專利名稱：一種從結(jié)香中提取分離高純度銀椴苷的新方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于中藥有效成分的提取純化方法，具體而言，涉及一種從結(jié)香中提取分離高純度銀椴苷的新方法。
背景技術(shù)：
結(jié)香系瑞香科(Hiymelaeaceae )結(jié)香屬(Edgeworthia )植物結(jié)香fckemriAia diTM/^Aa，產(chǎn)于河南、陜西及長江流域以南諸省區(qū)，莖皮纖維可做高級紙及人造棉原料。 民間常以結(jié)香的根與花入藥，花常作密蒙花的代用品，具有養(yǎng)陰安神，明目，祛障翳之功效， 用于治療青盲、翳障、多淚、夢遺、虛淋、失音。有文獻從結(jié)香花中分離出香豆素、黃酮、有機酸、氮雜環(huán)等多類化合物。銀椴苷(Tiliroside)，為黃色針晶，mp.215_217°C，分子式 C3tlH26O13，分子量 594. 52。銀椴苷具有較強的抗氧化活性、清除自由基活性和抗炎活性，對補體系統(tǒng)的傳統(tǒng)途徑顯示出非常有潛力的抗補體活性(IC50=5.4X10-5M)，其活性甚至比公認的補體系統(tǒng)抑制劑迷迭香酸活性還強。另有文獻報道銀椴苷及全乙?；苌锞哂幸欢ǖ膶Π籽“┘毎亩拘宰饔?。銀椴苷還具有強的護肝作用。筱雅研究發(fā)現(xiàn)銀椴苷和鼠尾草黃素能夠抑制人低密度脂蛋白氧化?，F(xiàn)常采用醇提、非極性溶劑萃取、反復(fù)柱層析等從結(jié)香等植物中分離得到銀椴苷。陳鋼在碩士論文“結(jié)香和溫郁金化學(xué)成分的研究”中采用10倍量工業(yè)酒精冷浸一周，濾液回收至無醇味，補加水過濾，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇梯度萃取， 再通過硅膠柱粗分、Sephadex LH-20柱層析、高速逆流色譜純化等步驟分離得到各成分，以正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水(3:7:4:6)溶劑系統(tǒng)分離得到銀椴苷，該方法經(jīng)過多次柱層析，樣品損失較大。中國專利(公開號CN1733788A) “一種從結(jié)香花中提取分離銀椴苷的方法”，采用60-100%甲醇或乙醇溶液浸提或回流提取，提取液水洗后用脂溶性溶劑回流萃取， 得到的濾餅重結(jié)晶得到產(chǎn)品，用到毒害性有機溶劑，造成溶劑殘留，產(chǎn)品質(zhì)量差。本發(fā)明克服了現(xiàn)有技術(shù)中的不足，提供給了一種從結(jié)香中提取分離高純度銀椴苷的新方法。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種從結(jié)香中提取分離高純度銀椴苷的新方法，成品中銀椴苷含量高，采用高效液相色譜法測定銀椴苷為98%以上。為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案
