專利名稱：Bcr-復(fù)合體-特異性抗體和其使用方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及特異性結(jié)合BCR復(fù)合體的嵌合抗體和人源化抗體，并且尤其是BCR復(fù) 合體的嵌合抗體和人源化抗體。本發(fā)明還涉及抗體和包含它們的組合物用于下列疾病的診 斷、預(yù)后和治療的方法例如，癌癥、自身免疫疾病、炎性疾患和傳染病。相關(guān)技術(shù)說明B細(xì)胞受體(BCR) &BCR復(fù)合體B細(xì)胞是負(fù)責(zé)產(chǎn)生抗體的免疫系統(tǒng)細(xì)胞。B細(xì)胞對(duì)抗原的反應(yīng)是正常免疫系統(tǒng)的 基本組成。B細(xì)胞擁有特化的細(xì)胞表面受體(B細(xì)胞受體；“BCR”)。如果B細(xì)胞遇到能夠 結(jié)合該細(xì)胞的BCR的抗原，則B細(xì)胞將被刺激而增殖并產(chǎn)生對(duì)所結(jié)合的抗原特異性的抗體。 為了產(chǎn)生對(duì)抗原的有效反應(yīng)，還需要BCR相關(guān)蛋白和T輔助細(xì)胞?？乖?BCR復(fù)合體是內(nèi)化 的，并且抗原被蛋白水解加工。一小部分的抗原保持與B細(xì)胞表面上的主要組織相容性復(fù) 合體-II( “MHCII”)分子復(fù)合，這時(shí)復(fù)合體可以被T細(xì)胞識(shí)別。被這種抗原呈遞激活的T 細(xì)胞分泌誘導(dǎo)B細(xì)胞成熟的多種淋巴因子。通過BCR進(jìn)行的信號(hào)傳導(dǎo)在產(chǎn)生抗體、自身免疫性和免疫耐受的建立中起重要的 作用(Gauld等人(2002) Science 296(5573) 1641-1642)。仍在骨髓中的結(jié)合自身抗原的 未成熟的B細(xì)胞被凋亡清除。相反，結(jié)合在成熟B細(xì)胞上的抗原導(dǎo)致激活、增殖、無反應(yīng)性 和凋亡。觀察到的具體功能反應(yīng)取決于B細(xì)胞是否接收到通過其它表面受體的共刺激信號(hào) 和激活的特定信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑。BCR由膜免疫球蛋白與非共價(jià)締合的⑶79的α和β亞基(分別為“⑶79a”和 “⑶79b”)一起形成BCR復(fù)合體而構(gòu)成。⑶79a和⑶79b是信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)亞基，它們含有信號(hào)轉(zhuǎn) 導(dǎo)所需的保守的基于免疫受體酪氨酸的激活基序(“ITAM”)(Dylke等人(2007) Immunol. Lett. 112(1) 47-57 ；Cambier (1995) Immunol. Today 16:110)。多價(jià)抗原引起的 BCR 復(fù)合 體聚集啟動(dòng)⑶79a和⑶79b ITAM的轉(zhuǎn)磷酸作用以及受體相關(guān)激酶的激活(DeFranco (1997) Curr. Opin. Immunol. 9 :296_308 ；Kurosaki (1997) Curr. Opin. Immunol. 9 :309_318 ；Kim 等 人(1993) Immun. Rev. 132 125-146)。磷酸化的ITAM募集其他的效應(yīng)子，例如PI3K、PLC_ γ 和Ras/MAPK途徑的成員。這些信號(hào)傳導(dǎo)事件負(fù)責(zé)B細(xì)胞增殖和激活標(biāo)記物(例如MHCII 和CD86)的表達(dá)增加，這些是初免B細(xì)胞以便它們隨后與T-輔助(“Th”)細(xì)胞相互作用所 需的。
