專利名稱：一種檢測(cè)硫醇的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及檢測(cè)探針，具體涉及檢測(cè)硫醇的方法，更具體地說是基于一種香豆素色烯衍生物檢測(cè)硫醇的方法。
背景技術(shù)：
硫醇在生物體系中起著關(guān)鍵作用。三種結(jié)構(gòu)相似的小分子硫醇半胱氨酸(Cys)、 同型半胱氨酸(Hcy)和谷胱甘肽(GSH)在維持生物系統(tǒng)中扮演著至關(guān)緊要的的角色。細(xì)胞內(nèi)硫醇濃度的改變與一些疾病緊密相連，如白血球降低、牛皮癬、肝臟損傷、癌癥和艾滋病。 半胱氨酸(Cys)缺乏會(huì)引起很多綜合疾病，如兒童生長緩慢、白化病、水腫、嗜睡癥、肝臟損傷、肌肉和脂肪消損、皮膚損傷、虛弱。血漿中高水平的同型半胱氨酸(Hcy)是Alzheimer 癥、葉酸和維生素B12缺乏癥和心血管疾病的致病因素之一。血漿中總的同型半胱氨酸 (tHcy)濃度與出生缺陷、老年癡呆等疾病有關(guān)。谷胱甘肽(GSH)是細(xì)胞內(nèi)含量最高的非蛋白質(zhì)硫醇(I 10mmol/L),支持許多細(xì)胞功能,如維持細(xì)胞氧化還原動(dòng)態(tài)平衡、異型生物質(zhì)的新陳代謝、細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)傳導(dǎo)以及基因調(diào)節(jié)。更為重要的是，谷胱甘肽能保持蛋白質(zhì)中半胱氨酸巰基處于還原態(tài)，和通過俘獲傷害DNA和RNA的自由基保護(hù)細(xì)胞免受氧化傷害。因此，定量檢測(cè)生物體系中硫醇的濃度在科研和臨床中具有重要意義，建立快速、準(zhǔn)確、靈敏的硫醇檢測(cè)方法，也是預(yù)防和監(jiān)測(cè)硫醇所引發(fā)的疾病的重要措施之一。
目前已報(bào)道的用于檢測(cè)硫醇的檢測(cè)方法有高效液相色譜法、毛細(xì)管電泳法、電化學(xué)法、傅里葉變換紅外光譜、質(zhì)譜法等。然而這些方法檢測(cè)過程需要大型儀器、檢測(cè)過程繁瑣、耗時(shí)、設(shè)備和藥品比較昂貴等。小型醫(yī)院及診所由于缺乏大型設(shè)備，而無法把測(cè)定病人體液中硫醇的含量作為臨床上的一個(gè)常規(guī)檢驗(yàn)。所以，發(fā)展一種檢測(cè)過程簡(jiǎn)單、靈敏、成本低、適合臨床、科研使用的的檢測(cè)硫醇的方法非常必要。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種體系簡(jiǎn)單、操作方便、選擇性高、靈敏度高、水溶性好的定量檢測(cè)硫醇的方法。
本發(fā)明提供的快速檢測(cè)硫醇的方法，是基于一種香豆素色烯衍生物 8, 9-dihydro-2H-cyclopenta [b] pyrano [2, 3-f] chromene-2, 10 (7AH) -dione (簡(jiǎn)稱 CPC,中文名稱為8，9-二氫-2H-環(huán)戊二烯并[b]吡喃并[2，3-f]苯并吡喃-2，10 (7AH)-二酮)， 在pH為7. 4的HEPES溶液中定量地檢測(cè)硫醇的含量。該檢測(cè)方法，對(duì)硫醇顯示了高的靈敏性和選擇性，
檢測(cè)過程簡(jiǎn)便、靈敏、快速，檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確。
