專利名稱：一種同時制備鬼臼苦酮和鬼臼苦素的工藝方法
技術領域：
本發(fā)明涉及從天然植物中制備活性成分的方法，具體地說，涉及一種同時制備鬼臼苦酮和鬼白苦素的工藝方法。
背景技術：
鬼臼苦酮(picropodophyllone，Q2H20O8)、鬼臼苦素(podophyllotoxin，C22H22O8) 屬于木脂體類(Iignans)，主要存在于小檗科多年生草本類群鬼白亞科八角蓮屬、窩兒七屬、桃兒七屬、山荷葉屬及足葉草屬植物中。這些植物由于都具有盾狀著生的葉，莖中具有多數(shù)散生微管束，花不具蜜腺，漿果含鬼白苦素等一些共同特征而被看作一個自然而相對獨立的類群，習慣上稱為鬼白類植物。鬼白類植物是一類含有顯著生物活性，具有悠久應用歷史的藥用植物。我國漢代的《神農本草經(jīng)》中就有鬼白的記述。該類植物具有抗腫瘤、祛痰止咳、抗炎和抗病毒等作用，其根、莖及葉中含有大量具有抗癌活性的木脂素類成分。其中，鬼白苦酮和鬼白苦素是主要活性成分。鬼臼苦酮無色針晶，分子式C22H2tlO8,分子量412. 39 ；藥理作用主要有1.抗腫瘤作用，對P388、A-549、HT-29的IC5tl都為5微克/毫升，對照藥阿霉素的IC5tl (微克/毫升) 分別為0. 017,0. 053和0. 11 ；2.抗病毒作用，對HSV/CV-1和VSV/BHK的IC50(微克/毫升) 分別為20和10 ；3.抗真菌作用，在200微克/毫升時，對絮狀表皮癬菌、彎孢、稻黑孢、糙皮側耳等有強抑制活性。鬼臼苦素無色細針晶，分子式C22H22O8,分子量414. 41 ；藥理作用主要有抗腫瘤作用，對P388、A-549、HT-29的IC50都< 2. 5微克/毫升，對照藥阿霉素的IC50 (微克/毫升) 分別為0. 017,0. 053和0. 11，對HSV/CV-1和VSV/BHK的IC50 (微克/毫升)分別< 20和 10。現(xiàn)有技術采用超聲提取鬼白苦素，而采用高速逆流色譜法純化鬼白苦酮和鬼臼苦素的方法尚未見文獻報道。

發(fā)明內容
本發(fā)明的目的在于提供一種同時制備鬼臼苦酮和鬼臼苦素的工藝方法，以同時得到高純度的鬼白苦酮和鬼白苦素。為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明的技術方案如下
1)將原料藥材粉碎，置于萃取釜中，進行超臨界(X)2萃取，解析，收集提取物；
2)取正己烷-乙酸乙酯-乙腈-水(3飛3^6:4、5)均勻混合，充分飽和后，靜置 10-12小時，取上相為固定相，下相為流動相，將提取物用流動相溶解，將固定相泵入逆流色譜的螺旋管柱中，調節(jié)轉速為800-1000rpm，以1. 5-3ml/min的流速將流動相泵入，待機子穩(wěn)定后進樣，分別收集鬼白苦酮和鬼白苦素流分，濃縮、低溫干燥即得鬼白苦酮和鬼臼苦
ο所述原料藥材來源于小檗科陜西窩兒七、南方山荷葉、多花八角蓮、貴州八角蓮、廣西八角蓮、桃兒七等植物的根莖或葉。所述超臨界萃取溫度為35_50°C，萃取壓力為22_40MPa，解析溫度為18_40°C，解析壓力為8-15MPa，CO2流量為18_30L/h。本發(fā)明的優(yōu)勢在于
(1)采用超臨界提取技術，高效無溶劑殘留，對環(huán)境無污染；
(2)采用高速逆流色譜制備工藝，克服了固相載體帶來的樣品吸附、損失等缺點，且 HSCCC法具有制備量大、易于工業(yè)推廣等優(yōu)點。
具體實施例方式下面結合實施例進一步對本發(fā)明加以說明 實施例1
將小檗科植物陜西窩兒七的根莖葉粉碎，取Ikg置于萃取釜中，通入超臨界(X)2流體， 進行超臨界(X)2萃取，CO2流量為18L/h，超臨界萃取溫度為50°C，萃取壓力為40MPa，解析， 解析溫度為18°C，解析壓力為15MPa，收集小檗科植物提取物；用水和乙腈按體積比4:5混合，配制混合液A，用正己烷和乙酸乙酯按體積比3 :3，配制混合液B，將混合液A和混合液 B均勻混合，充分飽和后，靜置10小時，取下相為固定相，上相為流動相，將小檗科植物提取物用流動相溶解，將固定相泵入逆流色譜的螺旋管柱中，調節(jié)轉速為lOOOrpm，以3ml/min 的流速將流動相泵入，待機子穩(wěn)定后進樣，分別收集鬼白苦酮和鬼白苦素流分，將鬼白苦酮流分濃縮、低溫干燥得到鬼白苦酮7mg，經(jīng)HPLC檢測，純度為98. 2% ；將鬼白苦素流分濃縮、 低溫干燥得到鬼白苦素lang，經(jīng)HPLC檢測，純度為98. 1%。實施例2:
