專利名稱：抗cd5蛋白單克隆抗體及其用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及可特異結(jié)合CD5蛋白的單克隆抗體，及其在檢測(cè)CD5蛋白中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
⑶5為第I型糖蛋白，且為清除劑受體家族成員。⑶5由胸腺細(xì)胞、成熟T細(xì)胞及部分成熟B細(xì)胞(主要是分泌IgM的B細(xì)胞)表達(dá)，與調(diào)節(jié)淋巴細(xì)胞活化與分化的過(guò)程有關(guān)。CD5抗體有助于對(duì)淋巴瘤進(jìn)行分類，如套層細(xì)胞淋巴瘤常常為CD5陽(yáng)性表達(dá)，而濾泡中心性淋巴瘤常為陰性；來(lái)源于B細(xì)胞的慢性淋巴細(xì)胞白血病呈陽(yáng)性表達(dá)，而其他類型的淋巴瘤如濾泡性淋巴瘤、毛細(xì)胞白血病、大細(xì)胞淋巴瘤等則為⑶5陰性。在臨床上，⑶5可作為慢性淋巴細(xì)胞白血病、套細(xì)胞淋巴瘤以及彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤的生物標(biāo)記物。另外，有報(bào)道顯示，類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎與⑶5陽(yáng)性的B淋巴細(xì)胞的水平有關(guān)類風(fēng)濕·關(guān)節(jié)炎患者⑶5陽(yáng)性B淋巴細(xì)胞水平顯著高于健康對(duì)照組⑶5陽(yáng)性B淋巴細(xì)胞水平，高度活動(dòng)的類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者⑶5陽(yáng)性B淋巴細(xì)胞水平顯著高于低度活動(dòng)的類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者⑶5+B淋巴細(xì)胞水平；因此，⑶5表達(dá)水平的檢測(cè)可用于類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的輔助診斷及預(yù)后評(píng)估。目前臨床上通常通過(guò)免疫組織化學(xué)(IHC)病理實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞中⑶5的表達(dá)狀況。IHC實(shí)驗(yàn)的核心為特異性結(jié)合CD5的單克隆抗體，其性能的優(yōu)劣直接決定著整個(gè)檢測(cè)的靈敏度和特異性。因此，研制出一種高特異性結(jié)合CD5蛋白的抗CD5單克隆抗體具有重要的意義。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明要解決的技術(shù)問(wèn)題為提供一種結(jié)合特異性較高的抗CD5蛋白的單克隆抗體，及其在制備用于檢測(cè)CD5蛋白的免疫檢測(cè)工具中的應(yīng)用。為解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明提供了一種雜交瘤細(xì)胞株，保藏于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心(簡(jiǎn)稱為CGMCC)，保藏日期為2012年5月16日，保藏編號(hào)為 CGMCC No. 6133。本發(fā)明還提供了一種特異性結(jié)合CD5蛋白的單克隆抗體2B8，由上述雜交瘤細(xì)胞