⑶79表達(dá)限制在B細(xì)胞中并且在非霍奇金淋巴瘤細(xì)胞(NHL)中表達(dá)(Olejniczak 等人(2006) Immunol. Invest. 35 93-114 ；D' Arena φ 人(2000) Am. J. Hematol. 64 275-281 ；Cabezudo 等人(1999) Haematologica84 :413_18)。CD79a 和 CD79b 以及可溶性免 疫球蛋白(“slg”)全部都是⑶79的表面表達(dá)所需要的。NHL上的⑶79b的平均表面表達(dá)與 在正常B細(xì)胞上所觀察到的類似，但是具有更大的范圍(Matsuuchi等人(2001)Curr. Opin. Immunol. 13(3) :270_277)。慢性淋巴細(xì)胞性白血病細(xì)胞中的⑶79b表達(dá)與免疫球蛋白重 鏈基因中的突變相關(guān)，但是似乎不充當(dāng)臨床嚴(yán)重程度的獨(dú)立預(yù)測(cè)(Cajiao等人(2007)Am J. Hematol. 82(8) :712_720)。CD79a和CD79b均參與非抗原依賴性(強(qiáng)直的(tonic))和抗 原依賴性的 BCR信號(hào)傳導(dǎo)(Fuentes-Pananci 等人(2006) J. Immunol. 177(11) :7913_7922)。已顯示結(jié)合BCR復(fù)合體的抗體(“抗-BCR復(fù)合體抗體”)通過引起B(yǎng)CR解離或通過 阻抑(下調(diào))BCR功能而破壞BCR信號(hào)傳導(dǎo)(參見，例如美國(guó)專利第6，503，509號(hào)；Poison等 人(2007) Blood 110(2) :616_623 ；Zhang 等人(1995) Ther. Immunol. 2(4) 191-202)。阻抑 一般是更可取的，因?yàn)樗苊饬丝赡懿黄谕腂細(xì)胞損耗和所引起的副作用。這種抗-BCR 復(fù)合體抗體在自身免疫疾病、癌癥、炎性疾病和移植的治療中具有治療用途。然而，由于人 免疫系統(tǒng)攻擊抗-BCR復(fù)合體鼠抗體，因此其使用引發(fā)減少的人抗-小鼠抗體(“HAMA”)反 應(yīng)的改進(jìn)的抗體是期望的。同樣，表現(xiàn)出改善的結(jié)合親和力或改變的效應(yīng)子功能的抗-BCR 復(fù)合體抗體是期望的。Fc 受體抗體-抗原復(fù)合體與免疫系統(tǒng)的細(xì)胞的相互作用導(dǎo)致了廣泛的一系列的反應(yīng)，其 范圍從效應(yīng)子功能如抗體依賴性細(xì)胞毒性、肥大細(xì)胞脫顆粒和吞噬作用到免疫調(diào)節(jié)信號(hào)， 如調(diào)節(jié)淋巴細(xì)胞增殖和抗體分泌。所有這些相互作用均是通過抗體或免疫復(fù)合體的Fc結(jié) 構(gòu)域與Fc受體的結(jié)合啟動(dòng)的，F(xiàn)c受體是造血細(xì)胞上的特化的細(xì)胞表面受體。由抗體和免 疫復(fù)合體所觸發(fā)的細(xì)胞反應(yīng)的多樣性是由Fc受體的結(jié)構(gòu)不均一性產(chǎn)生的。Fc受體共同擁 有結(jié)構(gòu)上相關(guān)的配體結(jié)合結(jié)構(gòu)域，該結(jié)構(gòu)域大概介導(dǎo)細(xì)胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)。 免疫球蛋白基因超家族的蛋白成員Fc受體是可以結(jié)合免疫球蛋白分子的Fc部 分的表面糖蛋白。該家族的每個(gè)成員通過Fc受體的α鏈上的識(shí)別結(jié)構(gòu)域識(shí)別一種或多 種同種型的免疫球蛋白。Fc受體是由他們對(duì)免疫球蛋白亞型的特異性定義的。IgG的Fc 受體稱為"Fe y R”，IgE的Fc受體稱為"F ε R”并且IgA的Fc受體稱為"Fe α R”。不同的 佐細(xì)胞擁有不同同種型抗體的Fc受體，并且抗體的同種型決定了哪些佐細(xì)胞將參與給定 的反應(yīng)(Billadeau 等人(2002) J. Clin. Investigat. 2 (109) :161_81 ；Gerber 等人(2001) Microbes Infection 3 :131_139 ；Ravetch 等人(2001)Annu. Rev. Immunol. 19 :275_90 ； Ravetch 等人(2000) Science 290 :84_89 ；Ravetch (1994) Cell78(4) 553-560 ；Ravetch 等 人(1991) Annu. Rev. Immunol. 9 :457_492 ；還參見，Immunobiology :The Immune System in Health and Disease(免疫生物學(xué)健康與疾病中的免疫系統(tǒng))(第4版，1999年)，Elsevier Science Ltd/GarlandPublishing, New York)。各種受體的總括呈現(xiàn)在表 1 中。