本發(fā)明首先提供的一種香豆素色烯衍生物，是8，9-dihydro-2H_cyclopenta[b] pyrano [2, 3-f] chromene-2, 10 (7AH) -dione (簡(jiǎn)稱 CPC),其結(jié)構(gòu)式是
權(quán)利要求
1.一種香豆素色烯衍生物，其特征在于它是8，9-dihydro-2H-cyclopenta[b] pyrano [2, 3-f] chromene-2, 10 (7aH)-dione,其結(jié)構(gòu)式為
2.如權(quán)利要求I所述的一種香豆素色烯衍生物的合成方法，其特征在于，步驟為香豆素醛和環(huán)戊烯酮按摩爾比1:1. 1-3溶解在體積比為1:1的四氫呋喃和水的混合溶液中，在室溫下攪拌72小時(shí)，用5-10倍體積的IM HCl稀釋，并用乙酸乙酯萃取，有機(jī)相濃縮并被減壓蒸干，然后用體積比1:4的乙酸乙酯和石油醚在硅膠色譜柱淋洗，蒸干即可得產(chǎn)品。
3.如權(quán)利要求2所述的一種香豆素色烯衍生物的合成方法，其特征在于，所述的香豆素醛和環(huán)戊烯酮按摩爾比為1:1.5。
4.一種檢測(cè)硫醇的方法其特征在于，步驟為(1)、配制pH=7.4、濃度為IOmM的HEPES緩沖溶液，并用乙醇配制2mM的CPC乙醇溶液；(2)、按體積比400:7將HEPES緩沖溶液和CPC乙醇溶液加到干凈的紫外比色皿中，在紫外可見分光光度儀上檢測(cè)，隨著待測(cè)樣的加入，372nm出現(xiàn)新的吸收峰并逐漸升高，當(dāng)吸收峰不再升高時(shí)，停止加待測(cè)樣，此時(shí)加入待測(cè)樣的體積計(jì)為;(3)、按VcrcX2X10_3/V_W計(jì)算出待測(cè)樣中硫醇的濃度(mol/L)。
5.一種檢測(cè)硫醇的方法其特征在于，步驟為(1)配制pH=7.4、濃度為IOmM的HEPES緩沖溶液，并用乙醇配制2mM的CPC乙醇溶液；(2)按體積比200:1將HEPES緩沖溶液和CPC乙醇溶液加到干凈的紫外比色皿中，在熒光分光光度儀上檢測(cè)，隨著待測(cè)樣的加入，455nm出現(xiàn)明顯的熒光增強(qiáng)，且隨著硫醇濃度的增大，熒光強(qiáng)度也增大，當(dāng)強(qiáng)度不再增大時(shí)，停止加待測(cè)樣，此時(shí)加入待測(cè)樣的體積計(jì)為V待測(cè)樣5(3)按VcrcUIX2XlO-Vvitew μ I計(jì)算出待測(cè)樣中硫醇的濃度(mol/L)。
6.如權(quán)利要求I所述的香豆素色烯衍生物在細(xì)胞成像中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種檢測(cè)硫醇的方法，具體地說是基于一種香豆素色烯衍生物檢測(cè)硫醇的方法。所述的香豆素色系衍生物，它是8,9-dihydro-2H-cyclopenta[b]pyrano[2,3-f]chromene-2,10(7AH)-dione(簡(jiǎn)稱CPC)。檢測(cè)方法是基于CPC，在pH為7.4的HEPES溶液中定量地檢測(cè)硫醇的含量。該檢測(cè)方法，對(duì)硫醇顯示了高的靈敏性和選擇性，檢測(cè)過程簡(jiǎn)便、靈敏、快速，檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確。
文檔編號(hào)C07D493/04GK102977113SQ201210532990
公開日2013年3月20日 申請(qǐng)日期2012年12月11日 優(yōu)先權(quán)日2012年12月11日
發(fā)明者陰彩霞, 霍方俊 申請(qǐng)人:山西大學(xué)