專利名稱：一種制備白花丹苷a的方法
技術領域：
本發(fā)明屬于天然藥物化學領域，特別是涉及一種制備白花丹苷A的方法。
背景技術：
白花丹苷A (Plumbaside A)為酚苷類物質，CAS 號 126582-70-5，分子式 C17H20O8,分子量352. 34。白花丹苷A來源于白花丹科(Plumbaginaceae)小藍雪花的全草，具有免疫促進作用，體外在濃度為100 lpg/ml時能提高T-淋巴細胞的增殖能力。小藍雪花為白花丹科藍雪花屬落葉灌木，我國特產。分布于四川西部和西藏東部，南至云南中部，北達甘肅文縣；生于干熱河谷的巖壁和礫石或砂質基地上，多見于山麓、路邊、河邊向陽處。全株治主治風濕麻木；脘腹脅痛；跌打損傷；骨折；脈管炎；腮腺炎。

發(fā)明內容
本發(fā)明的目的是提供一種制備白花丹苷A的方法。本發(fā)明的目的是通過以下技術方案來實現(xiàn)的
(1)取小藍雪花全草粉碎，加生物酶拌勻，常溫酶解1-3天，酶解原料用溫水浸泡提取2-3次，過濾后得到提取液；
(2)提取液用超濾膜超濾，透過液加入聚酰胺色譜柱，用乙醇水溶液洗脫，洗脫液濃縮得粗提物；
(3 )把上述粗提物采用高速逆流色譜分離，紫外檢測器監(jiān)測，收集目標成分，減壓干燥得白花丹苷A。步驟(I)中所述的生物酶可選纖維素酶、淀粉酶和果膠酶，用量為原料量的
2-5%0。步驟(2)中所述的超濾膜為截留分子量2000-10000的中空纖維素超濾膜。步驟(2)中所述的聚酰胺樹脂為200-400目，乙醇水溶液濃度為60_75%，用量是
3-6BV。步驟(3)中所述的高速逆流色譜的溶劑系統(tǒng)為乙酸乙酯-甲醇-水，比例為45-50:1-2:47-51，下相為流動相，上相為固定相。本發(fā)明采用生物酶發(fā)酵，可以縮短提取周期，提高提取率；采用膜過濾技術分離，物理方法除雜，操作簡單，不污染環(huán)境；采用高速逆流色譜分離，分離速度快，樣品無損失，溶劑可以循環(huán)使用，制備量大。
具體實施例方式
下面將結合具體實施方式
進一步說明本發(fā)明。 實施例I :
取纖維酶5g溶于5L水，加入粉碎的5kg小藍雪花全草中拌勻，常溫酶解3天，酶解原料用70°C溫水浸泡提取2次，每次加40kg，提取液過濾后用截留分子量2000的中空纖維素超濾膜超濾，透過液加入200-400目聚酰胺色譜柱，用4BV60%乙醇水溶液洗脫，洗脫液濃縮得粗提物20g。取乙酸乙酯、甲醇、水按45:1:47混合，充分分層后，取上相注滿高速逆流色譜柱，同時開轉主機900rpm，泵入下相做流動相，待系統(tǒng)平衡后，流速調節(jié)為3ml/min，同時用流動相溶解粗提物，由進樣閥進樣，紫外檢測器監(jiān)測，收集目標流分，連續(xù)制備，合并流分減壓干燥得白色白花丹苷A2. Og,經HPLC檢測，純度98. 9%。實施例2:
取淀粉酶IOg溶于5L水，加入粉碎的5kg小藍雪花全草中拌勻，常溫酶解I天，酶解原料用60°C溫水浸泡提取3次，每次加30kg，提取液過濾后用截留分子量6000的中空纖維素超濾膜超濾，透過液加入200-400目聚酰胺色譜柱，用6BV65%乙醇水溶液洗脫，洗脫液濃縮得粗提物12g。取乙酸乙酯、甲醇、水按50:2:51混合，充分分層后，取上相注滿高速逆流色譜柱，同時開轉主機SOOrpm，泵入下相做流動相，待系統(tǒng)平衡后，流速調節(jié)為2ml/min，同時用流動相溶解粗提物，由進樣閥進樣，紫外檢測器監(jiān)測，收集目標流分，連續(xù)制備，合并流分減壓干燥得白色白花丹苷A2. 5g，經HPLC檢測，純度98. 1%。實施例3
