專利名稱：：重樓皂苷提取液的除雜純化方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種含植物有效成分的提取液的除雜純化方法。技術(shù)背景無機(jī)陶瓷膜分離技術(shù)作為一項現(xiàn)代純化技術(shù)，在植物及中藥材分離除雜領(lǐng)域中己表現(xiàn)出極好的發(fā)展前景，涉及注射液、口服液、浸膏、藥酒等劑型的制備，藥液的除菌、除熱原等方面經(jīng)無機(jī)陶瓷膜微濾得到的透過液都能使產(chǎn)品達(dá)到質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)要求。除此之外，還有人用無機(jī)陶瓷膜對料液進(jìn)行預(yù)處理，收集透過液上大孔樹脂柱，除去提取料液的多糖、果膠、淀粉、纖維等難溶性成分，可以使料液在柱中流暢不易結(jié)塊，達(dá)到除雜目的。該工藝涉及到兩個工藝過程，效率不是很高。除此之處有人也用其它一些方法，開展提取液的除雜工藝研究，如醇沉、水沉、加絮凝劑等。各種新方法都在不斷進(jìn)行嘗試研究，并使工藝流程更加高效、經(jīng)濟(jì)。隨著科技的進(jìn)步，提取液除雜純化工藝有多種技術(shù)方案。CN1481857專利僅涉及到"重樓皂苷的提取方法"，CN14卯320專利公開了"重樓總皂苷的制備方法"，其中提到的膜過濾過程，只是利用膜的過濾性能，除顆粒性雜質(zhì)；CN1927230專利公開"一種單味中藥或中藥復(fù)方有效部分的提取純化方法"，所提到的純化方法主要強(qiáng)調(diào)了大孔樹脂除雜純化工藝過程；CN1364864專利公開了"一種利用陶瓷膜的生物發(fā)酵液分離方法"，描述了陶瓷膜微濾單元流出的透過液即為未濃縮的產(chǎn)物；CN1528768專利公開了"膜集成技術(shù)處理薯蕷皂素廢水并回收葡萄糖和鹽酸的方法"，所用膜為有機(jī)納濾膜，目的是除提取液中的鹽酸；CN1364864專利公開了"一種陶瓷膜處理洗毛廢水回收羊毛脂的方法"，利用陶瓷膜循環(huán)過濾系統(tǒng)過濾濃縮珠毛廢水，得到的濃縮液引入粗分離心機(jī)，分離出不含泥砂的粗羊毛脂，這雖強(qiáng)調(diào)了過濾過程，是為了進(jìn)行固液分離。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)的缺陷，提供一種利用物質(zhì)的溶解性以及無機(jī)陶瓷膜的微濾特性，能夠有效地進(jìn)行雜質(zhì)分離的重樓皂苷提取液的除雜純化方法。本發(fā)明所述的重樓皂苷提取液的除雜純化方法由以下步驟組成一、將重樓屬植物，碎成粗粉，經(jīng)溶媒提取后過濾除去殘渣及雜質(zhì)，得到重樓皂苷粗提取液，所述溶媒為水和有機(jī)溶劑甲醇、乙醇、丙酮、正丁醇、乙酸乙酯、三氯甲垸中的一種或幾種的混合物；二、將步驟(一)的粗提取液濃縮成密度在25"C時為1.011.05的懸濁液;三、將懸濁液用無機(jī)陶瓷膜過濾，無機(jī)陶瓷膜材質(zhì)為二氧化鋯膜，膜孔徑為0.050.2um，得截留液和透過液，收集截留液，截留液濃縮、干燥，即得經(jīng)除雜純化的重樓皂苷提取物；步驟(二)所述的懸濁液是將重樓皂苷粗提取液進(jìn)行濃縮，使?jié)饪s后的體積升為所用重樓屬植物公斤重量的28倍，同時使?jié)饪s液中有機(jī)溶劑的體積百分比濃度《10%;每升濃縮液加入淀粉酶或果膠酶15g，即得所需的懸濁液。