專利名稱：一種高純度苦樹(shù)素a的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于天然藥物化學(xué)領(lǐng)域，特別是涉及一種高純度苦樹(shù)素A的制備方法。
背景技術(shù)：
^MPicrasma quassioides (D. Don) Benn.為苦木科苦樹(shù)屬植物?？鄻?shù)屬是我國(guó)所有的苦木科植物5個(gè)屬中的一個(gè)，該屬植物為多年生落葉喬木，高達(dá)10余米，樹(shù)皮紫褐色，平滑，有灰色斑紋，全株有苦味，喜生長(zhǎng)于濕潤(rùn)而肥沃的山坡、山谷、林緣、溪邊和路旁等地?！吨袊?guó)植物志》記載，我國(guó)分布該屬植物有中國(guó)苦樹(shù)AcAiz^z7lSi1SA Y. Chen、光序 T^fW ( ^ft )P. quassioides (D. Don) Benn. Var. glabrescens Pamp.、苦樹(shù)(原變種) P. quassioides (D. Don) Benn. var. (jttassioii/e』個(gè)禾中禾口 1 個(gè)變禾中。該屬植物苦樹(shù)是我國(guó)南方民間用藥，歷代本草均未見(jiàn)記載，《中國(guó)藥典》1977年版一部開(kāi)始收載。其性寒，味苦，歸肺，大腸經(jīng)，有清熱燥濕、解毒、殺蟲(chóng)之功效。臨床上多用于抗感染、降血壓等方面的治療。主要分布于我國(guó)黃河以南各省，以廣東廣西山區(qū)資源最為豐富?？鄻?shù)化學(xué)成分復(fù)雜，目前國(guó)內(nèi)外對(duì)其化學(xué)成分的報(bào)道有鐵屎米酮類生物堿、咔巴啉類生物堿、苦木苦味素、甘遂型三萜、酚苷、酚酸、苯丙素、二氫黃酮苷類化合物。其中苦樹(shù)素A具有特異地抑制35S-TBPS與大鼠腦膜的結(jié)合，其IC5tl為0. 18 μ M ；苦樹(shù)素A還具有殺蟲(chóng)活性， 對(duì)蟑螂的LD5tl為1. 1 μ g/蟑螂。目前尚未見(jiàn)采用高速逆流色譜法分離純化苦樹(shù)素A的報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種苦樹(shù)素A的制備方法，采用高速逆流色譜法，可以快速高效得到高純度苦樹(shù)素A。為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案
1)以漿果苦樹(shù)莖皮為原料，粉碎，5-8倍量低碳醇超聲提取，提取液減壓濃縮至浸膏，再將硅膠氧化鋁混合均勻裝柱，將苦樹(shù)浸膏用氧化鋁拌樣，上硅膠氧化鋁混合柱，用混合溶液洗脫，硅膠薄層色譜監(jiān)測(cè)，收集洗脫液，減壓濃縮得濃縮液；
2)將正己烷、甲醇、水在分液漏斗中充分混合，靜置分層后，取下相做固定相，充滿逆流色譜儀柱，開(kāi)轉(zhuǎn)主機(jī)，泵入上相做流動(dòng)相，平衡后，由進(jìn)樣閥注進(jìn)濃縮液，根據(jù)檢測(cè)器圖譜， 收集組分，回收試劑，干燥即得高純度苦樹(shù)素A。步驟1)中所述的低碳醇為70-90%的甲醇或乙醇溶液。步驟1)中所述的超聲提取次數(shù)為2-3次，每次30-60min。步驟1)中的硅膠氧化鋁柱層析硅膠和氧化鋁的比例為5-10 :1。步驟1)所述混合溶液為85-65 2的氯仿-甲醇溶液或氯仿-丙酮中的一種。步驟2 )所述的正己烷、甲醇、水混合比例為4-6 3-8 3。步驟2)所述的主機(jī)轉(zhuǎn)速700-1000rpm，流動(dòng)相流速l-3ml/min。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是工藝采用硅膠氧化鋁混合柱和高速逆流色譜聯(lián)合制備苦樹(shù)素A，生產(chǎn)制備量大、純度高、易操作、生產(chǎn)周期短、收率高。
具體實(shí)施例方式下面將結(jié)合具體實(shí)施方式
進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明，但本發(fā)明要求保護(hù)的范圍并不局限于下列實(shí)施方式。硅膠薄層色譜法 薄層板硅膠GF2M薄層板展開(kāi)劑石油醚-丙酮顯色劑香草醛乙醇濃硫酸。實(shí)施例1
取漿果苦樹(shù)莖皮粉碎，取10kg，投入超聲提取罐，加入5倍量90%的甲醇溶液超聲提取 2次，每次60min，合并2次提取液減壓濃縮無(wú)醇，和硅膠、氧化鋁(5 :1)混合均勻裝柱，將苦樹(shù)浸膏用其3倍量的氧化鋁拌樣，上硅膠氧化鋁混合柱，用85 :2的氯仿-甲醇溶液洗脫，薄層色譜監(jiān)測(cè)，收集洗脫液，濃縮干燥得干燥物；
取正己烷、甲醇、水，按4:3:3比例在分液漏斗中充分混合，靜置分層后，取下相做固定相，充滿逆流色譜儀柱，開(kāi)轉(zhuǎn)主機(jī)，轉(zhuǎn)速調(diào)整為700rpm，泵入上相做流動(dòng)相，平衡后，流速調(diào)整為3ml/min，由進(jìn)樣閥注進(jìn)濃縮液，根據(jù)檢測(cè)器圖譜，收集組分，回收試劑，干燥得苦樹(shù)素 A805mg,經(jīng)檢測(cè)，含量98. H實(shí)施例2:
