專利名稱：硫化劑及其用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及用作硫化劑的化合物，S卩，通過(guò)將雙鍵硫原子加入到所述化合物中而 氧化化合物，特別是含磷化合物。所述硫化劑例如特別適用于穩(wěn)定核苷酸間鍵合，并產(chǎn)生阻 燃劑。
背景技術(shù)：
寡核苷酸及其合成衍生物作為研究工具和藥物已經(jīng)變?yōu)橹匾呢?cái)富。其作用是多 方面的，從恢復(fù)RNase H到消化目標(biāo)mRNA，通過(guò)外顯子跳躍調(diào)節(jié)治療和生物學(xué)相關(guān)起始密 碼子靶的反義阻斷至小干擾RNA(SiRNA)工具和治療。核酸的穩(wěn)定性在所述工具和治療的效果中是重要的因素，因?yàn)槔鏒NA和RNA中 的正常磷酸酯鍵容易水解。為了避免不期望的過(guò)程，已經(jīng)合成了天然核酸的更穩(wěn)定的類似 物，包括PNA、ENA/BNA、LNA和ΡΜ0。此外，穩(wěn)定化可以通過(guò)RNA中的2' -OH基團(tuán)的烷基化 來(lái)實(shí)現(xiàn)，得到一系列衍生物，其中有2' -0甲基化和烯丙基化衍生物。通過(guò)用硫代磷酸酯 (P = S)代替磷酸酯(P = 0)核苷酸間鍵合可以引入另一個(gè)穩(wěn)定因素。在化學(xué)和生物學(xué)研究中，肽的磷衍生物變得越來(lái)越重要。磷酸化蛋白質(zhì)被認(rèn)為是 在通過(guò)蛋白激酶和磷酸酯酶進(jìn)行蛋白質(zhì)調(diào)控和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)中的關(guān)鍵中間體，憑借所述磷酸化 蛋白質(zhì)與絲氨酸、蘇氨酸或酪氨酸的側(cè)鏈羥基形成磷酸單酯。磷酸化肽(磷酸肽，Curr. Org. Chem. 2007，11,409)被用于了解磷酸化的作用機(jī)理以及磷酸化在疾病中的作用。本發(fā)明中所涉及的這些含磷結(jié)構(gòu)的硫化(含P = S)類似物對(duì)于這些領(lǐng)域的發(fā)展 是重要的。P = S鍵的引入可以通過(guò)使用硫化劑來(lái)實(shí)現(xiàn)，所述硫化劑將由新核苷酸的偶合形 成的中間三價(jià)磷原子氧化成五價(jià)原子。由于天然硫磺S8僅與三價(jià)磷緩慢反應(yīng)，因此在過(guò)去的幾十年中已經(jīng)制備和分 析了大量硫化劑。其中一種是普通Beaucage試劑(J Org. Chem. 1990，55，4693)。除了 Beaucage試劑外，在實(shí)驗(yàn)室中還可以使用其它試劑，尤其是在寡核苷酸合成領(lǐng)域中。其中 有二硫化二苯乙酰(PADS, Nucleos. Nucleot. 1999，18，485)、二硫化四乙基秋蘭姆(TETD， Tetrahedron Lett. 1991，32，3005)、雙(0，0-二異丙氧基硫膦基)二硫化物(S-tetra， Tetrahedron Lett. 1993，33，5317)和 3-乙氧基-1，2，4-二噻唑啉-5-酮(EDITH, Nucleos. Nucleot. 1997，16，1585)。W0-2005/097817給出了用于寡核苷酸合成和純化的試劑列表。優(yōu)選試劑是3_氨 基-1，2，4- 二噻唑啉-5-酮。不幸的是，在本領(lǐng)域內(nèi)硫化劑的制備通常是非常復(fù)雜的。US 5，852，168公開了廣 泛使用的Beaucage試劑的合成可能性、溶解性和穩(wěn)定性都不是最佳的，并對(duì)相同試劑用于 大規(guī)模寡核苷酸制備的適用性提出質(zhì)疑。用容易由易獲得的便宜的原料合成的硫化化合物 替代上述試劑將是受歡迎的。Zhiwei Wang等人在“Dimethylthiuram Disulfide. New Sulfur TransferReagent in Phosphorothioate Oligonucleotide Synthesis，，Methods，MolecularBiology，Vol. 288 (2005), p. 51-63中對(duì)二硫化二甲基秋蘭姆(DTD)作為硫化劑與前述PADS進(jìn)行了比 較。