專利名稱：一種從土荊皮中提制土荊皮乙酸的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及天然產(chǎn)物化學(xué)領(lǐng)域，特別是涉及一種從土荊皮中提制土荊皮乙酸的方法。
背景技術(shù)：
土荊皮(Pcsudolaricis cortcx)系松科植物金錢松(Pseudolarix amabilis (Nelson)Rchd.)的干燥根皮或近根樹皮。具有殺蟲、療癬、止癢的功效，廣泛用于疥癬瘙癢。金錢松的化學(xué)成分主要有二萜類化合物、三萜類化合物、木脂類化合物、倍半萜類化合物以及其他類型化合物(聞志慧，朱全飛，李萍，等.土荊皮化學(xué)成分研究[J].現(xiàn)代醫(yī)藥衛(wèi)生，2010，26 (4) :507. )。土荊皮的抗真菌有效成分為土荊皮酸，為一混合物，其中土荊皮乙酸含量最高(陳樺，馮柏康，李艷園，等.高效液相色譜法測定上荊皮藥材中上荊皮乙酸的含量·中藥材，2006，29 (5) :452)。土荊皮乙酸(pseudolaric acid B, PAB),又名土槿皮乙酸,分子式是C23H28O8,是土荊皮中一種二萜類化合物?，F(xiàn)代藥理研究表明，土槿皮乙酸具有抗腫瘤、抗生育、抗血管生成、抗真菌、可激活過氧化物酶增殖物激活受體(PPAR)等作用。王偉成等研究發(fā)現(xiàn)土荊皮乙酸對大鼠、倉鼠、兔及狗，經(jīng)ig，im，sc給藥都具有明顯的抗生育作用，通過給妊娠大鼠ig 上荊皮乙酸，應(yīng)用氫清除率技術(shù)，測得子宮肌層及內(nèi)膜層血流量皆較正常對照組為低，證明 PAB使早孕大鼠子宮血流量減少是造成胚胎死亡的重要原因。宗志紅等發(fā)現(xiàn)其具有明顯的細(xì)胞毒作用，通過PI3K/AKT途徑激活Caspase-3誘導(dǎo)胃癌細(xì)胞凋亡，抑制細(xì)胞增殖。譚文福等的實驗表明PAB通過抑制VEGF促內(nèi)皮細(xì)胞生存信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中的KDR、AKT及ERK的磷酸化逆轉(zhuǎn)VEGF促內(nèi)皮細(xì)胞生存、誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞凋亡為PAB抑制血管生成的作用機(jī)制之一。 PAB具有廣泛的抗腫瘤活性，不僅阻斷VEGF途徑，還可以促進(jìn)HIF的降解，這就抑制了與腫瘤血管生成相關(guān)的關(guān)鍵途徑。PAB也可以通過PPAR配體途徑抑制血管生成，同時PAB還具有促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡，抑制細(xì)胞骨架及抑制端粒酶活性等藥理作用，因此，PAB可以避免單一抑制血管藥物的不足。天然產(chǎn)物中尋找新的抗癌有效成分是目前新藥開發(fā)的主要途徑， PAB作為一種對活體無明顯毒性的天然產(chǎn)物，對其藥理機(jī)制進(jìn)行深入研究，有望促進(jìn)PAB成為新型的抗腫瘤藥物。現(xiàn)有文獻(xiàn)中多采用乙醇或苯提取，這些方法存在提取雜質(zhì)多或毒性大的缺點。因此，提供一種簡單易行、毒性小、專屬性強、純度高的提取方法具有重要意義。