專利名稱：一種替考拉寧單組份的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種工業(yè)微生物技術(shù)領(lǐng)域中藥品原料的制備方法，尤其是一種從發(fā)酵培養(yǎng)物中分離純化替考拉寧單組份的制備方法。
背景技術(shù)：
替考拉寧(Teicoplanin),為游動(dòng)放線菌屬iActinoplanes teichomyceticus)發(fā)酵產(chǎn)生的一種糖肽類抗生素。它是由Teicoplanin A2(TA2)五種結(jié)構(gòu)相似的糖肽類化合物(TA2_rTA2_5)和去?；咸前稵eicoplanin A3(TA3)組成的混合物。替考拉寧是繼萬古霉素后開發(fā)的另一種抗耐藥菌糖肽類抗生素，它主要對(duì)革蘭氏陽性需氧菌和厭氧菌具有較強(qiáng)的抗菌活性，特別對(duì)MRSA引起的感染有很好的療效，是目前臨床上為數(shù)不多的仍具有對(duì)多重耐藥性金黃色葡萄球菌和腸球菌有活性的藥物之一。與當(dāng)前國(guó)際上公認(rèn)的抗耐藥菌抗生素 萬古霉素相比，替考拉寧具有與之相似的抗菌活性，相同的作用機(jī)理，相近或更優(yōu)的臨床療效，但毒性更低，特別是更低的腎毒性，不會(huì)發(fā)生使用萬古霉素后引發(fā)的“紅人綜合癥”。替考拉寧具有比萬古霉素更方便、快捷的給藥途徑，可以通過靜注或肌注給藥，應(yīng)用更方便。此外，它與￠-內(nèi)酰胺類、氨基糖苷類和碳青霉烯類抗生素聯(lián)用對(duì)絕大多數(shù)革蘭氏陽性菌有協(xié)同殺菌作用。因此，對(duì)替考拉寧的研究與開發(fā)具有重要的經(jīng)濟(jì)價(jià)值和應(yīng)用前景。由于替考拉寧是兩性化合物且結(jié)構(gòu)中含有多個(gè)羥基，故易溶于水。另外，它易溶于二甲基甲酰胺、二甲基亞砜、丙二醇，可溶于甲醇、乙醇等有機(jī)溶劑，不溶于無機(jī)酸和非極性溶劑。國(guó)內(nèi)外對(duì)其分離純化方法進(jìn)行了大量的研究，歸納起來主要有溶媒萃取法、吸附法、離子交換法和色譜法。替考拉寧單組份的結(jié)構(gòu)式為
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權(quán)利要求
1.一種替考拉寧單組份的制備方法，其特征在于該方法包括下述步驟， 步驟I)預(yù)處理在常溫條件下，在替考拉寧發(fā)酵液中加入堿溶液，調(diào)節(jié)PH至11. (T13. O ;將發(fā)酵液固液分離，所得濾液用酸溶液調(diào)節(jié)PH至7. (T7. 5，得到替考拉寧濾液； 步驟2)脫色將替考拉寧濾液導(dǎo)入大孔脫色樹脂進(jìn)行脫色，得到替考拉寧脫色液； 步驟3)吸附將替考拉寧脫色液導(dǎo)入大孔吸附樹脂進(jìn)行吸附，再用溶劑解吸，所得替考拉寧解吸液，經(jīng)濃縮、結(jié)晶、干燥，得到替考拉寧的粗提物； 步驟4)層析將替考拉寧粗提物用水溶解，注入聚合物微球?qū)游鲋M(jìn)行層析，然后用不同濃度的洗脫溶劑梯度洗脫，分別收集各段洗脫液，得到含有TA”、TA2_2、TA2_3、TA2_4、TA2_5和TAp1六種單組份的替考拉寧單組份洗脫液； 步驟5)將六種替考拉寧單組份洗脫液分別濃縮、結(jié)晶、干燥，得到替考拉寧的單組份精粉。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種替考拉寧單組份的制備方法，其特征在于所述步驟I)中堿溶液為氫氧化鈉溶液或氫氧化鉀溶液；酸溶液為鹽酸、硫酸或有機(jī)酸溶液的其中一種。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種替考拉寧單組份的制備方法，其特征在于所述步驟2)中大孔脫色樹脂為L(zhǎng)X-98、LSA-700B、DMl30或D303樹脂的其中一種。