作者得出的結(jié)論是，DTD可以降低總共20%的溶劑消耗并且將總的合成時(shí)間減少25%。 US 6，809，195教導(dǎo)了類似的結(jié)論。所述內(nèi)容在此援引加入。不幸的是，如Wang等人的文獻(xiàn)的58頁(yè)中所述，在添加堿時(shí)，DTD快速降解。這不 利地限制了其應(yīng)用。而且，合成涉及到易燃和刺激性成分，以及DTD伴有持久的令人不愉快 的氣味。因此，對(duì)于易于生產(chǎn)的酸堿穩(wěn)定的試劑的需求仍然存在。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的一個(gè)目的是提供一種硫化劑，其不受前述缺點(diǎn)阻礙，并且是酸堿穩(wěn)定的?，F(xiàn)在發(fā)現(xiàn)，一組特定的化合物，尤其是甲脒二硫化物(FMDS)，及其鹽滿足這些要 求。R1-R4如下定義。FMDS在堿性條件下的穩(wěn)定性在實(shí)施例1和2中說(shuō)明。
權(quán)利要求
式A的硫化劑或其鹽、水合物、溶劑化物或混合物在硫化中的用途，其中所有R基團(tuán)彼此獨(dú)立地表示H或有機(jī)基團(tuán)。FPA00001214559500011.tif
2.權(quán)利要求1的用途，其中所有R基團(tuán)彼此獨(dú)立地表示H或選自(取代)胺、(取代) 羥基、(取代)巰基、(取代)羥胺、硫氰酸酯、異硫氰酸酯、氰酸酯、異氰酸酯、芳基、直鏈或 支鏈烷基、雜芳基和/或直鏈或支鏈雜烷基的有機(jī)基團(tuán)，其中所述(雜)烷基可以是飽和的 或不飽和的。
3.式A的硫化劑或其鹽、水合物、溶劑化物或混合物在硫化中的用途，其中所有R基團(tuán) 彼此獨(dú)立地表示 H、-OH、-NO2、-CN、-SO2Ra, -SRa, -NHRa, -N (Ra) 2、-C (0) Ra、-CO2Ra, -ORa,鹵素、 烷基、烯基、炔基、芳基、芳烷基、烷氧基，其中Ra彼此獨(dú)立地表示H、鹵素、烷基、芳基或芳烷 基，其任選包含一個(gè)或多個(gè)優(yōu)選自0、N、P、Se、B和S的雜原子。
4.權(quán)利要求3的用途，其中所述硫化劑由式Al表示
5.任一前述權(quán)利要求的用途，其中R1和R2基團(tuán)是含氮基團(tuán)，優(yōu)選是NH2。
6.任一前述權(quán)利要求的用途，其中所述硫化劑是甲脒二硫化物。
7.任一前述權(quán)利要求的用途，其中所述硫化劑被用于硫化含三價(jià)磷Pm的化合物。
8.權(quán)利要求7的用途，其中所述含三價(jià)磷Pm的化合物是寡核苷酸或其衍生物。
9.權(quán)利要求7的用途，其中所述含三價(jià)磷Pm的化合物被轉(zhuǎn)化成具有Pv的阻燃性有機(jī) 磷酸酯化合物。
10.權(quán)利要求1-6之一的用途，其中所述硫化劑被用于硫化烯烴化合物。
11.任一前述權(quán)利要求的用途，其中所述硫化還使用堿。
12.權(quán)利要求11的用途，其中所述堿是(取代)吡啶，優(yōu)選是吡啶或3-甲基吡啶。
13.任一前述權(quán)利要求的用途，其中硫化還使用至少一種硫化物鹽，優(yōu)選硫化鈉。
全文摘要
本發(fā)明涉及式A的硫化劑或其鹽、水合物、溶劑化物或混合物在硫化中的用途其中所有R基團(tuán)彼此獨(dú)立地代表H或有機(jī)基團(tuán)。所述硫化劑優(yōu)選是甲脒二硫化物。發(fā)現(xiàn)其特別適于代替現(xiàn)有的硫化劑，因?yàn)槠湟子谟梢椎玫谋阋说钠鹗疾牧虾铣伞?br> 文檔編號(hào)C07B45/00GK101959832SQ200980107994
公開日2011年1月26日 申請(qǐng)日期2009年2月6日 優(yōu)先權(quán)日2008年2月8日
發(fā)明者G·J·普拉滕布爾格, P·C·德菲瑟 申請(qǐng)人:普羅森薩控股有限公司