株產(chǎn)生。本發(fā)明所述單克隆抗體的制備方法如下(I)重組表達(dá)載體的構(gòu)建根據(jù)⑶5基因的ORF全序列(如SEQ ID No. I所示)設(shè)計(jì)引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，基因兩側(cè)分別引入限制性內(nèi)切酶位點(diǎn)SgfI和Mlul，并在其C末端引入Myc-DDK標(biāo)簽序列(如SEQ ID No. 2所示)，插入表達(dá)載體pCMV6_Entry，構(gòu)建CD5重組表達(dá)質(zhì)粒;(2)⑶5重組蛋白的表達(dá)與純化以該質(zhì)粒轉(zhuǎn)染HEK293T細(xì)胞，裂解離心取上清，使用DDK親和層析柱純化，獲得純化的⑶5重組蛋白；(3)單抗的篩選與制備采用上述純化的⑶5重組蛋白免疫BALB/c小鼠，取小鼠脾臟細(xì)胞與SP2/0細(xì)胞進(jìn)行融合，有限稀釋法獲得單克隆，ELISA法篩選陽(yáng)性雜交瘤細(xì)胞，獲得能分泌抗CD5特異性抗體的雜交瘤細(xì)胞株，該雜交瘤細(xì)胞株分泌的抗CD5抗體命名為2B8，亞型鑒定為IgGl ;制備小鼠腹水，通過(guò)親和層析柱純化⑶5單抗。分別通過(guò)WesternBlot、免疫組化實(shí)驗(yàn)、免疫熒光驗(yàn)證該單抗的靈敏度和特異性。上述單克隆抗體的特異性驗(yàn)證OriGene高密度蛋白芯片上包含10400個(gè)HEK293T細(xì)胞蛋白過(guò)表達(dá)裂解物，每種蛋白裂解液在芯片上具有兩個(gè)拷貝的重復(fù)。蛋白裂解液被印跡在硝酸纖維素膜上。每一鐘蛋白裂解液的定位可以通過(guò)Excel文件進(jìn)行準(zhǔn)確定位。蛋白芯片上蛋白分為40個(gè)亞矩陣,每個(gè)亞矩陣上有一些參照，通過(guò)參照，可以定量每個(gè)芯片點(diǎn)上蛋白的含量，監(jiān)控每次免疫反應(yīng)數(shù)據(jù)的重復(fù)性，以及定位陽(yáng)性信號(hào)的方向。將本發(fā)明單克隆抗體2B8與上述芯片雜交并確定陽(yáng)性信號(hào)位點(diǎn)，結(jié)果顯示本發(fā)明單克隆抗體2B8特異性結(jié)合CD5蛋白，而與其他蛋白無(wú)交叉反應(yīng)。
·
本發(fā)明還提供了單克隆抗體2B8在制備用于檢測(cè)CD5蛋白的免疫檢測(cè)工具中的應(yīng)用。具體地，所述免疫檢測(cè)工具為試劑盒、芯片或試紙。在具體的實(shí)施例中，本發(fā)明提供了一種免疫組化檢測(cè)試劑盒，包括上述單克隆抗體2B 8 ;可檢測(cè)組織細(xì)胞中⑶5的表達(dá)狀況。本發(fā)明還提供了上述單克隆抗體在制備用于診斷B細(xì)胞來(lái)源腫瘤的試劑盒中的應(yīng)用，所述B細(xì)胞來(lái)源腫瘤為慢性淋巴細(xì)胞白血病、套細(xì)胞淋巴瘤或彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤。CD5分子作為B細(xì)胞來(lái)源腫瘤的分子標(biāo)記物，使用本發(fā)明單克隆抗體2B8對(duì)CD5蛋白分子進(jìn)行免疫檢測(cè)可用于診斷B細(xì)胞來(lái)源腫瘤；目前，臨床上已確定CD5分子為慢性淋巴細(xì)胞白血病、套細(xì)胞淋巴瘤及彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤的標(biāo)記物。鑒于⑶5陽(yáng)性B細(xì)胞的水平與類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的相關(guān)性，本發(fā)明還提供了上述單克隆抗體在制備用于診斷類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的試劑盒中的應(yīng)用。保藏信息用于保藏的雜交瘤細(xì)胞株的科學(xué)描述為抗人CD5單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞株2B8 ；保藏單位全稱中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心；保藏單位簡(jiǎn)稱CGMCC ；保藏單位地址北京市朝陽(yáng)區(qū)北辰西路I號(hào)院3號(hào)中國(guó)科學(xué)院微生物研究所；保藏日期2012年5月16日；保藏編號(hào)CGMCCNo. 6133。


圖I為Western blot驗(yàn)證CD5重組質(zhì)粒在HEK293T細(xì)胞中的表達(dá)；左邊泳道的上樣樣品為轉(zhuǎn)染空載體的J1EK293T細(xì)胞裂解液，右邊泳道的上樣樣品為轉(zhuǎn)染重組質(zhì)粒PCMV6-⑶5的HEK293T細(xì)胞裂解液，雜交所用一抗為DDK標(biāo)簽抗體；圖2為⑶5重組蛋白的SDS-PAGE鑒定圖；圖3為免疫組化檢測(cè)淋巴癌組織的CD5表達(dá)(以2B8單抗為一抗)；
