抗axl抗體及其用途
【專利摘要】本發(fā)明涉及抗Axl抗體及其在診斷和治療方法中的用途。更具體來說，本發(fā)明涉及對Axl具有特異性的單克隆抗體，其包含在H-CDR1區(qū)中包含SEQ?ID?NO：2、在H-CDR2區(qū)中包含SEQ?ID?NO：3并在H-CDR3區(qū)中包含SEQ?ID?NO：4的重鏈可變區(qū)，以及在L-CDR1區(qū)中包含SEQ?ID?NO：6、在L-CDR2區(qū)中包含SEQ?ID?NO：7并在L-CDR3區(qū)中包含SEQ?ID?NO：8的輕鏈可變區(qū)。所述單克隆抗體通過SEQ?ID?NO：9和SEQ?ID?NO：10結(jié)合于Axl的細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域。
【專利說明】抗AXL抗體及其用途
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及抗Axl抗體及其在診斷和治療方法中的用途。
【背景技術(shù)】
[0002]Axl屬于受體酪氨酸激酶(RTK)的TAM亞家族,所述亞家族還包括Tyro3和Mer。TAM受體的特征在于細(xì)胞外區(qū)中的兩個免疫球蛋白樣結(jié)構(gòu)域和雙重纖連蛋白III型重復(fù)序列的組合及細(xì)胞質(zhì)激酶結(jié)構(gòu)域。TAM受體的配體是Gas6 (生長停滯特異性因子6)和蛋白S，兩種維生素K依賴性蛋白，其顯示出43%的氨基酸序列同一性并共有相似的結(jié)構(gòu)域結(jié)構(gòu)。每種蛋白具有含11個Y-羧基谷氨酸殘基的N-端Gla結(jié)構(gòu)域，隨后為4個表皮生長因子(EGF)樣模塊，以及由兩個串聯(lián)的層粘連蛋白G結(jié)構(gòu)域構(gòu)成的C-端性激素結(jié)合球蛋白(SHBG)樣結(jié)構(gòu)。SHBG結(jié)構(gòu)域?qū)τ赥AM受體結(jié)合和激活來說是必要且充分的，而Gla結(jié)構(gòu)域結(jié)合帶負(fù)電的膜磷脂并在凋亡細(xì)胞的TAM介導(dǎo)的胞吞作用中發(fā)揮重要作用。TAM激活和信號傳導(dǎo)參與多種細(xì)胞應(yīng)答，包括細(xì)胞存活、增殖、遷移和粘附。
[0003]Axl或其配體Gas6的調(diào)節(jié)異常參與各種人類癌癥的發(fā)病機(jī)理。Axl的過表達(dá)已在廣泛的各種人類癌癥(肺癌、前列腺癌、乳腺癌、胃癌、胰腺癌、卵巢癌、甲狀腺癌、血癌、腎細(xì)胞癌以及成膠質(zhì)細(xì)胞瘤……)中報(bào)道，并與侵入性、轉(zhuǎn)移和不良預(yù)后有關(guān)。這些發(fā)現(xiàn)表明，Axl可能涉及腫瘤發(fā)生的多個方面(包括腫瘤生長、侵入和血管發(fā)生)的調(diào)控，因此代表了用于癌癥的治療性干預(yù)，特別是用于抗轉(zhuǎn)移癌療法的開發(fā)和用于其他多種癌癥治療(包括耐藥性的治療)的靶標(biāo)。
[0004]因此，已描述了抗Axl單克隆抗體在癌癥治療中的使用。例如，與抗Axl抗體相關(guān)的出版物包括 W02009/063965、W02009/062690 和 W02011/014457。
[0005]依賴或不依賴 于其配體的Axl的其他功能，例如免疫功能的抑制、血小板凝集的激活和病毒感染誘導(dǎo)者(舉例來說，埃博拉和拉沙病毒的攝入被Axl促進(jìn))，突出了 Axl作為治療靶標(biāo)用于腫瘤學(xué)之外的其他應(yīng)用的潛力。
