含SEQ ID N0.: 181的氨基酸序列的多肽具有特異性的抗體或抗體片段。在另外替代的方面中，所述IL17C拮抗劑是一種IL17C受體特異性的抗體或抗體片段。
[0080]在某些方面中，所述的IL17C特異性抗體或抗體片段可阻斷IL17C與IL17C受體的結(jié)合。在另外替代的方面中，所述的IL17C受體特異性抗體或抗體片段阻斷了 IL17C與IL17C受體的結(jié)合。
[0081]在某些方面中，所述的IL17C特異性抗體或抗體片段阻斷了 IL17C與IL17受體的結(jié)合，其中所述受體是IL17RE。在另外替代的方面中，所述的IL17C受體特異性抗體或抗體片段阻斷了 IL17C與IL17RE的結(jié)合。
[0082]在某些方面中，所述的IL17C特異性抗體或抗體片段阻斷了 IL17C與IL17RE的結(jié)合，其 IC5tl 濃度小于 100nM、90nM、80nM、70nM、60nM、50nM、40nM、30nM、20nM、10nM、9nM、8nM、7nM、6nM、5nM、4nM、3nM、2nM、lnM、100pM、90pM、80pM、70pM、60pM、50pM、40pM、30pM、20pM、10pM、9pM、8pM、7pM、6pM、5pM、4pM、3pM、2pM 或 lpM。在某些方面中，可通過 ELISA、SET、FACS或 MSD (Meso Scale Discovery)對(duì) IC5tl 濃度進(jìn)行確定。
[0083]在某些方面中，所述的IL17C特異性抗體或抗體片段阻斷了 IL17C與一種或多種IL17C受體的結(jié)合。在另外替代的方面中，所述的IL17C受體特異性抗體或抗體片段阻斷了IL17C與IL17C受體的結(jié)合，其中IL17受體包括IL17RE和IL17RA。在另外替代的方面中，所述的IL17C受體特異性抗體或抗體片段阻斷了 IL17C與IL17RE和IL17RA的結(jié)合。
[0084]在某些方面中，本發(fā)明提供了一種用于對(duì)炎性病癥進(jìn)行治療或預(yù)防的IL17C拮抗劑。在某些方面中，所述治療或預(yù)防包括以下步驟:對(duì)受試者給予一種有效量的IL17C拮抗劑。在某些方面中 ，所述受試者是人類。在另外替代的方面中，所述受試者是嚙齒類，如大鼠或小鼠。
[0085]在另一個(gè)方面中，本披露是關(guān)于與表1中所述的抗體交叉競(jìng)爭(zhēng)的分離單克隆抗體或其片段。在某個(gè)實(shí)施例中，本披露是關(guān)于一種分離單克隆抗體或其片段，該分離單克隆抗體或其片段與一種抗體交叉競(jìng)爭(zhēng)，該抗體包含如表1中所述的抗體中之一的6個(gè)CDR。在某個(gè)實(shí)施例中，本披露是關(guān)于一種分離單克隆抗體或其片段，該分離單克隆抗體或其片段與在表1中所述的一種抗體交叉競(jìng)爭(zhēng)，并且在基于ELISA的交叉競(jìng)爭(zhēng)中可將表1所述的抗體之一的特異性結(jié)合減少至少20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%或90%。在某個(gè)實(shí)施例中，本披露是關(guān)于一種分離單克隆抗體或其片段，該分離單克隆抗體或其片段與一種在表1中所述的抗體交叉競(jìng)爭(zhēng)，并在基于ELISA的交叉競(jìng)爭(zhēng)中將表1所述的抗體之一與IL17C的特異性結(jié)合減少至少 20%、30%、40%、50%、60%、70%、80% 或 90%。
[0086]在另一個(gè)方面中，本披露是關(guān)于一種分離單克隆抗體或其片段，該分離單克隆抗體或其片段與表1中所述的抗體相同的表位有相互作用(例如通過結(jié)合、穩(wěn)定化、空間分布)。
