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一種制備高純度貝萼皂苷元的方法

文檔序號(hào):3510185閱讀:239來(lái)源:國(guó)知局
專(zhuān)利名稱(chēng):一種制備高純度貝萼皂苷元的方法
技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域,涉及一種利用高速逆流色譜法從土貝母中制備高純度貝萼皂苷元的方法。
背景技術(shù)
土貝母系葫蘆科植物土貝母 Bolbostemma pan i cu latum (Maxim. )Franquet 的干燥塊莖,始載于清代《本草綱目拾遺》,具有散結(jié)、消腫、解毒之功效。皂苷類(lèi)為土貝母的主要活性成分,含量較大。貝萼皂苷元(Bayogenin)是一種齊墩果酸五環(huán)三萜類(lèi)化合物,分子式C30H4805,分子量為488. 7。中國(guó)專(zhuān)利申請(qǐng)?zhí)?00410101074. O以貝萼皂苷元為活性成分,單獨(dú)與藥用輔料或與其它藥物聯(lián)合制備成抗腫瘤藥物。有文獻(xiàn)研究表明貝萼皂苷元具有中等強(qiáng)度的糖原磷酸化酶抑制活性以及抗腫瘤等作用,可作為糖原磷酸化酶抑制劑。目前貝萼皂苷元的提取分離方法主要采用乙醇回流提取、大孔樹(shù)脂或硅膠柱層析、酸水解、堿調(diào) PH,溶劑萃取、重結(jié)晶等步驟獲得貝萼皂苷元,這些方法生產(chǎn)周期長(zhǎng)、樣品損失較大,所用有機(jī)溶劑毒性較大,不適用于大規(guī)模生產(chǎn)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種快速、高效分離土貝母中貝萼皂苷元的方法,即采用高速逆流色譜法從土貝母中分離制備貝萼皂苷元的方法。該分離方法分離效率高、分離時(shí)間短,能得到高純度的貝萼皂苷元。本發(fā)明提供一種制備高純度貝萼皂苷元的方法,包括以下步驟a.取干燥土貝母鱗莖,粉碎,用石油醚脫脂后,以乙醇、甲醇、丙酮和水的混合溶劑超聲提取2-4次,提取液濃縮至相對(duì)密度I. 11-1. 18,得總皂苷;b.將總皂苷溶于水并以此加入酸液和乙酸乙酯后加熱進(jìn)行酸水解,待水解完成后趁熱分取乙酸乙酯層并濃縮,得乙酸乙酯浸膏;c.在分液漏斗中配制兩相溶劑系統(tǒng),充分振搖后在室溫下靜置過(guò)夜,分取漏斗中的上相和下相,超聲脫氣,取步驟b中的乙酸乙酯浸膏用下相溶解,作為樣品溶液備用;將溶劑系統(tǒng)的上相注入高速逆流色譜儀分離管中,待上相充滿(mǎn)整個(gè)管路后,調(diào)整主機(jī)轉(zhuǎn)速,泵入下相,待下相從柱出口流出,兩相在分離管中達(dá)到動(dòng)態(tài)平衡后,由進(jìn)樣閥注入樣品溶液,在210nm波長(zhǎng)下檢測(cè),根據(jù)色譜圖收集得到單體化合物貝萼皂苷元。步驟a中所述提取混合溶劑與藥材質(zhì)量比為8-20 I。步驟b中所述酸水解中所用酸為l-4mol/L鹽酸或硫酸,溫度為65_85°C。步驟c中所述溶劑系統(tǒng)為正己烷-乙酸乙酯-甲醇-7K,體積比為(10-12) (4-6) (5-10) (1-5)。步驟c中所述高速逆流色譜儀的主機(jī)轉(zhuǎn)速為850-1000r/min,流動(dòng)相流速為
2.0-4. Oml/min。本發(fā)明的優(yōu)勢(shì)在于
