專利名稱：應(yīng)用蛋白質(zhì)功能化磁性納米顆粒拆分手性藥物的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體的是涉及一種應(yīng)用蛋白質(zhì)功能化磁性納米顆粒拆分手性藥物的方法。
背景技術(shù)：
手性藥物的對(duì)映異構(gòu)體通常表現(xiàn)出不同的生理行為——它們往往一種立體異構(gòu)體有藥效，而它的鏡像分子或具有毒副作用、或具有相反的藥效或根本就沒有藥效 [J. Chromat. A, 2001,906, 3-33]。因此，研究開發(fā)高效率的單一對(duì)映異構(gòu)體手性化合物生產(chǎn)技術(shù)已成為科研部門和工業(yè)界的關(guān)注焦點(diǎn)，制備單一對(duì)映異構(gòu)體的手性化合物要依托立體選擇性合成與手性拆分技術(shù)。目前，用于手性藥物對(duì)映體拆分的方法主要有結(jié)晶法、膜拆分法、色譜法、毛細(xì)管電泳法等。色譜和毛細(xì)管電泳法應(yīng)用廣泛，分離效率雖高，但操作不能連續(xù)化，達(dá)不到制備規(guī)模，僅適用于藥物分析和檢測(cè)；而結(jié)晶法可達(dá)制備規(guī)模，但要求藥物外消旋體以聚集體形式存在，因而限制了可分離藥物的種類；膜拆分可進(jìn)行連續(xù)操作，但平衡分離因子和通量之間的矛盾是亟待解決的問題[Anal. Chem. 2010，82，4712-4722]。蛋白因其獨(dú)特的藥物結(jié)合位點(diǎn)及立體選擇性而被廣泛用做手性選擇劑，其中牛血清白蛋白、卵糖蛋白、糖蛋白、卵類粘蛋白、纖維二糖水解酶、抗生物素蛋白、胰凝乳蛋白酶等已被成功應(yīng)用于高效液相色譜和毛細(xì)管電泳法拆分藥物對(duì)映體，具有良好分離效果[J. Chromat. A, 2000,875, 235-254 ;J. Chromat. A, 2001,906, 253-273] 中國(guó)專利 200510110689. 4發(fā)明一種碳納米管固載蛋白作為固定相填充于PMMA芯片分離通中，基于微流芯片進(jìn)行手性分離分析的方法，此方法分離分析速度快，適用于藥物檢測(cè)和分析，但由于載樣量小，不適于處理量大的制備型分離。中國(guó)專利200810113779. 2發(fā)明了一種串聯(lián)式連續(xù)多級(jí)手性拆分裝置，首先利用大分子手性選擇劑(BSA等)與待拆分藥物進(jìn)行位點(diǎn)識(shí)別反應(yīng)，然后通過成熟的超濾或納濾膜實(shí)現(xiàn)拆分，此方法克服了手性膜分離通量和對(duì)映體選擇性較低的缺點(diǎn)，但裝置較為復(fù)雜，分離時(shí)間l_4h。功能化磁性復(fù)合納米粒，由于同時(shí)具有磁響應(yīng)性和表面功能性，通過磁穩(wěn)定床技術(shù)，能快速、高效地從介質(zhì)中分離目標(biāo)分子，已在生物醫(yī)學(xué)、細(xì)胞學(xué)和生物工程學(xué)等領(lǐng)域廣泛應(yīng)用[Biotechnol. Bioeng.，1997，53，79-87 ；Angew. Chem. Int. Ed.，2009，48， 1620-1624]。近年來(lái)，由于生物檢測(cè)以及酶催化技術(shù)的需求，對(duì)磁性納米顆粒表面進(jìn)行蛋白質(zhì)修飾的方法得到了越來(lái)越多的關(guān)注。目前，將超順磁性顆粒表面負(fù)載功能化蛋白用于手性藥物對(duì)映體拆分，并通過磁穩(wěn)定床技術(shù)強(qiáng)化的研究還未曾報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是克服現(xiàn)有技術(shù)中的不足，提供應(yīng)用蛋白質(zhì)功能化磁性納米顆粒拆分手性藥物的方法。本發(fā)明的技術(shù)方案概述如下應(yīng)用蛋白質(zhì)功能化磁性納米顆粒拆分手性藥物的方法，包括如下步驟