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種從土荊皮中提制土荊皮乙酸的方法。本發(fā)明的目的是通過下述方案實現(xiàn)的一種從上荊皮中提制上荊皮乙酸的方法，其特征在于包括下列步驟(I)提取以土荊皮為原料，用丙酮提取數(shù)次，得到提取液；(2)除雜步驟(I)中得到的提取液中加入活性炭回流脫色，趁熱過濾，回收溶劑至適量，再經(jīng)石油醚脫除脂溶性雜質(zhì)，得到脫脂浸膏，將其熱溶于氯化鈉溶液，混懸均勻后用乙醚萃取，所得萃取液濃縮后得到乙醚浸膏；(3)分離將步驟(2)中得到的乙醚浸膏，拌樣烘干，上中壓氧化鋁柱或中壓氧化鎂柱層析，得到土荊皮乙酸粗品；(4)重結(jié)晶步驟(3)中的土荊皮乙酸粗品用二氯甲烷-乙醚重結(jié)晶得到土荊皮乙酸純品。
步驟(I)中所述提取方法為加熱回流提取、滲漉提取或超聲提取法。步驟(2)中所述氯化鈉溶液濃度為0-1. 5mol/L。步驟(3)中所述氧化鋁為中性氧化鋁，所述氧化鎂為中性氧化鎂，目數(shù)為100-300目。
步驟(3)中所述柱層析洗脫條件為采用氯仿-乙醇(9 1、2 1、1 3)梯度二氯甲烷-甲醇(20 : 1、10 1、5 I)梯度洗脫。本發(fā)明的優(yōu)點是土荊皮在我國分布廣泛，藥源豐富；本方法操作簡單、專屬性強，所得產(chǎn)品純度高；所用溶劑毒性小，基本都可回收重復(fù)使用，對環(huán)境污染小，適合工業(yè)規(guī)?；a(chǎn)。
具體實施例方式以下通過實施例進(jìn)一步說明本發(fā)明，但不作為對本發(fā)明的限制。實施例I取上荊皮500g粉碎成粗粉，加1500ml丙酮反復(fù)加熱回流提取2次，提取液合并后得2400ml提取液,加入106g活性炭回流脫色,趁熱過濾，回收乙醇至1000ml,用石油醚反復(fù)除去脂溶性雜質(zhì)，得到脫脂浸膏，將脫脂浸膏溶解于500ml0. 8mol/LNaCl溶液中，混懸均勻后用乙醚反復(fù)萃取，所得萃取液合并后減壓濃縮得到乙醚浸膏。乙醚浸膏與100gl00-200 目氧化鋁拌樣烘干，上中壓氧化鋁柱層析，以氯仿-乙醇(9 1、2 1、1 3)梯度洗脫， TLC跟蹤監(jiān)測，收集上荊皮乙酸洗脫液，真空濃縮至干，二氯甲烷-乙醚重結(jié)晶3次，得到
O.85g上荊皮乙酸純品，得率O. 17%。實施例2取土荊皮500g粉碎成粗粉，加4000ml丙酮反復(fù)超聲提取2次，提取液合并后得 5500ml提取液,加入265g活性炭回流脫色,趁熱過濾，回收乙醇至1000ml,用石油醚反復(fù)除去脂溶性雜質(zhì)，得到脫脂浸膏，將脫脂浸膏溶解于500mll. Omol/L NaCl溶液中，混懸均勻后用乙醚反復(fù)萃取，所得萃取液合并后減壓濃縮得到乙醚浸膏。乙醚浸膏與100gl50-250目氧化鎂拌樣烘干，上中壓氧化鎂柱層析，以二氯甲烷-甲醇(20 : 1、10 1、5 I)梯度洗脫，TLC跟蹤監(jiān)測，收集土荊皮乙酸洗脫液，真空濃縮至干，二氯甲烷-乙醚重結(jié)晶3次，得到O. 75g 土荊皮乙酸純品，得率O. 15%。實施例3取土荊皮Ikg粉碎成粗粉，加適量丙酮滲漉提取至滲漉液二萜反應(yīng)為陰性，得到 IOL滲漉液,加入430g活性炭回流脫色,趁熱過濾，回收乙醇至2000ml,用石油醚反復(fù)除去脂溶性雜質(zhì)，得到脫脂浸膏，將脫脂浸膏溶解于IOOOmlO. 