所述的重樓屬植物為南重樓、北重樓、云南重樓、毛葉重樓、巴山重樓、花葉重樓、七葉一枝花、黑籽重樓、短梗重樓等的干燥根莖。經(jīng)過陶瓷膜微濾處理，呈顆粒狀的皂苷類有效成分保留在截留液中，而溶解在懸濁液中的多糖、淀粉、果膠等雜質(zhì)則通過膜進(jìn)入到透過液，從而達(dá)到除雜純化的目的。由于透過液中也會含有少部分皂苷類有效成分，為了提高得率，可以對透過液進(jìn)行進(jìn)一步處理步驟四、將步驟(三)所得的透過液，上D—lOl型大孔樹脂柱吸附，用24倍柱體積的蒸餾水洗脫，洗脫液棄去，再用24倍柱體積的75%95%乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液，乙醇洗脫液與步驟(三)得到的截留液合并，濃縮，干燥，得重樓皂苷提取物。本發(fā)明方法是對重樓皂苷提取液的除雜純化方法，重樓皂苷粗提取液為上述重樓屬植物經(jīng)溶媒提取后得到的溶液，重樓屬植物經(jīng)常規(guī)方法提取，如加熱回流提取、浸漬提取或滲漉提取，提取液過滹除去泥沙及藥渣得到重樓皂苷粗提取液，經(jīng)濃縮后過二氧化鋯陶瓷膜得到的截留液即為經(jīng)除雜純化的重樓皂苷提取液。'為提高采用本發(fā)明方法制備重樓皂苷的提取率，還可以將上述方法中經(jīng)陶瓷膜過濾的透過液經(jīng)大孔樹脂柱吸附，用柱體積24倍的蒸餾水洗脫，棄去洗脫液，再用24倍柱體積的75%95%乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液，與過陶瓷膜的截留液合并，濃縮，干燥，得到經(jīng)除雜純化的重樓皂苷提取物。本發(fā)明工藝較傳統(tǒng)的重樓皂苷的除雜純化方法工藝簡單，易于操作，得到的提取物活性成分(重樓皂苷)含量高，吸濕性低等優(yōu)點(diǎn)。本發(fā)明方法的特點(diǎn)在于將提取液刻意制備成懸浮液，再用陶瓷膜處理。根據(jù)這一設(shè)計原理，我們開展了中藥重樓皂苷成分的提取分離研究工作。本發(fā)明方法與醇沉除雜方法比較如下1.重樓皂苷粗提取液的制備100公斤云南重樓的干燥根莖，碎成粗粉，分別以1000、500、500公斤70%乙醇提取5、4、3小時，提取液過濾除去殘渣及雜質(zhì)，后合并得重樓皂苷粗提取液。2.除雜純化工藝比較2.1醇沉除雜取重樓皂苷粗提取液，濃縮至流浸膏，用510倍90%的乙醇溶解，低溫靜置過夜，過濾，收集濾液，濃縮，干燥，，得浸膏粉。2.2本發(fā)明二氧化鋯(Zr02)陶瓷膜除雜取重樓皂苷粗提取液，濃縮使其密度為1.011.10(25'C下用密度計測定)，濃縮后的體積(升)相當(dāng)于所用重樓屬植物質(zhì)量(公斤)的28倍，每升濃縮液加入淀粉酶或果膠酶l5g，制成懸濁液。控制懸濁液中溶媒的體積百分比濃度《10%。懸濁液上無機(jī)陶瓷膜進(jìn)行微濾，陶瓷膜材質(zhì)為二氧化鋯(Zr02)膜，膜孔徑為0.05—0.2"m。收集截留液；透過液經(jīng)D—101大孔樹脂吸附收集，用柱體積24倍的蒸餾水洗脫，棄去洗脫液，再用24倍柱體積的75%95%乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液，與過陶瓷膜的截留液合并，濃縮，干燥，得浸膏粉。3.