[0006]發(fā)明概沭
[0007]本發(fā)明涉及對Axl具有特異性的單克隆抗體，所述抗體包含在H-⑶Rl區(qū)中含SEQID NO:2、在H-CDR2區(qū)中含SEQ ID NO:3并在H-CDR3區(qū)中含SEQ ID NO:4的重鏈可變區(qū)，以及在L-CDRl區(qū)中含SEQ ID NO:6、在L-CDR2區(qū)中含SEQ ID NO:7并在L-CDR3區(qū)中含SEQ ID NO:8的輕鏈可變區(qū)。所述單克隆抗體通過SEQ ID NO:9和SEQ ID NO:10結(jié)合于Axl的細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域。
[0008]發(fā)明詳沭
[0009]定義:
[0010]術(shù)語“Axl”具有其在本【技術(shù)領(lǐng)域】中的通常含義，并且是指人類Axl。Axl也被稱為“Ark”、“Tyro-7”、“ufo” 或“ jtk11”。
[0011]術(shù)語“抗Axl抗體”是指針對Axl的抗體。
[0012]根據(jù)本發(fā)明，“抗體”或“免疫球蛋白”具有相同的意義，并且在本發(fā)明中等同地使用。當(dāng)在本文中使用時，術(shù)語“抗體”是指免疫球蛋白分子和免疫球蛋白分子的免疫活性部分，即含有免疫特異性結(jié)合抗原的抗原結(jié)合位點(diǎn)的分子。因此，術(shù)語抗體不僅涵蓋完整抗體分子，而且涵蓋抗體片段以及抗體和抗體片段的變體(包括衍生物)。在天然抗體中，兩條重鏈通過二硫鍵彼此連接，并且每條重鏈通過二硫鍵與輕鏈連接。存在兩種類型的輕鏈，λ(I)和K (10。存在5種主要的重鏈類別(或同種型)，其決定抗體分子的功能活性:IgM，IgD, IgG, IgA和IgE。每條鏈含有獨(dú)特的序列結(jié)構(gòu)域。輕鏈包括兩個結(jié)構(gòu)域，可變結(jié)構(gòu)域(VL)和恒定結(jié)構(gòu)域(CL)。重鏈包括4個結(jié)構(gòu)域，可變結(jié)構(gòu)域(VH)和3個恒定結(jié)構(gòu)域(CH1、CH2和CH3，合稱為CH)。輕鏈(VL)和重鏈(VH)兩者的可變區(qū)決定對抗原的結(jié)合識別和特異性。輕鏈(CL)和重鏈(CH)的恒定區(qū)結(jié)構(gòu)域提供重要的生物學(xué)性質(zhì)例如抗體鏈締合、分泌、跨胎盤移動性、補(bǔ)體結(jié)合以及與Fe受體(FcR)的結(jié)合。Fv片段是免疫球蛋白的Fab片段的N-端部分，并且由一條輕鏈和一條重鏈的可變部分構(gòu)成。抗體的特異性在于抗體結(jié)合位點(diǎn)與抗原決定簇之間的結(jié)構(gòu)互補(bǔ)性?？贵w結(jié)合位點(diǎn)由主要來自于高變區(qū)或互補(bǔ)決定區(qū)(CDR)的殘基構(gòu)成。有時，來自于非高變區(qū)或框架區(qū)(FR)的殘基影響總體結(jié)構(gòu)域結(jié)構(gòu)，并因此影響結(jié)合位點(diǎn)。互補(bǔ)決定區(qū)或CDR是指合在一起限定天然免疫球蛋白結(jié)合位點(diǎn)的天然Fv區(qū)的結(jié)合親和性和特異性的氨基酸序列。免疫球蛋白的輕鏈和重鏈各自具有3個CDR，分別命名為L-CDRl、L-CDR2、L-CDR3和H-CDRl、H-CDR2、H-CDR3。因此，抗原結(jié)合位點(diǎn)包括6個⑶R，包含來自于各重鏈和輕鏈V區(qū)域的⑶R集?？蚣軈^(qū)(FR)是指插置在⑶R之間的氨基酸序列。
