專利名稱：一種可直接標記的蘇丹紅i號及其制備方法和應用的制作方法
技術領域：
本發(fā)明屬于免疫學檢測技術領域，具體涉及一種可直接標記的蘇丹紅I號的制備 方法及其應用。
背景技術：
蘇丹紅I號是一種人工合成的偶氮類染料，不溶于水，具有很好的親脂性。作為一 種常用的工業(yè)染料，它被廣泛用于溶劑的增色以及紡織品的增光等方面。自21世紀初有關蘇丹紅I號污染食品的相關事件被曝光以來，人們越來越關注蘇 丹紅I號所引起的危害。研究表明蘇丹紅I號的致毒性與其代謝所生成的胺類及萘酚類 物質密切相關。當人食用或接觸含有蘇丹紅I號的食品后，它可以通過人體皮膚或消化系 統(tǒng)進入體內(nèi)。肝臟作為蘇丹紅I號產(chǎn)生致癌性的主要靶器官，一方面，其代謝產(chǎn)物苯胺可直 接作用于肝細胞，引起肝臟疾病，并且有可能誘發(fā)基因突變，增加癌變的幾率；另一方面，苯 胺進入人體后的代謝產(chǎn)物可以將狗2+氧化為狗3+，使得血紅蛋白無法結合氧從而導致患上 高鐵血紅蛋白癥。蘇丹紅I號的另一種代謝產(chǎn)物1-氨基-2-萘酚具有致癌、致畸、致敏、致 突變的潛在毒性。國際癌癥研究機構(International Agency for Research on Cancer, IARC)將 蘇丹紅I號歸為三類致癌物，即動物致癌物。1995年歐盟等國家禁止蘇丹紅作為食品添加 劑，中國也在1996年的《食品添加劑衛(wèi)生標準》中明令禁止使用蘇丹紅。但是由于其價廉易 得、色澤鮮亮持久等特點，仍然有一些不法食品生產(chǎn)商違規(guī)加工、違法使用蘇丹紅染料。這 不但給國家的食品安全帶來了很大的隱患，而且也給消費者的身心健康帶來嚴重威脅。目前，國內(nèi)外對食品中蘇丹紅I號的常用檢測方法是高效液相色譜法(HPLC)、高 效液相-質譜聯(lián)用法(HPLC-MS)、氣相色譜-質譜聯(lián)用法(GC-MS)、化學發(fā)光法等。這些方 法的樣品前處理比較復雜繁瑣，需要精密昂貴的儀器設備，同時還要有專門的儀器操作人 員等，很難達到快速、簡便的現(xiàn)場檢測要求，因此限制了其在基層檢測部門的大規(guī)模推廣使 用。酶聯(lián)免疫檢測分析(Enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA)由于具有特異 性強、靈敏度高、簡便、快速等優(yōu)點，近年來備受人們的關注。蘇丹紅I號作為小分子物質， 對于它的檢測，傳統(tǒng)的ELISA分析方法主要采用非競爭性間接ELISA，其操作步驟相對較 多，引入人為誤差的幾率較大。目前，國際上著名的檢測公司如拜耳等商業(yè)化的檢測小分子 物質試劑盒很多均采用競爭性一步法ELISA，其工作原理是將小分子物質直接標記上酶 或者其他的一些直接可以檢測的熒光基團，與待測樣品同時加入到檢測體系中，兩者與酶 標板上的抗體競爭性結合，待測物的含量與輸出信號呈負相關。這種方法大大縮短了檢測 步驟，從而達到快速、簡捷、減少人為誤差的目的。但是，蘇丹紅I號本身沒有可以直接和載 體蛋白偶聯(lián)的氨基或羧基，因此需要引入。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明要解決的技術問題是
蘇丹紅I號自身沒有可以直接和載體蛋白偶聯(lián)的氨基或羧基，因此需要引入。本發(fā)明 利用從頭合成的方法在不改變蘇丹紅I號主體分子結構中抗原決定簇的前提下，引入了活 性基團氨基，然后直接與熒光物質和酶連接，為建立蘇丹紅I號競爭性一步法ELISA檢測體 系解決競爭性抗原制備這一重要問題。本發(fā)明的技術方案是
本發(fā)明所述的一種可直接標記的蘇丹紅I號的結構為
權利要求
1.-種可直接標記的蘇丹紅I號，其結構為
2.根據(jù)權利要求1所述可直接標記的蘇丹紅I號的制備方法，其特征在于合成步驟為(1)、將18.5mmol對苯二胺溶解于無水四氫呋喃中，在攪拌的條件下，將溶解于無水四 氫呋喃中的18. 5mmol乙酸酐逐滴加入到對苯二胺溶液中，TLC監(jiān)測反應是否完全；(2)、將反應液過濾，留沉淀，沉淀用甲醇重結晶，得單氨基保護產(chǎn)物；(3)、將3.3mmol單氨基保護的樣品攪拌溶解于50ml含有2. 5ml濃鹽酸的冰水中；將 3. 3mmol亞硝酸鈉溶液緩慢滴加到上述溶液中，持續(xù)攪拌反應，得重氮鹽溶液；(4)、將溶解于10%NaOH溶液中的3. 3mmol β -萘酚逐滴加入到上述重氮鹽溶液中，滴 加完畢后，繼續(xù)攪拌反應4小時可見紅色沉淀生成；(5)、過濾，留沉淀，沉淀用甲醇溶解，按摩爾比1:10加入相應量的IM鹽酸，加熱回流 反應3-6小時，過柱即得產(chǎn)物。
3.根據(jù)權利要求1所述可直接標記的蘇丹紅I號，其特征在于與其偶聯(lián)的分子可以為 帶羧基的熒光分子物質或ELISA檢測中的辣根過氧化物酶或堿性磷酸酶。
4.根據(jù)權利要求1所述一種可直接標記的蘇丹紅I號在競爭性一步法ELISA檢測體系 中的應用。
全文摘要
本發(fā)明屬于免疫學檢測技術領域，具體涉及一種可直接標記的蘇丹紅I號的制備方法及其應用。該方法主要利用從頭合成的技術路線，在不改變蘇丹紅I號主體分子結構中抗原決定簇的前提下，成功引入了活性基團氨基，為蘇丹紅I號提供了一種可以直接與熒光物質和酶連接的修飾物的制備方法，為建立蘇丹紅I號競爭性一步法ELISA檢測體系解決了競爭性抗原制備這一重要問題。整個方法簡單易行，操作簡便，與熒光物質和酶連接的效率高。
文檔編號C07C245/10GK102115451SQ201010599388
公開日2011年7月6日 申請日期2010年12月22日 優(yōu)先權日2010年12月22日
發(fā)明者徐加發(fā), 沈萍萍, 范祚舟 申請人:南京大學