專利名稱：植物抗性相關(guān)基因edos1的克隆及其在植物抗病中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及基因工程領(lǐng)域，具體涉及到一種擬南芥基因EDOSl的克隆，功能鑒定和應(yīng)用。包括該基因在調(diào)控植物對病原菌的抗性應(yīng)答和調(diào)節(jié)乙烯誘導(dǎo)的葉片衰老中的應(yīng)用，同時(shí)涉及該基因在調(diào)控mRNA核質(zhì)運(yùn)輸中的應(yīng)用，以及該基因在創(chuàng)建抗病轉(zhuǎn)基因作物品種中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
在自然界中，植物面對著各種各樣的病原菌的侵襲。這些病原菌大致可以分為兩類，一類是活體營養(yǎng)型，需要存活的植物細(xì)胞來完成生長周期；另一類是死體營養(yǎng)型，需要?dú)⑺乐参锛?xì)胞來獲取營養(yǎng)，完成生命周期。在漫長的進(jìn)化過程中，植物演化出有效的抗病反應(yīng)。其中植物激素水楊酸和乙烯，茉莉酸發(fā)揮著重要的作用，水楊酸主要在對活體營養(yǎng)型病菌的抗性中起著重要作用；乙烯和茉莉酸主要在對死體營養(yǎng)型病菌的抗性中發(fā)揮著重要作用。白粉菌是自然界中廣泛存在的一種真菌，可以侵染小麥、大麥、葡萄等重要農(nóng)作物，在世界范圍內(nèi)造成農(nóng)業(yè)生產(chǎn)的重要損失。在我們先前的研究中，我們報(bào)道了擬南芥edrl突變體的表型和EDRl基因的功能(Frye and Innes, 1998 ；Frye et al.，2001)。EDRl 基因編碼一個(gè)fcif-like 蛋白激酶，EDRl蛋白具有激酶活性。edrl突變體表現(xiàn)出白粉菌誘導(dǎo)的細(xì)胞死亡表型和對白粉病菌的顯著抗性。雙突變分析實(shí)驗(yàn)顯示edrl突變體的表型能夠被pad4，sid2, nprl等突變體抑制，表明edrl的表型需要水楊酸信號途徑的作用。同時(shí)，與野生型相比，edrl突變體表現(xiàn)出更明顯的乙烯誘導(dǎo)的葉片衰老表型。但是，目前我們對于EDRl介導(dǎo)細(xì)胞死亡和植物抗病反應(yīng)的分子機(jī)制依然知之甚少?？梢钥闯?，EDRl是創(chuàng)建抗病性增強(qiáng)的轉(zhuǎn)基因作物和作物分子設(shè)計(jì)的優(yōu)秀候選基因。研究EDRl調(diào)節(jié)植物抗病反應(yīng)的分子機(jī)制，尋找EDRl信號通路的其他組分，具有重要的理論價(jià)值和廣闊的應(yīng)用前景。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明涉及到擬南芥EDOSl基因的克隆及應(yīng)用，尤其涉及到EDOSl基因在mRNA核質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)中的作用，同時(shí)也涉及到該基因在調(diào)控植物對病原菌的抗性和葉片衰老中的功能與應(yīng)用。本發(fā)明通過突變體篩選和圖位克隆的方法，對EDOSl基因進(jìn)行了分離和功能鑒定，確立了 EDOSl基因在植物對白粉病的抗性和病原菌誘導(dǎo)的細(xì)胞死亡中的作用，發(fā)現(xiàn)了EDOSl基因在乙烯誘導(dǎo)的葉片衰老中的作用及其分子機(jī)制，同時(shí)，確立了 EDOSl基因影響mRNA核質(zhì)運(yùn)輸?shù)臋C(jī)制。