一種從結(jié)香中提取分離高純度銀椴苷的新方法，其特征在于包括下述步驟(1)提取液的制備將粉碎的結(jié)香花采用60-100%的甲醇或乙醇溶液超聲提取，提取2-3次，合并提取液備用；(2)膜濾將上述提取液先用振動式過濾器濾除泥沙等雜質(zhì)，再通過超濾膜裝置除去大分子多糖、鞣質(zhì)等，得到透過液；(3)大孔樹脂柱層析透過液加活性炭脫色，脫色液減壓濃縮至無醇，加水分散，加入大孔樹脂柱吸附，用3-5倍柱體積的30%-80%乙醇水溶液洗脫，收集目標成分，減壓濃縮，離心，將清液干燥，得粗提物；(4)高速逆流色譜純化以乙酸乙酯-正丁醇-水或正己烷-正丁醇-甲醇-水或正己烷-甲酸乙酯-乙腈-水為溶劑系統(tǒng)，以上相為固定相，下相為流動相，將上述得到的粗提物應(yīng)用高速逆流色譜法進行分離純化，即得到高純度的銀椴苷。步驟(2)中超濾膜為中空超濾膜，材質(zhì)可選聚偏氟乙烯(PVDF)、聚丙烯(PP)或聚醚砜(PES)中的一種。步驟(4)中的溶劑系統(tǒng)乙酸乙酯-正丁醇-水體積比為(3-10): (1-4): (3-10), 優(yōu)選體積比為(4-6) (1-2) (4-6)。步驟⑷中的溶劑系統(tǒng)正己烷-正丁醇-甲醇-水體積比為(1-5) (3-6) (1-4) (4-8)，優(yōu)先體積比為(1-2) :(3-4) :(1-2) (5-6)。步驟(4)中的溶劑系統(tǒng)正己烷-甲酸乙酯-乙腈-水體積比為0-5): (2-5) (1-4) (2-5)，優(yōu)選體積比為(4-5) :(4-5) :(2-3) (3-5)。采用上述技術(shù)方案的有益效果是本發(fā)明采用超濾膜技術(shù)過濾除雜，比傳統(tǒng)加熱蒸發(fā)濃縮節(jié)能；采用高速逆流色譜法進行銀椴苷的分離純化，與以往技術(shù)手段相比，具有分離能力強、分離時間短、樣品損失小、產(chǎn)品質(zhì)量高等優(yōu)點。
具體實施例方式下面結(jié)合具體實施例對本發(fā)明作進一步說明，但本發(fā)明并不限于以下實施例。實施例1
取2kg結(jié)香花粉碎過10目篩，加入5倍量70%乙醇超聲提取1小時，提取3次，合并提取液，先用振動篩式過濾器連續(xù)濾除泥沙等物理雜質(zhì)，再用中空聚丙烯超濾膜顧慮，透過液加m活性炭攪拌脫色，脫色液減壓濃縮至無醇，加水分散，加入AB-8大孔吸附樹脂柱吸附， 先用4BV30%乙醇洗脫，再用5BV75%乙醇洗脫有效成分，收集目標成分減壓濃縮，離心，將離心液干燥，得到24g粗提物。取乙酸乙酯、正丁醇、水按比例5:2:5混合，靜置分層，兩相分別超聲脫氣30分鐘， 取上相為固定相，下相為流動相。將固定相以5ml/min的流速泵入高速逆流色譜分離柱中， 啟動高速逆流色譜主機，調(diào)節(jié)分離柱轉(zhuǎn)速為850rpm，將流動相以3ml/min的流速泵入，分離柱的溫度調(diào)至25°C。將IOOmg銀椴苷粗提物溶于5ml上相和5ml下相組成的溶劑中作為樣品溶液備用，待分離柱達到平衡，將樣品溶液注入進樣閥中，檢測波長為2Mnm，使用分步收集器收集流出組分，根據(jù)色譜工作站譜圖將同組分收集液合并，低溫真空濃縮至干，得到銀椴苷，經(jīng)HPLC檢測、核磁共振進行結(jié)構(gòu)確認，銀椴苷的含量為98. 6%。實施例2:
取2kg結(jié)香花粉碎過20目篩，加入4倍量60%乙醇超聲提取2小時，提取3次，合并提取液，先用振動篩式過濾器連續(xù)濾除泥沙等物理雜質(zhì)，再用中空聚偏氟乙烯超濾膜顧慮， 透過液加4%活性炭攪拌脫色，脫色液減壓濃縮至無醇，加水分散，加入AB-8大孔吸附樹脂柱吸附，先用5BV40%乙醇洗脫，再用4BV80%乙醇洗脫有效成分，收集目標成分減壓濃縮，離心，將離心液干燥，得到22g粗提物。取正己烷、正丁醇、甲醇、水按比例1:4:2:5混合，靜置分層，兩相分別超聲脫氣30 分鐘，取上相為固定相，下相為流動相。將固定相以5ml/min的流速泵入高速逆流色譜分離柱中，啟動高速逆流色譜主機，調(diào)節(jié)分離柱轉(zhuǎn)速為850rpm，將流動相以3ml/min的流速泵入，分離柱的溫度調(diào)至20°C。將120mg銀椴苷粗提物溶于5ml上相和5ml下相組成的溶劑中作為樣品溶液備用，待分離柱達到平衡，將樣品溶液注入進樣閥中，檢測波長為2Mnm，使用分步收集器收集流出組分，根據(jù)色譜工作站譜圖將同組分收集液合并，低溫真空濃縮至干，得到銀椴苷，經(jīng)HPLC檢測、核磁共振進行結(jié)構(gòu)確認，銀椴苷的含量為98. 4%。實施例3:
取5kg結(jié)香花粉碎過20目篩，加入5倍量80%甲醇超聲提取1.5小時，提取2次，合并提取液，先用振動篩式過濾器連續(xù)濾除泥沙等物理雜質(zhì)，再用中空聚醚砜超濾膜顧慮，透過液加3. 5%活性炭攪拌脫色，脫色液減壓濃縮至無醇，加水分散，加入AB-8大孔吸附樹脂柱吸附，先用3BV30%乙醇洗脫，再用5BV80%乙醇洗脫有效成分，收集目標成分減壓濃縮，離心，將離心液干燥，得到56g粗提物。取正己烷、甲酸乙酯、乙腈、水按比例5:5:2:4混合，靜置分層，兩相分別超聲脫氣 30分鐘，取上相為固定相，下相為流動相。將固定相以5ml/min的流速泵入高速逆流色譜分離柱中，啟動高速逆流色譜主機，調(diào)節(jié)分離柱轉(zhuǎn)速為800rpm，將流動相以2ml/min的流速泵入，分離柱的溫度調(diào)至25°C。將150mg銀椴苷粗提物溶于IOml上相和IOml下相組成的溶劑中作為樣品溶液備用，待分離柱達到平衡，將樣品溶液注入進樣閥中，檢測波長為2Mnm， 使用分步收集器收集流出組分，根據(jù)色譜工作站譜圖將同組分收集液合并，低溫真空濃縮至干，得到銀椴苷，經(jīng)HPLC檢測、核磁共振進行結(jié)構(gòu)確認，銀椴苷的含量為98. 5%。實施例4:
取5kg結(jié)香花粉碎過10目篩，加入4倍量90%甲醇超聲提取2小時，提取3次，合并提取液，先用振動篩式過濾器連續(xù)濾除泥沙等物理雜質(zhì)，再用中空聚偏氟乙烯超濾膜顧慮， 透過液加3%活性炭攪拌脫色，脫色液減壓濃縮至無醇，加水分散，加入AB-8大孔吸附樹脂柱吸附，先用3BV45%乙醇洗脫，再用5BV80%乙醇洗脫有效成分，收集目標成分減壓濃縮，離心，將離心液干燥，得到53g粗提物。取正己烷、正丁醇、甲醇、水按比例2:3:1:6混合，靜置分層，兩相分別超聲脫氣30 分鐘，取上相為固定相，下相為流動相。將固定相以5ml/min的流速泵入高速逆流色譜分離柱中，啟動高速逆流色譜主機，調(diào)節(jié)分離柱轉(zhuǎn)速為800rpm，將流動相以3ml/min的流速泵入，分離柱的溫度調(diào)至30°C。將150mg銀椴苷粗提物溶于IOml上相和IOml下相組成的溶劑中作為樣品溶液備用，待分離柱達到平衡，將樣品溶液注入進樣閥中，檢測波長為2Mnm， 使用分步收集器收集流出組分，根據(jù)色譜工作站譜圖將同組分收集液合并，低溫真空濃縮至干，得到銀椴苷，經(jīng)HPLC檢測、核磁共振進行結(jié)構(gòu)確認，銀椴苷的含量為98. 8%。實施例5