工藝過程及結(jié)果分析3.1云南重樓的干燥根莖中皂苷類成分的分析在本工藝研究實(shí)驗中，我們以重樓皂苷I、II、III、IV、V、VI六個成份為監(jiān)測指標(biāo)，用以比較兩種除雜純化工藝的差異。采用HPLC方法對本研究實(shí)驗選用的云南重樓的干燥根莖中的重樓皂苷I、II、III、IV、V、VI六個成份進(jìn)行分析，六個重樓皂苷標(biāo)準(zhǔn)樣品的HPLC線性見表l。表16種重樓皂苷標(biāo)準(zhǔn)樣品HPLC線性關(guān)系<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>表2云南重樓的干燥根莖中6種皂苷組份含量分析<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>3.2兩種工藝過程分析取同批次云南重樓的干燥根莖各100公斤，分別按重樓皂苷粗提取液的制備工藝流程提取，及進(jìn)行除雜純化處理。醇提除雜工藝選擇醇提混合液濃縮、醇沉上清液、醇沉上清液濃縮液、浸膏粉及藥渣等5個步驟取樣；二氧化鋯陶瓷膜除雜工藝選擇醇提混合液濃縮、膜過濾截留液、膜過濾透過液、大孔樹脂洗脫液、截留液+洗脫液混合濃縮'、浸膏粉及藥渣等7個取樣點(diǎn)，比較兩個工藝過程，結(jié)果見表3、表4。.表3醇沉除雜工藝中各取樣點(diǎn)的成分分析<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>表4二氧化鋯陶瓷膜除雜工藝中各取樣點(diǎn)的成分分析<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>根據(jù)皂苷類成分含量分析結(jié)果，結(jié)合物料分析，可以直觀地比較出兩種工藝的優(yōu)劣，比較結(jié)果見表5、表6。表5兩種除雜工藝中各取樣點(diǎn)的比較<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>表6兩種除雜工藝所得浸膏比較<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>4.結(jié)論從上述分析可以看出，在浸膏得率及浸膏活性成份含量方面，無機(jī)陶瓷膜工藝都比傳統(tǒng)的醇沉工藝較好。與一般提取工藝比較，用該方法處理得到的浸膏，從得率、含量、吸濕性、.外觀顏色等方面進(jìn)行比較，在工藝流程和品質(zhì)上都有較大的優(yōu)勢。本發(fā)明方法具有:皂苷類成分含量高、得率高，產(chǎn)物吸濕性低，工藝簡單易于操作等優(yōu)點(diǎn)。具體實(shí)施方式結(jié)合具體實(shí)施例僅是進(jìn)一步說明本發(fā)明專利內(nèi)容，但本發(fā)明專利并不限于此。實(shí)施例1:取100公斤云南重樓的干燥根莖，碎成粗粉，分別以1000、500、500公斤700%乙醇提取5、4、3小時，合并提取液，過濾除藥渣、泥砂等雜質(zhì)，即得到重樓皂苷粗提取液，再經(jīng)減壓濃縮處理，回收有機(jī)溶媒，每升濃縮液加入淀粉酶或果膠酶lg，制成懸濁液，控制懸濁液中乙醇含量低于5%，使最終溶液密度為1.01(25。C下用密度計測定)，體積為0.40立方米。