一種藍(lán)雪花組織培養(yǎng)外植體消毒方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種藍(lán)雪花組織培養(yǎng)外植體消毒方法，屬于植物組培技術(shù)領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002] 藍(lán)雪花（Plumbagoauriculata)原產(chǎn)南非，又名藍(lán)花丹、藍(lán)雪丹、藍(lán)花磯松、藍(lán)茉莉 等，屬于白花丹科（藍(lán)雪科）白花丹屬多年生常綠灌木。藍(lán)雪花長(zhǎng)勢(shì)強(qiáng)健，耐熱，較耐高溫 高濕，病蟲(chóng)害少，管理簡(jiǎn)單，觀賞期長(zhǎng)。葉色翠綠，花色淡雅，炎熱的夏季給人以清涼感覺(jué)， 可盆栽點(diǎn)綴居室、陽(yáng)臺(tái)；成熟植株枝條懸垂，適宜大型容器組合盆栽，也可用于場(chǎng)館周邊、道 路、立交橋等主要路段的綠化美化，也可地栽林緣種植或點(diǎn)綴草坪。
[0003] 藍(lán)雪花花期正值少花吋節(jié)，而且是自然界少有的藍(lán)色花，受到園林工作者青睞。 目前藍(lán)雪花在國(guó)內(nèi)作為一種新優(yōu)觀花花卉被引種栽培，特別是2008年北京奧運(yùn)會(huì)期間，在 一些重要綠化地段被推廣應(yīng)用，發(fā)揮了很好的景觀效果，是奧運(yùn)會(huì)期間裝飾北京環(huán)境的新 優(yōu)觀花花卉之一。
[0004] 藍(lán)雪花播種繁殖，種子自然結(jié)實(shí)率低，不易獲得種子，國(guó)內(nèi)引種栽培大多數(shù)是利用 進(jìn)口種子栽培，價(jià)格較貴。扦插繁殖生根率較低，且適宜扦插的時(shí)間有限，不易獲得大量種 苗。組織培養(yǎng)繁殖技術(shù)所需繁殖材料少，不受季節(jié)限制，繁殖系數(shù)高，繁殖速度快，是針對(duì)材 料缺乏，不易繁殖植物快速獲得大量種苗的有效途徑。
[0005] 利用組織培養(yǎng)技術(shù)，外植體的選擇、預(yù)處理、及消毒方法是初代培養(yǎng)成功的關(guān)鍵， 也是減少污染、保證成活獲得無(wú)菌體系的核心技術(shù)，是組培快繁種苗的基礎(chǔ)。但是，現(xiàn)有藍(lán) 雪花組培技術(shù)中，消毒方法選擇不夠合理，導(dǎo)致成活率過(guò)低，并且易造成環(huán)境污染。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 發(fā)明目的：為了解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明提供一種藍(lán)雪花組織培養(yǎng)外植體消毒 方法。
[0007] 技術(shù)方案：為了實(shí)現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明公開(kāi)了一種藍(lán)雪花組織培養(yǎng)外植體消 毒方法，包括以下步驟：
[0008] (1)外植體選擇：選擇具有品種典型特征明顯、生長(zhǎng)勢(shì)強(qiáng)、無(wú)病蟲(chóng)害的優(yōu)良藍(lán)雪花 單株作外植體取材母株，剪取枝條的中上部分作為外植體，剪取后立即插入盛有清水的燒 杯中；
[0009] (2)外植體預(yù)處理：把步驟（1)剪取的枝條剪成小段，每個(gè)小段保證有1-2個(gè)腋 芽，剪掉較大的葉片，清洗所得小段；
[0010] (3)外植體消毒：將步驟（2)所得小段，先用75%乙醇浸潤(rùn)，用無(wú)菌水漂洗1-2次， 再用10%的NaClO溶液中浸泡，用無(wú)菌水沖洗，最后用無(wú)菌濾紙吸去表面水分，置于無(wú)菌培 養(yǎng)皿中備用，即得。
[0011] 作為優(yōu)選，步驟（1)中所述藍(lán)雪花單株為2-3年生單株。
[0012] 作為另一種優(yōu)選，步驟（1)中所述枝條為生長(zhǎng)健壯、節(jié)間均勻、葉色翠綠的枝條。
[0013] 作為另一種優(yōu)選，步驟（2)中所述小段的長(zhǎng)度為5-8cm。
[0014] 作為另一種優(yōu)選，步驟（2)中所述清洗所得小段的方法為：把小段放入燒杯中，加 入洗衣粉，攪拌沖洗，然后用紗布封住燒杯口，放在自來(lái)水下流水沖洗30-40min。
[0015] 作為另一種優(yōu)選，步驟（3)中所述75%乙醇浸潤(rùn)的時(shí)間為120-140秒。
[0016] 作為另一種優(yōu)選，步驟（3)中所述NaClO溶液中浸泡的時(shí)間為10-20min。
[0017] 1、利用本發(fā)明所述外植體的選擇標(biāo)準(zhǔn)，能夠很好地保證藍(lán)雪花的優(yōu)良特性，選擇 健壯的枝條及中上部腋芽營(yíng)養(yǎng)能夠保證外植體的成活。