權(quán)利要求
1.一種多肽，所述多肽結(jié)合人BCR復(fù)合體，其中所述多肽包含免疫球蛋白輕鏈可變區(qū) (Vl)的氨基酸序列，所述免疫球蛋白輕鏈可變區(qū)為包含下列的BCC \的人源化變體(A)在Kabat殘基37處的修飾；(B)在Kabat殘基45處的修飾；或(C)(A)和⑶兩者。
2.如權(quán)利要求1所述的多肽，其中所述BCCVl的人源化變體具有(A)在Kabat殘基37處的亮氨酸取代；(B)在Kabat殘基45處的賴氨酸或天冬酰胺取代；或(C)(A)和⑶兩者。
3.如權(quán)利要求1所述的多肽，其中所述\具有在Kabat殘基37處的亮氨酸和在Kabat 殘基45處的賴氨酸。
4.如權(quán)利要求1所述的多肽，其中所述\具有在Kabat殘基37處的亮氨酸和在Kabat 殘基45處的天冬酰胺。
5.如權(quán)利要求1所述的多肽，其中所述多肽包含選自由下列組成的組的氨基酸序列 SEQ ID NO 10,SEQ ID NO 12,SEQ ID NO 14、SEQ IDNO 16、SEQ ID N0:18 禾口 SEQ ID NO: 20。
6.一種多肽，所述多肽結(jié)合人BCR復(fù)合體，其中所述多肽包含免疫球蛋白重鏈可變區(qū) (Vh)的氨基酸序列，所述免疫球蛋白重鏈可變區(qū)是BCC Vh的人源化變體，所述變體包含在 Kabat殘基48、62、66、67、68、69、70、71和73的一處或多處的修飾。
7.如權(quán)利要求6所述的多肽，其中所述BCCVh的人源化變體包含選自由下列組成的組 的一種或多種修飾(A)在Kabat殘基48處的異亮氨酸取代；(B)在Kabat殘基62處的賴氨酸取代；(C)在Kabat殘基66處的賴氨酸取代；(D)在Kabat殘基67處的丙氨酸取代；(E)在Kabat殘基69處的亮氨酸取代；(F)在Kabat殘基71處的纈氨酸取代；和(G)在Kabat殘基73處的賴氨酸取代。
8.如權(quán)利要求7所述的多肽，其中所述多肽包含選自由下列組成的組的氨基酸序列 SEQ ID NO :22、SEQ ID NO :24、SEQ ID NO :26、SEQ IDNO :28、SEQ ID NO :30、SEQ ID NO 32、SEQ ID N0:34 禾口 SEQ ID NO :36。
9.如權(quán)利要求1-8任一項(xiàng)所述的多肽，其中所述多肽是單鏈抗體或雙體。
10.一種多肽，所述多肽包含至少兩個(gè)抗體可變結(jié)構(gòu)域(I)其中所述抗體可變結(jié)構(gòu)域的第一個(gè)是輕鏈可變結(jié)構(gòu)域(VJ，所述輕鏈可變結(jié)構(gòu)域 是包含下列的BCC Vl的人源化變體(A)在Kabat殘基37處的修飾；(B)在Kabat殘基45處的修飾；或(C)(A)和⑶兩者；并且(II)其中所述抗體可變結(jié)構(gòu)域的第二個(gè)是重鏈可變結(jié)構(gòu)域(Vh)，所述重鏈可變結(jié)構(gòu)域是包含在Kabat殘基48、62、66、67、68、69、70、71和73的一處或多處的修飾的BCC Vh的人 源化變體。
11.如權(quán)利要求10所述的多肽，其中(I)所述第一抗體可變結(jié)構(gòu)域包含(A)在Kabat殘基37處的亮氨酸取代；(B)在Kabat殘基45處的賴氨酸或天冬酰胺取代；或(C)(A)和⑶兩者；并且(II)所述第二抗體可變結(jié)構(gòu)域包含選自由下列組成的組的一種或多種修飾(A)在Kabat殘基48處的異亮氨酸取代；(B)在Kabat殘基62處的賴氨酸取代；(C)在Kabat殘基66處的賴氨酸取代；(D)在Kabat殘基67處的丙氨酸取代；(E)在Kabat殘基69處的亮氨酸取代；(F)在Kabat殘基71處的纈氨酸取代；和(G)在Kabat殘基73處的賴氨酸取代。
12.如權(quán)利要求10所述的多肽，其中(I)所述第一抗體可變結(jié)構(gòu)域包含選自由下列組成的組的氨基酸序列SEQID NO 10, SEQ ID NO: 12、SEQ ID NO: 14、SEQ ID NO: 16、SEQ IDNO : 18 和 SEQ ID NO 20 ；(II)所述第二抗體可變結(jié)構(gòu)域包含選自由下列組成的組的氨基酸序列SEQID NO 22、SEQ ID NO :24、SEQ ID NO :26、SEQ ID NO :28、SEQ ID NO :30、SEQ ID NO :32、SEQ ID NO :34 禾口 SEQ ID NO :36。
