專利名稱：由葵花粕中同時(shí)提取綠原酸和葵花蛋白的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種由葵花粕中同時(shí)提取綠原酸和葵花蛋白的方法。
背景技術(shù)：
綠原酸(CGA)又名咖啡鞣酸，是植物在有氧呼吸過(guò)程中產(chǎn)生的一種由咖啡酸 (caffiec acid)與奎尼酸(quinic acid)組成的酯類物質(zhì)，分子式C16H18O9,分子量345. 30。 綠原酸具有較強(qiáng)的藥理活性，具有預(yù)防II型糖尿病和心血管疾病的功能。據(jù)報(bào)道，綠原酸有抗病毒、抗細(xì)菌和抗真菌作用，并且毒副作用較低。綠原酸主要存在于杜仲葉，金銀花和向日葵中，據(jù)報(bào)道向日葵栽培品種中綠原酸含量為1. 4.5%，平均為2.8%，我國(guó)有豐富的葵粕資源，對(duì)葵粕中綠原酸進(jìn)行研究，不僅可以促進(jìn)向日葵資源的綜合開發(fā)利用，而且解決了向日葵產(chǎn)區(qū)葵粕積壓?jiǎn)栴}。目前，國(guó)內(nèi)對(duì)葵花粕綠原酸醇提工藝的研究報(bào)道，多限于分析各單因素對(duì)綠原酸提取率的影響，以正交試驗(yàn)方法確定其最佳工藝條件。雖然傳統(tǒng)的正交試驗(yàn)方法能夠同時(shí)考慮幾種影響因素，尋找最佳因素水平組合，卻不能找出因素和相應(yīng)值間的確切的函數(shù)表達(dá)式，即回歸模型，從而無(wú)法找到全部影響因素的最佳組合和響應(yīng)值的最優(yōu)值?？ㄆ山?jīng)醇法提出綠原酸溶液后，經(jīng)冷凍干燥，即可得到葵粕綠原酸粗提物，但是其中仍然含有大量的蛋白、糖、脂肪等雜質(zhì)，不僅產(chǎn)品的純度較低(此時(shí)綠原酸含量為 16. 6%左右)，而且直接影響了產(chǎn)品的穩(wěn)定性和應(yīng)用范圍。因此，十分有必要對(duì)其進(jìn)行純化精制。目前綠原酸純化方法主要有以上所提到的超濾法、大孔吸附樹脂、聚酰胺柱層析法、 乙酸乙酯法、絮凝沉淀分離、水提石灰乳沉淀法、醇提鉛鹽沉淀法及超臨界流體萃取法等。 其中大孔樹脂吸附精制法具有效率高、質(zhì)量穩(wěn)定、成本低及簡(jiǎn)單等優(yōu)點(diǎn)，是目前綠原酸純化的主流。盡管對(duì)綠原酸類物質(zhì)的分離純化的報(bào)道不在少數(shù)，但多限于杜仲葉、金銀花等的分離研究，而關(guān)于葵花粕綠原酸類物質(zhì)的純化研究很少。純化試驗(yàn)旨在通過(guò)研究影響大孔吸附樹脂純化效果的樹脂種類、上樣液濃度、洗脫劑和洗脫流速等因素的影響，篩選出最佳效果的大孔吸附樹脂，并對(duì)大孔吸附樹脂富集、純化葵粕綠原酸的工藝條件與參數(shù)進(jìn)行研究， 探索工藝流程，確立純化的可行方法?？ǖ鞍资且环N優(yōu)質(zhì)蛋白，但由于葵花粕中含有綠原酸等蛋白抑制因子，能和蛋白質(zhì)結(jié)合，使蛋白的色澤發(fā)暗，并且降低的葵花蛋白的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值和利用價(jià)值。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種由葵花粕中同時(shí)提取綠原酸和葵花蛋白的方法。