專利名稱：一種制備朝藿定c的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種制備朝藿定C的方法，特別是涉及一種利用高速逆流色譜法制備朝藿定C的方法。
背景技術(shù)：
朝藿定(XEpimedin C)，黃酮苷類化合物，熔點179_180°C(甲醇)，分子式C39H5tlO19, 分子量822. 8，分子結(jié)構(gòu)式
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朝藿定c具有顯著增加細胞基質(zhì)鈣、促進骨細胞增殖和增加礦化結(jié)節(jié)鈣作用，同時還具有顯著的免疫促進作用。傳統(tǒng)醫(yī)學認為淫羊藿性味辛甘、溫，有補腎壯陽、祛風除濕的功效?，F(xiàn)代醫(yī)學研究表明淫羊藿中含有大量黃酮類物質(zhì)，具有增強內(nèi)分泌系統(tǒng)的分泌功能、激素樣作用、促進蛋白質(zhì)合成、調(diào)節(jié)細胞代謝、增強免疫功能、抗衰老、降壓、抗血小板聚集、抗炎、抗菌、抗病毒、 袪痰、鎮(zhèn)咳、降糖及性激素樣作用等藥理作用。但淫羊藿又分為檗科植物淫羊藿處i ^// brevicornum Maxim.、箭葉淫羊藿腫 sagittaturn (Sieb. et Zucc. )Maxim.、柔毛 S^e Epimedium pubescens Maxim. >M illS^im Epimedium wushanense Τ· S. Ying 禾口卓月 ^fmMEpimedium koreanum Naka，其中朝藿定C含量差別懸殊，巫山淫羊藿含量最高，同時在《中國藥典-2010版》中規(guī)定朝藿定C作為巫山淫羊藿的指標性成分。由于朝藿定C結(jié)晶較難，純化高含量朝藿定C的工藝較為繁瑣，制備量較小。如專禾Ij (申請?zhí)?00610201222. 5)“朝藿定C對照品的制備方法及其產(chǎn)品”，該專利公開的方法是 45-90%乙醇回流提取，提取液濃縮后，依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯和正丁醇萃取，再進行硅膠柱和聚酰胺分離。專利(申請?zhí)?00710002610. 5)“朝藿定C標準對照品的制備方法”， 該專利公開的方法是乙醇回流提取，乙酸乙酯和乙酸乙酯-甲醇萃取，萃取物用硅膠柱分離后再采用反相硅膠和凝膠柱分離。還有專利(200810229887. 6)“一種朝藿定C化學對照品的分離制備方法”，該專利采用的方法是兩步制備液相分離得到產(chǎn)品。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是為了克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種制備朝藿定C的方法，應(yīng)用高速逆流色譜分離純化，操作簡單，生產(chǎn)周期短。
為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明技術(shù)解決方案如下
一種制備朝藿定C的方法，其特征在于包括以下步驟
1)以巫山淫羊藿為原料，粉碎加入70-90%甲醇溶液微波提取，提取液加活性炭脫色， 脫色液減壓濃縮至無醇加水分散，加入聚酰胺樹脂吸附，甲醇水溶液梯度洗脫，收集目標成分，減壓濃縮，放置沉淀，去除沉淀物，濃縮液干燥，得粗提物；
2)上述粗提物采用高速逆流色譜分離，即得高純度朝藿定C。步驟1)中活性炭可選藥用粉末狀活性炭，用量為液體量的1_2%。步驟1)所述的甲醇溶液梯度洗脫為4-5BV20-30%甲醇洗脫雜質(zhì)，4_5BV40_60%甲醇洗脫有效成分。步驟2)所述的高速逆流色譜的溶劑系統(tǒng)為氯仿、甲醇、水，混合比例4-5:5-7:3， 取上相為流動相，下相為固定相。步驟2)所述的高速逆流色譜分離條件為流動相流速l-3ml/min，主機轉(zhuǎn)速 700-1000rpm,常溫分離，檢測器檢測波長270nm。本發(fā)明優(yōu)點是采用高速逆流色譜分離，是液液分配色譜，分離過程樣品不損失，也不產(chǎn)生廢棄物，制備周期短，制備量大，產(chǎn)品含量高。
下面將結(jié)合具體實施方式
進一步說明本發(fā)明，但本發(fā)明要求保護的范圍并不局限于下列實施方式。
具體實施例方式實施例1
