專利名稱：含有二氯乙酰氧基的鉑(ii)類抗癌配合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種新型的含有二氯乙酰氧基的鉬(II)類抗癌配合物，所述二氯乙 酰氧基可以在癌細(xì)胞內(nèi)解離為靶向癌細(xì)胞線粒體的二氯乙酸。
背景技術(shù)：
癌癥是一種嚴(yán)重威脅人類健康和生命的疾病，是繼心血管疾病后的全球第二大死 亡原因。據(jù)世界衛(wèi)生組織大會(huì)估計(jì)，2005年全世界5800萬(wàn)死亡總數(shù)中，大約有760萬(wàn)人死 于癌癥，預(yù)計(jì)在今后10年將有8400萬(wàn)人死于癌癥。近年來(lái)，由于環(huán)境惡化、不良生活習(xí)慣以 及人口老齡化等因素的影響，我國(guó)的癌癥發(fā)生率也不斷增加，每年癌癥新發(fā)病例為220萬(wàn)， 因癌癥死亡人數(shù)為160萬(wàn)。因此，癌癥已成為人類亟待攻克的醫(yī)學(xué)難題之一。目前治療癌 癥主要有三大手段手術(shù)治療、放射治療和化學(xué)治療。然而，手術(shù)治療和放射治療主要針對(duì) 的是局部或區(qū)域性腫瘤，對(duì)發(fā)生全身多處轉(zhuǎn)移的惡性腫瘤只能依賴化學(xué)治療。此外，目前手 術(shù)治療和放射治療的技術(shù)已經(jīng)相當(dāng)完善，已不能期望繼續(xù)取得顯著進(jìn)步。而化學(xué)療法的歷 史雖然較短，但發(fā)展較快，已經(jīng)取得了很多成就，因而在治療腫瘤方面可以期望從化學(xué)療法 獲得更好的發(fā)展?；煹幕A(chǔ)是化療藥物，因此，世界各國(guó)每年都投入大量人力、物力和財(cái)力進(jìn)行 抗癌藥物的研究。鉬類抗癌藥物是上世紀(jì)70年代末發(fā)展起來(lái)的一類無(wú)機(jī)抗癌化合物， 由于其抗癌活性強(qiáng)、作用譜較廣、作用機(jī)制獨(dú)特、與非鉬類抗癌藥物不產(chǎn)生交叉耐藥性， 因而是治療許多腫瘤的首選藥物，得到廣泛使用。目前批準(zhǔn)上市的鉬類抗腫瘤藥物有六 個(gè)，它們分別是順鉬(cisplatin)、卡鉬(carboplatin)、奧沙利鉬(oxaliplatin)、奈達(dá)鉬 (nedaplatin)、舒鉬(sunpla, eptaplatin)和樂(lè)鉬(Iobaplatin)。特別是如化學(xué)結(jié)構(gòu)式 1 所示的卡鉬，它是繼順鉬后的第二代鉬抗癌藥，化學(xué)名為順-1，I"環(huán)丁烷二羧酸根 二氨合 鉬(II)，在全世界公認(rèn)的最有效的抗癌藥物之一，已被WHO列為世界基本藥物，收入包括我 國(guó)在內(nèi)的世界上大部分國(guó)家的藥典中，在臨床治療癌癥中得到廣泛的應(yīng)用。但是近年來(lái)不 斷出現(xiàn)對(duì)卡鉬產(chǎn)生耐藥性的病例，嚴(yán)重影響其臨床療效，同時(shí)卡鉬還存在較大的毒副作用 如骨髓抑制等。因此，研制新型的卡鉬衍生物也是目前抗癌藥研究的主要方向之一。
結(jié)構(gòu)式1卡鉑的化學(xué)結(jié)構(gòu)現(xiàn)已知，隨著腫瘤的長(zhǎng)大，癌細(xì)胞離血管越來(lái)越遠(yuǎn)，出現(xiàn)缺氧的狀態(tài)，而癌細(xì)胞的 快速分裂繁殖又需要及時(shí)得到大量的能量。由于通過(guò)線粒體獲得能量是有氧代謝，并且有 氧代謝的三羧酸循環(huán)路線長(zhǎng)，雖然轉(zhuǎn)化效率高，但獲得能量的速度慢。為了生存，癌細(xì)胞通常關(guān)閉線粒體的功能，采用糖原酵解的方式獲得能量。但線粒體在細(xì)胞內(nèi)除提供能量外，另 有激活不正常細(xì)胞自我毀滅的作用。