取淀粉酶5和果膠酶IOg溶于5L水，加入粉碎的5kg小藍雪花全草中拌勻，常溫酶解I天，酶解原料用60°C溫水浸泡提取3次，每次加30kg，提取液過濾后用截留分子量6000的中空纖維素超濾膜超濾，透過液加入200-400目聚酰胺色譜柱，用3BV70%乙醇水溶液洗脫，洗脫液濃縮得粗提物12g。取乙酸乙酯、甲醇、水按50:1:50混合，充分分層后，取上相注滿高速逆流色譜柱，同時開轉主機850rpm，泵入下相做流動相，待系統(tǒng)平衡后，流速調節(jié)為2. 5ml/min,同時用流動相溶解粗提物，由進樣閥進樣，紫外檢測器監(jiān)測，收集目標流分，連續(xù)制備，合并流分減壓干燥得白色白花丹苷A2. 7g，經HPLC檢測，純度98. 7%。實施例4:
取淀粉酶25g溶于5L水，加入粉碎的5kg小藍雪花全草中拌勻，常溫酶解2天，酶解原料用80°C溫水浸泡提取2次，每次加30kg，提取液過濾后用截留分子量6000的中空纖維素超濾膜超濾，透過液加入200-400目聚酰胺色譜柱，用5BV60%乙醇水溶液洗脫，洗脫液濃縮得粗提物12g。取乙酸乙酯、甲醇、水按50:2:48混合，充分分層后，取上相注滿高速逆流色譜柱，同時開轉主機SOOrpm，泵入下相做流動相，待系統(tǒng)平衡后，流速調節(jié)為2ml/min，同時用流動相溶解粗提物，由進樣閥進樣，紫外檢測器監(jiān)測，收集目標流分，連續(xù)制備，合并流分減壓干燥得白色白花丹苷A3. Ig,經HPLC檢測，純度98. 2%。實施例5:
取淀粉酶5和果膠酶IOg溶于5L水，加入粉碎的5kg小藍雪花全草中拌勻，常溫酶解I天，酶解原料用60°C溫水浸泡提取3次，每次加20kg，提取液過濾后用截留分子量6000的中空纖維素超濾膜超濾，透過液加入200-400目聚酰胺色譜柱，用3BV75%乙醇水溶液洗脫，洗脫液濃縮得粗提物19g。取乙酸乙酯、甲醇、水按50:1:49混合，充分分層后，取上相 注滿高速逆流色譜柱，同時開轉主機900rpm，泵入下相做流動相，待系統(tǒng)平衡后，流速調節(jié)為3ml/min，同時用流動相溶解粗提物，由進樣閥進樣，紫外檢測器監(jiān)測，收集目標流分，連續(xù)制備，合并流分減壓干燥得白色白花丹苷A3. 5g，經HPLC檢測，純度98. 0%。
權利要求
1.一種制備白花丹苷A的方法，其特征在于以下步驟 (1)取小藍雪花全草粉碎，加生物酶拌勻，常溫酶解1-3天，酶解原料用溫水浸泡提取2-3次，過濾后得到提取液； (2)提取液用超濾膜超濾，透過液加入聚酰胺色譜柱，用こ醇水溶液洗脫，洗脫液濃縮得粗提物； (3 )把上述粗提物采用高速逆流色譜分離，紫外檢測器監(jiān)測，收集目標成分，減壓干燥得白花丹苷A。
2.據(jù)權利要求I所述的制備白花丹苷A的方法，其特征在于步驟(I)中所述的生物酶可選纖維素酶、淀粉酶和果膠酶，用量為原料量的2-5%。。
3.根據(jù)權利要求I所述的制備白花丹苷A的方法，其特征在于步驟(2)中所述的超濾膜為截留分子量2000-10000的中空纖維素超濾膜。
4.根據(jù)權利要求I所述的制備白花丹苷A的方法，其特征在于步驟(2)中所述的聚酰胺樹脂為200-400目，こ醇水溶液濃度為60-75%，用量是3-6BV。
5.根據(jù)權利要求I所述的制備白花丹苷A的方法，其特征在于步驟(3)中所述的高速逆流色譜的溶劑系統(tǒng)為こ酸こ酷-甲醇-水，比例為45-50:1-2:47-51，下相為流動相，上相為固定相。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種制備白花丹苷A的方法。方法步驟如下(1)取小藍雪花全草粉碎，加生物酶拌勻，常溫酶解1-3天，酶解原料用溫水浸泡提取2-3次，過濾后得到提取液；(2)提取液用超濾膜超濾，透過液加入聚酰胺色譜柱，用乙醇水溶液洗脫，洗脫液濃縮得粗提物；(3)把上述粗提物采用高速逆流色譜分離，紫外檢測器監(jiān)測，收集目標成分，減壓干燥得白花丹苷A。采用本發(fā)明制備白花丹苷A，方法操作簡單、效率高、制備量大，所得產品純度高。
文檔編號C07H1/08GK102659862SQ201210122808
公開日2012年9月12日 申請日期2012年4月25日 優(yōu)先權日2012年4月25日
發(fā)明者萬冬梅, 劉東鋒 申請人:南京澤朗醫(yī)藥科技有限公司