(I)酸水解時(shí)加入乙酸乙酯,使水解后產(chǎn)生的目標(biāo)產(chǎn)物貝萼皂苷元及時(shí)進(jìn)入乙酸乙酯層,既避免了長(zhǎng)時(shí)間與酸接觸可能產(chǎn)生的化學(xué)變化,又使水解、萃取操作同時(shí)完成,簡(jiǎn)化了工藝。(2)本發(fā)明采用合理的溶劑系統(tǒng),控制高速逆流色譜儀的主機(jī)轉(zhuǎn)速及流動(dòng)相流速等條件,可得到純度較高的貝萼皂苷元,該分離條件容易控制、分離時(shí)間短。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例I :取土貝母干燥鱗莖2kg,用石油醚脫脂后,用40%乙醇超聲提取3次,每次2小時(shí),合并提取液,提取液濃縮至相對(duì)密度I. 15,得總皂苷,將總皂苷溶于IL水中,加入鹽酸使溶液中鹽酸濃度達(dá)到2mol/L,然后加入乙酸乙酯2L,70°C回流5小時(shí),冷卻至乙酸乙酯不再沸騰,趁熱分取乙酸乙酯層,減壓濃縮,得乙酸乙酯浸膏。取正己烷、乙酸乙酯、甲醇、水按體積比11 : 4 : 8 : 3混合,置于分液漏斗中,充分振搖后在室溫下靜置過(guò)夜,分取漏斗中的上·相(作為固定相)和下相(作為流動(dòng)相),超聲脫氣,將乙酸乙酯浸膏用下鄉(xiāng)溶解,作為樣品溶液備用。將溶劑系統(tǒng)的上相注入高速逆流色譜儀分離管中,待上相充滿(mǎn)整個(gè)管路后,調(diào)整主機(jī)轉(zhuǎn)速960r/min,再以2. Oml/min流速泵入下相,待下相從柱出口流出,兩相在分離管中達(dá)到動(dòng)態(tài)平衡后,由進(jìn)樣閥注入樣品溶液,在210nm波長(zhǎng)下檢測(cè),根據(jù)色譜圖收集流分,回收試劑,干燥得到單體化合物貝萼皂苷元737mg,高效液相檢測(cè),含量為95. 7%。實(shí)施例2:取土貝母干燥鱗莖2kg,用石油醚脫脂后,用50%丙酮超聲提取2次,每次3小時(shí),合并提取液,提取液濃縮至相對(duì)密度I. 11,得總皂苷,將總皂苷溶于I. IL水中,加入硫酸使溶液中硫酸濃度達(dá)到3mol/L,然后加入乙酸乙酯2L,75°C回流4小時(shí),冷卻至乙酸乙酯不再沸騰,趁熱分取乙酸乙酯層,減壓濃縮,得乙酸乙酯浸膏。取正己烷、乙酸乙酯、甲醇、水按體積比12 6 10 5混合,置于分液漏斗中,充分振搖后在室溫下靜置過(guò)夜,分取漏斗中的上相(作為固定相)和下相(作為流動(dòng)相),超聲脫氣,將乙酸乙酯浸膏用下鄉(xiāng)溶解,作為樣品溶液備用。將溶劑系統(tǒng)的上相注入高速逆流色譜儀分離管中,待上相充滿(mǎn)整個(gè)管路后,調(diào)整主機(jī)轉(zhuǎn)速850r/min,再以3. Oml/min流速泵入下相,待下相從柱出口流出,兩相在分離管中達(dá)到動(dòng)態(tài)平衡后,由進(jìn)樣閥注入樣品溶液,在210nm波長(zhǎng)下檢測(cè),根據(jù)色譜圖收集流分,回收試劑,干燥得到單體化合物貝萼皂苷元724mg,高效液相檢測(cè),含量為96. 3%。實(shí)施例3:取土貝母干燥鱗莖2. 5kg,用石油醚脫脂后,用45%甲醇超聲提取2次,每次I小時(shí),合并提取液,提取液濃縮至相對(duì)密度I. 18,得總皂苷,將總皂苷溶于I. 4L水中,加入硫酸使溶液中硫酸濃度達(dá)到lmol/L,然后加入乙酸乙酯2. 5L,85°C回流6小時(shí),冷卻至乙酸乙酯不再沸騰,趁熱分取乙酸乙酯層,減壓濃縮,得乙酸乙酯浸膏。取正己烷、乙酸乙酯、甲醇、水按體積比10 6 7 I混合,置于分液漏斗中,充分振搖后在室溫下靜置過(guò)夜,分取漏斗中的上相(作為固定相)和下相(作為流動(dòng)相),超聲脫氣,將乙酸乙酯浸膏用下鄉(xiāng)溶解,作為樣品溶液備用。將溶劑系統(tǒng)的上相注入高速逆流色譜儀分離管中,待上相充滿(mǎn)整個(gè)管路后,調(diào)整主機(jī)轉(zhuǎn)速1000r/min,再以4. Oml/min流速泵入下相,待下相從柱出口流出,兩相在分離管中達(dá)到動(dòng)態(tài)平衡后,由進(jìn)樣閥注入樣品溶液,在210nm波長(zhǎng)下檢測(cè),根據(jù)色譜圖收集流分,回收試劑,干燥得到單體化合物貝萼皂苷元866mg,高效液相檢測(cè),含量為95. 4%。實(shí)施例4:取土貝母干燥鱗莖5kg,用石油醚脫脂后,用45%乙醇超聲提取3次,每次3小時(shí),合并提取液,提取液濃縮至相對(duì)密度I. 14,得總皂苷,將總皂苷溶于2L水中,加入鹽酸使溶液中鹽酸濃度達(dá)到4mol/L,然后加入乙酸乙酯4L,65°C回流8小時(shí),冷卻至乙酸乙酯不再沸騰,趁熱分取乙酸乙酯層,減壓濃縮,得乙酸乙酯浸膏。