4.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種替考拉寧單組份的制備方法，其特征在于所述步驟3)中大孔吸附樹脂為HZ816、HZ801、DlOl或D312樹脂的其中一種；所述溶劑為甲醇水溶液、乙醇水溶液或丙酮水溶液的其中一種，溶劑濃度為40% 50%。
5.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種替考拉寧單組份的制備方法，其特征在于所述步驟4)中層析介質(zhì)為聚合物微球PS25-300、PS30RPC-300或PSA30-300的其中一種；所述洗脫溶劑為甲醇水溶液、乙醇水溶液或丙酮水溶液的其中一種，洗脫溶劑濃度為25%飛0%。
6.根據(jù)權(quán)利要求1 5任一項(xiàng)所述的一種替考拉寧單組份的制備方法，其特征在于所述步驟4)中包括如下步驟， 步驟A)將替考拉寧粗提物用蒸餾水溶解，注入聚合物微球?qū)游鲋M(jìn)行層析，然后依次使用從低濃度到高濃度的洗脫溶劑梯度洗脫； 步驟B)根據(jù)HPLC對(duì)替考拉寧中各單組份的檢測(cè)結(jié)果，分別收集TA3YTAh和TA2_2的洗脫液；得到TA3+ TA2^1和TA2_2三種替考拉寧單組份洗脫液； 步驟C)根據(jù)HPLC對(duì)替考拉寧中各單組份的檢測(cè)結(jié)果，分別收集TA2_2與TA2_3的HPLC峰面積百分比為I :2的混合液，TA2_4與TA2_5峰面積百分比為I :1的混合液； 步驟D)將步驟C)中得到的兩種混合液濃縮至混合液濃度為100g/L，再次注入聚合物微球?qū)游鲋M(jìn)行層析分離，然后依次使用從低濃度到高濃度的洗脫溶劑梯度洗脫，根據(jù)HPLC檢測(cè)結(jié)果，分別收集TA2_3、TA2_4和TA2_5的洗脫液，得到TA2_3、TA2_4和TA2_5三種替考拉寧單組份洗脫液。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種替考拉寧單組份的制備方法，屬于微生物原料藥品的制備領(lǐng)域。該方法包括將替考拉寧發(fā)酵液通過大孔脫色樹脂脫色后，再用大孔吸附樹脂吸附、解吸，濃縮后得到含有TA2-1、TA2-2、TA2-3、TA2-4、TA2-5和TA3-1六種組份的替考拉寧粗提物；粗提物用水溶解后借助聚合物微球進(jìn)行層析分離，得到高純度的替考拉寧TA2-1、TA2-2、TA2-3、TA2-4、TA2-5和TA3-1六個(gè)單組份。本發(fā)明使用新型層析介質(zhì)—聚合物微球，可以從替考拉寧粗提物中同時(shí)分離得到六種單組份；該方法工藝簡(jiǎn)潔，樣品處理量大，溶劑消耗少，可以規(guī)模化制備替考拉寧單組份，為替考拉寧單組份的病理學(xué)、毒理學(xué)等深入研究提供樣品。
文檔編號(hào)C07K1/22GK102718843SQ20121022163
公開日2012年10月10日 申請(qǐng)日期2012年6月30日 優(yōu)先權(quán)日2012年6月30日
發(fā)明者任風(fēng)芝, 張志江, 張雪霞, 成曉迅, 朱秀良, 李麗紅, 李寧, 李曉露, 林毅, 段寶玲, 王海燕, 董愛華, 蔣沁, 陳書紅 申請(qǐng)人:華北制藥集團(tuán)新藥研究開發(fā)有限責(zé)任公司