圖4為免疫組化檢測(cè)扁桃體組織的CD5表達(dá)(以2B8單抗為一抗)；圖5為Western blot驗(yàn)證芯片的陽(yáng)性信號(hào)位點(diǎn)；左圖以2B8抗體(I :500稀釋)為一抗的雜交結(jié)果，從左至右依次為過(guò)表達(dá)⑶5質(zhì)粒的293T細(xì)胞裂解液、蛋白Marker、野生型293T細(xì)胞裂解液、過(guò)表達(dá)CETN2的293T細(xì)胞裂解液、過(guò)表達(dá)JUB的293T細(xì)胞裂解液；右圖以分泌2B 8抗體的雜交瘤培養(yǎng)上清為一抗的雜交結(jié)果，從左至右依次為過(guò)表達(dá)⑶5質(zhì)粒的293T細(xì)胞裂解液、蛋白Marker、野生型293T細(xì)胞裂解液、過(guò)表達(dá)CETN2的293T細(xì)胞裂解液、過(guò)表達(dá)JUB的293T細(xì)胞裂解液。
具體實(shí)施例方式為了使本領(lǐng)域的技術(shù)人員更好地理解本發(fā)明的技術(shù)方案，下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的詳細(xì)說(shuō)明。·實(shí)施例I抗⑶5單克隆抗體的制備一、⑶5重組表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建以從ATCC獲得的質(zhì)粒BC027901 (含SEQ ID No. I所示CD5 ORF序列)為模板，設(shè)計(jì)兩條引物并分別引入酶切位點(diǎn)SgfI、MluI，以及C末端Myc-DDK標(biāo)簽(序列如SEQ ID No. 2所示)，并克隆入表達(dá)載體pCMV6-Entry,構(gòu)建⑶5重組表達(dá)質(zhì)粒。二、⑶5重組蛋白的表達(dá)與純化I、轉(zhuǎn)染 HEK293T 細(xì)胞HEK293T細(xì)胞以1:3傳至直徑為IOcm的細(xì)胞培養(yǎng)皿中繼續(xù)培養(yǎng)；取7. 5ml DMEM(無(wú)血清及抗生素)培養(yǎng)基至50ml管中，加入300 V- IPEI MegaTranl. 0混勻，然后加入75 y g上述⑶5重組質(zhì)粒DNA，混勻并靜置30分鐘；分別取515 ill上述混合液加入上述各細(xì)胞培養(yǎng)皿中，于37°C、5%C02培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。轉(zhuǎn)染24小時(shí)后，每培養(yǎng)皿細(xì)胞添加25 ill 2M 丁酸鈉至終濃度5mM。2、裂解細(xì)胞轉(zhuǎn)染48小時(shí)后，進(jìn)行細(xì)胞裂解。吸去培養(yǎng)基，加入Iml PBS進(jìn)行漂洗，吸去PBS。加入Iml裂解緩沖液，使用前加入蛋白酶抑制劑PI和PMSF。置于冰盒中在搖床上振蕩，收集所有培養(yǎng)皿中的裂解液，4°C離心，收集上清。3、DDK親和層析柱純化以孔徑0. 45 u m,直徑33mm的PVDF膜濾器過(guò)濾離心后的裂解液上清并轉(zhuǎn)入15ml管中，加入混合好的S印harose Beads 1ml，封口后放入360度混勻器中，于4°C結(jié)合2小時(shí)；取出15ml管，將裂解液倒入BIO-RAD層析柱中，并接住穿透液，滴盡后穿透液取樣WB檢測(cè)，見(jiàn)圖I ;以裂解緩沖液沖洗柱料1-2次，滴盡后再用TBST沖洗Beads 3次，滴盡后用0. IM Glycine (pH3. 5)洗脫，第一次200 yl，滴盡不收集，第二、三次各500 yl，第四次250 u I,收集至一個(gè)1.5ml Tube中，并迅速加入NaH2P04(pH=ll. 0)中和至pH7. 0左右，每管加入甘油至終濃度為10%，Tween-80至終濃度為0. 1%。純化后的⑶5重組蛋白用SDS-PAGE鑒定，結(jié)果見(jiàn)圖2。