[0087]在一個(gè)方面中，本披露是關(guān)于一種分離單克隆抗體或其片段，該分離單克隆抗體或其片段包含由表1中的任何抗體的卡巴特(Kabat)所定義的6個(gè)⑶R。在另一個(gè)方面中，本披露是關(guān)于一種分離單克隆抗體或其片段，該分離單克隆抗體或其片段包含由表1中的各抗體的卡巴特所定義的6個(gè)CDR。
[0088]在一個(gè)方面中，本披露是關(guān)于一種分離單克隆抗體或其片段，該分離單克隆抗體或其片段包含表1中所述的任何抗體的VH和VL。
[0089]在另一個(gè)方面中，本披露是關(guān)于一種核酸，該核酸編碼一種分離單克隆抗體或其片段，其中該核酸包含表1中所述的任何抗體的VH和VL。
[0090]在另一個(gè)方面中，本披露是關(guān)于一種核酸，該核酸編碼一種分離單克隆抗體或其片段，該分離單克隆抗體或其片段與表1中所述的核酸具有至少75%、80%、85%、90%、95%、98%、99%的序列一致性。
[0091]本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員將贊同，在此描述的本發(fā)明易受不同于具體所述的變化和修改的那些變化和修改的影響。應(yīng)理解的是，本發(fā)明包括所有這類變化和修改。本發(fā)明還包括在本說明書中參考的或指出的所有的步驟、特征、組合物和化合物，單獨(dú)地或共同地，以及任何或所有所述步驟或特征中的任何兩個(gè)或多個(gè)的組合。
[0092]表1:
[0093]
【權(quán)利要求】
1.一種用于在治療炎性病癥中使用的IL17C特異性分離抗體或抗體片段。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的分離抗體或抗體片段，其中IL17C包括SEQ.1D Nol81的氨基酸。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的分離抗體或抗體片段，其中所述治療是對(duì)關(guān)節(jié)炎、哮喘、膿毒病、自身免疫性疾病、肺部炎癥、銀屑病、炎癥性腸病、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、COPD (慢性阻塞性肺病)、系統(tǒng)性紅斑性狼瘡和/或結(jié)節(jié)病的治療。
4.根據(jù)權(quán)利要求1-3所述的分離抗體或抗體片段，其中所述抗體阻斷了IL17C與IL17RE的結(jié)合。
5.根據(jù)權(quán)利要求1 -4中之一所述的分離抗體或抗體片段，其中所述抗體或抗體片段與包含由表1中的任何抗體的卡巴特所定義的6個(gè)CDR的一種抗體或抗體片段具有交叉競(jìng)爭(zhēng)。
6.根據(jù)權(quán)利要求1-5中之一所述的分離抗體或抗體片段，其中所述抗體或其片段是一種單克隆抗體。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的抗體或抗體片段，其中所述抗體或抗體片段是一種人源的、人源化的或嵌合的抗體或抗體片段。
8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的抗體或抗體片段，其中所述抗體或抗體片段包含一個(gè)人重鏈恒定區(qū)以及一個(gè)人輕鏈恒定區(qū)。
9.根據(jù)權(quán)利要求6所述的抗體或抗體片段，其中所述抗體是IgG同種型。
10.根據(jù)權(quán)利要求6所述的抗體或抗體片段，其中所述抗體片段選自由以下各項(xiàng)組成的組:Fab、F (ab2)’、F (ab)2，、scFV。
【文檔編號(hào)】C07K16/24GK103974976SQ201280051378
【公開日】2014年8月6日 申請(qǐng)日期:2012年10月19日 優(yōu)先權(quán)日:2011年10月19日
【發(fā)明者】安德里亞斯·布爾特曼, 羅伯特·米爾鮑爾, 特里薩·加西亞, 雷金納德·克里斯多夫·澤維爾·布萊斯, 盧克·尼爾斯, 卡杰·康拉斯 申請(qǐng)人:莫佛塞斯公司, 加拉帕戈斯股份有限公司