將小檗科植物南方山荷葉的根莖葉粉碎，取Ikg置于萃取釜中，通入超臨界(X)2流體， 進行超臨界(X)2萃取，CO2流量為30L/h，超臨界萃取溫度為35°C，萃取壓力為22MPa，解析， 解析溫度為40°C，解析壓力為8MPa，收集小檗科植物提取物。用水和乙腈按體積比8:5混合，配制混合液A，用正己烷和乙酸乙酯按體積比5 :3，配制混合液B，將混合液A和混合液 B均勻混合，充分飽和后，靜置10小時，取下相為固定相，上相為流動相，將小檗科植物提取物用流動相溶解，將固定相泵入逆流色譜的螺旋管柱中，調節(jié)轉速為800rpm，以1. 5ml/min 的流速將流動相泵入，待機子穩(wěn)定后進樣，分別收集鬼白苦酮和鬼白苦素流分，將鬼白苦酮流分濃縮、低溫干燥得到鬼白苦酮5mg，經(jīng)HPLC檢測，純度為98. 5% ；將鬼白苦素流分濃縮、 低溫干燥得到鬼臼苦素8mg，經(jīng)HPLC檢測，純度為98. 3%。實施例3:
將小檗科植物多花八角蓮的根莖葉粉碎，取Ikg置于萃取釜中，通入超臨界(X)2流體， 進行超臨界(X)2萃取，CO2流量為25L/h，超臨界萃取溫度為40°C，萃取壓力為^MPa,解析， 解析溫度為25°C，解析壓力為12MPa，收集小檗科植物提取物。用水和乙腈按體積比6:5混合，配制混合液A，用正己烷和乙酸乙酯按體積比4 :5，配制混合液B，將混合液A和混合液 B均勻混合，充分飽和后，靜置10小時，取下相為固定相，上相為流動相，將小檗科植物提取物用流動相溶解，將固定相泵入逆流色譜的螺旋管柱中，調節(jié)轉速為lOOOrpm，以2. 5ml/ min的流速將流動相泵入，待機子穩(wěn)定后進樣，分別收集鬼白苦酮和鬼白苦素流分，將鬼臼苦酮流分濃縮、低溫干燥得到鬼白苦酮細g，經(jīng)HPLC檢測，純度為98. 1% ；將鬼白苦素流分濃縮、低溫干燥得到鬼白苦素llmg，經(jīng)HPLC檢測，純度為98. 5%。
實施例4:
將小檗科植物廣西八角蓮的根莖葉粉碎，取Ikg置于萃取釜中，通入超臨界(X)2流體， 進行超臨界(X)2萃取，CO2流量為22L/h，超臨界萃取溫度為38°C，萃取壓力為33MPa，解析， 解析溫度為25°C，解析壓力為13MPa，收集小檗科植物提取物。用水和乙腈按體積比7:5混合，配制混合液A，用正己烷和乙酸乙酯按體積比4 :3，配制混合液B，將混合液A和混合液 B均勻混合，充分飽和后，靜置10小時，取下相為固定相，上相為流動相，將小檗科植物提取物用流動相溶解，將固定相泵入逆流色譜的螺旋管柱中，調節(jié)轉速為950rpm，以2. 8ml/min 的流速將流動相泵入，待機子穩(wěn)定后進樣，分別收集鬼白苦酮和鬼白苦素流分，將鬼白苦酮流分濃縮、低溫干燥得到鬼白苦酮5mg，經(jīng)HPLC檢測，純度為98. 5% ；將鬼白苦素流分濃縮、 低溫干燥得到鬼臼苦素10mg，經(jīng)HPLC檢測，純度為98. 6%。
權利要求
1.一種同時制備鬼白苦酮和鬼白苦素的工藝方法，其特征在于1)將原料藥材粉碎，置于萃取釜中，進行超臨界(X)2萃取，解析，收集提取物；2)取正己烷-乙酸乙酯-乙腈-水(3飛3^6:4、5)均勻混合，充分飽和后，靜置 10-12小時，取上相為固定相，下相為流動相，將提取物用流動相溶解，將固定相泵入逆流色譜的螺旋管柱中，調節(jié)轉速為800-1000rpm，以1. 5-3ml/min的流速將流動相泵入，待機子穩(wěn)定后進樣，分別收集鬼白苦酮和鬼白苦素流分，濃縮、低溫干燥即得鬼白苦酮和鬼臼苦素。
2.根據(jù)權利要求1所述的制備鬼白苦酮和鬼白苦素的工藝方法，其特征在于所述原料藥材來源于小檗科陜西窩兒七、南方山荷葉、多花八角蓮、貴州八角蓮、廣西八角蓮、桃兒七等植物的根莖或葉。
3.根據(jù)權利要求1所述的制備鬼白苦酮和鬼白苦素的工藝方法，其特征在于所述超臨界萃取溫度為35-50°C，萃取壓力為22-40MPa，解析溫度為18_40°C，解析壓力為 8-15MPa, CO2 流量為 18_30L/h。
全文摘要
本發(fā)明公開一種同時制備鬼臼苦酮和鬼臼苦素的工藝方法。方法是取原料粉末先經(jīng)超臨界CO2萃取，得到提取物，然后經(jīng)高速逆流色譜進一步提純，得鬼臼苦酮和鬼臼苦素純品。本發(fā)明采用高速逆流色譜法制備工藝，克服了樣品吸附、損失等缺點，且高速逆流色譜具有制備量大、易于工業(yè)化等優(yōu)點。
文檔編號C07D493/04GK102329324SQ20111030460
公開日2012年1月25日 申請日期2011年10月10日 優(yōu)先權日2011年10月10日
發(fā)明者劉東鋒, 吳艷波 申請人:南京澤朗醫(yī)藥科技有限公司