專(zhuān)利名稱(chēng)：重樓皂苷Ⅰ的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及重樓皂苷I的制備方法。
背景技術(shù)：
重樓，又稱(chēng)七葉一枝花，是百合科重樓屬植物的泛稱(chēng)，以蚤體之名首載于《神農(nóng)本草經(jīng)》。本品味苦，性微寒，有小毒，歸肝經(jīng)，具有清熱解毒、消腫止痛、涼肝定驚之功效，用于癰瘡、咽喉腫痛、毒蛇咬傷、跌打傷痛、涼風(fēng)抽筋等癥。關(guān)于重樓總皂苷的抗腫瘤作用的文獻(xiàn)報(bào)道很多。中國(guó)中藥雜志，2008,33(16) :2057-2060公開(kāi)了滇重樓皂苷對(duì)10種腫瘤細(xì)胞株的細(xì)胞毒譜及構(gòu)效關(guān)系研究；王羽等在中國(guó)中藥雜志，2007，32 (14) =1425-1428)發(fā)表了滇重樓的抗腫瘤活性成分研究；程志祥等對(duì)重樓總皂苷作用人肝癌細(xì)胞系HepG2的細(xì)胞毒性作用及蛋白組學(xué)進(jìn)行了研究。重樓皂苷I (薯蕷皂苷元-3-0-α-L-阿拉伯糖基 (1 — 4)-[a-L-鼠李糖基(1 —幻]_β-D-葡萄糖苷)是總皂苷中含量最大的皂苷，有研究發(fā)現(xiàn)重樓皂苷I在0. 31-5pg/ml濃度范圍內(nèi)對(duì)Bel_7402細(xì)胞的增殖均有抑制作用，并呈現(xiàn)出明顯的時(shí)間劑量依賴(lài)效應(yīng)關(guān)系。重樓皂苷I能誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡，流式檢測(cè)在濃度為1. 25/ml作用后可出現(xiàn)明顯的凋亡峰，作用時(shí)間越長(zhǎng)，凋亡率越高；DNA凝膠電泳可見(jiàn)DNA斷裂片段明顯增多；重樓皂苷 I對(duì)A549肺癌細(xì)胞的增殖也有很強(qiáng)的抑制作用。同時(shí)，中國(guó)專(zhuān)利20081017M16. 6公布了一種重樓皂苷I的制備方法，但是該方法有機(jī)溶劑使用量大，污染環(huán)境，消耗能源，且步驟繁瑣。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種重樓皂苷I的制備方法。重樓皂苷I的制備方法，由如下步驟組成(1)取重樓，用體積百分濃度為60% -85%的乙醇水溶液浸泡、加熱回流提取，所述乙醇水溶液的重量為重樓重量的4 10倍，提取2 3次，每次1 3小時(shí)，過(guò)濾；(2)過(guò)濾液減壓濃縮至室溫下相對(duì)密度為0. 93 1. 0，離心，得到上清液和沉淀， 沉淀作為樣品A ；(3)上清液通過(guò)大孔吸附樹(shù)脂柱，依次用體積百分濃度為50% 60%的乙醇水溶液、70 % 85 %的乙醇水溶液洗脫，收集70 % -85 %的乙醇水溶液的洗脫液，減壓濃縮至 25°C相對(duì)密度為1. 5，作為樣品B ；(4)將樣品A與B混合，用柱層層析正相硅膠色譜柱進(jìn)行純化，得到重樓皂苷I即薯蕷皂苷元-3-0-α-L-阿拉伯糖基(1 —4)-[a_L-鼠李糖基(1 — 2) ] - β-D-葡萄糖苷。所述大孔吸附樹(shù)脂為弱極性或非極性的聚苯乙烯型樹(shù)脂。所述弱極性聚苯乙烯型大孔吸附樹(shù)脂的型號(hào)為ΑΒ-8或DM130。所述非極性聚苯乙烯型大孔吸附樹(shù)脂的型號(hào)為D101、X_5、HPD-100或D1300。
本發(fā)明的方法有機(jī)溶劑用量少，不污染環(huán)境，節(jié)約成本，適合工業(yè)生產(chǎn)，重樓皂苷I 的得率為不小于藥材重量的0. 05%，回收率不低于60%，純度不低于90%。
