專利名稱：一種糙蘇素的提純方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于天然產(chǎn)物分離領(lǐng)域，涉及一種糙蘇素的提純方法，尤其是涉及一種采用高速逆流色譜法純化糙蘇素的方法。
背景技術(shù)：
螃蟹甲為唇形科糙蘇屬多年生草本植物螃蟹甲Phlom is younghusband ii Mukerjee.的干燥塊根，為藏醫(yī)習(xí)用藥材，藏藥名為“露木爾”，主要分布于西藏、青海等省區(qū)。其味苦性涼，具有疏風(fēng)清熱、散寒潤(rùn)喉、止咳化痰、生肌斂瘡等功效，用于治療培根寒癥、咽喉疫疬、風(fēng)熱感冒、咳嗽痰多、支氣管炎、瘡瘍久潰不斂、肺病等癥，現(xiàn)收載于衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)藏藥第一冊(cè)(1995版)。目前對(duì)螃蟹甲的化學(xué)成分研究較少，有文獻(xiàn)報(bào)道從中分離得到二萜苷、環(huán)烯醚萜苷、蒽醌、黃酮和揮發(fā)油類等成分。
糙蘇素白色粉末，C17H26O13,mp. 156 158°C。糙蘇素為螃蟹甲中的一種環(huán)烯醚萜類成分，現(xiàn)代藥理研究表明，植物中許多環(huán)烯醚萜苷類化合物有抗炎、抗腫瘤、抗氧化和抗菌等活性。謝文利等發(fā)表的文獻(xiàn)“糙蘇素的抗腫瘤活性研究”，該文獻(xiàn)表明糙蘇素對(duì)體外培養(yǎng)的人腫瘤細(xì)胞和接種的小鼠腫瘤具有明顯抑制作用，能夠增強(qiáng)淋巴細(xì)胞增殖功能和NK細(xì)胞的殺傷能力，具有抗腫瘤和免疫調(diào)節(jié)功倉(cāng)泛。目前，尚未見采用高速逆流色譜法純化糙蘇素的報(bào)道，同時(shí)未見有相關(guān)制備色譜技術(shù)用于制備高純度糙蘇素的報(bào)道，也未見有相關(guān)專利。目前，國(guó)內(nèi)外多采用柱色譜法和重結(jié)晶等傳統(tǒng)分離制備方法分離植物中的有效單體，費(fèi)時(shí)費(fèi)力、污染環(huán)境，而且所用固定相對(duì)樣品有不可逆吸附等缺點(diǎn)。高速逆流色譜(HSCCC)是一種較新的液液分配色譜技術(shù)，它不用任何固體支撐或載體而克服了傳統(tǒng)分離方法對(duì)樣品的不可逆吸附作用，因而樣品回收率高，同時(shí)還具有應(yīng)用范圍廣、儀器操作簡(jiǎn)單、分離量大等優(yōu)點(diǎn)，因此被廣泛應(yīng)用于天然產(chǎn)物分離制備當(dāng)中。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種糙蘇素的提純方法。本發(fā)明是通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的一種糙蘇素的提純方法，其特征在于以螃蟹甲藥材為原料，加入50 70%乙醇提取2 4次，提取液減壓回收乙醇得濃縮液，濃縮液過大孔樹脂柱，先用水洗脫雜質(zhì)，再用30 50%乙醇液洗脫，醇洗脫液濃縮干燥后采用高速逆流色譜法分離純化，得糙蘇素產(chǎn)品O所述大孔樹脂柱徑高比為I : 5 I : 7，吸附流速控制在2 5L/h。