本發(fā)明提供的由葵花粕中同時(shí)提取綠原酸和葵花蛋白的方法，包括如下步驟1)將脫脂葵花粕粉碎后用乙醇水溶液進(jìn)行醇提，收集上清液得到綠原酸粗提液， 收集沉淀得到已提取過(guò)綠原酸的葵花粕；2)將步驟1)所得綠原酸粗提液上樣于大孔吸附樹脂中進(jìn)行靜態(tài)吸附，吸附完畢后將所得靜態(tài)吸附的洗脫液上樣于所述大孔吸附樹脂中進(jìn)行動(dòng)態(tài)吸附，用乙醇水溶液進(jìn)行洗脫，收集洗脫時(shí)間在65-125分鐘的動(dòng)態(tài)吸附的洗脫液，濃縮干燥后得到綠原酸凍干粉；3)將步驟1)所得已提取過(guò)綠原酸的葵花粕粉碎后用氯化鈉水溶液進(jìn)行鹽提，收集上清液進(jìn)行離心后用酸度調(diào)節(jié)劑調(diào)節(jié)PH值后進(jìn)行沉淀，收集沉淀得到葵花蛋白。上述方法步驟1)粉碎步驟中，粉碎后的目數(shù)為20-100目，優(yōu)選50目；所述乙醇水溶液的體積百分濃度為10-90%，優(yōu)選60% ；所述醇提步驟中，溫度為20-80°C，優(yōu)選75°C， 時(shí)間為30-1200分鐘，優(yōu)選60分鐘；所述粉碎后的脫脂葵花粕與乙醇水溶液的用量比為 1 (1-25)，優(yōu)選 1 15。所述步驟2)中，所述大孔吸附樹脂的型號(hào)為如下任意一種NKA_II、D101、 HPD-826、HPD-400、AB-8、BS-75、BS-45、BS-30、HPD100 和 H103，優(yōu)選 NKA-II 型大孔吸附樹脂；所述大孔吸附樹脂柱中的填充介質(zhì)為NKA-II型大孔吸附樹脂；所述大孔樹脂柱的徑高比為0-4) 60，優(yōu)選2 60;所述大孔樹脂柱的徑高比中，徑為該樹脂柱的內(nèi)徑，高為樹脂柱內(nèi)的大孔樹脂填充高度；所述靜態(tài)吸附步驟中，吸附時(shí)間為O-M小時(shí)，但不包括0小時(shí)，優(yōu)選2小時(shí)；所述綠原酸粗提液的進(jìn)樣濃度為3. 9-11. 4mg/mL,優(yōu)選8. 64mg/mL,進(jìn)樣pH值為2. 5-6. 8，優(yōu)選 3. 62 ；所述大孔吸附樹脂動(dòng)態(tài)吸附步驟中，所述乙醇水溶液的體積百分濃度為15-95%， 優(yōu)選95%，吸附時(shí)間為1-15小時(shí)，優(yōu)選8小時(shí)；所述乙醇水溶液的用量為所述大孔吸附樹脂體積的1倍-4倍，優(yōu)選2倍；洗脫速率為1. OmL/min-2. OmL/min，優(yōu)選1. 5mL/min。所述步驟3)中，所述粉碎步驟中，粉碎后的目數(shù)為20-150目，優(yōu)選60目；所述氯化鈉水溶液的濃度為0. 5-2. 5mol/L，優(yōu)選1. 5mol/L mol/L ；所述離心步驟中，轉(zhuǎn)速為 1000-5000r/min,優(yōu)選3000r/min，時(shí)間為5_10分鐘，優(yōu)選7分鐘；所述酸度調(diào)節(jié)劑為濃度為0. 5-5%的鹽酸水溶液、檸檬酸或硫酸溶液，優(yōu)選濃度為的鹽酸水溶液；所述調(diào)節(jié) PH值步驟中，pH值的終值為3. 5-9. 5，優(yōu)選7. 5 ；所述鹽提步驟中，溫度為20_50°C，優(yōu)選 35°C;粉碎后的所述步驟1)所得已提取過(guò)綠原酸的葵花粕與所述氯化鈉水溶液的用量比為 0. 3-0. 7g lmL，優(yōu)選 0. 3g lmL。所述由葵花粕中同時(shí)提取綠原酸和葵花蛋白的方法，還包括如下步驟在所述步驟1)之后，所述步驟幻之前，將所述步驟1)所得綠原酸粗提液進(jìn)行過(guò)濾、濃縮、靜置和離心。其中，所述過(guò)濾步驟中，濾孔直徑為50-300目，優(yōu)選200目；所述濃縮步驟中，溫度為50-70°C，優(yōu)選55°C，濃縮倍數(shù)為2-5倍，優(yōu)選4倍；所述靜置步驟中，溫度為0_4°C，優(yōu)選0°C，時(shí)間為12- 小時(shí)，優(yōu)選12小時(shí)；所述離心步驟中，轉(zhuǎn)速為3000-5000r/min，優(yōu)選 3000r/min,時(shí)間為5_10分鐘，優(yōu)選7分鐘。