具體實(shí)施例方式下面的實(shí)施例可以使本領(lǐng)域的技術(shù)人員理解本發(fā)明，但不以任何方式限制本發(fā)明。實(shí)施例1重樓皂苷I的制備方法，由如下步驟組成(1)取重樓，用體積百分濃度為60%的乙醇水溶液浸泡、加熱回流提取，所述乙醇水溶液的重量為重樓重量的4倍，提取3次，每次1小時(shí)，過(guò)濾；(2)過(guò)濾液減壓濃縮至室溫下相對(duì)密度為1. 0，離心，得到上清液和沉淀，沉淀作為樣品A;(3)上清液通過(guò)X-5型大孔吸附樹(shù)脂柱(干樹(shù)脂重量重樓藥材重量 1:4)， 依次用1. 5倍樹(shù)脂床體積(BV)的體積百分濃度為50%的乙醇水溶液、3BV的體積百分濃度為70%的乙醇水溶液洗脫，收集70%的乙醇水溶液的洗脫液，減壓濃縮至25°C相對(duì)密度為 1.5，作為樣品B;(4)將樣品A與B混合，加入等重量的硅膠并混合均勻，減壓干燥，得拌樣硅膠；將拌樣硅膠填入裝有為其重量20倍柱層層析正相硅膠的色譜柱的頂端，用體積比為78 22 的二氯甲烷、甲醇混合溶劑進(jìn)行洗脫，用硅膠G板對(duì)洗脫液在線(xiàn)進(jìn)行檢測(cè)，收集含有重樓皂苷I的洗脫液，減壓濃縮、干燥。即得重樓皂苷I即薯蕷皂苷元-3-0-a-L-阿拉伯糖基 (1 — 4)-[a-L-鼠李糖基(1 —幻]_ β -D-葡萄糖苷。重樓皂苷I的得率為不小于藥材重量的0.05%，回收率大于60 %，純度高于90 %。實(shí)施例2重樓皂苷I的制備方法，由如下步驟組成(1)取重樓，用體積百分濃度為65%的乙醇水溶液浸泡、加熱回流提取，所述乙醇水溶液的重量為重樓重量的6倍，提取2次，每次3小時(shí)，過(guò)濾；(2)過(guò)濾液減壓濃縮至室溫下相對(duì)密度為0. 95，離心，得到上清液和沉淀，沉淀作為樣品Α;(3)上清液通過(guò)DlOl型大孔吸附樹(shù)脂柱(干樹(shù)脂重量重樓藥材重量 1:4)， 依次用1. 2倍樹(shù)脂床體積(BV)的體積百分濃度為55%的乙醇水溶液、2. 5BV的體積百分濃度為75%的乙醇水溶液洗脫，收集75%的乙醇水溶液的洗脫液，減壓濃縮至25°C相對(duì)密度為1.5，作為樣品B;(4)將樣品A與B混合，加入等重量的硅膠并混合均勻，減壓干燥，得拌樣硅膠；將拌樣硅膠填入裝有為其重量30倍柱層層析正相硅膠的色譜柱的頂端，用體積比為78 22 的二氯甲烷、甲醇混合溶劑進(jìn)行洗脫，用硅膠G板對(duì)洗脫液在線(xiàn)進(jìn)行檢測(cè)，收集含有重樓皂苷I的洗脫液，減壓濃縮、干燥。即得重樓皂苷I即薯蕷皂苷元-3-0-a-L-阿拉伯糖基 (1 — 4)-[a-L-鼠李糖基(1 —幻]_β -D-葡萄糖苷。重樓皂苷I的得率為不小于藥材重量的0.05%，回收率大于60 %，純度高于90 %。實(shí)施例3
重樓皂苷I的制備方法，由如下步驟組成(1)取重樓，用體積百分濃度為70%的乙醇水溶液浸泡、加熱回流提取，所述乙醇水溶液的重量為重樓重量的8倍，提取2次，每次3小時(shí)，過(guò)濾；(2)過(guò)濾液減壓濃縮至室溫下相對(duì)密度為0. 97，離心，得到上清液和沉淀，沉淀作為樣品A;(3)上清液通過(guò)AB-8型大孔吸附樹(shù)脂柱(干樹(shù)脂重量重樓藥材重量 1:4)， 依次用1倍樹(shù)脂床體積(BV)的體積百分濃度為60%的乙醇水溶液、2. 