13.如權(quán)利要求12所述的多肽，其中所述第一抗體可變結(jié)構(gòu)域包含SEQID NO :16的 氨基酸序列，并且所述第二抗體可變結(jié)構(gòu)域包含SEQ IDNO 34的氨基酸序列。
14.如權(quán)利要求10-13任一項(xiàng)所述的多肽，其中所述多肽是抗體。
15.如權(quán)利要求14所述的抗體，其中所述抗體包含變體Fc結(jié)構(gòu)域，所述變體Fc結(jié)構(gòu)域 與野生型Fc結(jié)構(gòu)域相比在Fc結(jié)構(gòu)域中具有至少一種修飾。
16.如權(quán)利要求15所述的抗體，其中所述修飾包括(A)選自由下列組成的組的至少一個(gè)取代F243L、D270E、R292P、S298N、Y300L、V305I、 A330V 和 P396L ；(B)選自由下列組成的組的至少兩個(gè)取代F243L和P396L；F243L和R292P ；以及R292P 和 V305I ；(C)選自由下列組成的組的至少三個(gè)取代F243L、R292P和Y300L；F243L、R292P和 V305I ；F243L、R292P 和 P396L ；以及 R292P、V305I 知 P396L ；(D)選自由下列組成的組的至少四個(gè)取代F243L、R292P、Y300L和P396L；以及F243L、 R292P、V305I 和 P396L ；或(E)至少F243L、R292P、Y300L、V305I 和 P396 取代。
17.如權(quán)利要求16所述的抗體，其中所述變體Fc結(jié)構(gòu)域與野生型Fc結(jié)構(gòu)域相比表現(xiàn) 出改變的效應(yīng)子功能，其中所述改變的效應(yīng)子功能選自由下列組成的組(A)增強(qiáng)的抗體依賴性細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性(ADCC)功能；(B)增強(qiáng)的補(bǔ)體依賴性細(xì)胞毒性(CDC)功能；(C)與野生型Fc結(jié)構(gòu)域相比增加的與激活性Fcγ R的結(jié)合；(D)與野生型Fc結(jié)構(gòu)域相比降低的與FcYRIIB的結(jié)合；或者(E)與野生型Fc結(jié)構(gòu)域相比增加的與Fcy RIIB的結(jié)合。
18.如權(quán)利要求14-17任一項(xiàng)所述的抗體，其中所述抗體是F(ab')2片段、單克隆抗 體、F(ab)片段、單鏈抗體或雙體。
19.如權(quán)利要求14-18任一項(xiàng)所述的抗體，其中所述抗體與異源多肽可操作地連接。
20.一種編碼權(quán)利要求1-19任一項(xiàng)所述的多肽的多核苷酸。
21.如權(quán)利要求1-19任一項(xiàng)所述的多肽在制備用于治療癌癥或自身免疫疾病或免疫 介導(dǎo)的炎性疾病的藥物中的用途。
22.如權(quán)利要求21所述的用途，其中所述藥物用于治療造血性癌癥。
23.如權(quán)利要求22所述的用途，其中所述治療包括與所述抗體同時(shí)或順序施用第二治 療劑的步驟。
24.如權(quán)利要求21所述的用途，其中所述藥物用于治療自身免疫疾病或免疫介導(dǎo)的炎 性疾病。
25.如權(quán)利要求24所述的用途，其中所述自身免疫疾病或免疫介導(dǎo)的炎性疾病選自由 下列組成的組克羅恩病、多發(fā)性硬化、銀屑病、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、1型糖 尿病、血管炎；哮喘、濕疹和特發(fā)性皮炎、纖維化、移植排斥、移植物抗宿主病和炎性腸病。
全文摘要
本發(fā)明涉及特異性結(jié)合BCR復(fù)合體的嵌合抗體和人源化抗體，并且尤其是BCR復(fù)合體的嵌合抗體和人源化抗體。本發(fā)明還涉及抗體和包含它們的組合物用于下列疾病的診斷、預(yù)后和治療的方法例如，癌癥、自身免疫疾病、炎性疾患和傳染病。
文檔編號(hào)C07K16/00GK102046655SQ200980119622
公開日2011年5月4日 申請(qǐng)日期2009年3月25日 優(yōu)先權(quán)日2008年4月2日
發(fā)明者萊斯利·S·約翰遜, 菱·黃 申請(qǐng)人:宏觀基因有限公司