所述由葵花粕中同時(shí)提取綠原酸和葵花蛋白的方法，還包括如下步驟在所述步驟3)之后，將所述用酸度調(diào)節(jié)劑進(jìn)行沉淀后的沉淀物進(jìn)行脫鹽和干燥，得到所述葵花蛋白。按照上述方法制備得到的綠原酸和葵花蛋白，也屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。本發(fā)明提供的同時(shí)提取綠原酸和葵花蛋白的方法，在對(duì)葵花粕進(jìn)行充分的綠原酸提取之后，以提取綠原酸后的葵花粕為原料，進(jìn)行葵花蛋白的提取，考慮到提取綠原酸后的葵花粕有綠原酸殘留，同樣也會(huì)對(duì)提取后的蛋白產(chǎn)生影響，因此，采用通過(guò)氯化鈉輔助，在低PH值和氯化鈉輔助的條件下進(jìn)行葵花蛋白的提取，從而得到優(yōu)質(zhì)的葵花蛋白。該方法工藝簡(jiǎn)便，提取率高，具有重要的應(yīng)用價(jià)值。


圖1為UV法測(cè)CGA標(biāo)準(zhǔn)曲線。
圖2為HPLC法測(cè)CGA標(biāo)準(zhǔn)曲線。圖3為線性擬合圖。圖4為指數(shù)擬合圖。圖5為三次多項(xiàng)式擬合圖。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步闡述，但本發(fā)明并不限于以下實(shí)施例。所述方法如無(wú)特別說(shuō)明均為常規(guī)方法。所述材料如無(wú)特別說(shuō)明均能從公開商業(yè)途徑而得。實(shí)施例11)將脫脂葵花粕粉碎后(粉碎后的目數(shù)為50目)用體積百分濃度為60%的乙醇水溶液在75°C進(jìn)行醇提60分鐘，收集上清液得到綠原酸粗提液，收集沉淀得到已提取過(guò)綠原酸的葵花粕；其中，粉碎后的脫脂葵花粕與乙醇水溶液的質(zhì)量比為1 15;2)將步驟1)所得綠原酸粗提液過(guò)200目的濾篩，以去除步驟1)所得綠原酸粗提液中的部分雜質(zhì)后于將該粗提液濃縮4倍后，再于0°C靜置12小時(shí)，于轉(zhuǎn)速為30001·/ min的條件下離心7分鐘后，將pH值為3. 6、濃度為8. 64mg/mL的綠原酸粗提液上樣于大孔吸附樹脂中進(jìn)行靜態(tài)吸附2小時(shí)，吸附完畢后將所得靜態(tài)吸附的洗脫液上樣于相同的大孔吸附樹脂中進(jìn)行動(dòng)態(tài)吸附，用體積百分濃度為95%的乙醇水溶液洗脫8小時(shí)，收集洗脫時(shí)間在65-125分鐘的動(dòng)態(tài)吸附的洗脫液，濃縮干燥后得到綠原酸凍干粉；該步驟中，所用大孔吸附樹脂均為NKA-II型大孔吸附樹脂，填充介質(zhì)為NKA-II型大孔吸附樹脂；徑高比為3 60，規(guī)格為60CmX3Cm;動(dòng)態(tài)吸附步驟中，所用乙醇水溶液的用量為大孔吸附樹脂體積的2倍，洗脫速率為 1. 5mL/min。該步驟所得綠原酸的純度為36. 2 %，純化前粗提液的濃度僅為16. 6%，經(jīng)過(guò)純化后，純度提高了近一倍。通過(guò)計(jì)算，綠原酸的回收率(即產(chǎn)率)為79.6%。3)將步驟1)所得已提取過(guò)綠原酸的葵花粕過(guò)60目篩粉碎后用濃度1. 5mol/L的氯化鈉水溶液于35°C進(jìn)行鹽提，其中，粉碎后的步驟1)所得已提取過(guò)綠原酸的葵花粕與氯化鈉水溶液的用量比為0.3g ImL;再收集上清液后于轉(zhuǎn)速為3000r/min的條件下離心7分鐘后取上清液，用酸度調(diào)節(jié)劑質(zhì)量百分濃度為的鹽酸水溶液調(diào)節(jié)pH值至7. 