專(zhuān)利名稱(chēng)：一種高烏甲素分離純化方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于中藥有效成分提純領(lǐng)域，涉及一種高烏甲素分離純化方法。
背景技術(shù)：
高烏甲素(Lappaconitine)分子式=C32H44N2O8；化學(xué)結(jié)構(gòu)式高烏頭Aconitum sinomontanum Nakai為毛茛科烏頭屬高烏頭的干燥塊根。又名 龍骨七，九連環(huán)、麻布七、統(tǒng)天袋。高烏甲素是從高烏頭根中分離的生物堿，用于治療中度以 上疼痛。高烏甲素0. 15mg/kg超前鎮(zhèn)痛對(duì)婦科腔鏡術(shù)后鎮(zhèn)痛可產(chǎn)生較好的鎮(zhèn)痛效果以及可 減少阿片藥的用量，同時(shí)不影響麻醉恢復(fù)，也可用于甲狀腺手術(shù)患者的術(shù)后鎮(zhèn)痛。臨床常用 其氫溴酸鹽。氫溴酸鹽高烏甲素具有明顯的抗炎、消腫、解熱、局麻和鎮(zhèn)痛作用，無(wú)成癮性， 不良反應(yīng)少。鑒于高烏甲素具有以上藥理作用，有必要對(duì)其進(jìn)行分離純化，為中藥新藥開(kāi)發(fā)提 供優(yōu)質(zhì)資源，為氫溴酸鹽高烏甲素的合成提供高純度前體物質(zhì)。國(guó)內(nèi)對(duì)高烏甲素及其氫溴 酸鹽的提純研究較多，主要提取方法為溶劑回流或滲漉、浸漬提取，純化方法為酸堿除雜、 柱層析。關(guān)于高烏甲素提取分離方法的發(fā)明專(zhuān)利有4件(1)93100499. 3 (韋璧瑜，《高烏甲素的提取工藝》)該工藝將粉碎藥材經(jīng)乙醇加熱 回流后，過(guò)濾，濾液濃縮析晶，過(guò)濾，濾渣干燥劑干燥的方法得到高烏甲素結(jié)晶。該方法提取 時(shí)間長(zhǎng)，耗能大。(2) 200510042718. 8 (張濤，陳蘇濱，楊偉成，等，《氫溴酸高烏甲素的制備方法》) 該發(fā)明采用乙醇浸泡、滲漉提取，制得濃縮液，濃縮液經(jīng)酸化劑酸化，過(guò)濾，酸化液用堿化劑 堿化，堿化液加氯仿萃取，脫水劑脫水，回收氯仿，制得萃取液，萃取液加乙醇靜置、結(jié)晶，乙 醇洗滌制得高烏甲素結(jié)晶。該方法制得的結(jié)晶純度低。 (3) 200610041920. 3 (雷菊芳，《高烏甲素及其氫溴酸鹽的制備工藝》)該發(fā)明用乙 醇回流提取、乙醇浸漬提取、酸水滲漉提取，提取液濃縮后酸化，酸化液用堿化劑調(diào)PH8-12， 離心沉淀后，取上清液過(guò)大孔樹(shù)脂或氧化鋁柱。該工藝上清液中提取到的高烏甲素收率極低，該工藝制得的產(chǎn)品成本高。(4)200610104795. 6 (佘建文，《拉巴烏頭堿氫溴酸鹽的制備方法》)該發(fā)明將高烏 頭根粉碎，用酸性乙醇滲漉法、酸水滲漉法提取，酸性乙醇滲漉液減壓濃縮至流浸膏，冷卻， 靜置，過(guò)濾，用堿化劑調(diào)PH9-9. 8，用三氯甲烷萃?。凰崴疂B漉液加堿化劑調(diào)ρΗΙΟ-ΙΟ. 9，靜 置，分離，上清液棄去，沉淀物用三氯甲烷萃取或用1-2倍于沉淀物量的三氯甲烷溶解上大 孔樹(shù)脂柱，用乙醇-三氯甲烷洗脫。洗脫液濃縮，乙醇稀釋靜置、分離得高烏頭生物總堿，乙 醇重結(jié)晶得拉巴烏頭堿精制品。該工藝生產(chǎn)周期較長(zhǎng)，且使用大量三氯甲烷，不易回收，溶 劑殘留量較大。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種成本低、收率高，生產(chǎn)周期短的高烏甲素提純工藝。為了達(dá)到上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案是將高烏頭根粉碎，加入一定濃度 的乙醇中進(jìn)行超聲提取，提取液濃縮后用鹽酸溶解，上陽(yáng)離子交換樹(shù)脂柱，采用逆流上 樣，酸水溶液洗脫，洗脫液用堿調(diào)PH至中性，經(jīng)脫鹽處理后用氧化鋁柱層析分離，最后用丙 酮-乙醇(1 1)重結(jié)晶純化，干燥后即得高純度的高烏甲素。所述提取溶劑是濃度為40-95%的乙醇溶液，用量為原料質(zhì)量的3-20倍，超聲功 率為50-450W，超聲時(shí)間0. 5-2小時(shí)，提取1_6次，溫度控制在30_50°C。所用陽(yáng)離子交換樹(shù)脂可選大孔型強(qiáng)酸性離子交換樹(shù)脂。