專利名稱：富含甲基化兒茶素茶多酚的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種利用吸附層析柱法，以中國產(chǎn)茶葉為原料，利用大孔樹脂對茶葉 中功能性成分的特異性吸附，制備富含甲基化兒茶素茶多酚的方法。
背景技術(shù)：
很久以來，茶葉一直受到人們的喜愛，僅次于水，是世界上最廣受歡迎的飲料。除 了膾炙人口的色香味之外，還以其祛病健身的功效折服人類，而茶的風(fēng)味與保健功能正是 茶葉所特有的多酚化合物所賦予的。茶多酚是兒茶素(黃烷醇類)、花色素類(花青素和花白素)、花黃素類(黃酮與 黃酮類)等集于茶葉中的一群多酚復(fù)合物的總稱。其中兒茶素占60%-80%，分為酯型兒 茶素和游離型兒茶素，酯型兒茶素占兒茶素的70%左右。酚類物質(zhì)早就被報(bào)道具有多種生 理活性，尤其是表沒食子兒茶素沒食子酸酯(EGCG)。近幾年研究發(fā)現(xiàn)茶葉中含有另一種 兒茶素，即兒茶素的甲基化衍生物，以(-)_表沒食子兒茶素3-0(3-0-甲基)沒食子酸酯 (EGCG3'le)和(_)_表沒食子兒茶素3-0(4_0_甲基)沒食子酸酯(EGCG4"Me)為主。目前 關(guān)于甲基化兒茶素生理功能的研究主要集中在對甲基化EGCG的抗過敏作用的研究方面， 尤其是對最常見的花粉過敏癥具有顯著的預(yù)防和抑制作用。在日本，部分富含甲基化EGCG的產(chǎn)品已經(jīng)進(jìn)入商業(yè)發(fā)展階段，在食品行業(yè)，餅干、 口香糖、茶飲料等添加甲基化EGCG給食品行業(yè)注入了新的賣點(diǎn)，得到了更多消費(fèi)者的青 睞。因此，甲基化兒茶素的研究至關(guān)重要，在學(xué)術(shù)、生物學(xué)方面都具有非常重要的意義。目前，研究報(bào)道的甲基化兒茶素的體外合成主要有化學(xué)法和生物酶法。但是，化學(xué) 合成法中需要使用大量有機(jī)溶劑和各種基團(tuán)保護(hù)劑，合成反應(yīng)條件較為苛刻，專一性差，副 產(chǎn)物多，因此，化學(xué)合成不宜作為甲基化兒茶素的體外合成方法。體外酶法合成雖然專一性 強(qiáng)、反應(yīng)條件溫和、安全性高，但目前甲基化兒茶素的體外轉(zhuǎn)化研究均沒有對合成反應(yīng)物進(jìn) 行分離純化與結(jié)構(gòu)解析，沒有實(shí)現(xiàn)酶法合成產(chǎn)物的大量制備。從茶葉中直接提取甲基化兒 茶素，由于其來源于天然產(chǎn)物，有著較好的安全性。從食品工業(yè)角度看，作為一種大量使用 的功能性基料，必須考慮原料充足，方便，易得，無毒性，生產(chǎn)成本低等問題。因此，合理的方 法是從茶葉中直接提取甲基化兒茶素。經(jīng)過實(shí)驗(yàn)分析測定，比較一些中國產(chǎn)茶葉中甲基化 兒茶素的含量，發(fā)現(xiàn)中國產(chǎn)茶葉中一些茶葉的甲基化兒茶素含量較高。因此可以利用這些 茶葉為原料，結(jié)合吸附柱層析法的工藝，制備出富含甲基化兒茶素的茶多酚產(chǎn)品。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是以中國產(chǎn)茶葉為原料，提供一種制備富含甲基化兒茶 素茶多酚的方法，能夠保證提取的產(chǎn)品純度高、成本低、效率高、環(huán)境友好，且工藝易于實(shí)現(xiàn) 工業(yè)化生產(chǎn)。為解決上述問題，本發(fā)明提供了一種利用中國產(chǎn)茶葉作為原料制備富含甲基 化兒茶素茶多酚的方法，包括如下工藝步驟1)茶葉經(jīng)熱水提取，干燥，得到茶多酚粗提取物；