所述高速逆流色譜法分離純化，它包括配置高速逆流色譜固定相、流動(dòng)相的溶劑系統(tǒng)，使逆流色譜儀柱子中充滿固定相，然后調(diào)整主機(jī)轉(zhuǎn)速為800 IOOOrmp，再以I 3ml/min流速泵入流動(dòng)相，待柱內(nèi)溶劑系統(tǒng)建立動(dòng)態(tài)平衡后，由進(jìn)樣閥進(jìn)樣，然后根據(jù)檢測(cè)器譜圖接收目標(biāo)流分。所述高速逆流色譜固定相、流動(dòng)相的溶劑系統(tǒng)為乙酸乙酯-正丁醇-水(3 6 : 2 5 : 4 9)，配置方法為，將乙酸乙酯-正丁醇-水按上述比例量取混合，超聲搖勻，靜置分層后分離，下相為流動(dòng)相，上相為固定相，樣品用下相溶解。本發(fā)明是采用高速逆流色譜技術(shù)對(duì)中藥粗提物進(jìn)行分離純化，簡(jiǎn)便、快速，同時(shí)避免了樣品損失?？朔藗鹘y(tǒng)制備方法操作繁瑣、分離周期長(zhǎng)等缺點(diǎn)，并有制備量大、分離效率高、產(chǎn)品純度好等優(yōu)點(diǎn)。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)的描述，但本發(fā)明的實(shí)施方式不限于此。 實(shí)施例I :取螃蟹甲藥材1kg，加入50 %乙醇提取2次，提取液減壓回收乙醇得濃縮液，濃縮液過大孔樹脂柱(徑高比I : 5)吸附，吸附流速控制為2L/h，先用水洗脫雜質(zhì)，再用30%乙醇液洗脫，收集醇洗脫液濃縮干燥得干燥物；將乙酸乙酯-正丁醇-水按3 3 5體積比取混合，超聲搖勻，靜置分層后分離，下相為流動(dòng)相，上相為固定相，干燥物用下相溶解，將固定相泵滿色譜柱，然后調(diào)整主機(jī)轉(zhuǎn)速為800rmp，再以3ml/min流速泵入流動(dòng)相，待柱內(nèi)溶劑系統(tǒng)建立動(dòng)態(tài)平衡后，由進(jìn)樣閥進(jìn)樣，然后根據(jù)檢測(cè)器譜圖接收目標(biāo)流分，蒸干即得糙蘇素產(chǎn)品，含量97. I %。實(shí)施例2:取螃蟹甲藥材5kg，加入70 %乙醇提取4次，提取液減壓回收乙醇得濃縮液，濃縮液過大孔樹脂柱(徑高比I : 7)吸附，吸附流速控制為5L/h，先用水洗脫雜質(zhì)，再用50%乙醇液洗脫，收集醇洗脫液濃縮干燥得干燥物；將乙酸乙酯-正丁醇-水按6 5 8體積比取混合，超聲搖勻，靜置分層后分離，下相為流動(dòng)相，上相為固定相，干燥物用下相溶解，將固定相泵滿色譜柱，然后調(diào)整主機(jī)轉(zhuǎn)速為lOOOrmp，再以2ml/min流速泵入流動(dòng)相，待柱內(nèi)溶劑系統(tǒng)建立動(dòng)態(tài)平衡后，由進(jìn)樣閥進(jìn)樣，然后根據(jù)檢測(cè)器譜圖接收目標(biāo)流分，蒸干即得糙蘇素產(chǎn)品，含量98. I %。實(shí)施例3:取螃蟹甲藥材10kg，加入60%乙醇提取3次，提取液減壓回收乙醇得濃縮液，濃縮液過大孔樹脂柱(徑高比I : 5)吸附，吸附流速控制為3L/h，先用水洗脫雜質(zhì)，再用40%乙醇液洗脫，收集醇洗脫液濃縮干燥得干燥物；將乙酸乙酯-正丁醇-水按4 5 7體積比取混合，超聲搖勻，靜置分層后分離，下相為流動(dòng)相，上相為固定相，干燥物用下相溶解，將固定相泵滿色譜柱，然后調(diào)整主機(jī)轉(zhuǎn)速為900rmp，再以3ml/min流速泵入流動(dòng)相，待柱內(nèi)溶劑系統(tǒng)建立動(dòng)態(tài)平衡后，由進(jìn)樣閥進(jìn)樣，然后根據(jù)檢測(cè)器譜圖接收目標(biāo)流分，蒸干即得糙蘇素產(chǎn)品，含量96. 