所用陽(yáng)離子交換樹(shù)脂柱的徑高比為1 4-1 10，上樣方式優(yōu)選為逆流上樣。洗脫所用的酸液是0. 5-10%的鹽酸溶液或0. 5-10%硫酸溶液。所述脫鹽方法可選透析除鹽法或膜過(guò)濾除鹽法。所用氧化鋁為中性氧化鋁，目數(shù)為150-300目，采用負(fù)壓短粗柱。所用洗脫劑為50-99%乙醇。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)1.有機(jī)溶劑尤其是有毒溶劑用量明顯減少、成本低、收率高，生產(chǎn)周期短，易于產(chǎn) 業(yè)化。2.陽(yáng)離子樹(shù)脂柱采用逆流上樣，可以發(fā)揮離子柱的最大交換效率，也避免了從上 端上樣時(shí)由于交換不完全而發(fā)生的提前穿透問(wèn)題。下面將結(jié)合具體實(shí)施方式
進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明，但本發(fā)明要求保護(hù)的范圍并不局限 于下列實(shí)施方式。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步的說(shuō)明。實(shí)施例1 稱(chēng)取Ikg粉碎粒度為40-60目的高烏頭塊根粉末，按固液比1 10(W/V)溶于 80%乙醇(50°C)中，于超聲提取器中提取40分鐘，功率為75W，提取3次，過(guò)濾，除去藥渣， 合并提取液，提取液濃縮后用鹽酸溶解，以5BV/h通過(guò)大孔型陽(yáng)離子交換樹(shù)脂(徑高比 1 6)，水洗至洗出液顏色變淺色，再用5%鹽酸溶液洗脫，洗脫速度為2BV/h，收集洗脫液， 至生物堿反應(yīng)為陰性(流出液滴于薄層板或?yàn)V紙片上，噴灑改良碘化鉍鉀試劑無(wú)紅棕色斑
4點(diǎn))。用氫氧化鈉中和至PH為7，透析除鹽，濾液濃縮成相對(duì)密度為1. 3的濃縮液，向濃縮 液中加入相當(dāng)于原料藥3-6倍量的中性氧化鋁粉末，攪拌均勻后于40-60°C烘干并粉碎， 過(guò)80-100目篩備用，將200目氧化鋁裝柱，連接負(fù)壓裝置，確認(rèn)連接正確后啟動(dòng)負(fù)壓泵，待 氣壓穩(wěn)定后將空氣流量調(diào)節(jié)為70L/h，打開(kāi)三通閥進(jìn)行引流，當(dāng)層析液內(nèi)原有的保存液全部 滲入層析柱后立即關(guān)閉三通閥，將高烏甲素粗提物加入層析柱，打開(kāi)三通閥，依次用50%、 75%,90%乙醇進(jìn)行梯度洗脫，每份4-5柱體積，薄層監(jiān)測(cè)，收集高烏甲素洗脫液。將洗脫 液減壓濃縮至干，丙酮-乙醇(1 1)重結(jié)晶3次，過(guò)濾，低溫干燥即得白色粉末6. 03g，經(jīng) HPLC檢測(cè)純度為97. 43%。實(shí)施例2 稱(chēng)取Ikg粉碎粒度為40-60目的高烏頭塊根粉末，按固液比1 14(W/V)溶于 90%乙醇(40°C)中，于超聲提取器中提取60分鐘，功率為50W，提取4次，過(guò)濾，除去藥渣， 合并提取液，提取液濃縮后用鹽酸溶解，以5BV/h通過(guò)大孔型陽(yáng)離子交換樹(shù)脂(徑高比 1 8)，水洗至洗出液顏色變淺色，再用1.0%鹽酸溶液洗脫，洗脫速度為2BV/h，收集洗脫 液，至生物堿反應(yīng)為陰性(流出液滴于薄層板或?yàn)V紙片上，噴灑改良碘化鉍鉀試劑無(wú)紅棕 色斑點(diǎn))。用氫氧化鈉中和至PH為7，透析除鹽，濾液濃縮成相對(duì)密度為1. 25的濃縮液， 向濃縮液中加入相當(dāng)于原料藥3-6倍量的中性氧化鋁粉末，攪拌均勻后于40-60°C烘干并 粉碎，過(guò)80-100目篩備用，將150目氧化鋁裝柱，連接負(fù)壓裝置，確認(rèn)連接正確后啟動(dòng)負(fù)壓 泵，待氣壓穩(wěn)定后將空氣流量調(diào)節(jié)為80L/h，打開(kāi)三通閥進(jìn)行引流，當(dāng)層析液內(nèi)原有的保存 液全部滲入層析柱后立即關(guān)閉三通閥，將高烏甲素粗提物加入層析柱，打開(kāi)三通閥，依次用 50%,80%、99%乙醇進(jìn)行梯度洗脫，每份4-5柱體積，薄層監(jiān)測(cè)，收集高烏甲素洗脫液。將 洗脫液減壓濃縮至干，丙酮-乙醇(1 1)重結(jié)晶4次，過(guò)濾，低溫干燥即得白色粉末5. 74g， 經(jīng)HPLC檢測(cè)純度為98. 16%。