三、單抗的篩選與制備I、動(dòng)物免疫上述純化的⑶5重組蛋白以完全弗氏佐劑乳化，采用皮下或腹腔注射方法免疫6-8周齡BALB/c小鼠，免疫劑量為50 u g/只，間隔兩周后進(jìn)行第二次免疫，以不完全弗氏佐劑乳化，免疫劑量為50ii g/只。免疫兩次后取尾血以ELISA法梯度稀釋測(cè)定血清效價(jià)；根據(jù)結(jié)果確定是否加強(qiáng)免疫，選取抗體效價(jià)最高的小鼠進(jìn)行細(xì)胞融合。2、細(xì)胞融合骨髓瘤細(xì)胞采用BALB/c小鼠來(lái)源的sp2/0，融合時(shí)處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期；取上述免疫的小鼠脾臟，制成淋巴細(xì)胞單細(xì)胞懸液；免疫小鼠脾淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞以1:5-1:10混合，滴加371的50% ￡6 (PH 8.0) 1ml，加入不完全培養(yǎng)基及其終止液，離心棄上清后加入HAT培養(yǎng)基懸浮混勻，MC定容到50ml，分裝到3. 5cm培養(yǎng)皿中，放于濕盒中，置于37°C、5%C02恒溫培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。3、篩選和克隆融合7-10天內(nèi)挑選細(xì)胞克隆，使用上述純化的⑶5重組蛋白進(jìn)行ELISA測(cè)試，標(biāo)記細(xì)胞株號(hào)。對(duì)陽(yáng)性孔細(xì)胞進(jìn)行有限稀釋，每次有限稀釋后5-6天測(cè)定ELISA值，挑取0D280陽(yáng)性值較高的單克隆孔進(jìn)行有限稀釋，直至ELISA測(cè)定96孔板全板結(jié)果為陽(yáng)性；挑取陽(yáng)性值高的單克隆定株，其對(duì)應(yīng)融合板細(xì)胞株為2B8。4、腹水單抗的制備與純化10-12周齡的雄性BALB/c小鼠腹腔注射0. 5ml降植·烷，一周后每只小鼠用Iml注射器腹腔注射經(jīng)PBS洗滌重懸的單克隆細(xì)胞懸液，細(xì)胞用量為
5X IO6/只，每株抗體打2只小鼠。待小鼠腹水積聚后收集腹水，離心取上清，親和層析法進(jìn)行腹水純化，根據(jù)抗體亞型選擇相應(yīng)柱料，單抗2B 8亞型為IgGl,采用proteinG進(jìn)行純化。純化后的單抗?jié)舛葴y(cè)定、分裝、凍存在_20°C。實(shí)施例2以單抗2B8為一抗對(duì)淋巴癌組織進(jìn)行免疫組化檢測(cè)I、取淋巴癌組織進(jìn)行石蠟包埋，使用Finesse組織切片機(jī)進(jìn)行切片，組織厚度為
6u m ；2、脫錯(cuò)與水化分析純二甲苯3次X IOmin,無(wú)水乙醇3次X IOmin, 95 %乙醇5min，85%乙醇5min，75%乙醇5min，去離子水浸泡3minX 3次；3、加入抗原修復(fù)液(0. 01M, pH6. 0枸櫞酸鈉緩沖液)高壓鍋高壓熱修復(fù)2min，待高壓鍋溫度降至約90°C時(shí)，打開(kāi)高壓鍋，取出標(biāo)本，然后自然冷卻至室溫。去離子水浸泡3minX 3 次。4、使用3%過(guò)氧化氫滅活組織內(nèi)源性過(guò)氧化物酶,室溫靜置lOmin。去離子水浸泡5minX 3 次。5、加上封閉液(PBS+5%脫脂奶粉+5%正常山羊血清)，37°C孵育60min。6、去除封閉液，勿沖洗，加入1:150比例稀釋的本發(fā)明單抗2B8 ;置于濕盒中，37°C孵育 60min。PBST (含 0. l%Tween_20)洗滌 2 次，每次洗滌 5min。PBST (含 0. 02%Tween_20)洗漆I次，每次洗漆5min。7、滴加 Polink-試劑盒 2 (Catlog No. D37-15)中的試劑 1，37°C孵育 10-20 分鐘。使用PBS洗滌3次，每次5min。滴加Pol ink-2試劑盒(Catlog No. D37-15)中的試劑2，37°C孵育10-20分鐘，使用PBS洗滌3次，每次5min。8、應(yīng)用DAB溶液(中杉金橋ZLI-9019)顯色，顯色3 lOmin。蒸餾水洗滌。9、蘇木精復(fù)染細(xì)胞核2min，蒸餾水漂洗，1%鹽酸分化。蒸餾水漂洗3次，室溫靜置Imin010、脫水和透明75%乙醇5min，100%乙醇5minX3次，85%乙醇5min，95%乙醇5min，100%乙醇3 X 5min ;二甲苯3 X 5min，中性樹(shù)膠封片。