[0018] 2、利用本發(fā)明所述外植體的預(yù)處理，方便操作，用洗衣粉及流水沖洗，操作簡(jiǎn)單， 清潔外植體效果好。
[0019] 3、利用本發(fā)明所述外植體消毒的方法，步驟科學(xué)合理，消毒劑酒精及NaClO容易 獲得，所用濃度及處理時(shí)間，既具有很好的消毒效果，又對(duì)外植體不會(huì)造成太大傷害，達(dá)到 減少污染保證成活的目的。
[0020] 技術(shù)效果：相對(duì)于現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明方法操作簡(jiǎn)單，步驟科學(xué)合理，既具有很好的 消毒效果，又對(duì)外植體不會(huì)造成太大傷害，能夠顯著提高外植體成活率，同時(shí)有效減少環(huán)境 污染。
【具體實(shí)施方式】
[0021] 實(shí)施例1
[0022] (1)外植體選擇：選擇具有品種典型特征明顯、生長(zhǎng)勢(shì)強(qiáng)、無(wú)病蟲(chóng)害的2-3年生優(yōu) 良藍(lán)雪花單株作外植體取材母株，選擇生長(zhǎng)健壯、節(jié)間均勻、葉色翠綠的枝條，剪取枝條的 中上部分作為外植體，剪取后立即插入盛有清水的燒杯中；
[0023] (2)外植體預(yù)處理：把步驟（1)剪取的枝條剪成5-8cm小段，每個(gè)小段保證有1-2 個(gè)腋芽，剪掉較大的葉片，清洗所得小段，方法為：把小段放入燒杯中，加入洗衣粉，攪拌沖 洗，然后用紗布封住燒杯口，放在自來(lái)水下流水沖洗30min。；
[0024] (3)外植體消毒：將步驟⑵所得小段，先用75%乙醇浸潤(rùn)120秒，用無(wú)菌水漂洗 1-2次，再用10%的NaClO溶液中浸泡lOmin，用無(wú)菌水沖洗4-6次，最后用無(wú)菌濾紙吸去表 面水分，置于無(wú)菌培養(yǎng)皿中備用，即得。
[0025] 實(shí)施例2 :
[0026] (1)外植體選擇：選擇具有品種典型特征明顯、生長(zhǎng)勢(shì)強(qiáng)、無(wú)病蟲(chóng)害的2-3年生優(yōu) 良藍(lán)雪花單株作外植體取材母株，選擇生長(zhǎng)健壯、節(jié)間均勻、葉色翠綠的枝條，剪取枝條的 中上部分作為外植體，剪取后立即插入盛有清水的燒杯中；
[0027] (2)外植體預(yù)處理：把步驟（1)剪取的枝條剪成5-8cm小段，每個(gè)小段保證有1-2 個(gè)腋芽，剪掉較大的葉片，清洗所得小段，方法為：把小段放入燒杯中，加入洗衣粉，攪拌沖 洗，然后用紗布封住燒杯口，放在自來(lái)水下流水沖洗40min。；
[0028] (3)外植體消毒：將步驟⑵所得小段，先用75%乙醇浸潤(rùn)140秒，用無(wú)菌水漂洗 1-2次，再用10%的NaClO溶液中浸泡20min，用無(wú)菌水沖洗4-6次，最后用無(wú)菌濾紙吸去表 面水分，置于無(wú)菌培養(yǎng)皿中備用，即得。
[0029] 實(shí)施例3 :
[0030] (1)外植體選擇：選擇具有品種典型特征明顯、生長(zhǎng)勢(shì)強(qiáng)、無(wú)病蟲(chóng)害的2-3年生優(yōu) 良藍(lán)雪花單株作外植體取材母株，選擇生長(zhǎng)健壯、節(jié)間均勻、葉色翠綠的枝條，剪取枝條的 中上部分作為外植體，剪取后立即插入盛有清水的燒杯中；
[0031] (2)外植體預(yù)處理：把步驟（1)剪取的枝條剪成5-8cm小段，每個(gè)小段保證有1-2 個(gè)腋芽，剪掉較大的葉片，清洗所得小段，方法為：把小段放入燒杯中，加入洗衣粉，攪拌沖 洗，然后用紗布封住燒杯口，放在自來(lái)水下流水沖洗35min。；
[0032] (3)外植體消毒：將步驟⑵所得小段，先用75%乙醇浸潤(rùn)130秒，用無(wú)菌水漂洗 1-2次，再用10%的NaClO溶液中浸泡15min，用無(wú)菌水沖洗4-6次，最后用無(wú)菌濾紙吸去表 面水分，置于無(wú)菌培養(yǎng)皿中備用，即得。
[0033] 實(shí)驗(yàn)例1不同外植體的選擇對(duì)藍(lán)雪花成活率的研究
[0034] 實(shí)驗(yàn)分別以葉片為外植體，將葉片進(jìn)行初步消毒處理后，在帶葉脈部分切割成 2cm*2cm左右大小的方塊；以莖段為外植體，將枝條上的葉片去除后，切成2cm長(zhǎng)左右?guī)?1~2個(gè)腋芽的莖段接種到MS培養(yǎng)基上，2個(gè)月后觀測(cè)腋芽成活及發(fā)育情況。結(jié)果如下表 1〇
[0035] 表1不同外植體的選擇對(duì)藍(lán)雪花成活率的影響
[0036]
[0037] 由上表2結(jié)果可得，利用帶腋芽的莖段芽分化成活率遠(yuǎn)高于葉片。
[0038] 實(shí)驗(yàn)例2不同滅菌劑及滅菌時(shí)間的控制對(duì)藍(lán)雪花成活率的研究