實(shí)施例3:稱(chēng)取2kg粉碎粒度為40-60目的高烏頭塊根粉末，按固液比1 16(W/V)溶于75% 乙醇(45°C)中，于超聲提取器中提取90分鐘，功率為150W，提取3次，過(guò)濾，除去藥渣，合 并提取液，提取液濃縮后用鹽酸溶解，以5BV/h通過(guò)大孔型陽(yáng)離子交換樹(shù)脂(徑高比 1 10)，水洗至洗出液顏色變淺色，再用2.0%鹽酸溶液洗脫，洗脫速度為2BV/h，收集洗脫 液，至生物堿反應(yīng)為陰性(流出液滴于薄層板或?yàn)V紙片上，噴灑改良碘化鉍鉀試劑無(wú)紅棕 色斑點(diǎn))。用氫氧化鈉中和全PH為7，透析除鹽，濾液濃縮成相對(duì)密度為1. 10的濃縮液， 向濃縮液中加入相當(dāng)于原料藥3-6倍量的中性氧化鋁粉末，攪拌均勻后于40-60°C烘干并 粉碎，過(guò)80-100目篩備用，將150目氧化鋁裝柱，連接負(fù)壓裝置，確認(rèn)連接正確后啟動(dòng)負(fù)壓 泵，待氣壓穩(wěn)定后將空氣流量調(diào)節(jié)為100L/h，打開(kāi)三通閥進(jìn)行引流，當(dāng)層析液內(nèi)原有的保存 液全部滲入層析柱后立即關(guān)閉三通閥，將高烏甲素粗提物加入層析柱，打開(kāi)三通閥，依次用 50%,70%,90%乙醇進(jìn)行梯度洗脫，每份4-5柱體積，薄層監(jiān)測(cè)，收集高烏甲素洗脫液。將 洗脫液減壓濃縮至干，丙酮-乙醇(1 1)重結(jié)晶4次，過(guò)濾，低溫干燥即得白色粉末11. 3g， 經(jīng)HPLC檢測(cè)純度為97. 87%。
權(quán)利要求
一種高烏甲素分離純化方法，以高烏頭根粉末為原料，包括溶劑提取、離子樹(shù)脂柱、氧化鋁柱和重結(jié)晶純化，其特征在于所述的溶劑提取是高烏頭根粉末加入一定濃度的乙醇中進(jìn)行超聲提取，提取液濃縮后用1％鹽酸溶解，上陽(yáng)離子交換樹(shù)脂柱，采用逆流上樣，酸水溶液洗脫，洗脫液用堿調(diào)pH至中性，經(jīng)脫鹽處理后用氧化鋁柱層析分離，最后用丙酮 乙醇(1∶1)重結(jié)晶純化。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述提取溶劑是濃度為40-95%的乙醇溶 液，用量為原料質(zhì)量的3-20倍，超聲功率為50-450W，超聲時(shí)間0. 5-2小時(shí)，提取1_6次，溫 度控制在30-50°C。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所用陽(yáng)離子交換樹(shù)脂可選大孔型強(qiáng)酸性 離子交換樹(shù)脂。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所用陽(yáng)離子交換樹(shù)脂柱的徑高比為 1:4-1: 10，上樣方式優(yōu)選為逆流上樣。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于洗脫所用的酸液是0.5-10%的鹽酸溶液 或0. 5-10%硫酸溶液。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所用氧化鋁為中性氧化鋁，目數(shù)為 150-300目，采用負(fù)壓短粗柱。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所用洗脫劑為50-99%乙醇。
全文摘要
一種高烏甲素分離純化方法，是一種集溶劑提取-離子樹(shù)脂柱-氧化鋁柱-重結(jié)晶方法對(duì)高烏頭進(jìn)行提取制備高純高烏甲素。用乙醇超聲提取，濃縮后用1％鹽酸溶解，逆流上陽(yáng)離子交換樹(shù)脂，酸洗脫，調(diào)pH至中性，經(jīng)脫鹽處理；柱層析采用短粗柱，填料為氧化鋁，流動(dòng)相為乙醇；重結(jié)晶溶劑為丙酮-乙醇(1∶1)。該分離純化方法，有機(jī)溶劑尤其是有毒溶劑量明顯減少、成本低、收率高，生產(chǎn)周期短，易于產(chǎn)業(yè)化。
文檔編號(hào)C07D221/22GK101967124SQ201010210238
公開(kāi)日2011年2月9日 申請(qǐng)日期2010年6月28日 優(yōu)先權(quán)日2010年6月28日
發(fā)明者劉東鋒, 楊成東, 郭琴 申請(qǐng)人:南京澤朗醫(yī)藥科技有限公司