5后進(jìn)行沉淀，收集沉淀后進(jìn)行脫鹽和干燥，得到本發(fā)明提供的葵花蛋白，純度為85 %，產(chǎn)率為 68%。其中，該實(shí)施例中綠原酸純度、回收率(也即產(chǎn)率)的檢測(cè)方法如下1)標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立稱取綠原酸(CGA)標(biāo)準(zhǔn)品5mg，用95 %乙醇定容到50mL，搖勻后，取0. 5,0. 75,2. 0，1. 25,2. 0,2. 5mL分別置于IOmL容量瓶中，并且用質(zhì)量百分濃度為95%的乙醇水溶液稀釋到刻度。以質(zhì)量百分濃度為95%的乙醇水溶液為參比液，在 327nm處測(cè)定各濃度的吸光值A(chǔ)。以綠原酸標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)，以其吸光度為縱坐標(biāo)繪圖，得回歸方程。根據(jù)朗伯比爾定律，在一定濃度范圍內(nèi)吸光度值與樣品濃度成正比，由圖1可知，CGA濃度在0.01-0. 03mg/mL時(shí)有良好的線性關(guān)系，并求得線性回歸方程為Y = 0.0169X+0. 0002，R2 = 0. 9952。2)回收率的測(cè)定在樣品制備液中加入一定濃度的綠原酸標(biāo)準(zhǔn)溶液，在已經(jīng)測(cè)定的最大吸收波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度0D，根據(jù)回歸方程計(jì)算回收率。R = R1/R2(式中R回收率，Rl 實(shí)測(cè)量，R2加入量)采用加樣回收法。取適量已知含量的樣品，分別精密加入一定量的綠原酸對(duì)照品，依法操作測(cè)定，同法重復(fù)試驗(yàn)5次，測(cè)得綠原酸的平均回收率。由表1可知UV 法的平均加樣回收率為1. 16%，可見UV法具有較好的準(zhǔn)確度。表1、UV法CGA回收率表
■rnnmnimmm“ ······· ······· ······· ······· ·······
編號(hào)_實(shí)測(cè)量(昭) 加入CGA量(昭)回收率(％)
1gYJj21511136
326251.04
431301.03
541401.03
^mgtgtgtgtgtgtm..........................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................3)綠原酸高效液相色譜檢測(cè)方法的建立(1)液相色譜條件色譜柱C18柱Q50mmX4· 6mm, 5 μ m)；流動(dòng)相由質(zhì)量百分濃度為0.5%的乙酸水溶液和乙腈以體積比90 10混勻而得)；流速1.0mL/min;柱溫 350C ；檢測(cè)波長(zhǎng)327nm ；進(jìn)樣量10 μ L。(2)標(biāo)準(zhǔn)曲線方程的建立稱取綠原酸標(biāo)準(zhǔn)品0. 02g(精確至0. OOOlg)于100. OmL 容量瓶中，加流動(dòng)相溶解并定容至刻度，混勻，此標(biāo)準(zhǔn)使用液在4°C冰箱中儲(chǔ)存，分別吸取此標(biāo)準(zhǔn)使用液，用流動(dòng)相稀釋并在容量瓶中定容的濃度為別為2. 0,10. 0,20. 0,40. 0、 80.0yg/mL標(biāo)準(zhǔn)系列，以綠原酸標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)，以其吸光度為縱坐標(biāo)繪圖(如圖2所示)，得回歸方程。通過(guò)計(jì)算得HPLC法測(cè)定葵花粕中CGA線性回歸方程為Y = 0. 09946+0. 22857Χ, R = O. 99984，方程顯著性水平是 0. 0001。(3)回收率試驗(yàn)采用與前述步驟幻相同的方法測(cè)定回收率?？芍狢GA在2_80μ g/ mL的濃度范圍內(nèi)是線性相關(guān)的，并且具有良好的線性關(guān)系。通過(guò)表2可知HPLC法的平均加樣回收率為95. 8%，說(shuō)明HPLC法是準(zhǔn)確和可信的。表2、HPLC法CGA回收率表