(1)采用物理吸附法對(duì)超順磁性顆粒表面進(jìn)行改性將質(zhì)量濃度為2-10g/L的超順磁性顆粒水溶液與質(zhì)量濃度為0. 02-lg/L的離子型聚合物水溶液等體積混合，在10-45°C，吸附20-40分鐘，得到表面改性的超順磁性顆粒；(2)負(fù)載具有手性識(shí)別作用的蛋白質(zhì)將質(zhì)量濃度為2-10g/L的所述表面改性的超順磁性顆粒水溶液與濃度為 0. 8-10g/L的蛋白質(zhì)水溶液等體積混合，吸附2- ，得到蛋白質(zhì)修飾的磁性納米顆粒；所述蛋白質(zhì)為牛血清白蛋白、人血清白蛋白、α 1酸性糖蛋白、卵類粘蛋白、卵類糖蛋白或親和素；(3)將所述蛋白質(zhì)修飾的超順磁性納米顆粒填充到用于磁穩(wěn)定床的玻璃管中，并置于軸向磁穩(wěn)定床中，在磁場(chǎng)強(qiáng)度為100-5000奧斯特的條件下，將質(zhì)量濃度為l_500mg/L 的手性藥物外消旋體水溶液從填充后的柱狀容器底部以0. 2-lOmL/min流速泵入，在柱狀容器頂部連續(xù)獲得含有一種對(duì)映異構(gòu)體的分離產(chǎn)物的液體，而超順磁性顆粒吸附物為另一種對(duì)映異構(gòu)體的分離產(chǎn)物。所述超順磁性顆粒為平均粒徑為lO-SOnm、飽和磁化強(qiáng)度為lO-SOemu/g的狗304、 Y -Fe203> CoFe2O4^ NiFe2O4 或 Ni0.5Zn0 5Fe204。所述離子型聚合物為聚二烯丙基二甲基氯化銨、聚乙烯亞胺、乙二醇?xì)ぞ厶?、聚丙烯胺、聚丙烯酸或聚?duì)苯乙烯磺酸鈉。所述步驟(1)中所述離子型聚合物水溶液的質(zhì)量濃度為0. 1-0. 5g/L，所述溫度為 20-30 "C。所述步驟(3)中所述磁場(chǎng)強(qiáng)度為2000-4000奧斯特，所述手性藥物外消旋體水溶液質(zhì)量濃度為5-100mg/L，所述流速為l-5mL/min。所述手性藥物為布洛芬、華法林、氧氟沙星、萘普生、酮洛芬、奧沙西泮、氟比洛芬、 西酞普蘭、普萘洛爾或撲爾敏。第二種應(yīng)用蛋白質(zhì)功能化磁性納米顆粒拆分手性藥物的方法，包括如下步驟(1)采用化學(xué)鍵合法對(duì)超順磁性顆粒表面進(jìn)行改性將超順磁性顆粒粉末浸入體積百分濃度為0. 3-10%的硅烷化試劑溶液中使超順磁性顆粒粉末的濃度為l-10g/L，在25-130°C，反應(yīng)3_48h，分離，得到表面改性的超順磁性顆粒；所述硅烷化試劑溶液的溶劑為甲苯、環(huán)己烷或乙醇；(2)負(fù)載具有手性識(shí)別作用的蛋白質(zhì)將質(zhì)量濃度為2-10g/L的所述表面改性的超順磁性顆粒水溶液與質(zhì)量濃度為 0. 8-10g/L的蛋白質(zhì)水溶液等體積混合，再加入共價(jià)連接試劑，使共價(jià)連接試劑摩爾濃度為 0. 005-0. 2mol/L，反應(yīng)2- ，得到蛋白質(zhì)修飾的磁性納米顆粒；所述蛋白質(zhì)為牛血清白蛋白、人血清白蛋白、α 1酸性糖蛋白、卵類粘蛋白、卵類糖蛋白、胃蛋白酶或纖維素水解酶I ；(3)將所述蛋白質(zhì)修飾的超順磁性納米顆粒填充到用于磁穩(wěn)定床的玻璃管中，并置于軸向磁穩(wěn)定床中，在磁場(chǎng)強(qiáng)度為100-5000奧斯特的條件下，將質(zhì)量濃度為l_500mg/L 的手性藥物外消旋體水溶液從填充后的柱狀容器底部以0. 2-lOmL/min流速泵入，在柱狀容器頂部連續(xù)獲得含有一種對(duì)映異構(gòu)體的分離產(chǎn)物的液體，而超順磁性顆粒吸附物為另一種對(duì)映異構(gòu)體的分離產(chǎn)物。所述超順磁性顆粒為平均粒徑為lO-SOnm、飽和磁化強(qiáng)度為lO-SOemu/g的狗304、Y -Fe203> CoFe2O4^ NiFe2O4 或 Ni0.5Zn0 5Fe204。