懸濁液用無機(jī)陶瓷膜過濾，陶瓷膜材質(zhì)為二氧化鋯(Zr02)膜，膜孔徑為0.05ym，收集截留液，濃縮，干燥，得重樓皂苷提取物5.4公斤，重樓總皂苷含量13.7%。實(shí)施例2:取80公斤云南重樓的干燥根莖，碎成粗粉，分別以800、400、400公斤60%乙醇提取5、4、3小時，合并提取液，過濾除藥渣、泥砂等雜質(zhì)，即得到重樓皂苷粗提取液，再經(jīng)減壓濃縮處理，回收有機(jī)溶媒，每升濃縮液加入淀粉酶或果膠酶2g，制^急濁液，控制懸濁液中乙醇含量低于7%，使最終溶液密度為1.01(25。C下用密度計測定)，體積為0.35立方米。懸濁液用無機(jī)陶瓷膜過濾，陶瓷膜材質(zhì)為二氧化鋯(Zr02)膜，膜孔徑為0.05nm，收集截留液，濃縮，干燥，得重樓皂苷提取物4.0公斤，重樓總皂苷含量13.2%。實(shí)施例3:取50公斤七葉一枝花的干燥根莖，碎成粗粉，分別以500、400、400公斤80%乙醇提取8、5、3小時，合并提取液，過濾除藥渣、泥砂等雜質(zhì)，即得到重樓皂苷粗提取液，再經(jīng)減壓濃縮處理，回收有機(jī)溶媒，每升濃縮液加入淀粉酶或果膠酶3g，制成懸濁液，控制懸濁液中乙醇含量低于10%，使最終溶液密度為1.02(25。C下用密度計測定)，體積為'0.15立方米。懸濁液用無機(jī)陶瓷膜過濾，陶瓷膜材質(zhì)為二氧化鋯(Zr02)膜，膜孔徑為0.10iim，收集截留液，濃縮，干燥，得重樓皂苷提取物2.3公斤，重樓總皂苷含量12.9%。實(shí)施例4:取50公斤南重樓的干燥根莖，碎成粗粉，分別以500、400、400公斤75%甲醇提取7、5、3小時，合并提取液，過濾除藥渣、泥砂等雜質(zhì)，即得到重樓皂苷粗提取液，再經(jīng)減壓濃縮處理，回收有機(jī)溶媒，每升濃縮液加入淀粉酶或果膠酶3.5g，制成懸濁液，控制懸濁液中甲醇含量低于10%，使最終溶液密度為1.05(25X:下用密度計測定)，體積為0.15立方米。懸濁液用無機(jī)陶瓷膜過濾，陶瓷膜材質(zhì)為二氧化鋯(Zr02)膜，膜孔徑為0.10lim，收集截留液；透過液上大孔樹脂柱，以2.5倍柱體積的蒸餾水洗脫，棄去水洗脫液，再用2倍柱體積的95%乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液與截留液合并，濃縮，干燥，得重樓皂苷提取物2.4公斤，重樓總皂苷含量13.5%。實(shí)施例5:取50公斤花葉重樓的干燥根莖，碎成粗粉，分別以500、400、400公斤80%丙酮提取7、5、3小時，合并提取液，過濾除藥渣、泥砂等雜質(zhì)，即得到重樓皂苷粗提取液，再經(jīng)減壓濃縮處理，回收有機(jī)溶媒，每升濃縮液加入淀粉酶或果膠酶4g，制成懸濁液，控制懸濁液中丙酮含量低于9%，使最終溶液密度為1.03(25。C下用密度計測定)，體積為0.28立方米。懸濁液用無機(jī)陶瓷膜過濾，陶瓷膜材質(zhì)為二氧化鋯(Zr02)膜，膜孔徑為0.12um，收集截留液;透過液上大孔樹脂柱，以2.5倍柱體積的蒸餾水洗脫，棄去水洗脫液，再用2倍柱體積的80%乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液與截留液合并，濃縮，干燥，得重樓皂苷提取物2.2公斤，重樓總皂苷含量13.2%。