11、鏡檢，見(jiàn)圖3。由圖3可見(jiàn)淋巴癌組織可見(jiàn)大量棕黃色顆粒，為⑶5蛋白表達(dá)陽(yáng)性細(xì)胞。實(shí)施例3以單抗2B8為一抗對(duì)扁桃體組織進(jìn)行免疫組化檢測(cè)使用本發(fā)明單抗2B 8對(duì)扁桃體組織進(jìn)行免疫組化檢測(cè)，檢測(cè)步驟同實(shí)施例2，結(jié)果如圖4所示，由圖4可見(jiàn)，扁桃體組織可見(jiàn)大量棕黃色顆粒，為CD5蛋白表達(dá)陽(yáng)性細(xì)胞。實(shí)施例4、OriGene蛋白芯片檢測(cè)單克隆抗體2B8的特異性O(shè)riGene高密度蛋白芯片上包含10400個(gè)HEK293T細(xì)胞蛋白過(guò)表達(dá)裂解物，每種蛋白裂解液在芯片上具有兩個(gè)拷貝的重復(fù)。蛋白裂解液被印跡在硝酸纖維素膜上。每一鐘蛋白裂解液的定位可以通過(guò)Excel文件進(jìn)行準(zhǔn)確定位。蛋白芯片上蛋白分為40個(gè)亞矩陣,每個(gè)亞矩陣上有一些參照，通過(guò)參照，可以定量每個(gè)芯片點(diǎn)上蛋白的含量，監(jiān)控每次免疫反應(yīng)數(shù)據(jù)的重復(fù)性，以及定位陽(yáng)性信號(hào)的方向。·以下為使用OriGene蛋白(OriGene Cat PA100001)芯片對(duì)2B8單克隆抗體進(jìn)行特異性鑒定的具體步驟I、將一張蛋白芯片放在50ml離心管中，使用40ml去離子水浸潤(rùn)芯片，置于搖床上，室溫混合30分鐘；棄掉去離子水，使用IOmlPBST平衡芯片，室溫處理10分鐘。2、向50ml離心管中加入40ml 5%脫脂牛奶(用PBST進(jìn)行稀釋)置于搖床上，室溫封閉30分鐘。3、使用封閉液(5%脫脂牛奶)稀釋一抗2B 8，稀釋比例I :200。4、將潔凈的封口膜粘貼到實(shí)驗(yàn)臺(tái)上，滴加250-300 ill上述稀釋一抗在封口膜上。5、將蛋白芯片從封閉液中抽出，將蛋白芯片NC膜的一面朝下，從芯片的一邊接觸抗體，慢慢滑下，依靠液體表面張力，抗體將慢慢浸潤(rùn)芯片NC膜，直至整張NC膜浸潤(rùn)在一抗溶液中。整個(gè)操作過(guò)程避免產(chǎn)生氣泡。將芯片移到4度環(huán)境下，靜置，一抗孵育過(guò)夜。在芯片上加蓋培養(yǎng)皿蓋，其上黏附一張濕紙巾，以防止長(zhǎng)時(shí)間孵育導(dǎo)致抗體蒸發(fā)。6、第二天將芯片移至50ml離心管中，使用PBST漂洗芯片兩次，去除多余的抗體。使用40ml PBSTC 0. l%Tween_20)洗滌芯片，置于搖床上混合均勻，洗滌三次，每次洗滌5min。7、使用封閉液(5% 脫脂牛奶)稀釋二抗 DyLight649_conjugated AffiniPureFragment Goat-anti-Mouse IgG,稀釋比例為 I :400。8、按照上述步驟4，步驟5進(jìn)行二抗孵育操作。室溫孵育I小時(shí)。在芯片上方用鋁箔紙遮蓋，以防止發(fā)生信號(hào)漂白。9、按照上述步驟6，使用PBST洗滌芯片。10、使用去離子水沖洗芯片，以去除殘余的鹽分和變性劑。11、室溫干燥芯片，確保芯片完全干燥。12、使用芯片掃描儀讀取突光信號(hào)。13、根據(jù)BSA_Cy3以及BSA_Cy5確定芯片方向以及陽(yáng)性信號(hào)的位點(diǎn)。14、根據(jù)陽(yáng)性信號(hào)位點(diǎn)找出對(duì)應(yīng)蛋白裂解液ID，根據(jù)裂解液數(shù)據(jù)庫(kù)信息，查找到對(duì)應(yīng)蛋白名稱，NCBI錄入號(hào)(accession number),蛋白ID,蛋白大小等信息。芯片結(jié)果顯示蛋白芯片上出現(xiàn)4個(gè)陽(yáng)性信號(hào)點(diǎn)，對(duì)應(yīng)蛋白分別為⑶5、CETN2、JUB、CACNG5。實(shí)施例5、Western blot驗(yàn)證蛋白芯片雜交結(jié)果