[0013]術(shù)語“嵌合抗體”是指包含源自于3E3E8抗體的抗體VH結(jié)構(gòu)域和VL結(jié)構(gòu)域以及人抗體的CH結(jié)構(gòu)域和CL結(jié)構(gòu)域的抗體。
[0014]根據(jù)本發(fā)明，術(shù)語“人源化抗體”是指具有來自于人抗體的可變區(qū)框架區(qū)和恒定區(qū)，但保留了 3E3E8抗體的⑶R的抗體。
[0015]術(shù)語“Fab”是指具有約50，000的分子量和抗原結(jié)合活性的抗體片段，其中在用蛋白酶(木瓜蛋白酶)處理IgG而獲得的片段中H鏈N-端側(cè)的約一半與整個L鏈通過二硫鍵
結(jié)合在一起。
[0016]術(shù)語“F(ab’)2”是指具有約100,000的分子量和抗原結(jié)合活性的抗體片段，在用蛋白酶(胃蛋白酶)處理IgG而獲得的片段中，其略大于通過鉸鏈區(qū)的二硫鍵結(jié)合的Fab。
[0017]術(shù)語“Fab’ ”是指具有約50，000的分子量和抗原結(jié)合活性的抗體片段，其通過切割F(ab’)2的鉸鏈區(qū)的二硫鍵而獲得。
[0018]單鏈Fv (“scFv”)多肽是共價連接的VH::VL異二聚體，其通常從包括通過肽編碼連接體相連的VH和VL編碼基因的基因融合體來表達(dá)?！癲sFv”是通過二硫鍵穩(wěn)定化的VH:: VL異二聚體。二價和多價抗體片段可以通過單價scFv的締合自發(fā)形成，或者可以通過用肽連接物偶聯(lián)單價scFv來產(chǎn)生,例如二價sc (Fv) 2。
[0019]術(shù)語“雙特異抗體”是指具有兩個抗原結(jié)合位點(diǎn)的小抗體片段，所述片段包含與同一多肽鏈中的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域(VL)相連的重鏈可變結(jié)構(gòu)域(VH) (VH-VL)。通過使用過短而不允許同一鏈上的兩個結(jié)構(gòu)域之間配對的連接物，迫使結(jié)構(gòu)域與另一條鏈的互補(bǔ)結(jié)構(gòu)域配對，并產(chǎn)生兩個抗原結(jié)合位點(diǎn)。
[0020]“純化的”或“分離的”當(dāng)指稱本發(fā)明的抗體或指稱核苷酸序列時，意味著所指分子在基本上不存在相同類型的其他生物大分子的情況下存在。當(dāng)在本文中使用時，術(shù)語“純化的”優(yōu)選地是指存在至少75重量％、更優(yōu)選地至少85重量％、更優(yōu)選地至少95重量％、最優(yōu)選地至少98重量％的相同類型的生物大分子。編碼特定多肽的“分離的”核酸分子是指基本上不含不編碼所述多肽的其他核酸分子的核酸分子，但是，所述分子可以包括對組合物的基本特征沒有有害影響的一些另外的堿基或部分。
[0021]本發(fā)明的抗體:
[0022]本發(fā)明提供了分離的抗Axl抗體或其片段。具體來說，本發(fā)明人培育了產(chǎn)生鼠抗Axl抗體(3E3E8)的雜交瘤。本發(fā)明人克隆并鑒定了所述mAb3E3E8的輕鏈和重鏈的可變結(jié)構(gòu)域，并因此確定了所述抗體的互補(bǔ)決定區(qū)(CDR)結(jié)構(gòu)域，如表1中所描述:
[0023]
【權(quán)利要求】
1.一種對Axl具有特異性的單克隆抗體，其包含在H-⑶Rl區(qū)中含SEQ ID NO:2、在H-CDR2區(qū)中含SEQ ID NO:3并在H-CDR3區(qū)中含SEQ ID NO:4的重鏈可變區(qū)，以及在L-CDRl區(qū)中含 SEQ ID NO:6、在 L-CDR2 區(qū)中含 SEQ ID NO:7 并在 L-CDR3 區(qū)中含 SEQ ID NO:8 的輕鏈可變區(qū)。