所述硅烷化試劑為氨丙基三甲氧基硅烷或巰丙基三甲氧基硅烷。所述共價(jià)連接試劑為戊二醛、乙基-(3- 二甲基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽、氮-琥珀酰亞氨基-3 (2-吡啶二硫代)-丙酸酯或?qū)Ρ蕉惲蚯杷狨ァＫ霾襟E(1)中所述硅烷化試劑溶液的體積百分濃度為1_5%，所述溫度為 40_80°C，所述反應(yīng)時(shí)間為6_12h。所述步驟(3)中所述磁場(chǎng)強(qiáng)度為2000-4000奧斯特，所述手性藥物外消旋體水溶液質(zhì)量濃度為5-100mg/L，所述流速為l-5mL/min。所述手性藥物為布洛芬、華法林、氧氟沙星、萘普生、酮洛芬、奧沙西泮、氟比洛芬、 西酞普蘭、普萘洛爾或撲爾敏。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)(1)本發(fā)明的方法操作簡(jiǎn)便，條件溫和，反應(yīng)時(shí)間短，蛋白質(zhì)固載量大且能保持其藥物識(shí)別能力；(2)磁穩(wěn)定床技術(shù)強(qiáng)化拆分過程使產(chǎn)品光學(xué)純度顯著提高，實(shí)現(xiàn)了手性拆分的連續(xù)化操作。
具體實(shí)施例方式下面的實(shí)施例是為了使本領(lǐng)域的技術(shù)人員能夠更好地理解本發(fā)明，但不對(duì)本發(fā)明作任何限制。超順磁性顆粒的制備是以低溫共沉淀法、超臨界造粒法、水熱合成法、溶膠-凝膠法、微乳法、前驅(qū)體熱分解法等方法合成粒徑均勻、具有超順磁性的納米顆粒。實(shí)施例1一種應(yīng)用蛋白質(zhì)功能化磁性納米顆粒拆分手性藥物的方法，包括如下步驟(1)采用物理吸附法對(duì)超順磁性顆粒表面進(jìn)行改性將質(zhì)量濃度為2g/L的超順磁性顆粒水溶液與質(zhì)量濃度為0. lg/L的聚二烯丙基二甲基氯化銨水溶液等體積混合，在25°C，吸附25分鐘，得到表面改性的超順磁性顆粒；所述超順磁性顆粒為平均粒徑為15nm、飽和磁化強(qiáng)度為70emu/g的!^e3O4 ；(2)負(fù)載具有手性識(shí)別作用的蛋白質(zhì)將質(zhì)量濃度為5g/L的所述表面改性的超順磁性顆粒水溶液與濃度為lg/L的牛血清白蛋白水溶液等體積混合，吸附池，得到蛋白質(zhì)修飾的磁性納米顆粒；(3)將所述蛋白質(zhì)修飾的超順磁性納米顆粒填充到用于磁穩(wěn)定床的玻璃管中，并置于軸向磁穩(wěn)定床中，在磁場(chǎng)強(qiáng)度為MOO奧斯特的條件下，將質(zhì)量濃度為5mg/L的手性布洛芬外消旋體水溶液從填充后的柱狀容器底部以lmL/min流速泵入，在柱狀容器頂部連續(xù)獲得含有一種對(duì)映異構(gòu)體的分離產(chǎn)物的液體，對(duì)映體過量值為99. 0%，而超順磁性顆粒吸附物為另一種對(duì)映異構(gòu)體的分離產(chǎn)物。本實(shí)施例的方法也可用于拆分手性氧氟沙星、華法林或普萘洛爾外消旋體。實(shí)施例2一種應(yīng)用蛋白質(zhì)功能化磁性納米顆粒拆分手性藥物的方法，包括如下步驟(1)采用物理吸附法對(duì)超順磁性顆粒表面進(jìn)行改性
將質(zhì)量濃度為4g/L的超順磁性顆粒水溶液與質(zhì)量濃度為0. 02g/L的聚乙烯亞胺水溶液等體積混合，在30°C，吸附20分鐘，得到表面改性的超順磁性顆粒；所述超順磁性顆粒為平均粒徑為10nm、飽和磁化強(qiáng)度為80emu/g的Y-Fe2O3 ；(2)負(fù)載具有手性識(shí)別作用的蛋白質(zhì)將質(zhì)量濃度為2g/L的所述表面改性的超順磁性顆粒水溶液與濃度為0. 