[0039] 各實(shí)驗(yàn)組為按照本發(fā)明消毒方法，不同之處10%的NaClO溶液中浸泡時(shí)間不同， 分另1J為 5min、15min和 25min。
[0040] 各對(duì)照組也按照本發(fā)明消毒方法，不同之處為采用1%升汞浸泡替代10%的 NaClO溶液浸泡，且浸泡時(shí)間分別為3min、6min和9min。（升萊濃度和浸泡時(shí)間均為現(xiàn)有技 術(shù)中常用）
[0041] 上述各組均采用同一批次的藍(lán)雪花，其外植體成活率，結(jié)果如下表2 :
[0042] 表2各外植體成活率結(jié)果
[0043]
[0044] 由上表2結(jié)果可得，應(yīng)用1 %升汞進(jìn)行消毒，成活率最高的為浸泡6min，成活率為 65. 82 %，而采用本發(fā)明方法，成活率最高可以達(dá)到79. 03 %，顯著優(yōu)于1 %升汞。并且，升 汞為劇毒溶液不容易獲得，且易污染環(huán)境，而本發(fā)明所用NaClO溶液不僅效果好，而且無(wú)污 染。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種藍(lán)雪花組織培養(yǎng)外植體消毒方法，其特征在于，包括以下步驟： (1) 外植體選擇：選擇具有品種典型特征明顯、生長(zhǎng)勢(shì)強(qiáng)、無(wú)病蟲(chóng)害的優(yōu)良藍(lán)雪花單 株作外植體取材母株，剪取枝條的中上部分作為外植體，剪取后立即插入盛有清水的燒杯 中； (2) 外植體預(yù)處理：把步驟（1)剪取的枝條剪成小段，每個(gè)小段保證有1-2個(gè)腋芽，剪 掉較大的葉片，清洗所得小段； (3) 外植體消毒：將步驟⑵所得小段，先用75%乙醇浸潤(rùn)，用無(wú)菌水漂洗1-2次，再用 10%的NaClO溶液中浸泡，用無(wú)菌水沖洗，最后用無(wú)菌濾紙吸去表面水分，置于無(wú)菌培養(yǎng)皿 中備用，即得。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的藍(lán)雪花組織培養(yǎng)外植體消毒方法，其特征在于，步驟（1)中所 述藍(lán)雪花單株為2-3年生單株。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的藍(lán)雪花組織培養(yǎng)外植體消毒方法，其特征在于，步驟（1)中所 述枝條為生長(zhǎng)健壯、節(jié)間均勻、葉色翠綠的枝條。4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的藍(lán)雪花組織培養(yǎng)外植體消毒方法，其特征在于，步驟（2)中所 述小段的長(zhǎng)度為5-8cm。5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的藍(lán)雪花組織培養(yǎng)外植體消毒方法，其特征在于，步驟（2)中所 述清洗所得小段的方法為：把小段放入燒杯中，加入洗衣粉，攪拌沖洗，然后用紗布封住燒 杯口，放在自來(lái)水下流水沖洗30-40min。6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的藍(lán)雪花組織培養(yǎng)外植體消毒方法，其特征在于，步驟（3)中所 述75%乙醇浸潤(rùn)的時(shí)間為120-140秒。7. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的藍(lán)雪花組織培養(yǎng)外植體消毒方法，其特征在于，步驟（3)中所 述NaClO溶液中浸泡的時(shí)間為10-20min。
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種藍(lán)雪花組織培養(yǎng)外植體消毒方法，包括以下步驟：(1)外植體選擇；(2)外植體預(yù)處理；(3)外植體消毒。相對(duì)于現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明方法操作簡(jiǎn)單，步驟科學(xué)合理，既具有很好的消毒效果，又對(duì)外植體不會(huì)造成太大傷害，能夠顯著提高外植體成活率，同時(shí)有效減少環(huán)境污染。
【IPC分類(lèi)】A01H4/00
【公開(kāi)號(hào)】CN105191796
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510627529
【發(fā)明人】宗樹(shù)斌, 王永平, 劉玉華, 顧立新, 陳少卿
【申請(qǐng)人】江蘇農(nóng)林職業(yè)技術(shù)學(xué)院
【公開(kāi)日】2015年12月30日
【申請(qǐng)日】2015年9月28日