本發(fā)明為理解植物mRNA核質(zhì)運(yùn)輸?shù)姆肿訖C(jī)制提供了重要依據(jù)，為研究mRNA核質(zhì)運(yùn)輸如何影響植物的抗病反應(yīng)和激素的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)提供了新的線索，為探索植物激素水楊酸和乙烯的交叉網(wǎng)絡(luò)提供了新的節(jié)點(diǎn)。在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)上，本發(fā)明可以應(yīng)用于增強(qiáng)植物的抗病反應(yīng)和調(diào)控作物的成熟衰老時(shí)期等方面的轉(zhuǎn)基因作物的創(chuàng)制。為了尋找EDRl信號通路上的其它基因，我們進(jìn)行了 edrl抑制子和增強(qiáng)子突變體的篩選。我們得到了其中一個(gè)突變體edosl，通過圖位克隆，我們得到了 EDOSl基因。通過對EDOSl的功能分析，我們發(fā)現(xiàn)EDOSl對植物抗病反應(yīng)以及植物mRNA的核質(zhì)運(yùn)輸有著重要的調(diào)控作用。另一方面，作為真核生物，植物的RNA是在核內(nèi)合成，而RNA翻譯成蛋白質(zhì)是在細(xì)胞質(zhì)中進(jìn)行，RNA的核質(zhì)運(yùn)輸對植物的生長發(fā)育和逆境反應(yīng)起著重要的調(diào)控作用，少數(shù)的幾個(gè)報(bào)道已經(jīng)說明了影響mRNA核質(zhì)運(yùn)輸?shù)耐蛔凅w可以調(diào)節(jié)植物對病原菌的抗性。當(dāng)然，目前對植物mRNA運(yùn)輸?shù)姆肿訖C(jī)制以及mRNA運(yùn)輸調(diào)控植物抗病反應(yīng)的具體機(jī)理的研究依然非常有限。通過對EDOSl的研究，可以幫助我們了解EDRl的信號通路。同時(shí)，通過對EDOSl的研究，我們可以深入探索mRNA核質(zhì)運(yùn)輸對植物抗病反應(yīng)的影響。更為重要的是，EDOSl本身也是作物轉(zhuǎn)基因改良和作物分子設(shè)計(jì)的合適靶基因。綜上所述，對EDOSl基因的克隆和功能分析有著重要的理論和現(xiàn)實(shí)意義，而且EDOSl基因有著廣闊的應(yīng)用前景。1. 一個(gè)擬南芥基因EDOSl的基因序列，全長基因組DNA序列4302bp，⑶S全長1800bp。其 CDS 序列見 SEQ ID No. 1。2. EDOSl的蛋白序列，編碼599個(gè)氨基酸，大小68. 3kD。其氨基酸序列見SEQ ID
No. 2。3. EDOSl突變之后，可以抑制edrl的抗病表型和白粉菌誘導(dǎo)的細(xì)胞死亡表型。4. EDOSl突變之后，可以增強(qiáng)edrl的乙烯誘導(dǎo)的葉片衰老表型。5. EDOSl突變之后，mRNA在細(xì)胞核內(nèi)積累。6. EDOSl基因在高等植物中廣泛存在并且高度保守，可以應(yīng)用到基因工程技術(shù)領(lǐng)域，調(diào)控作物的抗病反應(yīng)和成熟時(shí)期。具體內(nèi)容如下1. 一種擬南芥白粉病抗性相關(guān)基因ED0S1，其為下列核苷酸序列之一1) SEQ ID No. 1的核苷酸序列；2)與SEQ ID No. 1的核苷酸序列具有90%以上同源性且編碼相同功能蛋白質(zhì)的核苷酸序列。2. 一種蛋白質(zhì)，其由以上1的基因EDOSl編碼。3.