8g/L的人血清白蛋白水溶液等體積混合，吸附池，得到蛋白質(zhì)修飾的磁性納米顆粒；(3)將所述蛋白質(zhì)修飾的超順磁性納米顆粒填充到用于磁穩(wěn)定床的玻璃管中，并置于軸向磁穩(wěn)定床中，在磁場(chǎng)強(qiáng)度為2000奧斯特的條件下，將質(zhì)量濃度為lmg/L的手性萘普生外消旋體水溶液從填充后的柱狀容器底部以5mL/min流速泵入，在柱狀容器頂部連續(xù)獲得含有一種對(duì)映異構(gòu)體的分離產(chǎn)物的液體，對(duì)映體過量值為98. 0%，而超順磁性顆粒吸附物為另一種對(duì)映異構(gòu)體的分離產(chǎn)物。本實(shí)施例的方法也可用于拆分手性布洛芬、酮洛芬、奧沙西泮或氟比洛芬外消旋體。實(shí)施例3一種應(yīng)用蛋白質(zhì)功能化磁性納米顆粒拆分手性藥物的方法，包括如下步驟(1)采用物理吸附法對(duì)超順磁性顆粒表面進(jìn)行改性將質(zhì)量濃度為6g/L的超順磁性顆粒水溶液與質(zhì)量濃度為lg/L的聚丙烯胺水溶液等體積混合，在45°C，吸附30分鐘，得到表面改性的超順磁性顆粒；所述超順磁性顆粒為平均粒徑為20nm、飽和磁化強(qiáng)度為50emu/g的Coi^e2O4 ；(2)負(fù)載具有手性識(shí)別作用的蛋白質(zhì)將質(zhì)量濃度為7g/L的所述表面改性的超順磁性顆粒水溶液與濃度為5g/L的卵類粘蛋白水溶液等體積混合，吸附池，得到蛋白質(zhì)修飾的磁性納米顆粒；(3)將所述蛋白質(zhì)修飾的超順磁性納米顆粒填充到用于磁穩(wěn)定床的玻璃管中，并置于軸向磁穩(wěn)定床中，在磁場(chǎng)強(qiáng)度為5000奧斯特的條件下，將質(zhì)量濃度為100mg/L的手性撲爾敏外消旋體水溶液從填充后的柱狀容器底部以lOmL/min流速泵入，在柱狀容器頂部連續(xù)獲得含有一種對(duì)映異構(gòu)體的分離產(chǎn)物的液體，對(duì)映體過量值為93. 0%，而超順磁性顆粒吸附物為另一種對(duì)映異構(gòu)體的分離產(chǎn)物。也可采用卵類糖蛋白替代本實(shí)施例中的卵類粘蛋白，拆分手性撲爾敏外消旋體。實(shí)施例4一種應(yīng)用蛋白質(zhì)功能化磁性納米顆粒拆分手性藥物的方法，包括如下步驟(1)采用物理吸附法對(duì)超順磁性顆粒表面進(jìn)行改性將質(zhì)量濃度為8g/L的超順磁性顆粒水溶液與質(zhì)量濃度為0. 2g/L的聚對(duì)苯乙烯磺酸鈉水溶液等體積混合，在10°c，吸附25分鐘，得到表面改性的超順磁性顆粒；所述超順磁性顆粒為平均粒徑為30nm、飽和磁化強(qiáng)度為30emu/g的Nii^e2O4 ；(2)負(fù)載具有手性識(shí)別作用的蛋白質(zhì)將質(zhì)量濃度為5g/L的所述表面改性的超順磁性顆粒水溶液與濃度為2g/L的親和素水溶液等體積混合，吸附池，得到蛋白質(zhì)修飾的磁性納米顆粒；(3)將所述蛋白質(zhì)修飾的超順磁性納米顆粒填充到用于磁穩(wěn)定床的玻璃管中，并置于軸向磁穩(wěn)定床中，在磁場(chǎng)強(qiáng)度為4000奧斯特的條件下，將質(zhì)量濃度為500mg/L的手性酮洛芬外消旋體水溶液從填充后的柱狀容器底部以2mL/min流速泵入，在柱狀容器頂部連續(xù)獲得含有一種對(duì)映異構(gòu)體的分離產(chǎn)物的液體，對(duì)映體過量值為99. 0%，而超順磁性顆粒吸附物為另一種對(duì)映異構(gòu)體的分離產(chǎn)物。也可采用聚丙烯酸替代本實(shí)施例中的聚對(duì)苯乙烯磺酸鈉，對(duì)手性酮洛芬進(jìn)行拆分。實(shí)施例5一種應(yīng)用蛋白質(zhì)功能化磁性納米顆粒拆分手性藥物的方法，包括如下步驟(1)采用物理吸附法對(duì)超順磁性顆粒表面進(jìn)行改性將質(zhì)量濃度為10g/L的超順磁性顆粒水溶液與質(zhì)量濃度為0. 