使用Western blot對(duì)實(shí)施例4所得結(jié)果進(jìn)行分析驗(yàn)證。分別以過(guò)表達(dá)⑶5重組質(zhì)粒、CETN2重組質(zhì)粒、JUB重組質(zhì)粒的293T細(xì)胞的細(xì)胞裂解液以及野生型293T細(xì)胞裂解液進(jìn)行上樣，SDS-PAGE電泳、轉(zhuǎn)膜、封閉后，分別使用本發(fā)明2B 8單克隆抗體(稀釋比例為1:500)及分泌2B8抗體的雜交瘤細(xì)胞上清為一抗進(jìn)行雜交,其結(jié)果如圖5所示。由圖5可見(jiàn)無(wú)論是本發(fā)明2B8單克隆抗體還是分泌2B8抗體的雜交瘤細(xì)胞培養(yǎng)上清，均只與CD5蛋白結(jié)合，而與CETN2、JUB蛋白抗原均無(wú)結(jié)合，提示本發(fā)明單克隆抗體2B8僅特異性結(jié)合⑶5蛋白。以上所述僅是本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式，應(yīng)當(dāng)指出，對(duì)于 本技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來(lái)說(shuō)，在不脫離本發(fā)明原理的前提下，還可以做出若干改進(jìn)和潤(rùn)飾，這些改進(jìn)和潤(rùn)飾也應(yīng)視為本發(fā)明的保護(hù)范圍。
權(quán)利要求
1.一種特異性結(jié)合CD5蛋白的單克隆抗體2B8，由保藏編號(hào)為CGMCC No. 6133的雜交瘤細(xì)胞株產(chǎn)生。
2.一種雜交瘤細(xì)胞株，其保藏編號(hào)為CGMCC No. 6133。
3.如權(quán)利要求I所述的單克隆抗體在制備用于檢測(cè)CD5蛋白的免疫檢測(cè)工具中的應(yīng)用。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其特征在于，所述免疫檢測(cè)工具為試劑盒、芯片或試紙。
5.一種免疫組化檢測(cè)試劑盒，其特征在于，包括權(quán)利要求I所述的單克隆抗體。
6.如權(quán)利要求I所述的單克隆抗體在制備用于診斷B細(xì)胞來(lái)源腫瘤試劑盒中的應(yīng)用。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的應(yīng)用，其特征在于，所述B細(xì)胞來(lái)源腫瘤為慢性淋巴細(xì)胞白血病、套細(xì)胞淋巴瘤或彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤。
8.如權(quán)利要求I所述的單克隆抗體在制備用于診斷類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎試劑盒中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種雜交瘤細(xì)胞株(保藏編號(hào)為CGMCC No.6133)，以及由此雜交瘤細(xì)胞株產(chǎn)生的單克隆抗體2B8。本發(fā)明還涉及單克隆抗體2B8在制備用于檢測(cè)CD5蛋白的免疫檢測(cè)工具中的應(yīng)用，含單克隆抗體2B8的免疫組化試劑盒，以及單克隆抗體2B8在制備用于診斷B細(xì)胞來(lái)源腫瘤、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎試劑盒中的應(yīng)用。本發(fā)明所述單克隆抗體可與CD5蛋白特異性結(jié)合，而與細(xì)胞內(nèi)其他蛋白無(wú)交叉反應(yīng)，顯著提高了CD5蛋白免疫檢測(cè)的特異性和可靠性。
文檔編號(hào)C07K16/28GK102786595SQ201210274198
公開(kāi)日2012年11月21日 申請(qǐng)日期2012年8月3日 優(yōu)先權(quán)日2012年8月3日
發(fā)明者何為無(wú), 方麗, 汪芳迅, 管寶全, 袁克湖, 陳堅(jiān), 馬東輝 申請(qǐng)人:無(wú)錫傲銳東源生物科技有限公司