以上2的蛋白質(zhì)，其為1)由SEQ ID No. 2的氨基酸序列所示的蛋白；或2)將(1)的氨基酸序列經(jīng)過取代、缺失或添加一個(gè)或幾個(gè)氨基酸且具有與(1)相同的功能的由(1)衍生的蛋白。4.以上1的EDOSl基因的突變基因edosl，其核苷酸序列與SEQ IDNo. 1的核苷酸序列的區(qū)別在于在^79bp到^86bp的位置出現(xiàn)了 7bp的缺失。5.以上1的基因EDOSl或以上2或3的蛋白質(zhì)用于調(diào)控植物抗白粉病抗性、白粉菌誘導(dǎo)產(chǎn)生的細(xì)胞程序性死亡、乙烯熟化或mRNA核質(zhì)運(yùn)輸?shù)膽?yīng)用，其中所述植物包括擬南芥、大麥、葡萄、小麥，優(yōu)選為擬南芥突變體edrl。
6.以上5的應(yīng)用，其中抑制植物白粉病抗性、抑制白粉菌誘導(dǎo)產(chǎn)生的細(xì)胞程序性死亡、促進(jìn)乙烯熟化或抑制mRNA核質(zhì)運(yùn)輸?shù)膽?yīng)用通過在所述植物中抑制以上1的基因EDOSl或以上2或3的蛋白質(zhì)的表達(dá)來實(shí)現(xiàn)，其中抑制以上1的基因EDOSl或以上2或3的蛋白質(zhì)的表達(dá)可以通過使以上1的基因EDOSl發(fā)生缺失功能突變來實(shí)現(xiàn)；且增強(qiáng)植物抗白粉病抗性、促進(jìn)白粉菌誘導(dǎo)產(chǎn)生的細(xì)胞程序性死亡、抑制乙烯熟化或促進(jìn)mRNA核質(zhì)運(yùn)輸?shù)膽?yīng)用通過在所述植物中過量或超量表達(dá)以上1的基因EDOSl或以上2或3的蛋白質(zhì)來實(shí)現(xiàn)。7.以上4的突變基因edosl用于抑制植物抗白粉病抗性、抑制白粉菌誘導(dǎo)產(chǎn)生的細(xì)胞程序性死亡、促進(jìn)乙烯熟化和抑制mRNA核質(zhì)運(yùn)輸?shù)膽?yīng)用，其中所述植物包括擬南芥、大麥、葡萄、小麥，優(yōu)選為擬南芥突變體edrl。


圖1.生長5周的野生型Col-0，edrl, edosl/edrl接種白粉病菌8天后的表型(上)，和 Trypan Blue Staining 的結(jié)果(下)。圖2.生長5周的野生型，edrl, edosl/edrl在IOOppm乙烯氣體處理3天后的表型(上)，和葉綠素含量測量的結(jié)果(下)。圖3.通過圖位克隆的方法克隆EDOSl基因的略圖、edosl突變的位置與基因結(jié)構(gòu)和互補(bǔ)結(jié)果。圖4.突變體的表型與Col-O表現(xiàn)的比較。圖5.擬南芥、水稻、玉米、苜蓿等植物中EDOSl蛋白序列的比對分析。圖 6. Col-O，edosl 和 edosl/edrl 中，mRNA 在細(xì)胞核內(nèi)積累。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例一 edosl能夠抑制edrl突變體的抗病表型(1)材料和方法把 edrl 突變體(Frye and Innes, 1998 ；Frye et al.，2001)種子用 0. 3 %EMS (Ethyl methanesulfonate，購自 SIGMA-ALDRICH，貨號 M-0880)浸泡 16 小時(shí)，用 ddH20洗12次。把種子播于土壤中，22°C，16小時(shí)光照生長7周。按20棵植株作為一個(gè)Pool收種子，共獲得240個(gè)Pool。每個(gè)Pool播種200棵，22°C，9小時(shí)光照溫室生長5周，尋找不出現(xiàn)edrl表型的個(gè)體，命名為edos系列突變體并將其中一株命名為edosl/edrl。