當(dāng)癌細(xì)胞的線粒體關(guān)閉后，癌細(xì)胞也就可以不朽了。此 外，糖原酵解會(huì)產(chǎn)生大量的乳酸(這是癌組織顯酸性(PH= 5-6)的原因)，乳酸會(huì)破壞細(xì)胞 的粘接膠原，加速癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移。最近報(bào)道，二氯乙酸作為治療新陳代謝紊亂的老藥，可以 靶向癌細(xì)胞的線粒體，重新激活線粒體有氧代謝的功能，促使癌細(xì)胞凋亡。而鉬類化合物是 一類重要的抗癌藥，其作用靶點(diǎn)為癌細(xì)胞的DNA，可以抑制癌細(xì)胞DNA的分裂。因此，如果把 兩個(gè)化合物偶聯(lián)在一起，將起到協(xié)同作用，能夠提高抗癌效果。但二氯乙酸作為單羧酸，與 鉬(II)的配位弱，不能直接偶聯(lián)。通過(guò)大量的研究試驗(yàn)，本發(fā)明人將在癌細(xì)胞內(nèi)可以解離 為二氯乙酸的二氯乙酰氧基連接在卡鉬的離去基團(tuán)1，1_環(huán)丁烷二羧酸上，獲得了新型的 化合物3- 二氯乙酰氧基-1，1-環(huán)丁烷二羧酸(DCE-CBDCA)，并以此化合物為離去基團(tuán)，成功 合成了含有可以解離為二氯乙酸的二氯乙酰氧基的新型鉬(II)類抗癌配合物。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的一個(gè)目的是提供一種新型的含有二氯乙酰氧基的鉬(II)類配合物，其 在癌細(xì)胞內(nèi)可以解離出二氯乙酸，它是可以靶向癌細(xì)胞線粒體的成分。本發(fā)明的再一目的是提供所述含有二氯乙酰氧基的鉬(II)類配合物在制備治療 癌癥的藥物中的應(yīng)用。根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)方面，提供了一種如下通式2所示的含有二氯乙酰氧基的鉬 (II)類配合物 其中，A2為載體，為兩個(gè)單氨配體或一個(gè)二胺配體；η為結(jié)晶水的數(shù)量，為0或1。本發(fā)明的含有二氯乙酰氧基的鉬(II)類配合物中的A2優(yōu)選為(1)已上市的鉬類抗腫瘤藥物的氨/胺配體，如氨(2NH3)、1R，2R_ 二氨基環(huán)己烷 (DACH)、1，2-雙(氨甲基)_環(huán)丁烷、2-異丙基-(4R，5R)-4，5-雙(氨甲基)_1，3-二氧環(huán) 戊烷(EPTA-I)；(2)其他常見(jiàn)的二胺配體，如乙二胺、1，3_丙二胺、2-羥基-1，3-丙二胺、2-乙 基-(4R，5R)-4，5-雙(氨甲基)-1，3_ 二氧環(huán)戊烷(EPTA_2)、2_ 甲基-(4R，5R)-4，5-雙(氨 甲基)-1，3- 二氧環(huán)戊烷(EPTA-3)。艮P， 本發(fā)明的含有二氯乙酰氧基的鉬(II)類配合物最優(yōu)選為如下的配合物 本發(fā)明的含有二氯乙酰氧基的鉬(II)類配合物的制備方法是以K2PtCI4S起始原 料，加入KI，使其轉(zhuǎn)化成K2PtI4，再與載體A2反應(yīng)，制備出相應(yīng)的順-[Pt (II)A2I2]中間體； 該中間體再在水中與3-二氯乙酰氧基-1，1-環(huán)丁烷二羧酸銀等摩爾定量反應(yīng)，反應(yīng)完全后 過(guò)濾分離Agl，母液濃縮和冷凍干燥得到粗品。粗品經(jīng)水乙醇=1 1的體系中重結(jié)晶得 到本發(fā)明的配合物純品。本發(fā)明的鉬(II)類配合物的另一種制備方法為將順-[Pt (II) A2I2]中間體在水中與硝酸銀(1 2摩爾)定量反應(yīng)，反應(yīng)完全后過(guò)濾分離Agl，在母液中 加入過(guò)量的10% 3-二氯乙酰氧基-1，1-環(huán)丁烷二羧酸鉀，在60°C下減壓濃縮，析出本發(fā)明 的配合物晶體。