5mol/LNaCl溶液中，混懸均勻后用乙醚反復(fù)萃取，所得萃取液合并后減壓濃縮得到乙醚浸膏。乙醚浸膏與200gl00-200目氧化鋁拌樣烘干，上中壓氧化鋁柱層析，以二氯甲烷-甲醇(20 : 1、10 1、5 I)梯度洗脫，TLC跟蹤監(jiān)測，收集土荊皮乙酸洗脫液，真空濃縮至干，二氯甲烷-乙醚重結(jié)晶3次，得到I. 9g 土荊皮乙酸純品，得率O. 19%。實施例4取土荊皮5kg粉碎成粗粉，加30L丙酮反復(fù)加熱回流提取2次，提取液合并后得 50L提取液，加入2kg活性炭回流脫色，趁熱過濾，回收乙醇至5L，用石油醚反復(fù)除去脂溶性雜質(zhì)，得到脫脂浸膏，將脫脂浸膏溶解于5L1. 5mol/LNaCl溶液中，混懸均勻后用乙醚反復(fù)萃取，所得萃取液合并后減壓濃縮得到乙醚浸膏。乙醚浸膏與1000g200-300目氧化鎂拌樣烘干，上中壓氧化鎂柱層析，以氯仿-乙醇(9 1、2 1、1 3)梯度洗脫，TLC跟蹤監(jiān)測， 收集土荊皮乙酸洗脫液，真空濃縮至干，二氯甲烷-乙醚重結(jié)晶3次，得到9g 土荊皮乙酸純品，得率O. 18%。
權(quán)利要求
1.一種從土荊皮中提制土荊皮乙酸的方法，其特征在于包括下列步驟(1)提取以土荊皮為原料，用丙酮提取數(shù)次，得到提取液；(2)除雜步驟(I)中得到的提取液中加入活性炭回流脫色，趁熱過濾，回收溶劑至適量，再經(jīng)石油醚脫除脂溶性雜質(zhì)，得到脫脂浸膏，將其熱溶于氯化鈉溶液，混懸均勻后用乙醚萃取，所得萃取液濃縮后得到乙醚浸膏；(3)分離將步驟(2)中得到的乙醚浸膏，拌樣烘干，上中壓氧化鋁柱或中壓氧化鎂柱層析，得到土荊皮乙酸粗品；(4)重結(jié)晶步驟(3)中的土荊皮乙酸粗品用二氯甲烷-乙醚重結(jié)晶得到土荊皮乙酸純品。
2.如權(quán)利要求I所述的提制土荊皮乙酸的方法，其特征在于步驟(I)中所述提取方法為加熱回流提取、滲漉提取或超聲提取法。
3.如權(quán)利要求I所述的提制土荊皮乙酸的方法，其特征在于步驟(2)中所述氯化鈉溶液濃度為 O. 5-1. 5mol/L。
4.如權(quán)利要求I所述的提制上荊皮乙酸的方法，其特征在于步驟(3)中所述氧化鋁為中性氧化鋁，所述氧化鎂為中性氧化鎂，目數(shù)為100-300目。
5.如權(quán)利要求I所述的提制土荊皮乙酸的方法，其特征在于步驟(3)中所述柱層析洗脫條件為采用氯仿-乙醇(9 1、2 1、1 3)梯度洗脫，或二氯甲烷-甲醇(20 : I、 10 1、5 I)梯度洗脫。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種從土荊皮中提制土荊皮乙酸的方法，包括先以溶劑提取，活性炭回流脫色，經(jīng)石油醚脫除脂溶性雜質(zhì)，將其熱溶于氯化鈉溶液，乙醚萃取，將乙醚萃取液減壓濃縮得乙醚浸膏，上中壓氧化鋁柱或中壓氧化鎂柱層析，得土荊皮乙酸粗品，用二氯甲烷-乙醚重結(jié)晶得到上荊皮乙酸純品。本發(fā)明方法簡單易行，專屬性強，可獲得高純度的上荊皮乙酸，適合工業(yè)規(guī)?；a(chǎn)。
文檔編號C07D311/94GK102603700SQ201110026218
公開日2012年7月25日 申請日期2011年1月25日 優(yōu)先權(quán)日2011年1月25日
發(fā)明者劉東鋒, 李法慶 申請人:蘇州寶澤堂醫(yī)藥科技有限公司