Sf^M Col-O ( ^ g Arabidopsis Biological Resource Center), edrl, edosl/edrl突變體在土壤中，22°C，9小時(shí)光照溫室生長5周后，接種白粉病菌(Golovinomycescichoracearum) (Frye and Innes, 1998) 0該白粉病菌用擬南芥的一個(gè)對該白粉病菌易感的突變體pad4 (Jirage et al. , 1999)保存。接菌時(shí)將生長有大量白粉孢子的pad4的植株輕輕地刮在待接白粉的植物葉片上，接菌后，將接完菌的植物先用保鮮膜覆蓋M小時(shí)，后移去保鮮膜，繼續(xù)生長7天，進(jìn)行抗病表型鑒定。對典型的葉片照相，并且對有代表性的葉片進(jìn)行Trypan Blue Staining，標(biāo)記白粉菌的菌絲生長和葉片的細(xì)胞死亡斑點(diǎn)。(2)結(jié)果與分析接種白粉菌8天后，野生型植株上生長出大量的白粉菌(圖1左上)；edrl突變體植株上只有非常微弱的白粉菌生長，并且有可見的細(xì)胞壞死的斑點(diǎn)(圖1中上)；edosl/edrl突變體的表型類似于野生型，即有明顯的白粉菌的生長，而沒有明顯的細(xì)胞死亡的斑點(diǎn)(圖1右上)。Trypan Blue Staining的結(jié)果更清楚地顯示了野生型，edrl，edosl/edrl對白粉菌的反應(yīng)。野生型植株的葉片上可以看到大量的菌絲(圖1左下)；edrl植株上幾乎沒有可見的菌絲，卻有清晰地深藍(lán)色的壞死斑點(diǎn)(圖1中下)；edosl/edrl的表型與野生型類似(圖1右下)。實(shí)施例二 edosl可以增強(qiáng)edrl的乙烯誘導(dǎo)的葉片衰老表型1.在乙烯誘導(dǎo)下，edosl/edrl突變體表現(xiàn)出更嚴(yán)重地葉片黃化表型(1)材料與方法擬南芥植株Col-0，edrl和edosl/edrl在土壤中，22°C，9小時(shí)光照的溫室生長5周后，轉(zhuǎn)移到一個(gè)透明地封閉玻璃容器中，再注入乙烯氣體，濃度為lOOpprn。72小時(shí)后，觀察表型。同時(shí)，分別稱取0.2克葉片，用純乙醇萃取其中的葉綠素，再測量其中的葉綠素含量。同時(shí)，檢測未處理的植株作為對照。(2)結(jié)果與分析未用乙烯處理的植株都沒有明顯地黃化表型(圖2a，b，c)。乙烯處理后，野生型Col-O的葉片出現(xiàn)了黃化(圖2d) ；edrl突變體表現(xiàn)出更嚴(yán)重地黃化表型(圖加)；edosl/edrl突變體顯示出極其嚴(yán)重的黃化衰老表型(圖2f)。從葉綠素含量測定的實(shí)驗(yàn)中也可以看出，沒有處理時(shí)，所有植株的葉綠素含量類似；而在乙烯氣體處理后，與野生型Col-O相比，edrl的葉綠素含量明顯降低；而與edrl相比，edosl/edrl的葉綠素含量急劇減少(圖2下圖)。實(shí)施例三ED0S1基因的圖位克隆及互補(bǔ)(1)材料及方法為克隆ED0S1基因，我們把edosl/edrl突變體與Lansberg生態(tài)型植株(購自Arabidopsis Biological Resource Center)雜交，獲得的 Fl 代自交產(chǎn)生 F2 代。從 F2 代植株中選擇與edosl/edrl突變體表型相似的80個(gè)單株，用粗定位標(biāo)記(http //signal,salk. edu/genome/SSLP_info/SSLPsordered. html)進(jìn)行基因型鑒定(Konieczny andAusubel，1993)。粗定位的結(jié)果表明ED0S1定位在5號染色體的前端。