2.權(quán)利要求1的單克隆抗體，其中所述抗體的重鏈可變區(qū)具有如SEQID N0:1所示的氨基酸序列。
3.權(quán)利要求1的單克隆抗體，其中所述輕鏈可變區(qū)具有如SEQIDNO:5所示的氨基酸序列。
4.權(quán)利要求2和3的單克隆抗體，其中所述抗體的重鏈可變區(qū)具有如SEQID NO:1所示的氨基酸序列，并且所述輕鏈可變區(qū)具有如SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列。
5.權(quán)利要求4的單克隆抗體，其是嵌合抗體，優(yōu)選地為嵌合小鼠/人抗體。
6.權(quán)利要求1的單克隆抗體，其是人源化抗體。
7.權(quán)利要求1至6任一項(xiàng)的單克隆抗體，其在如SEQID NO:9所示的氨基酸序列中和如SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列中結(jié)合于Axl的細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域。
8.權(quán)利要求1至7任一項(xiàng)的單克隆抗體的片段,其選自Fv、Fab、F(ab’)2、Fab’、dsFv、scFv、sc (Fv) 2和雙特異性抗體。
9.一種核酸序列，其編碼權(quán)利要求1至7任一項(xiàng)的單克隆抗體的重鏈或輕鏈。
10.一種載體，其包含權(quán)利要求9的核酸。
11.一種宿主細(xì)胞，其包含權(quán)利要求9的核酸或權(quán)利要求10的載體。
12.—種藥物組合物，其包含權(quán)利要求1至7任一項(xiàng)的抗體或權(quán)利要求8的其片段。
13.權(quán)利要求1至7任一項(xiàng)的抗體或權(quán)利要求8的其片段，其用作藥物。
14.一種治療受試者的癌癥的方法，所述方法包括向所述受試者施用權(quán)利要求1至7任一項(xiàng)的抗Axl抗體或權(quán)利要求8的其片段。
15.權(quán)利要求1至7任一項(xiàng)的抗體或權(quán)利要求8的其片段，其用于癌癥的診斷。
16.一種用于在需要的對象中治療選自以下的疾病的方法:人類免疫障礙、血栓性疾病、心血管疾病和病毒、細(xì)菌或寄生蟲感染，所述方法包括向需要的受試者施用權(quán)利要求1至7任一項(xiàng)的抗Axl抗體或權(quán)利要求8的其片段。
17.一種用于在需要的受試者中激活先天免疫應(yīng)答的方法，所述方法包括向所述受試者施用權(quán)利要求1至7任一項(xiàng)的抗體或權(quán)利要求8的其片段。
18.權(quán)利要求1至7任一項(xiàng)的抗體或權(quán)利要求8的其片段，其用于診斷選自人類免疫障礙、血栓性疾病、心血管疾病和病毒、細(xì)菌或寄生蟲感染的疾病。
【文檔編號】C07K16/28GK103747803SQ201280039593
【公開日】2014年4月23日 申請日期:2012年6月22日 優(yōu)先權(quán)日:2011年6月22日
【發(fā)明者】B·羅伯特, B·福韋爾, G·舍韋, A·雅斯里, C·拉鮑雷, W·勒康內(nèi), T·查爾德, C·拉羅奎, A·佩勒格蘭 申請人:國家醫(yī)療保健研究所, 奧里貝斯制藥, 蒙彼利埃第一大學(xué), 蒙彼利埃-瓦爾多雷勒地區(qū)癌癥研究所