_(M)_
15.66260.944210.644110.967
323.926250.957
428.036300.935
539.587400.9904)擬合曲線的建立為了分析HPLC法和UV法測(cè)定結(jié)果之間的關(guān)系，采用了線形擬合、指數(shù)擬合和多項(xiàng)式擬合的方法，線性擬合見圖3，擬合方程為Y = 0. 9738Χ-3. 8567，R2 = 0. 9849，其中X軸為UV測(cè)定結(jié)果，Y軸為HPLC測(cè)定結(jié)果。指數(shù)擬合見圖4，其擬合方程為Y = y0+Ae-x/t,y0=-2. 01327E7, A = 2. 01327E7t = -2. 06734E7, R2 = 0. 983570 多項(xiàng)式擬合見圖 5，其方程為 Y = A+BX+CX2+DX3, A=L 386，B = O. 4082，C = O. 0132，D = -8. 434，R2 = 0. 9856。 從上述擬合結(jié)果可以看出，HPLC法和UV法所測(cè)得結(jié)果存在差異，并且在一定的范圍內(nèi)，UV 所測(cè)得結(jié)果要大于HPLC所測(cè)得的結(jié)果，其主要原因是在UV測(cè)量的過(guò)程中，除了綠原酸以外其他的酚類物質(zhì)在327nm處也有吸收，從而為UV測(cè)定帶來(lái)了誤差，為了提高UV測(cè)定法的準(zhǔn)確性，采用Origins. 0對(duì)這兩種方法進(jìn)行擬合，結(jié)果表明多項(xiàng)式擬合的相關(guān)系數(shù)(R2 =0. 9856)略高于線性擬合(R2 = 0. 9849)以及指數(shù)擬合(R2 = 0. 98357)，由此選定Y = 1. 386+0. 4082X+0. 0132X2-8. 438X3 為最佳擬合方程。5)擬合方程的驗(yàn)證在以CGA標(biāo)準(zhǔn)品為檢測(cè)樣品建立了擬合方程后，利用UV法對(duì)醇提液中的CGA進(jìn)行測(cè)定，經(jīng)擬合方程校正CGA的含量，并通過(guò)HPLC對(duì)計(jì)算結(jié)果進(jìn)行驗(yàn)證，結(jié)果表明在一定的濃度范圍內(nèi)(5. 5-33 μ g/mL)，樣品經(jīng)擬合方程校正的濃度值與HPLC法所測(cè)得的結(jié)果相近，t 檢驗(yàn)的結(jié)果表明，在0. 05水平下，兩組數(shù)據(jù)之間沒(méi)有顯著差異(p = 0. 6722)。紫外分光光度法是一般常規(guī)試驗(yàn)室常采用的檢測(cè)方法。但是提取液中成分復(fù)雜多樣，存在各種雜質(zhì)的干擾，造成測(cè)定結(jié)果誤差很大。高效液相色譜法以其高效、高速、高靈敏度等優(yōu)點(diǎn)在檢測(cè)應(yīng)用中逐漸增多，但缺點(diǎn)是利用HPLC檢測(cè)需要時(shí)間較長(zhǎng)，并且成本較高。 國(guó)內(nèi)一些學(xué)者雖然對(duì)紫外可見分光光度法和高效液相色譜法對(duì)綠原酸的含量的測(cè)定有過(guò)研究和比較，但是卻沒(méi)有對(duì)UV測(cè)定進(jìn)行校正，本發(fā)明給出UV法測(cè)定CGA含量的擬合方程， 方程表明，在一定濃度范圍內(nèi)(5. 