隨后，我們設(shè)計(jì)了精細(xì)定位的標(biāo)記，對4000棵左右的F2植株進(jìn)行基因型鑒定，把ED0S1定位到五號染色體前端的BAC，F(xiàn)17I14中的一個(gè)301Λ左右的區(qū)域(圖3a)。對該區(qū)域內(nèi)所有基因進(jìn)行測序，通過測序，我們在基因AT5G09860中發(fā)現(xiàn)了一段7bp的缺失(圖北)。為了驗(yàn)證edosl的表型是有這個(gè)突變位點(diǎn)造成的，我們從野生型Col_0的基因組DNA中擴(kuò)增到一個(gè)5. 7kb的基因AT5G09860片段，包括800bp的啟動(dòng)子區(qū)、4. 3kb的基因組DNA，200bp 的相鄰序列。擴(kuò)增弓I物是 LeftPrimer 5' -cagagcaaatcgaattacgtaacca-3‘；Right Primer 5' -ggagatcggtggtgtttatgga-3，。退火溫度 56°C，延伸 6min，35 個(gè)循環(huán)。用 Kpn I 禾Π Hind III 酶切后，連接到 pCAMBIA1300 載體(GenBank 序列號 AF234296，(Heoet al.，1999))上。使用熱激法把質(zhì)粒轉(zhuǎn)化到農(nóng)桿菌GV3101 (Hajdukiewicz et al.，1994 ；Sambrook et al.，1989)中，鑒定正確后轉(zhuǎn)化edosl/edrl植株，得到TO代的種子。用含120mg/L潮霉素的MS培養(yǎng)基(4.33g MS鹽/L，1 %蔗糖，0. 8%瓊脂，pH = 5. 8)篩選TO代的種子，得到Tl轉(zhuǎn)基因植株。用乙烯氣體處理，進(jìn)行表型鑒定，鑒定轉(zhuǎn)基因植株是否能否互補(bǔ)edosl/edrl的表型。(2)結(jié)果及分析通過對該基因的cDNA進(jìn)行測序后，我們發(fā)現(xiàn)缺失位點(diǎn)的剪接發(fā)生了變化，突變體的cDNA出現(xiàn)了一段Ilbp的插入(圖3c)。對突變后的cDNA進(jìn)行編碼蛋白序列的預(yù)測，當(dāng)插入Ilbp的片段后，編碼序列在突變位點(diǎn)出現(xiàn)了兩個(gè)連續(xù)的終止密碼子，導(dǎo)致了突變體中，突變的EDOSl編碼一個(gè)截短的蛋白(圖3d)。EDOSl基因是一個(gè)具有多個(gè)外顯子的基因(圖:3e)。生長 4 周后，Tl 代互補(bǔ)植株(AT5G09860 in edosl/edrl)的表型與 edosl/edrl不同，而與edrl非常相似(圖3f)，說明基因AT5G09860的轉(zhuǎn)入可以互補(bǔ)edosl/edrl的表型，以及edosl/edrl的表型正是由于AT5G09860中第十四個(gè)外顯子末端的7bp缺失，即在2879bp到^86bp位置的7bp缺失造成的。因此ED0S1基因即為基因AT5G09860。實(shí)施例四edosl單突變的表型edosl單突變植株的表型(1)材料和方法為獲得edosl單突變體，我們用edosl/edrl與Col-O雜交，在F2代植株中尋找不帶有edrl背景的植株。檢測edrl背景用的是Derived CleavedAmplifiedPolymorphic Sequences (dCAPS)法(Neff et al.，2002)o 弓| 物為 LP 5，-AGGCTGAAAGGACAGATTCTTCATG-3，；RP :5，-TGTTGAGGAATTGTTCTCCAACTGA-3，。酶切所用的酶是HaeIII (購自大連TAKARA公司)。野生型Col-O和edosl突變體播種于土壤中。