實(shí)施例6:取80公斤黑籽重樓的干燥根莖，碎成粗粉，分別以800、500、500公斤75%正丁醇提取7、5、3小時，合并提取液，過濾除藥渣、泥砂等雜質(zhì)，即得到重樓皂苷粗提取液，再經(jīng)減壓濃縮處理，回收有機(jī)溶媒，每升濃縮液加入淀粉酶或果膠酶4.5g，制成懸濁液，控制懸濁液中正丁醇含量低于7%，使溶液密度為1.05(25。C下用密度計測定)，體積為0.32立方米。懸濁液用無機(jī)陶瓷膜過濾，陶瓷膜材質(zhì)為二氧化鋯(Zr02)'膜，膜孔徑為0.15ym，收集截留液；透過液上大孔樹脂柱，以2倍柱體積的蒸餾水洗脫，棄去水洗脫液，再用2倍柱體積的85。^乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液與截留液合并，濃縮，干燥，得重樓皂苷提取物3.9公斤，重樓總皂苷含量13%。實(shí)施例7:取80公斤短梗重樓的干燥根莖，碎成粗粉，分別以800、500、500公斤85%乙醇提取7、5、3小時，合并提取液，過濾除藥渣、泥砂等雜質(zhì)，即得到重樓皂苷粗提取液，再經(jīng)減壓濃縮處理，回收有機(jī)溶媒，每升濃縮液加入淀粉酶或果膠酶5g，制成懸濁液，控制懸濁液中乙醇含量低于7%，使溶液密度為1.07(25。C下用密度計測定)，體積為0.35立方米。懸濁液用無機(jī)陶瓷膜過濾，陶瓷膜材質(zhì)為二氧化鋯(Zr02)膜，膜孔徑為0.2um，收集截留液；透過液上大孔樹脂柱，以3倍柱體積的蒸餾水洗脫，棄去水洗脫液，再用2.5倍柱體積的85%乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液與截留液合并，濃縮，干燥，得重樓皂苷提取物4公斤，重樓總皂苷含量13.2%。實(shí)施例8:取80公斤毛葉重樓的干燥根莖，碎成粗粉，分別以800、500、500公斤乙醇、乙酸乙酯、水混合溶液(乙醇乙酸乙酯水體積比為5:3:2)提取7、5、3小時，合并提取液，過濾除藥渣、泥砂等雜質(zhì)，即得到重樓皂苷粗提取液，再經(jīng)減壓濃縮處理，回收有機(jī)溶媒，每升濃縮液加入淀粉酶或果膠酶2.5g,制成懸濁液，控制懸濁液中乙醇含量低于6%，使溶液密度為L1(25。C下用密度計測定)，體積為0.3立方米。懸濁液用無機(jī)陶瓷膜過濾，陶瓷膜材質(zhì)為二氧化鋯(Zr02)膜，膜孔徑為0.18Pm，收集截留液；透過液上大孔樹脂柱，以2倍柱體積的蒸餾水洗脫，棄去水洗脫液，再用2倍柱體積的80%乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液與截留液合并，濃縮，干燥，得重樓皂苷提取物3.8公斤，重樓總皂苷含量12.8%。實(shí)施例9:取80公斤北重樓的干燥根莖，碎成粗粉，分別以800、500、500公斤甲醇、三氯甲烷、水混合溶液(甲醇三氯甲烷水體積比為3:5:2)提取7、5、3小時，合并提取液，過濾除藥渣、泥砂等雜質(zhì)，即得到重樓皂苷粗提取液，再經(jīng)減壓濃縮處理，回收有機(jī)溶媒，再按每升濃縮液加入淀粉酶或果膠酶3g，制成懸濁液，控制懸濁液中甲醇含量低于8%，使溶液密度為1.1(25'C下用密度計測定)，體積為0.30立方米。懸濁液用無機(jī)陶瓷膜過濾，陶瓷膜材質(zhì)為二氧化鋯(Zr02)膜，膜孔徑為0.2Pm，收集截留液；透過液上大孔樹脂柱，以3倍柱體積的蒸餾水洗脫，棄去水洗脫液，再用2.5倍柱體積的85%乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液與截留液合并，濃縮，干燥，得重樓皂苷提取物4.1公斤，重樓總皂苷含量12.7%。