取正己烷、乙酸乙酯、甲醇、水按體積比10 : 5 : 5 : 2混合,置于分液漏斗中,充分振 搖后在室溫下靜置過(guò)夜,分取漏斗中的上相(作為固定相)和下相(作為流動(dòng)相),超聲脫氣,將乙酸乙酯浸膏用下鄉(xiāng)溶解,作為樣品溶液備用。將溶劑系統(tǒng)的上相注入高速逆流色譜儀分離管中,待上相充滿(mǎn)整個(gè)管路后,調(diào)整主機(jī)轉(zhuǎn)速900r/min,再以2. Oml/min流速泵入下相,待下相從柱出口流出,兩相在分離管中達(dá)到動(dòng)態(tài)平衡后,由進(jìn)樣閥注入樣品溶液,在210nm波長(zhǎng)下檢測(cè),根據(jù)色譜圖收集流分,回收試劑,干燥得到單體化合物貝萼皂苷元I. 63g,高效液相檢測(cè),含量為97. 8%。
權(quán)利要求
1.一種制備高純度貝萼皂苷元的方法,其特征在于包括如下步驟 a.取干燥土貝母鱗莖,粉碎,用石油醚脫脂后,以乙醇、甲醇、丙酮和水的混合溶劑超聲提取2-4次,提取液濃縮至相對(duì)密度I. 11-1. 18,得總皂苷; b.將總皂苷溶于水并以此加入酸液和乙酸乙酯后加熱進(jìn)行酸水解,待水解完成后趁熱分取乙酸乙酯層并濃縮,得乙酸乙酯浸膏; c.在分液漏斗中配制兩相溶劑系統(tǒng),充分振搖后在室溫下靜置過(guò)夜,分取漏斗中的上相和下相,超聲脫氣,取步驟b中的乙酸乙酯浸膏用下相溶解,作為樣品溶液備用;將溶劑系統(tǒng)的上相注入高速逆流色譜儀分離管中,待上相充滿(mǎn)整個(gè)管路后,調(diào)整主機(jī)轉(zhuǎn)速,泵入下相,待下相從柱出口流出,兩相在分離管中達(dá)到動(dòng)態(tài)平衡后,由進(jìn)樣閥注入樣品溶液,在210nm波長(zhǎng)下檢測(cè),根據(jù)色譜圖收集得到單體化合物貝萼皂苷元。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種制備高純度貝萼皂苷元的方法,其特征在于步驟a中所述提取混合溶劑與藥材質(zhì)量比為8-20 I。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種制備高純度貝萼皂苷元的方法,其特征在于步驟b中所述酸水解中所用酸為l-4mol/L鹽酸或硫酸,溫度為65-85°C。
4.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種制備高純度貝萼皂苷元的方法,其特征在于步驟c中所述溶劑系統(tǒng)為正己烷-乙酸乙酯-甲醇-7K,體積比為(10-12) (4-6) (5-10) (1-5)。
5.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種制備高純度貝萼皂苷元的方法,其特征在于步驟c中所述高速逆流色譜儀的主機(jī)轉(zhuǎn)速為850-1000r/min,流動(dòng)相流速為2. 0-4. Oml/min。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種制備高純度貝萼皂苷元的方法,本發(fā)明采用脫脂、提取、酸水解、萃取及高速逆流色譜分離的方法提取的貝萼皂苷元,純度高于95%。本發(fā)明制備方法操作簡(jiǎn)單、分離效率高、產(chǎn)品純度好,適合工業(yè)化生產(chǎn)。
文檔編號(hào)C07J63/00GK102911240SQ20111021872
公開(kāi)日2013年2月6日 申請(qǐng)日期2011年8月2日 優(yōu)先權(quán)日2011年8月2日
發(fā)明者李法慶, 劉東鋒 申請(qǐng)人:蘇州寶澤堂醫(yī)藥科技有限公司
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