2)采用特定的大孔樹脂A處理茶多酚相提取物，先用水充分洗脫，去除色素和咖 啡堿；3)接著用一定濃度的乙醇溶液洗脫，收集洗脫液，經(jīng)濃縮和干燥，得到富含甲基化 兒茶素的茶多酚組分I (甲基化兒茶素含量18%左右)；4)采用Toyopearl HW-40S樹脂處理富含甲基化兒茶素的茶多酚組分I，用一定 濃度的乙醇溶液洗脫，收集不同時間的洗脫液，經(jīng)濃縮和干燥，分別得到(-)_表沒食予兒 茶素3-0(3-0-甲基)沒食子酸酯(EGCG3" Me)和(-)-3-0-甲基-表兒茶素沒食子酸酯 (ECG3’ Me)的單體成分(純度均大于95% )；5)采用特定的大孔樹脂B處理富含甲基化兒茶素的茶多酚組分I，用一定濃度的 乙醇溶液洗脫，收集特定時間的洗脫液，經(jīng)濃縮和干燥，得到富含甲基化兒茶素的茶多酚 II (甲基化兒茶素含量> 60% )。本發(fā)明所述工藝提取的EGCG3" Me和ECG3，Me純度均大于95%，制備得到的富含 甲基化兒茶素的茶多酚II中甲基化兒茶素含量大于60%，大孔吸附樹脂再生性能好，可以 再生重復(fù)利用，洗脫劑乙醇無毒無害，也可以回收多次利用。本工藝成本低、效率高、環(huán)境友 好，易于實(shí)現(xiàn)工業(yè)化生產(chǎn)。


圖1為富含甲基化兒茶素的茶多酚組分I的HPLC圖譜(其中8. 33anin和 10. 286min 分別為 EGCG3" Me 和 ECG3，Me)圖 2 為 EGCG3" Me 的 HPLC 圖譜圖3為EGCG3" Me的核磁共振氫譜4為ECG3’ Me的核磁共振氫譜圖具體實(shí)施方法1)茶多酚粗提取物茶葉用熱水浴浸提30min，料液比1 20，水浴溫度為80°C， 浸提之后在40°C下進(jìn)行減壓濃縮；2)大孔樹脂A處理選取大孔樹脂A，用pH3. 0緩沖液平衡，上樣液也調(diào)整成同樣 的PH，上樣后用水充分洗脫，水的洗脫流速為每小時2個柱床體積；3)富含甲基化兒茶素的茶多酚組分I 使用80%濃度的乙醇溶液洗脫大孔樹脂A， 流速為每小時1個柱床體積，收集洗脫液，在50°C下進(jìn)行減壓濃縮；4) Toyopearl HW-40S樹脂處理選取Toyopearl HW-40S樹脂，富含甲基化兒茶素 的茶多酚組分I上樣后使用40%濃度的乙醇溶液洗脫樹脂，流速為每小時1個柱床體積，分 別收集不同時間的洗脫液，將收集的不同組分在40°C下減壓濃縮、干燥；5)大孔樹脂B處理選取大孔樹脂B，富含甲基化兒茶素的茶多酚組分I上樣后使 用70%濃度的乙醇溶液洗脫樹脂，流速為每小時1個柱床體積，收集特定時間的洗脫液，在 40°C下減壓濃縮、干燥。
權(quán)利要求
1.制備富含甲基化兒茶素茶多酚的方法，包括如下步驟1)茶葉(甲基化兒茶素含量較高的中國產(chǎn)茶葉)經(jīng)熱水提取，干燥，得到茶多酚粗提取物；2)采用特定的大孔樹脂A處理茶多酚粗提取物，先用水充分洗脫，去除色素和咖啡堿；3)接著用一定濃度的乙醇溶液洗脫，收集洗脫液，經(jīng)濃縮和干燥，得到富含甲基化兒茶 素的茶多酚組分I (甲基化兒茶素含量18%左右)；4)采用ToyopearlHW-40S樹脂處理富含甲基化兒茶素的茶多酚組分I，用一定濃 度的乙醇溶液洗脫，收集不同時間的洗脫液，經(jīng)濃縮和干燥，分別得到(-)_表沒食子兒茶 素3-0(3-0-甲基)沒食子酸酯(EGCG3" Me)和(-)-3-0-甲基-表兒茶素沒食子酸酯 (ECG3’ Me)的單體成分(純度均大于95% )；5)采用特定的大孔樹脂B處理富含甲基化兒茶素的茶多酚組分I，用一定濃度的乙醇 溶液洗脫，收集特定時間的洗脫液，經(jīng)濃縮和干燥，得到富含甲基化兒茶素的茶多酚11(甲 基化兒茶素含量>60%)；