所涉及的反應(yīng)為 或 本發(fā)明含有二氯乙酰氧基的鉬(II)類配合物在癌細(xì)胞內(nèi)依如下的反應(yīng)式進(jìn)行解離 本發(fā)明的鉬(II)類配合物在癌細(xì)胞內(nèi)的解離過(guò)程經(jīng)實(shí)驗(yàn)證明，本發(fā)明的含有二氯乙酰氧基的鉬(II)類配合物對(duì)肺癌細(xì)胞株Α549/ ATCC、胃癌細(xì)胞株SGC-7901和結(jié)腸癌細(xì)胞株ΗΤ-29的生長(zhǎng)繁殖有明顯的抑制作用，活性高 于臨床上最常用的鉬類藥物之一卡鉬，可用于臨床治療癌癥。因此，本發(fā)明還提供所述含有二氯乙酰氧基的鉬(II)類配合物在制備治療癌癥 的藥物中的應(yīng)用。所述癌癥包括但不限于肺癌、胃癌和結(jié)腸癌。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步闡述。這些實(shí)施例僅是出于解釋說(shuō)明的目 的，而不限制本發(fā)明的范圍和實(shí)質(zhì)。制備實(shí)施例1 3- 二氯乙酰氧基-1，1-環(huán)丁烷二羧酸及其銀鹽的制備先按文獻(xiàn)報(bào)道的方法[InorganicaChimica Acta，2004，357，4452-4466，其在此 以參考的方式引入本文]制備3-羥基-1，1-環(huán)丁烷二羧酸(mp 151-152°C)。取20g 3-羥 基-1，1-環(huán)丁烷二羧酸，溶于200mL丙酮，加入18. 4g新蒸二氯乙酰氯，于50°C攪拌4h，蒸 發(fā)除去溶劑，得粗品。將粗品在異丙醚重結(jié)晶，得到白色晶體，60°C烘干，得3-二氯乙酰氧 基-1，I-環(huán)丁烷二羧酸 20. 3g，mp :147-149°C，產(chǎn)率 60%。取3-二氯乙酰氧基-1，1_環(huán)丁烷二羧酸10g，溶于IOOmL的水中，用Imol/LNaOH(過(guò)量5% )，得到3- 二氯乙酰氧基_1，1_環(huán)丁 烷二羧酸銀沉淀，過(guò)濾收集沉淀，用水、乙醇洗滌后在60-70°C下真空干燥4小時(shí)，得到16g 3- 二氯乙酰氧基-1，1-環(huán)丁烷二羧酸銀，產(chǎn)率90%。制備實(shí)施例2順- [Pt (II)A2I2]中間體的制備(A2 = DACH或者EPTA-2)稱取5g K2PtCl4 (12mm0l)溶于50mL水中，過(guò)濾除去不溶物，在60°C下，緩慢加入 含KI 12g(72mmol)的水溶液50mL，避光反應(yīng)2_3小時(shí)后，滴加配體化合物A2 (DACH，12mmol ； 或者EPTA-2，12mmol)，得到黃色沉淀，過(guò)濾收集沉淀，用水、乙醇洗滌后在60-70°C下真空 干燥 4 小時(shí)，得到順-[Pt (II) (DACH) I2] (6. 2g，產(chǎn)率 92 % )，或者順-[Pt (II) (EPTA-2) I2] (6. 7g，產(chǎn)率 90% )。制備實(shí)施例3順-[1R，2R_ 二氨基環(huán)己烷·3_ 二氯乙酰氧基-1，1-環(huán)丁烷二羧酸 根合鉬(II)] (LLC-1502)的合成 取5g的順-[Pt (II) (DACH) I2]，懸浮于IOOmL水中，加入1 2摩爾量硝酸銀， 在45°C下攪拌反應(yīng)8小時(shí)，檢查反應(yīng)完全后過(guò)濾除去AgI沉淀，然后加入3- 二氯乙酰氧 基-1，1-環(huán)丁烷二羧酸鉀3. 05g,析出白色沉淀，過(guò)濾收集沉淀，得到順-[1R，2R- 二氨基環(huán) 己烷· 3- 二氯乙酰氧基-1，1-環(huán)丁烷二羧酸根合鉬(II) ] (2. 