權(quán)利要求1、一種重樓皂苷提取液的除雜純化方法，由以下步驟組成一、將重樓屬植物，碎成粗粉，經(jīng)溶媒提取后過濾除去殘渣及雜質(zhì)，得到重樓皂苷粗提取液，所述溶媒為水和有機(jī)溶劑甲醇、乙醇、丙酮、正丁醇、乙酸乙酯、三氯甲烷中的一種或幾種的混合物；其特征在于二、將步驟(一)的粗提取液濃縮成密度在25℃時為1.01～1.05的懸濁液；三、將懸濁液用無機(jī)陶瓷膜過濾，無機(jī)陶瓷膜材質(zhì)為二氧化鋯膜，膜孔徑為0.05～0.2μm，得截留液和透過液，收集截留液，截留液濃縮、干燥，即得經(jīng)除雜純化的重樓皂苷提取物；步驟(二)所述的懸濁液是將重樓皂苷粗提取液進(jìn)行濃縮，使?jié)饪s后的體積升為所用重樓屬植物公斤重量的2～8倍，同時使?jié)饪s液中有機(jī)溶劑的體積百分比濃度≤10％；每升濃縮液加入淀粉酶或果膠酶1～5g，即得所需的懸濁液。2、一種重樓皂苷提取液的除雜純化方法，由以下步驟組成一、將重樓屬植物，碎成粗粉，經(jīng)溶媒提取后過濾除去殘渣及雜質(zhì)，得到重樓皂苷粗提取液，所述溶媒為水和有機(jī)溶劑甲醇、乙醇、丙酮、正丁醇、乙酸乙酯、三氯甲烷中的一種或幾種的混合物；其特征在于二、將步驟(一)的粗提取液濃縮成密度在25"C時為1.011.05的懸濁液；三、將懸濁液用無機(jī)陶瓷膜過濾，無機(jī)陶瓷膜材質(zhì)為二氧化鋯膜，膜孔徑為0.050.2pm,得截留液和透過液，收集截留液；四、將步驟(三)所得的透過液，上D—lOl型大孔樹脂柱吸附，用24倍柱體積的蒸餾水洗脫，洗脫液棄去，再用24倍柱體積的75%95%乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液，乙醇洗脫液與步驛(三)得到^截留液合并，濃縮，干燥，得經(jīng)除雜純化的重樓皂苷提取物；步驟(二)所述的懸濁液是將重樓皂苷粗提取液進(jìn)行濃縮，使?jié)饪s后的體積升為所用重樓屬植物公斤重量的28倍，同時使?jié)饪s液中有機(jī)溶劑的體積百分比濃度《10%;每升濃縮液加入淀粉酶或果膠酶15g,即得所需的懸濁液。全文摘要本發(fā)明涉及一種含植物有效成分的提取液的除雜純化方法。本發(fā)明所述的重樓皂苷提取液的除雜純化方法由以下步驟組成一、將重樓屬植物，碎成粗粉，經(jīng)溶媒提取后過濾除去殘渣及雜質(zhì)，得到重樓皂苷粗提取液，所述溶媒為水和有機(jī)溶劑甲醇、乙醇、丙酮、正丁醇、乙酸乙酯、三氯甲烷中的一種或幾種的混合物；二、將步驟(一)的粗提取液濃縮成密度在25℃時為1.01～1.05的懸濁液；三、將懸濁液用無機(jī)陶瓷膜過濾，無機(jī)陶瓷膜材質(zhì)為二氧化鋯膜，膜孔徑為0.05～0.2μm，得截留液和透過液，收集截留液，即得經(jīng)除雜純化的重樓皂苷提取液。本發(fā)明工藝較傳統(tǒng)的重樓皂苷的除雜純化方法工藝簡單，易于操作，得到的提取物活性成分(重樓皂苷)含量高，吸濕性低等優(yōu)點(diǎn)。文檔編號A61K36/88GK101401897SQ200810233538公開日2009年4月8日申請日期2008年11月6日優(yōu)先權(quán)日2008年11月6日發(fā)明者峰張,張新華,真王,趙守仁,韋建榮申請人:云南白藥集團(tuán)股份有限公司