5g/L的乙二醇?xì)ぞ厶撬芤旱润w積混合，在20°C，吸附40分鐘，得到表面改性的超順磁性顆粒；所述超順磁性顆粒為平均粒徑為80nm、飽和磁化強(qiáng)度為lOemu/g的Nia5Sia5I^2O4 ；(2)負(fù)載具有手性識(shí)別作用的蛋白質(zhì)將質(zhì)量濃度為10g/L的所述表面改性的超順磁性顆粒水溶液與濃度為10g/L的 α 1酸性糖蛋白水溶液等體積混合，吸附證，得到蛋白質(zhì)修飾的磁性納米顆粒；(3)將所述蛋白質(zhì)修飾的超順磁性納米顆粒填充到用于磁穩(wěn)定床的玻璃管中，并置于軸向磁穩(wěn)定床中，在磁場(chǎng)強(qiáng)度為100奧斯特的條件下，將質(zhì)量濃度為50mg/L的手性西酞普蘭外消旋體水溶液從填充后的柱狀容器底部以0. 2mL/min流速泵入，在柱狀容器頂部連續(xù)獲得含有一種對(duì)映異構(gòu)體的分離產(chǎn)物的液體，對(duì)映體過量值為97. 0%，而超順磁性顆粒吸附物為另一種對(duì)映異構(gòu)體的分離產(chǎn)物。實(shí)施例6第二種應(yīng)用蛋白質(zhì)功能化磁性納米顆粒拆分手性藥物的方法，包括如下步驟(1)采用化學(xué)鍵合法對(duì)超順磁性顆粒表面進(jìn)行改性將超順磁性顆粒粉末浸入體積百分濃度為2%的氨丙基三甲氧基硅烷的環(huán)己烷溶液中使超順磁性顆粒粉末的濃度為5g/L，在80°C，反應(yīng)8h，分離，得到表面改性的超順磁性顆粒；所述超順磁性顆粒為平均粒徑為15nm、飽和磁化強(qiáng)度為70emu/g的!^e3O4 ；(2)負(fù)載具有手性識(shí)別作用的蛋白質(zhì)將質(zhì)量濃度為5g/L的所述表面改性的超順磁性顆粒水溶液與質(zhì)量濃度為2g/L的牛血清白蛋白水溶液等體積混合，再加入共價(jià)連接試劑戊二醛，使共價(jià)連接試劑摩爾濃度為0. lmol/L，反應(yīng)4h，得到蛋白質(zhì)修飾的磁性納米顆粒；(3)將所述蛋白質(zhì)修飾的超順磁性納米顆粒填充到用于磁穩(wěn)定床的玻璃管中，并置于軸向磁穩(wěn)定床中，在磁場(chǎng)強(qiáng)度為MOO奧斯特的條件下，將質(zhì)量濃度為5mg/L的手性布洛芬外消旋體水溶液從填充后的柱狀容器底部以lmL/min流速泵入，在柱狀容器頂部連續(xù)獲得含有一種對(duì)映異構(gòu)體的分離產(chǎn)物的液體，對(duì)映體過量值為97. 0%，而超順磁性顆粒吸附物為另一種對(duì)映異構(gòu)體的分離產(chǎn)物。本方法也可用于拆分手性氧氟沙星、華法林或普萘洛爾外消旋體。實(shí)施例7第二種應(yīng)用蛋白質(zhì)功能化磁性納米顆粒拆分手性藥物的方法，包括如下步驟(1)采用化學(xué)鍵合法對(duì)超順磁性顆粒表面進(jìn)行改性將超順磁性顆粒粉末浸入體積百分濃度為0. 3%的巰丙基三甲氧基硅烷的環(huán)己烷溶液中使超順磁性顆粒粉末的濃度為lg/L，在40°C，反應(yīng)12h，分離，得到表面改性的超順磁性顆粒；所述超順磁性顆粒為平均粒徑為lOnm、飽和磁化強(qiáng)度為80emu/g的Y-Fe2O3 ；(2)負(fù)載具有手性識(shí)別作用的蛋白質(zhì)將質(zhì)量濃度為2g/L的所述表面改性的超順磁性顆粒水溶液與質(zhì)量濃度為0. 8g/L 的人血清白蛋白水溶液等體積混合，再加入共價(jià)連接試劑氮-琥珀酰亞氨基-3(2-吡啶二硫代)_丙酸酯，使共價(jià)連接試劑摩爾濃度為0. 005mol/L,反應(yīng)池，得到蛋白質(zhì)修飾的磁性納米顆粒；(3)將所述蛋白質(zhì)修飾的超順磁性納米顆粒填充到用于磁穩(wěn)定床的玻璃管中，并置于軸向磁穩(wěn)定床中，在磁場(chǎng)強(qiáng)度為2000奧斯特的條件下，將質(zhì)量濃度為lmg/L的手性萘普生外消旋體水溶液從填充后的柱狀容器底部以5mL/min流速泵入，在柱狀容器頂部連續(xù)獲得含有一種對(duì)映異構(gòu)體的分離產(chǎn)物的液體，對(duì)映體過量值為99. O%，而超順磁性顆粒吸附物為另一種對(duì)映異構(gòu)體的分離產(chǎn)物。