4%。實(shí)施例4 取螃蟹甲藥材20kg，加入55%乙醇提取3次，提取液減壓回收乙醇得濃縮液，濃縮液過大孔樹脂柱(徑高比I : 5)吸附，吸附流速控制為2L/h，先用水洗脫雜質(zhì)，再用50%乙醇液洗脫，收集醇洗脫液濃縮干燥得干燥物；將乙酸乙酯-正丁醇-水按4 5 6體積比取混合，超聲搖勻，靜置分層后分離，下相為流動(dòng)相，上相為固定相，干燥物用下相溶解，將固定相泵滿色譜柱，然后調(diào)整主機(jī)轉(zhuǎn)速為lOOOrmp，再以2. 5ml/min流速泵入流動(dòng)相，待柱內(nèi)溶劑系統(tǒng)建立動(dòng)態(tài)平衡后，由進(jìn)樣閥進(jìn)樣，然后根據(jù)檢測(cè)器譜圖接收目標(biāo)流分，蒸干即得糙蘇素產(chǎn)品，含量96. 8%?！?br> 權(quán)利要求
1.一種糙蘇素的提純方法，其特征在于以螃蟹甲藥材為原料，加入50 70%乙醇提取2 4次，提取液減壓回收乙醇得濃縮液，濃縮液過大孔樹脂柱，先用水洗脫雜質(zhì)，再用30 50%乙醇液洗脫，醇洗脫液濃縮干燥后采用高速逆流色譜法分離純化，得糙蘇素產(chǎn)品O
2.如權(quán)利要求I所述的一種糙蘇素的提純方法，其特征在于所述大孔樹脂柱徑高比為I : 5 I : 7，吸附流速控制在2 5L/h。
3.如權(quán)利要求I所述的一種糙蘇素的提純方法，其特征在于所述高速逆流色譜法分離純化，它包括配置高速逆流色譜固定相、流動(dòng)相的溶劑系統(tǒng)，使逆流色譜儀柱子中充滿固定相，然后調(diào)整主機(jī)轉(zhuǎn)速為800 lOOOrmp，再以I 3ml/min流速泵入流動(dòng)相，待柱內(nèi)溶劑系統(tǒng)建立動(dòng)態(tài)平衡后，由進(jìn)樣閥進(jìn)樣，然后根據(jù)檢測(cè)器譜圖接收目標(biāo)流分。
4.如權(quán)利要求3所述的一種糙蘇素的提純方法，其特征在于所述高速逆流色譜固定相、流動(dòng)相的溶劑系統(tǒng)為乙酸乙酯-正丁醇-水(3 6 2 5 4 9)，配置方法為，將乙酸乙酯-正丁醇-水按上述比例量取混合，超聲搖勻，靜置分層后分離，下相為流動(dòng)相，上相為固定相，樣品用下相溶解。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種糙蘇素的提純方法，包括藥材提取、總提取物制備及糙蘇素單體化合物的分離純化三道工序，將糙蘇藥材用50～70％乙醇提取，提取液減壓回收乙醇得濃縮液，濃縮液過大孔樹脂柱，先用水洗脫雜質(zhì)，再用30～50％乙醇液洗脫，醇洗脫液濃縮干燥后經(jīng)高速逆流色譜儀分離純化，得到純度高于96％的糙蘇素產(chǎn)品。本方法具有操作簡(jiǎn)便、快速、制備量大、樣品損失少等優(yōu)點(diǎn)。
文檔編號(hào)C07H1/08GK102911220SQ20111021880
公開日2013年2月6日 申請(qǐng)日期2011年8月2日 優(yōu)先權(quán)日2011年8月2日
發(fā)明者李法慶, 劉東鋒 申請(qǐng)人:蘇州寶澤堂醫(yī)藥科技有限公司