5BV的體積百分濃度為80%的乙醇水溶液洗脫，收集80%的乙醇水溶液的洗脫液，減壓濃縮至25°C相對(duì)密度為 1.5，作為樣品B;(4)將樣品A與B混合，加入等重量的硅膠并混合均勻，減壓干燥，得拌樣硅膠；將拌樣硅膠填入裝有為其重量40倍柱層層析正相硅膠的色譜柱的頂端，用體積比為78 22 的二氯甲烷、甲醇混合溶劑進(jìn)行洗脫，用硅膠G板對(duì)洗脫液在線(xiàn)進(jìn)行檢測(cè)，收集含有重樓皂苷I的洗脫液，減壓濃縮、干燥。即得重樓皂苷I即薯蕷皂苷元-3-0-a-L-阿拉伯糖基 (1 — 4)-[a-L-鼠李糖基(1 —幻]_ β -D-葡萄糖苷。重樓皂苷I的得率為不小于藥材重量的0.05%，回收率大于60 %，純度高于90 %。實(shí)施例4重樓皂苷I的制備方法，由如下步驟組成(1)取重樓，用體積百分濃度為75%的乙醇水溶液浸泡、加熱回流提取，所述乙醇水溶液的重量為重樓重量的8倍，提取3次，每次2小時(shí)，過(guò)濾；(2)過(guò)濾液減壓濃縮至室溫下相對(duì)密度為0. 98，離心，得到上清液和沉淀，沉淀作為樣品Α;(3)上清液通過(guò)DM130型大孔吸附樹(shù)脂柱(干樹(shù)脂重量重樓藥材重量 1:4)， 依次用1.3倍樹(shù)脂床體積(BV)的體積百分濃度為55%的乙醇水溶液、2. 5BV的體積百分濃度為75%的乙醇水溶液洗脫，收集75%的乙醇水溶液的洗脫液，減壓濃縮至25°C相對(duì)密度為1.5，作為樣品B;(4)將樣品A與B混合，加入等重量的硅膠并混合均勻，減壓干燥，得拌樣硅膠；將拌樣硅膠填入裝有為其重量50倍柱層層析正相硅膠的色譜柱的頂端，用體積比為78 22 的二氯甲烷、甲醇混合溶劑進(jìn)行洗脫，用硅膠G板對(duì)洗脫液在線(xiàn)進(jìn)行檢測(cè)，收集含有重樓皂苷I的洗脫液，減壓濃縮、干燥。即得重樓皂苷I即薯蕷皂苷元-3-0-a-L-阿拉伯糖基 (1 — 4)-[a-L-鼠李糖基(1 —幻]_ β -D-葡萄糖苷。重樓皂苷I的得率為不小于藥材重量的0.05%，回收率大于60 %，純度高于90 %。實(shí)施例5重樓皂苷I的制備方法，由如下步驟組成(1)取重樓，用體積百分濃度為80%的乙醇水溶液浸泡、加熱回流提取，所述乙醇水溶液的重量為重樓重量的9倍，提取3次，每次1小時(shí)，過(guò)濾；(2)過(guò)濾液減壓濃縮至室溫下相對(duì)密度為0. 96，離心，得到上清液和沉淀，沉淀作為樣品Α;(3)上清液通過(guò)HPD-100型大孔吸附樹(shù)脂柱，(干樹(shù)脂重量重樓藥材重量 ^ 1 4)，依次用1倍樹(shù)脂床體積(BV)的體積百分濃度為60%的乙醇水溶液、2BV的體積百分濃度為80%的乙醇水溶液洗脫，收集80%的乙醇水溶液的洗脫液，減壓濃縮至25°C相對(duì)密度為1.5，作為樣品B;(4)將樣品A與B混合，加入等重量的硅膠并混合均勻，減壓干燥，得拌樣硅膠；將拌樣硅膠填入裝有為其重量60倍柱層層析正相硅膠的色譜柱的頂端，用體積比為78 22 的二氯甲烷、甲醇混合溶劑進(jìn)行洗脫，用硅膠G板對(duì)洗脫液在線(xiàn)進(jìn)行檢測(cè)，收集含有重樓皂苷I的洗脫液，減壓濃縮、干燥。即得重樓皂苷I即薯蕷皂苷元-3-0-a-L-阿拉伯糖基 (1 — 4)-[a-L-鼠李糖基(1 —幻]_ β -D-葡萄糖苷。重樓皂苷I的得率為不小于藥材重量的0.05%，回收率大于60 %，純度高于90 %。實(shí)施例6(1)取重樓，用體積百分濃度為85%的乙醇水溶液浸泡、加熱回流提取，所述乙醇水溶液的重量為重樓重量的10倍，提取2次，每次2小時(shí)，過(guò)濾；(2)過(guò)濾液減壓濃縮至室溫下相對(duì)密度為0. 