本方法也可用于拆分手性布洛芬、酮洛芬、奧沙西泮或氟比洛芬外消旋體。實(shí)施例8第二種應(yīng)用蛋白質(zhì)功能化磁性納米顆粒拆分手性藥物的方法，包括如下步驟(1)采用化學(xué)鍵合法對(duì)超順磁性顆粒表面進(jìn)行改性將超順磁性顆粒粉末浸入體積百分濃度為5%的氨丙基三甲氧基硅烷的乙醇溶液中使超順磁性顆粒粉末的濃度為5g/L，在25°C，反應(yīng)48h，分離，得到表面改性的超順磁性顆粒；所述超順磁性顆粒為平均粒徑為20nm、飽和磁化強(qiáng)度為50emu/g的Coi^e2O4 ；(2)負(fù)載具有手性識(shí)別作用的蛋白質(zhì)將質(zhì)量濃度為5g/L的所述表面改性的超順磁性顆粒水溶液與質(zhì)量濃度為3g/L的卵類粘蛋白水溶液等體積混合，再加入共價(jià)連接試劑戊二醛，使共價(jià)連接試劑摩爾濃度為 0. lmol/L，反應(yīng)池，得到蛋白質(zhì)修飾的磁性納米顆粒；(3)將所述蛋白質(zhì)修飾的超順磁性納米顆粒填充到用于磁穩(wěn)定床的玻璃管中，并置于軸向磁穩(wěn)定床中，在磁場(chǎng)強(qiáng)度為5000奧斯特的條件下，將質(zhì)量濃度為100mg/L的手性撲爾敏外消旋體水溶液從填充后的柱狀容器底部以lOmL/min流速泵入，在柱狀容器頂部連續(xù)獲得含有一種對(duì)映異構(gòu)體的分離產(chǎn)物的液體，對(duì)映體過量值為95. 0%，而超順磁性顆粒吸附物為另一種對(duì)映異構(gòu)體的分離產(chǎn)物。也可采用卵類糖蛋白替代本實(shí)施例中的卵類粘蛋白，拆分手性撲爾敏外消旋體。實(shí)施例9第二種應(yīng)用蛋白質(zhì)功能化磁性納米顆粒拆分手性藥物的方法，包括如下步驟(1)采用化學(xué)鍵合法對(duì)超順磁性顆粒表面進(jìn)行改性將超順磁性顆粒粉末浸入體積百分濃度為10%的巰丙基三甲氧基硅烷的甲苯溶液中使超順磁性顆粒粉末的濃度為10g/L，在130°C，反應(yīng)3h，分離，得到表面改性的超順磁性顆粒；所述超順磁性顆粒為平均粒徑為30nm、飽和磁化強(qiáng)度為30emu/g的Mi^e2O4 ；(2)負(fù)載具有手性識(shí)別作用的蛋白質(zhì)將質(zhì)量濃度為5g/L的所述表面改性的超順磁性顆粒水溶液與質(zhì)量濃度為5g/L的纖維素水解酶I水溶液等體積混合，再加入共價(jià)連接試劑對(duì)苯二異硫氰酸酯，使共價(jià)連接試劑摩爾濃度為0. 2mol/L，反應(yīng)4h，得到蛋白質(zhì)修飾的磁性納米顆粒；
(3)將所述蛋白質(zhì)修飾的超順磁性納米顆粒填充到用于磁穩(wěn)定床的玻璃管中，并置于軸向磁穩(wěn)定床中，在磁場(chǎng)強(qiáng)度為4000奧斯特的條件下，將質(zhì)量濃度為500mg/L的手性普萘洛爾外消旋體水溶液從填充后的柱狀容器底部以2mL/min流速泵入，在柱狀容器頂部連續(xù)獲得含有一種對(duì)映異構(gòu)體的分離產(chǎn)物的液體，對(duì)映體過量值為97. 0%，而超順磁性顆粒吸附物為另一種對(duì)映異構(gòu)體的分離產(chǎn)物。也可采用胃蛋白酶替代本實(shí)施例中的纖維素水解酶I，拆分手性普萘洛爾外消旋體。實(shí)施例10第二種應(yīng)用蛋白質(zhì)功能化磁性納米顆粒拆分手性藥物的方法，包括如下步驟(1)采用化學(xué)鍵合法對(duì)超順磁性顆粒表面進(jìn)行改性將超順磁性顆粒粉末浸入體積百分濃度為1 %的氨丙基三甲氧基硅烷的甲苯溶液中使超順磁性顆粒粉末的濃度為2g/L，在80°C，反應(yīng)6h，分離，得到表面改性的超順磁性顆粒；所述超順磁性顆粒為平均粒徑為80nm、飽和磁化強(qiáng)度為lOemu/g的Na5Zna5Fe2O4 ；(2)負(fù)載具有手性識(shí)別作用的蛋白質(zhì)將質(zhì)量濃度為10g/L的所述表面改性的超順磁性顆粒水溶液與質(zhì)量濃度為10g/L 的α 1酸性糖蛋白水溶液等體積混合，再加入共價(jià)連接試劑乙基-(3-二甲基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽，使共價(jià)連接試劑摩爾濃度為0. 