取IOkg結(jié)香花粉碎過10目篩，加入5倍量75%甲醇超聲提取1小時，提取2次，合并提取液，先用振動篩式過濾器連續(xù)濾除泥沙等物理雜質(zhì)，再用中空聚醚砜超濾膜顧慮，透過液加2、活性炭攪拌脫色，脫色液減壓濃縮至無醇，加水分散，加入AB-8大孔吸附樹脂柱吸附，先用4BV35%乙醇洗脫，再用4BV75%乙醇洗脫有效成分，收集目標成分減壓濃縮，離心， 將離心液干燥，得到120g粗提物。取正己烷、甲酸乙酯、乙腈、水按比例4:4:3:5混合，靜置分層，兩相分別超聲脫氣 30分鐘，取上相為固定相，下相為流動相。將固定相以5ml/min的流速泵入高速逆流色譜分離柱中，啟動高速逆流色譜主機，調(diào)節(jié)分離柱轉(zhuǎn)速為850rpm，將流動相以2ml/min的流速泵入，分離柱的溫度調(diào)至30°C。將150mg銀椴苷粗提物溶于IOml上相和IOml下相組成的溶劑中作為樣品溶液備用，待分離柱達到平衡，將樣品溶液注入進樣閥中，檢測波長為2Mnm， 使用分步收集器收集流出組分，根據(jù)色譜工作站譜圖將同組分收集液合并，低溫真空濃縮至干，得到銀椴苷，經(jīng)HPLC檢測、核磁共振進行結(jié)構(gòu)確認，銀椴苷的含量為98. 3%。
權(quán)利要求
1.一種從結(jié)香中提取分離高純度銀椴苷的新方法，其特征在于包括下述步驟(1)提取液的制備將粉碎的結(jié)香花采用醇溶液超聲提取，提取液備用；(2)膜濾將上述提取液先用振動式過濾器濾除泥沙等雜質(zhì)，再通過超濾膜裝置除去大分子多糖、鞣質(zhì)等，得到透過液；(3)大孔樹脂柱層析透過液加活性炭脫色，脫色液減壓濃縮至無醇，加水分散，加入大孔樹脂柱吸附，乙醇水溶液洗脫，收集目標成分，減壓濃縮，離心，將清液干燥，得粗提物； (4)高速逆流色譜純化以乙酸乙酯-正丁醇-水或正己烷-正丁醇-甲醇-水或正己烷-甲酸乙酯-乙腈-水為溶劑系統(tǒng)，以上相為固定相，下相為流動相，將上述得到的粗提物應(yīng)用高速逆流色譜法進行分離純化，即得到高純度的銀椴苷。
2.如權(quán)利要求1所述的新方法，其特征在于步驟(2)中超濾膜為中空超濾膜，材質(zhì)可選聚偏氟乙烯(PVDF)、聚丙烯(PP)或聚醚砜(PES)中的一種。
3.如權(quán)利要求1所述的新方法，其特征在于步驟(4)中的溶劑系統(tǒng)乙酸乙酯-正丁醇-水體積比為(3-10) (1-4) (3-10)。
4.如權(quán)利要求1所述的新方法，其特征在于步驟(4)中的溶劑系統(tǒng)正己烷-正丁醇-甲醇-水體積比為(1-5) (3-6) (1-4) (4-8)。
5.如權(quán)利要求1所述的新方法，其特征在于步驟(4)中的溶劑系統(tǒng)正己烷-甲酸乙酯-乙腈-水體積比為(2-5) (2-5) (1-4) (2-5)。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種從結(jié)香中提取分離高純度銀椴苷的新方法，包括提取、超濾、脫色、大孔樹脂柱層析、高速逆流色譜分離純化、濃縮和干燥等步驟進行分離制備高純度的銀椴苷。本發(fā)明工藝穩(wěn)定，產(chǎn)品中銀椴苷含量高，采用高效液相色譜法測定銀椴苷的含量達97%以上。
文檔編號C07H17/07GK102311467SQ201110187430
公開日2012年1月11日 申請日期2011年7月6日 優(yōu)先權(quán)日2011年7月6日
發(fā)明者蘇劉花 申請人:南京澤朗農(nóng)業(yè)發(fā)展有限公司