取漿果苦樹(shù)莖皮粉碎，取10kg，投入超聲提取罐，加入8倍量70%乙醇溶液超聲提取2 次，每次30min，合并3次提取液減壓濃縮無(wú)醇，和硅膠、氧化鋁(10 :1)混合均勻裝柱，將苦樹(shù)浸膏用其5倍量的氧化鋁拌樣，上硅膠氧化鋁混合柱，用65 :2的氯仿-甲醇溶液洗脫，薄層色譜監(jiān)測(cè)，收集洗脫液，濃縮干燥得干燥物；
取正己烷、甲醇、水，按6:8:3比例在分液漏斗中充分混合，靜置分層后，取下相做固定相，充滿逆流色譜儀柱，開(kāi)轉(zhuǎn)主機(jī)，轉(zhuǎn)速調(diào)整為lOOOrpm，泵入上相做流動(dòng)相，平衡后，流速調(diào)整為lml/min，由進(jìn)樣閥注進(jìn)濃縮液，根據(jù)檢測(cè)器圖譜，收集組分，回收試劑，干燥得苦樹(shù)素 A756mg,經(jīng)檢測(cè)，含量98. 3%。實(shí)施例3:
取漿果苦樹(shù)莖皮粉碎，取10kg，投入超聲提取罐，加入6倍量80%的乙醇溶液超聲提取 3次，每次50min，合并3次提取液減壓濃縮無(wú)醇，和硅膠、氧化鋁(8 :1)混合均勻裝柱，將苦樹(shù)浸膏用其4倍量的氧化鋁拌樣，上硅膠氧化鋁混合柱，用70 2的氯仿-丙酮洗脫，薄層色譜監(jiān)測(cè)，收集洗脫液，濃縮干燥得干燥物；
取正己烷、甲醇、水，按5:7:3比例在分液漏斗中充分混合，靜置分層后，取下相做固定相，充滿逆流色譜儀柱，開(kāi)轉(zhuǎn)主機(jī)，轉(zhuǎn)速調(diào)整為900rpm，泵入上相做流動(dòng)相，平衡后，流速調(diào)整為aiil/min，由進(jìn)樣閥注進(jìn)濃縮液，根據(jù)檢測(cè)器圖譜，收集組分，回收試劑，干燥得苦樹(shù)素 A731mg，經(jīng)檢測(cè)，含量98. 5%。
權(quán)利要求
1.一種高純度苦樹(shù)素A的制備方法，其特征在于包括以下步驟1)以漿果苦樹(shù)莖皮為原料，粉碎，5-8倍量低碳醇超聲提取，提取液減壓濃縮至浸膏，再將硅膠氧化鋁混合均勻裝柱，將苦樹(shù)浸膏用氧化鋁拌樣，上硅膠氧化鋁混合柱，用混合溶液洗脫，硅膠薄層色譜監(jiān)測(cè)，收集洗脫液，減壓濃縮得濃縮液；2)將正己烷、甲醇、水在分液漏斗中充分混合，靜置分層后，取下相做固定相，充滿逆流色譜儀柱，開(kāi)轉(zhuǎn)主機(jī)，泵入上相做流動(dòng)相，平衡后，由進(jìn)樣閥注進(jìn)濃縮液，根據(jù)檢測(cè)器圖譜， 收集組分，回收試劑，干燥即得高純度苦樹(shù)素A。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的高純度苦樹(shù)素A的制備方法，其特征在于步驟1)中所述的低碳醇為70-90%的甲醇或乙醇溶液。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的高純度苦樹(shù)素A的制備方法，其特征在于步驟1)中所述的超聲提取次數(shù)為2-3次，每次30-60min。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的高純度苦樹(shù)素A的制備方法，其特征在于步驟1)中的硅膠氧化鋁柱層析填料硅膠和氧化鋁的比例為5-10 :1。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的高純度苦樹(shù)素A的制備方法，其特征在于步驟1)所述混合溶液為85-65 2的氯仿-甲醇溶液或氯仿-丙酮中的一種。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的高純度苦樹(shù)素A的制備方法，其特征在于步驟2)所述的正己烷、甲醇、水混合比例為4-6 3-8 3。
全文摘要
本發(fā)明屬于天然藥物化學(xué)領(lǐng)域，特別是涉及一種高純度苦樹(shù)素A的制備方法。方法步驟是1)以漿果苦樹(shù)莖皮為原料，粉碎，5-8倍量低碳醇超聲提取，提取液減壓濃縮，濃縮液通過(guò)硅膠氧化鋁混合柱層析，洗脫，回收溶劑得濃縮液；2)將正己烷、甲醇、水在分液漏斗中充分混合，靜置分層后，取下相做固定相，充滿逆流色譜儀柱，開(kāi)轉(zhuǎn)主機(jī)，泵入上相做流動(dòng)相，平衡后，由進(jìn)樣閥注進(jìn)濃縮液，根據(jù)檢測(cè)器圖譜，收集組分，回收試劑，干燥即得高純度苦樹(shù)素A。本發(fā)明工藝易操作、生產(chǎn)周期短、收率高，適合工業(yè)化制備。
文檔編號(hào)C07D407/06GK102391257SQ20111030467
公開(kāi)日2012年3月28日 申請(qǐng)日期2011年10月10日 優(yōu)先權(quán)日2011年10月10日
發(fā)明者劉東鋒, 吳艷波 申請(qǐng)人:南京澤朗醫(yī)藥科技有限公司