93，離心，得到上清液和沉淀，沉淀作為樣品Α;(3)上清液通過(guò)D1300型大孔吸附樹(shù)脂柱，(干樹(shù)脂重量重樓藥材重量 ^ 1 4)，依次用1.5倍樹(shù)脂床體積(BV)的體積百分濃度為55%的乙醇水溶液、2BV的體積百分濃度為85%的乙醇水溶液洗脫，收集85%的乙醇水溶液的洗脫液，減壓濃縮至25°C 相對(duì)密度為1.5，作為樣品B;(4)將樣品A與B混合，加入等重量的硅膠并混合均勻，減壓干燥，得拌樣硅膠；將拌樣硅膠填入裝有為其重量50倍柱層層析正相硅膠的色譜柱的頂端，用體積比為78 22 的二氯甲烷、甲醇混合溶劑進(jìn)行洗脫，用硅膠G板對(duì)洗脫液在線(xiàn)進(jìn)行檢測(cè)，收集含有重樓皂苷I的洗脫液，減壓濃縮、干燥。即得重樓皂苷I即薯蕷皂苷元-3-0-a-L-阿拉伯糖基 (1 — 4)-[a-L-鼠李糖基(1 —幻]_ β -D-葡萄糖苷。重樓皂苷I的得率為不小于藥材重量的0.05%，回收率大于60 %，純度高于90 %。
權(quán)利要求
1.重樓皂苷I的制備方法，其特征由如下步驟組成(1)取重樓，用體積百分濃度為60%-85%的乙醇水溶液浸泡、加熱回流提取，所述乙醇水溶液的重量為重樓重量的4 10倍，提取2 3次，每次1 3小時(shí)，過(guò)濾；(2)過(guò)濾液減壓濃縮至室溫下相對(duì)密度為0.93 1. 0，離心，得到上清液和沉淀，沉淀作為樣品A ；(3)上清液通過(guò)大孔吸附樹(shù)脂柱，依次用體積百分濃度為50% 60%的乙醇水溶液、 70 % 85 %的乙醇水溶液洗脫，收集70 % -85 %的乙醇水溶液的洗脫液，減壓濃縮至25 V 相對(duì)密度為1.5，作為樣品B;(4)將樣品A與B混合，用柱層層析正相硅膠色譜柱進(jìn)行純化，得到重樓皂苷I即薯蕷皂苷元-3-0-α-L-阿拉伯糖基(1 —4)-[a_L-鼠李糖基(1 — 2) ] - β-D-葡萄糖苷。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的重樓皂苷I的制備方法，其特征在于所述大孔吸附樹(shù)脂為弱極性或非極性的聚苯乙烯型樹(shù)脂。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的重樓皂苷I的制備方法，其特征在于所述弱極性聚苯乙烯型大孔吸附樹(shù)脂的型號(hào)為ΑΒ-8或DM130。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的重樓皂苷I的制備方法，其特征在于所述非極性聚苯乙烯型大孔吸附樹(shù)脂的型號(hào)為D101、X-5、HPD-100或D1300。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種重樓皂苷I的制備方法，由如下步驟組成(1)取重樓，用乙醇水溶液浸泡、加熱回流提取，過(guò)濾；(2)過(guò)濾液減壓濃縮，離心，得到上清液和沉淀，沉淀作為樣品A；(3)上清液通過(guò)大孔吸附樹(shù)脂柱，用乙醇水溶液洗脫，收集70％-85％的乙醇水溶液的洗脫液，減壓濃縮，作為樣品B；(4)將樣品A與B混合，用柱層層析正相硅膠色譜柱進(jìn)行純化，得到重樓皂苷I即薯蕷皂苷元-3-O-α-L-阿拉伯糖基(1→4)-[a-L-鼠李糖基(1→2)]-β-D-葡萄糖苷。本發(fā)明的方法有機(jī)溶劑用量少，不污染環(huán)境，節(jié)約成本，適合工業(yè)生產(chǎn)。
文檔編號(hào)C07J71/00GK102199185SQ201110079220
公開(kāi)日2011年9月28日 申請(qǐng)日期2011年3月30日 優(yōu)先權(quán)日2011年3月30日
發(fā)明者武珊珊, 滿(mǎn)淑麗, 王潔銀, 高文遠(yuǎn) 申請(qǐng)人:天津大學(xué)