取巫山淫羊藿，取1kg，加10倍量70%甲醇溶液微波提取1小時，濾出液體，再加6倍量甲醇溶液，微波提取1小時，提取液合并加入2%藥用活性炭80°C脫色1小時，濾除活性炭減壓濃縮，濃縮液加水分散，加入聚酰胺樹脂柱吸附，先取5BV20%甲醇溶液洗脫雜質(zhì)，再取5BV40%甲醇溶液洗脫，收集減壓濃縮無醇，放置沉淀，濾出沉淀再濃縮干燥，得到18g粗品。取氯仿、甲醇、水，按比例5:7:3混合，靜置分層后，取下相注入色譜管中做固定相，開啟主機，調(diào)整轉(zhuǎn)速700rpm，泵入上相，平衡后，調(diào)整流速2ml/min，上相溶解粗品，過濾后進樣， 紫外檢測器在波長270nm檢測，收集流分回收試劑，連續(xù)制備，干燥即得到朝藿定C 5. 2g， 經(jīng)HPLC檢測，含量98. 7%。實施例2:
取巫山淫羊藿，取lkg，加6倍量90%甲醇溶液微波提取30分鐘，提取3次，提取液合并加入1%藥用活性炭80°C脫色1小時，濾除活性炭減壓濃縮，濃縮液加水分散，加入聚酰胺樹脂柱吸附，先取4BV30%甲醇溶液洗脫雜質(zhì)，再取4BV60%甲醇溶液洗脫，收集減壓濃縮無醇， 放置沉淀，濾出沉淀再濃縮干燥，得到15g粗品。取氯仿、甲醇、7K，按比例4:5:3混合，靜置分層后，取下相注入色譜管中做固定相，開啟主機，調(diào)整轉(zhuǎn)速IOOOrpm，泵入上相，平衡后，調(diào)整流速lml/min，上相溶解粗品，過濾后進樣，紫 外檢測器在波長270nm檢測，收集流分回收試劑，連續(xù)制備，干燥即得到朝藿定C 4. 2g，經(jīng)HPLC檢測，含量98. 1%。實施例3:
取巫山淫羊藿，取1kg，加10倍量80%甲醇溶液微波提取1小時，濾出液體，再加6倍量甲醇溶液，微波提取1小時，提取液合并加入2%藥用活性炭80°C脫色1小時，濾除活性炭減壓濃縮，濃縮液加水分散，加入聚酰胺樹脂柱吸附，先取5BV30%甲醇溶液洗脫雜質(zhì)，再取5BV50%甲醇溶液洗脫，收集減壓濃縮無醇，放置沉淀，濾出沉淀再濃縮干燥，得到13g粗品。取氯仿、甲醇、水，按比例5:5:3混合，靜置分層后，取下相注入色譜管中做固定相，開啟主機，調(diào)整轉(zhuǎn)速800rpm，泵入上相，平衡后，調(diào)整流速3ml/min，上相溶解粗品，過濾后進樣， 紫外檢測器在波長270nm檢測，收集流分回收試劑，連續(xù)制備，干燥即得到朝藿定C 4. 5g, 經(jīng)HPLC檢測，含量98. 4%
權(quán)利要求
1.一種制備朝藿定C的方法，其特征在于包括以下步驟1)以巫山淫羊藿為原料，粉碎，加入70-90%甲醇溶液微波提取，提取液加活性炭脫色， 脫色液減壓濃縮至無醇加水分散，加入聚酰胺樹脂吸附，甲醇水溶液梯度洗脫，收集目標成分，減壓濃縮，放置沉淀，去除沉淀物，濃縮液干燥，得粗提物；2)上述粗提物采用高速逆流色譜分離，即得高純度朝藿定C。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述制備朝藿定C的方法，其特征在于步驟1)所述的甲醇溶液梯度洗脫為4-5BV20-30%甲醇洗脫雜質(zhì)，4-5BV40-60%甲醇洗脫有效成分。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述制備朝藿定C的方法，其特征在于步驟2)所述的高速逆流色譜的溶劑系統(tǒng)為氯仿、甲醇、水，混合比例4-5:5-7:3，取上相為流動相，下相為固定相。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述制備朝藿定C的方法，其特征在于步驟2)所述的高速逆流色譜分離條件為流動相流速l-3ml/min，主機轉(zhuǎn)速700-1000rpm，常溫分離，檢測器檢測波長 270nm。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種制備朝藿定C的方法。方法包括以下步驟1)以巫山淫羊藿為原料，粉碎加入70-90%甲醇溶液微波提取，提取液加活性炭脫色，脫色液減壓濃縮至無醇加水分散，加入聚酰胺樹脂吸附，甲醇水溶液梯度洗脫，收集目標成分，減壓濃縮，放置沉淀，去除沉淀物，濃縮液干燥，得粗提物；2)上述粗提物采用高速逆流色譜分離，即得高純度朝藿定C。本發(fā)明的工藝簡單易操作，產(chǎn)品收率高、純度高，適合工業(yè)化制備。
文檔編號C07H17/07GK102329357SQ20111021064
公開日2012年1月25日 申請日期2011年7月26日 優(yōu)先權(quán)日2011年7月26日
發(fā)明者劉東鋒, 李法慶 申請人:蘇州寶澤堂醫(yī)藥科技有限公司