5-33 μ g/mL)，該方程準(zhǔn)確可靠，從而可以實(shí)現(xiàn)UV法快速、 準(zhǔn)確地測(cè)量大批量樣品中的CGA含量。在實(shí)際操作中，建議將CGA濃度控制在推薦的范圍內(nèi)，如果濃度過(guò)低或過(guò)高，需要適當(dāng)?shù)臐饪s或稀釋，以確保試驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。表4、多項(xiàng)式擬合結(jié)果驗(yàn)證
權(quán)利要求
1.一種由葵花粕中同時(shí)提取綠原酸和葵花蛋白的方法，包括如下步驟1)將脫脂葵花粕粉碎后用乙醇水溶液進(jìn)行醇提，收集上清液得到綠原酸粗提液，收集沉淀得到已提取過(guò)綠原酸的葵花粕；2)將步驟1)所得綠原酸粗提液上樣于大孔吸附樹脂中進(jìn)行靜態(tài)吸附，吸附完畢后將所得靜態(tài)吸附的洗脫液上樣于所述大孔吸附樹脂中進(jìn)行動(dòng)態(tài)吸附，用乙醇水溶液進(jìn)行洗脫，收集洗脫時(shí)間在65-125分鐘的動(dòng)態(tài)吸附的洗脫液，濃縮干燥后得到綠原酸凍干粉；3)將步驟1)所得已提取過(guò)綠原酸的葵花粕粉碎后用氯化鈉水溶液進(jìn)行鹽提，收集上清液進(jìn)行離心后用酸度調(diào)節(jié)劑調(diào)節(jié)PH值后進(jìn)行沉淀，收集沉淀得到葵花蛋白。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述步驟1)粉碎步驟中，粉碎后的目數(shù)為20-100目，優(yōu)選50目；所述乙醇水溶液的體積百分濃度為10-90%，優(yōu)選60%;所述醇提步驟中，溫度為20-80°C，優(yōu)選75°C，時(shí)間為30-1200分鐘，優(yōu)選60分鐘；所述粉碎后的脫脂葵花粕與乙醇水溶液的質(zhì)量比為1 (1-25)，優(yōu)選1 15。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其特征在于所述步驟2)中，所述大孔吸附樹脂的型號(hào)為下述任意一種NKA-II、D101、HPD-826、HPD-400、AB-8、BS-75、BS-45、BS-30、HPD100 和H103，優(yōu)選NKA-II型大孔吸附樹脂；所述大孔吸附樹脂柱中的填充介質(zhì)為NKA-II型大孔吸附樹脂；所述大孔樹脂柱的徑高比為0-4) 60，優(yōu)選2 60。
4.根據(jù)權(quán)利要求1-3任一所述的方法，其特征在于所述步驟幻靜態(tài)吸附步驟中， 吸附時(shí)間為O-M小時(shí)，但不包括0小時(shí)，優(yōu)選2小時(shí)；所述綠原酸粗提液的進(jìn)樣濃度為 3. 9-11. 4mg/mL，優(yōu)選 8. 64mg/mL，進(jìn)樣 pH 值為 2. 5-6. 8，優(yōu)選 3. 62。
5.根據(jù)權(quán)利要求1-4任一所述的方法，其特征在于所述步驟2)大孔吸附樹脂動(dòng)態(tài)吸附步驟中，所述乙醇水溶液的體積百分濃度為15% -95%，優(yōu)選95%，吸附時(shí)間為1-15小時(shí)，優(yōu)選8小時(shí)；所述乙醇水溶液的用量為所述大孔吸附樹脂體積的1倍-4倍，優(yōu)選2倍； 洗脫速率為 1. OmL/min-2. OmL/min，優(yōu)選 1. 5mL/min。