25g，產(chǎn)率50% )。特征結(jié)構(gòu)參數(shù)為<1> 元素分析C 29.0%, N 4. 86%, H 3.41%, Pt 33. 53%，該結(jié)果與理論值(C 29. 1%, N 4. 84%, H 3. 46%, Pt 33. 74% ) 一致。<2>FAB+-MS(m/e，RI) :579(M+，15% ) <3>IR(cm_1, KBr 壓片):3439，3232 (s，vNH3), 2941 (w, vCH2), 1748 (s, vC = 0), 1626 (vs, Vas(COCT))，1356 (s，vs (COCT))。<4>13C-NMR(DMS0, ppm) -.24. 04 (CH2) ,31. 45 (CH2) ,37. 84,37. 74 (CH2) ,48. 96(C), 62. 16,62. 01 (CH2)，64. 85 (CH)，67. 32 (CHCl2)，163. 92 (CO)，176. 15，175. 85 (CO)。制備實(shí)施例4順-[2-乙基-(4札510-4，5-雙(氨甲基)-1，3-二氧環(huán)戊烷.3-二 氯乙酰氧基-1，1_環(huán)丁烷二羧酸根合鉬(II)](LLC-1504)的合成 取 5g 的順-[Pt(EPTA-2)I2] (EPTA-2 = 2_ 乙基-(4R，5R) _4，5_ 雙(氨甲基)_1， 3- 二氧環(huán)戊烷)，懸浮于IOOmL水中，加入等摩爾量的3- 二氯乙酰氧基_1，1_環(huán)丁烷二羧
7酸銀3. 67g，在45°C下攪拌反應(yīng)12小時(shí)，檢查反應(yīng)完全后過(guò)濾除去AgI沉淀，母液減壓濃縮 到5mL，過(guò)濾收集白色晶體，得到順-[2-乙基-(4R，5R)-4，5-雙(氨甲基)_1，3-二氧環(huán)戊 烷· 3- 二氯乙酰氧基-1，1-環(huán)丁烷二羧酸根合鉬(II) ] (4. lg，產(chǎn)率81 % )。水溶性大于 25mg/mL (室溫)。特征結(jié)構(gòu)參數(shù)為<1> 元素分析C 29.0%, N 4. 54%, H 3. 20%, Pt 31. 21 %，該結(jié)果與理論值(C 28. 95%, N 4. 50%, H 3. 24%, Pt 31. 35% ) 一致。<2>FAB+-MS(m/e，RI) 514([M-CHCl2CO]+，100% ),624(M+, 10% ) <3>IR(cm_1, KBr 壓片):3431，3231 (s，νΝΗ2), 2974, 2943 (w, vCH2), 1719 (s, vC = 0)，1638 (vs, vas(C00_))，1376 (s，vs (C00_))。<4>13C-WR(DMS0，ppm) :6. 8 (CH3CH2)，25. 8 (CH3CH2)，39. 8,41. 1 (2CH2,環(huán)丁燒)， 48. 0,48. 7 (C-l,環(huán)丁烷)，60· 7(C-3，環(huán)丁烷)，67. 6 (CHCl2)，77. 6，77. 8 (2CH2NH2)，79. 4， 79. 5(C-4, C-5,1，3- 二氧戊環(huán))，105. 6(C_2，1，3_ 二氧戊環(huán))，170. 2 (0C0CHC12)，180. 7， 108. 9 (2C0CT)。本發(fā)明配合物L(fēng)LC-1501和LLC-1503采用與上述相似的方法制備而成。實(shí)驗(yàn)實(shí)施例1本發(fā)明配合物的抗癌作用將本發(fā)明的配合物溶于水中，以卡鉬作對(duì)照采用經(jīng)典的磺酰羅丹明 B (Sulforhodamine B, SRB)方法測(cè)定不同濃度(μ M)的下表1中的配合物對(duì)A549/ATCC (人 非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞株)，SGC-7901(人胃癌細(xì)胞株)和ΗΤ-29(人結(jié)腸癌細(xì)胞株)增殖的抑 制程度。