22°C，9小時(shí)光照生長5周后，注射接種丁香假單孢桿菌(Pseudomonas syringae) (Chisholm et al. ,2006 ；Weigel andGlazebrook, 2002)，濃度為OD6tltl = 5 X 10_4。3小時(shí)和72小時(shí)后，用打孔器取下葉片，用ddH20洗凈，磨碎葉片樣本，按梯度稀釋，分別涂平板，3天后計(jì)數(shù)。野生型Col-O，edrl, edosl/edrl和edosl突變體播種于土壤中。22°C，9小時(shí)光照生長5周后，放到一個(gè)封閉地透明容器中，注入IOOppm乙烯氣體。72小時(shí)后，取0. 2g葉片，用純乙醇萃取葉綠素，再測量葉綠素含量。同時(shí)，檢測未處理的植株作為對照。(2)結(jié)果與分析從圖4的上圖可以看出，注射接種丁香假單孢桿菌3小時(shí)后的葉片樣本中，edosl和Col-O的葉片中病菌的生長沒有明顯差異。在72小時(shí)后，edosl突變體中，病菌的生長略高于Col-0。從圖4的下圖中可以看出，在乙烯氣體處理72小時(shí)后，與Col-O和edrl相比，edosl單突變體和edosl/edrl雙突變體的葉綠素含量都顯著降低。而在未處理地對照中，Col-0, edrl, edosl/edrl, edosl的葉綠素含量非常接近。以上結(jié)果說明，與野生型Col-O相比，edosl單突變體對病原菌的抗性有小幅度地降低；同時(shí)，edosl單突變體對乙烯誘導(dǎo)的葉片衰老敏感度大幅提高。實(shí)施例五ED0S1的氨基酸序列在高等植物中高度保守ED0S1編碼的蛋白序列高度保守。與水稻(Oryza sativa，NP_001048715)，楊樹(Populus trichocarpa, XP_002299188),蓖麻(Ricinuscommunis, XP_002529986),葡萄(Vitis vinifera，XP_002^3874)，玉米(Zeamays, NP_001159168)中的同源基因的氨基酸序列比對，可以發(fā)現(xiàn)其序列的相似性達(dá)到80%以上。這個(gè)結(jié)果暗示了 ED0S1有著非常重要的功能，也表明在這些有經(jīng)濟(jì)價(jià)值的植物中，EDOSl非?？赡芤才c植物抗病和衰老密切相關(guān)，也說明了把EDOSl基因應(yīng)用到植物基因工程中的巨大可能性。如圖5所示。實(shí)施例六在edosl/edrl突變體中，mRNA在細(xì)胞核內(nèi)積累(1)材料與方法擬南芥植株Col-0，edrl和edosl/edrl在MS培養(yǎng)基上生長2周后，選取長度小于5mm 的葉片用 50% 固定液(120Mm NaCl, 7mM Na2HP04, 3mMNaH2P04, 2. 7mM KC1,0. 1% Tween20,80mM EGTA,5% formaldehyde, and 10% DMSO)固定。固定完成后用 50% 乙醇，50%甘露醇交替洗脫3次。把葉片加入到雜交緩沖液(購自Sigma-Aldrich，貨號H-7033)中，加入5’-熒光素標(biāo)記的oligo dT，雜交過夜。再用超純水洗脫后，用激光共聚焦顯微鏡觀察。激發(fā)光的波長為488nm。(2)結(jié)果與分析可以看出，野生型Col-O與edrl的細(xì)胞中都只有很微弱的細(xì)胞核內(nèi)熒光信號(圖6a，b)。而在edosl/edrl突變體中，有明顯地細(xì)胞核內(nèi)信號，表明mRNA在細(xì)胞核內(nèi)積累(圖6c)。這個(gè)結(jié)果也說明ED0S1在mRNA核質(zhì)運(yùn)輸中起著重要的調(diào)控作用。參考文獻(xiàn)Chisholm, S. , Coaker , G. , Day, B. , and Staskawi cz , B. 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權(quán)利要求