2.根據(jù)權(quán)利要求1所屬的制備富含甲基化兒茶素茶多酚的方法，其特征在于步驟1)中 茶葉提取的料液比為1 20，在80°C下水浴浸提30min。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所屬的制備富含甲基化兒茶素茶多酚的方法，其特征在于步驟2)中 選取的大孔樹脂A，用pH2. 0-3. O的緩沖液平衡，上樣液也調(diào)整成相同的pH值，上樣后用水 充分洗脫，水的洗脫流速為每小時1-2個柱床體積。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所屬的制備富含甲基化兒茶素茶多酚的方法，其特征在于步驟3)中 使用一定濃度的乙醇溶液(30% -50% )洗脫大孔樹脂A，流速為每小時1-2個柱床體積，收 集洗脫液，在40-50°C下減壓濃縮。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所屬的一種制備富含甲基化兒茶素茶多酚的方法，其特征在于步驟4)中選取的ToyopearlHW-40S樹脂，富含甲基化兒茶素的茶多酚組分I上樣之后使用一定 濃度的乙醇溶液(70% -80% )洗脫樹脂，流速為每小時1-2個柱床體積，分別收集不同時 間的洗脫液，將收集的不同組分在40-50°C下減壓濃縮、干燥。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所屬的一種制備富含甲基化兒茶素茶多酚的方法，其特征在于步驟5)中選取的大孔樹脂B，富含甲基化兒茶素的茶多酚組分I上樣之后使用一定濃度的乙醇 溶液(70% -80% )洗脫樹脂，流速為每小時1-2個柱床體積，收集特定時間的洗脫液，在 40-50°C下減壓濃縮、干燥。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種從中國產(chǎn)茶葉中制備富含甲基化兒茶素茶多酚的方法。包括如下步驟以一種甲基化兒茶素含最較高的中國產(chǎn)茶葉為原料，經(jīng)熱水提取與干燥得到粗提取物；粗提取物經(jīng)過大孔樹脂A處理之后，得到富含甲基化兒茶素的茶多酚組分I(甲基化兒茶素含量18％左右)；富含甲基化兒茶素的茶多酚組分I經(jīng)過Toyopearl HW-40S樹脂分離純化后，分別得到(-)-表沒食子兒茶素3-O(3-O-甲基)沒食子酸酯(EGCG3″Me)和(-)-3-O-甲基-表兒茶素沒食子酸酯(ECG3’Me)的單體成分(純度均大于95％)；富含甲基化兒茶素的茶多酚組分I經(jīng)過大孔樹脂B處理之后，得到富含甲基化兒茶素的茶多酚II(甲基化兒茶素含量＞60％)。作為一種成本低、效率高、環(huán)境友好的制備工藝，本發(fā)明易于工業(yè)化生產(chǎn)，具有廣闊的應(yīng)用前景。
文檔編號C07D311/62GK102086186SQ20111000727
公開日2011年6月8日 申請日期2011年1月14日 優(yōu)先權(quán)日2011年1月14日
發(fā)明者周蓓, 張鑫, 曾曉雄, 王琳, 高遠(yuǎn) 申請人:南京農(nóng)業(yè)大學(xué)