具體方法如下腫瘤細(xì)胞用RPMI 1640或DMEM培養(yǎng)基(Gibco)培養(yǎng)，內(nèi)含10%胎牛血清，培養(yǎng)條 件為37°C，5% CO20根據(jù)腫瘤細(xì)胞類型，分別接種0. 4 1. OX IO4細(xì)胞/孔于96-孔板， 24小時(shí)后，加入10倍稀釋的目標(biāo)化合物；化合物至少含5個(gè)濃度100,10,1,0. 1,0. OlyM0 化合物處理72小時(shí)后，棄去培養(yǎng)液，用10%冷三氯醋酸固定細(xì)胞。然后用磺酰羅丹明 B (Sulforhodamine B, SRB)溶液染色。洗去未結(jié)合SRB后，用Tris溶解與蛋白結(jié)合的SRB， 用酶標(biāo)儀在520nm波長(zhǎng)下測(cè)定OD值，以下列公式計(jì)算細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率抑制率=(0D值對(duì)照孔-OD值給藥孔)/OD值對(duì)照孔X 100 %根據(jù)各濃度抑制率，采用Logit法計(jì)算半數(shù)抑制濃度IC5Q。結(jié)果列在下面表1中。表1.所合成的配合物對(duì)癌細(xì)胞的半數(shù)抑制濃度 從表1的結(jié)果可以看出，本發(fā)明配合物的抗癌活性明顯高于卡鉬。與卡鉬相比，除 化合物DCE-CBDCA的鈉鹽以外，本發(fā)明配合物對(duì)人胃癌細(xì)胞株SGC-7901、人非小細(xì)胞肺癌 細(xì)胞株A549/ATCC和人結(jié)腸癌細(xì)胞株HT-29均有較明顯增強(qiáng)的活性，說(shuō)明本發(fā)明配合物是 具有廣譜抗腫瘤作用的配合物。
權(quán)利要求
一種如下通式2所示的含有二氯乙酰氧基的鉑(II)類配合物其中，A2為載體，為兩個(gè)單氨配體或一個(gè)二胺配體，所述單氨配體為NH3，所述二胺配體為1R，2R 二氨基環(huán)己烷、1，2 雙(氨甲基) 環(huán)丁烷、2 異丙基 (4R，5R) 4，5 雙(氨甲基) 1，3 二氧環(huán)戊烷、乙二胺、1，3 丙二胺、2 羥基 1，3 丙二胺、2 乙基 (4R，5R) 4，5 雙(氨甲基) 1，3 二氧環(huán)戊烷或2 甲基 (4R，5R) 4，5 雙(氨甲基) 1，3 二氧環(huán)戊烷；n為結(jié)晶水的數(shù)量，為0或1。FSA00000035312300011.tif
2.如權(quán)利要求1所述的含有二氯乙酰氧基的鉬(II)類配合物，其選自
3.如權(quán)利要求1或2所述的含有二氯乙酰氧基的鉬(II)類配合物在制備治療癌癥的 藥物中的用途。
4.如權(quán)利要求3所述的用途，其中，所述癌癥包括肺癌、胃癌和結(jié)腸癌。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種如下通式2所示的含有二氯乙酰氧基的鉑(II)類抗癌配合物其中，A2為載體，為兩個(gè)單氨配體或一個(gè)二胺配體；n為結(jié)晶水的數(shù)量，為0或1。
文檔編號(hào)C07F15/00GK101914117SQ20101010973
公開(kāi)日2010年12月15日 申請(qǐng)日期2010年2月11日 優(yōu)先權(quán)日2010年2月11日
發(fā)明者侯樹(shù)謙, 全海天, 劉偉平, 葉青松, 樓麗廣, 諶喜珠, 謝成英 申請(qǐng)人:中國(guó)科學(xué)院上海藥物研究所;昆明貴金屬研究所