1.一種擬南芥白粉病抗性相關(guān)基因ED0S1，其為下列核苷酸序列之一1)SEQ ID No. 1的核苷酸序列；2)與SEQID No. 1的核苷酸序列具有90%以上同源性且編碼相同功能蛋白質(zhì)的核苷酸序列。
2.一種蛋白質(zhì)，其由權(quán)利要求1的基因EDOSl編碼。
3.權(quán)利要求2的蛋白質(zhì)，其為1)由SEQID No. 2的氨基酸序列所示的蛋白；或2)將(1)的氨基酸序列經(jīng)過取代、缺失或添加一個(gè)或幾個(gè)氨基酸且具有與(1)相同的功能的由(1)衍生的蛋白。
4.權(quán)利要求1的EDOSl基因的突變基因edosl，其核苷酸序列與SEQIDNo. 1的核苷酸序列的區(qū)別在于在^79bp到^86bp的位置出現(xiàn)了 7bp的缺失。
5.權(quán)利要求1的基因EDOSl或權(quán)利要求2或3的蛋白質(zhì)用于調(diào)控植物抗白粉病抗性、白粉菌誘導(dǎo)產(chǎn)生的細(xì)胞程序性死亡、乙烯熟化或mRNA核質(zhì)運(yùn)輸?shù)膽?yīng)用，其中所述植物包括擬南芥、大麥、葡萄、小麥，優(yōu)選為擬南芥突變體edrl。
6.權(quán)利要求5的應(yīng)用，其中抑制植物抗白粉病抗性、抑制白粉菌誘導(dǎo)產(chǎn)生的細(xì)胞程序性死亡、促進(jìn)乙烯熟化或抑制mRNA核質(zhì)運(yùn)輸?shù)膽?yīng)用通過在所述植物中抑制權(quán)利要求1的基因EDOSl或權(quán)利要求2或3的蛋白質(zhì)的表達(dá)來實(shí)現(xiàn)，其中抑制權(quán)利要求1的基因EDOSl或權(quán)利要求2或3的蛋白質(zhì)的表達(dá)可以通過使權(quán)利要求1的基因EDOSl發(fā)生缺失功能突變來實(shí)現(xiàn)；且增強(qiáng)植物抗白粉病抗性、促進(jìn)白粉菌誘導(dǎo)產(chǎn)生的細(xì)胞程序性死亡、抑制乙烯熟化或促進(jìn)mRNA核質(zhì)運(yùn)輸?shù)膽?yīng)用通過在所述植物中過量或超量表達(dá)權(quán)利要求1的基因EDOSl或權(quán)利要求2或3的蛋白質(zhì)來實(shí)現(xiàn)。
7.權(quán)利要求4的突變基因edosl用于抑制植物白粉病抗性、抑制白粉菌誘導(dǎo)產(chǎn)生的細(xì)胞程序性死亡、促進(jìn)乙烯熟化和抑制mRNA核質(zhì)運(yùn)輸?shù)膽?yīng)用，其中所述植物包括擬南芥、大麥、葡萄、小麥，優(yōu)選為擬南芥突變體edrl。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種擬南芥白粉病抗性相關(guān)基因EDOS1的分離克隆、功能驗(yàn)證及應(yīng)用。本發(fā)明還涉及所述EDOS1基因的突變基因、所述EDOS1基因編碼的蛋白及其應(yīng)用。
文檔編號C07K14/415GK102586267SQ20111000726
公開日2012年7月18日 申請日期2011年1月13日 優(yōu)先權(quán)日2011年1月13日
發(fā)明者唐定中, 潘懷榮 申請人:中國科學(xué)院遺傳與發(fā)育生物學(xué)研究所