2mol/L,反應(yīng)證，得到蛋白質(zhì)修飾的磁性納米顆粒；(3)將所述蛋白質(zhì)修飾的超順磁性納米顆粒填充到用于磁穩(wěn)定床的玻璃管中，并置于軸向磁穩(wěn)定床中，在磁場(chǎng)強(qiáng)度為100奧斯特的條件下，將質(zhì)量濃度為50mg/L的手性西酞普蘭外消旋體水溶液從填充后的柱狀容器底部以0. 2mL/min流速泵入，在柱狀容器頂部連續(xù)獲得含有一種對(duì)映異構(gòu)體的分離產(chǎn)物的液體，對(duì)映體過量值為94. 0%，而超順磁性顆粒吸附物為另一種對(duì)映異構(gòu)體的分離產(chǎn)物。
權(quán)利要求
1.一種應(yīng)用蛋白質(zhì)功能化磁性納米顆粒拆分手性藥物的方法，其特征包括如下步驟(1)采用物理吸附法對(duì)超順磁性顆粒表面進(jìn)行改性將質(zhì)量濃度為2-10g/L的超順磁性顆粒水溶液與質(zhì)量濃度為0. 02-lg/L的離子型聚合物水溶液等體積混合，在10-45°C，吸附20-40分鐘，得到表面改性的超順磁性顆粒；(2)負(fù)載具有手性識(shí)別作用的蛋白質(zhì)將質(zhì)量濃度為2-10g/L的所述表面改性的超順磁性顆粒水溶液與濃度為0. 8-10g/L的蛋白質(zhì)水溶液等體積混合，吸附2-5h，得到蛋白質(zhì)修飾的磁性納米顆粒；所述蛋白質(zhì)為牛血清白蛋白、人血清白蛋白、α 1酸性糖蛋白、卵類粘蛋白、卵類糖蛋白或親和素；(3)將所述蛋白質(zhì)修飾的超順磁性納米顆粒填充到用于磁穩(wěn)定床的玻璃管中，并置于軸向磁穩(wěn)定床中，在磁場(chǎng)強(qiáng)度為100-5000奧斯特的條件下，將質(zhì)量濃度為l_500mg/L的手性藥物外消旋體水溶液從填充后的柱狀容器底部以0. 2-10mL/min流速泵入，在柱狀容器頂部連續(xù)獲得含有一種對(duì)映異構(gòu)體的分離產(chǎn)物的液體，而超順磁性顆粒吸附物為另一種對(duì)映異構(gòu)體的分離產(chǎn)物。
2.一種應(yīng)用蛋白質(zhì)功能化磁性納米顆粒拆分手性藥物的方法，其特征包括如下步驟(1)采用化學(xué)鍵合法對(duì)超順磁性顆粒表面進(jìn)行改性將超順磁性顆粒粉末浸入體積百分濃度為0. 3-10%的硅烷化試劑溶液中使超順磁性顆粒粉末的濃度為l-10g/L，在25-130°C，反應(yīng)3-48h，分離，得到表面改性的超順磁性顆粒；所述硅烷化試劑溶液的溶劑為甲苯、環(huán)己烷或乙醇；(2)負(fù)載具有手性識(shí)別作用的蛋白質(zhì)將質(zhì)量濃度為2-10g/L的所述表面改性的超順磁性顆粒水溶液與質(zhì)量濃度為 0. 8-10g/L的蛋白質(zhì)水溶液等體積混合，再加入共價(jià)連接試劑，使共價(jià)連接試劑摩爾濃度為 0. 005-0. 2mol/L，反應(yīng)2- ，得到蛋白質(zhì)修飾的磁性納米顆粒；所述蛋白質(zhì)為牛血清白蛋白、人血清白蛋白、α 1酸性糖蛋白、卵類粘蛋白、卵類糖蛋白、胃蛋白酶或纖維素水解酶I ；(3)將所述蛋白質(zhì)修飾的超順磁性納米顆粒填充到用于磁穩(wěn)定床的玻璃管中，并置于軸向磁穩(wěn)定床中，在磁場(chǎng)強(qiáng)度為100-5000奧斯特的條件下，將質(zhì)量濃度為l_500mg/L的手性藥物外消旋體水溶液從填充后的柱狀容器底部以0. 2-10mL/min流速泵入，在柱狀容器頂部連續(xù)獲得含有一種對(duì)映異構(gòu)體的分離產(chǎn)物的液體，而超順磁性顆粒吸附物為另一種對(duì)映異構(gòu)體的分離產(chǎn)物。