6.根據(jù)權(quán)利要求1-5任一所述的方法，其特征在于所述步驟幻中，粉碎后的目數(shù)為 20-150目，優(yōu)選60目；所述氯化鈉水溶液的濃度為0. 5-2. 5mol/L，優(yōu)選1. 5mol/L ；所述離心步驟中，轉(zhuǎn)速為1000-5000r/min，優(yōu)選3000r/min，時(shí)間為5_10分鐘，優(yōu)選7分鐘；所述酸度調(diào)節(jié)劑為質(zhì)量百分濃度為0. 5-5%的鹽酸水溶液、檸檬酸或硫酸溶液，優(yōu)選質(zhì)量百分濃度為的鹽酸水溶液；所述調(diào)節(jié)PH值步驟中，pH值的終值為3. 5-9. 5，優(yōu)選7. 5 ；所述鹽提步驟中，溫度為20-50°C，優(yōu)選35°C;粉碎后的所述步驟1)所得已提取過(guò)綠原酸的葵花粕與所述氯化鈉水溶液的用量比為0.3-0. 7g lmL，優(yōu)選0.3g lmL。
7.根據(jù)權(quán)利要求1-6任一所述的方法，其特征在于所述由葵花粕中同時(shí)提取綠原酸和葵花蛋白的方法，還包括如下步驟在所述步驟1)之后，所述步驟幻之前，將所述步驟 1)所得綠原酸粗提液進(jìn)行過(guò)濾、濃縮、靜置和離心取上清液。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于所述將所述步驟1)所得綠原酸粗提液進(jìn)行過(guò)濾、濃縮、靜置和離心步驟中，所述過(guò)濾步驟中，濾孔直徑為50-300目，優(yōu)選200目； 所述濃縮步驟中，溫度為50-70°C，優(yōu)選55°C，濃縮倍數(shù)為2-5倍，優(yōu)選4倍；所述靜置步驟中，溫度為0-4 0C，優(yōu)選O °C，時(shí)間為12-M小時(shí)，優(yōu)選12小時(shí)；所述離心步驟中，轉(zhuǎn)速為 3000-5000r/min，優(yōu)選3000r/min,時(shí)間為5-10分鐘，優(yōu)選7分鐘。
9.根據(jù)權(quán)利要求1-8任一所述的方法，其特征在于所述由葵花粕中同時(shí)提取綠原酸和葵花蛋白的方法，還包括如下步驟在所述步驟幻之后，將所述用酸度調(diào)節(jié)劑進(jìn)行沉淀后的沉淀物進(jìn)行脫鹽和干燥，得到所述葵花蛋白。
10.權(quán)利要求1-9任一所述方法制備得到的綠原酸和葵花蛋白。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種由葵花粕中同時(shí)提取綠原酸和葵花蛋白的方法。該方法，包括1)將脫脂葵花粕粉碎后用乙醇水溶液進(jìn)行醇提，收集上清液得到綠原酸粗提液，收集沉淀得到已提取過(guò)綠原酸的葵花粕；2)將綠原酸粗提液上樣于大孔吸附樹脂靜態(tài)吸附，吸附完畢后上樣于所述大孔吸附樹脂中進(jìn)行動(dòng)態(tài)吸附，收集洗脫時(shí)間在65-125分鐘的洗脫液，濃縮干燥后得到綠原酸凍干粉；3)將步驟2)所得已葵花粕粉碎后用氯化鈉水溶液進(jìn)行鹽提，收集上清液進(jìn)行離心后用酸度調(diào)節(jié)劑調(diào)節(jié)pH值后進(jìn)行沉淀，收集沉淀得到葵花蛋白。該方法工藝簡(jiǎn)便，提取率高，產(chǎn)物純度高，具有重要的應(yīng)用價(jià)值。
文檔編號(hào)C07K2/00GK102491898SQ20111036272
公開日2012年6月13日 申請(qǐng)日期2011年11月16日 優(yōu)先權(quán)日2011年11月16日
發(fā)明者劉鷺, 呂加平, 孔凡丕, 張書文, 李紅娟, 胡鮮寶 申請(qǐng)人:中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)產(chǎn)品加工研究所