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其特征是所述超順磁性顆粒為平均粒徑為 10-80nm、飽和磁化強(qiáng)度為 10_80emu/g 的 Fe304、γ-Fii2O3、CoFii2O4、NiFii2O4 或 Ni。. 5Zn。. 5Fe204。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征是所述離子型聚合物為聚二烯丙基二甲基氯化銨、聚乙烯亞胺、乙二醇?xì)ぞ厶?、聚丙烯胺、聚丙烯酸或聚?duì)苯乙烯磺酸鈉。
5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征是所述硅烷化試劑為氨丙基三甲氧基硅烷或巰丙基三甲氧基硅烷。
6.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征是所述共價(jià)連接試劑為戊二醛、乙基-(3-二甲基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽、氮-琥珀酰亞氨基-3 (2-吡啶二硫代)-丙酸酯或?qū)Ρ蕉惲蚯杷狨ァ?br> 7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征是所述步驟(1)中所述離子型聚合物水溶液的質(zhì)量濃度為0. 1-0. 5g/L，所述溫度為20-30°C。
8.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征是所述步驟(1)中所述硅烷化試劑溶液的體積百分濃度為1_5%，所述溫度為40-80°C，所述反應(yīng)時(shí)間為6-12h。
9.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其特征是所述步驟(3)中所述磁場(chǎng)強(qiáng)度為 2000-4000奧斯特，所述手性藥物外消旋體水溶液質(zhì)量濃度為5-100mg/L，所述流速為 l-5mL/min。
10.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其特征是所述手性藥物為布洛芬、華法林、氧氟沙星、萘普生、酮洛芬、奧沙西泮、氟比洛芬、西酞普蘭、普萘洛爾或撲爾敏。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種應(yīng)用蛋白質(zhì)功能化磁性納米顆粒拆分手性藥物的方法，包括如下步驟(1)采用物理吸附法對(duì)超順磁性顆粒表面進(jìn)行改性；(2)負(fù)載具有手性識(shí)別作用的蛋白質(zhì)；(3)將蛋白質(zhì)修飾的超順磁性納米顆粒填充到用于磁穩(wěn)定床的玻璃管中，并置于軸向磁穩(wěn)定床中，將手性藥物外消旋體水溶液從填充后的柱狀容器底部泵入，在柱狀容器頂部連續(xù)獲得含有一種對(duì)映異構(gòu)體的分離產(chǎn)物的液體，而超順磁性顆粒吸附物為另一種對(duì)映異構(gòu)體的分離產(chǎn)物。本發(fā)明的方法操作簡(jiǎn)便，條件溫和，反應(yīng)時(shí)間短，蛋白質(zhì)固載量大且能保持其藥物識(shí)別能力；磁穩(wěn)定床技術(shù)強(qiáng)化拆分過程使產(chǎn)品光學(xué)純度顯著提高，實(shí)現(xiàn)了手性拆分的連續(xù)化操作。
文檔編號(hào)C07C59/64GK102408288SQ20111022797
公開日2012年4月11日 申請(qǐng)日期2011年8月10日 優(yōu)先權(quán)日2011年8月10日
發(fā)明者付雁, 馮子洋, 劉璐, 張金利, 李靈均, 李艷莉, 李韡, 黃天天 申請(qǐng)人:天津市天地創(chuàng)智科技發(fā)展有限公司