專利名稱：一種細(xì)胞色素c制備新方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于化工技術(shù)領(lǐng)域，尤其是涉及到細(xì)胞色素c的制備方法。
背景技術(shù)：
細(xì)胞色素C是一種含鐵卟啉的蛋白質(zhì)，是生物氧化過程中的電子傳遞體。其作用 原理為在酶存在的情況下，對組織的氧化、還原有迅速的酶促作用。通常外源性細(xì)胞色素C 不能進(jìn)入健康細(xì)胞，但在缺氧時，細(xì)胞膜的通透性增加，細(xì)胞色素C便有可能進(jìn)入細(xì)胞及線 粒體內(nèi)，增強(qiáng)細(xì)胞氧化，提高氧的利用。 目前市售細(xì)胞色素C注射液用于組織缺氧的急救和輔助用藥，如一氧化碳中毒、 催眠藥中毒、新生兒窒息、嚴(yán)重休克缺氧、麻醉及肺部疾病引起的呼吸困難、高山缺氧、腦缺 氧、心臟疾病引起的缺氧等。 現(xiàn)有細(xì)胞色素C提取方法是用硫酸水溶液提取，此法提取條件較劇烈，耗時長，而 且收率較低。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于改進(jìn)已有技術(shù)的不足而提供一種以哺乳動物心肌為原料，采用 硫酸鋁溶液提取法制備，得到細(xì)胞色素C，本發(fā)明具有方法成本低、步驟簡單、提取條件溫 和、引入雜質(zhì)少、反應(yīng)物無污染、適合工業(yè)化大生產(chǎn)的特點(diǎn)。 本發(fā)明的目的是這樣實(shí)現(xiàn)的，一種細(xì)胞色素C的制備方法，其特點(diǎn)是以哺乳動物 心肌為原料，采用硫酸鋁溶液提取法制備，得到細(xì)胞色素C。 為進(jìn)一步實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的目的，可以是用硫酸鋁溶液一次或多次提取，提取時硫酸 鋁的濃度控制在O. 1_10%，硫酸鋁溶液的體積控制在l-5倍心肌體積，提取pH值控制在 3-6，反應(yīng)溫度控制在0-3(TC，提取時間控制在1-4小時。 為了更進(jìn)一步實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的目的，可以是所述的制備方法是，將心肌絞碎，加入 1-5倍心肌體積的硫酸鋁溶液，硫酸鋁溶液的濃度為0. 1-10%，控制pH值在3-6之間，控 制溫度在0-3(TC之間，提取l-4h，再經(jīng)過濾，心渣可再經(jīng)硫酸鋁溶液提取，提取液經(jīng)沸石吸 附，洗脫，鹽析，超濾除鹽，凍干，得到細(xì)胞色素C。 本發(fā)明涉及的技術(shù)方法是以市售的哺乳動物心肌為原料，采用硫酸鋁溶液提取法 制備，得到細(xì)胞色素C。該方法成本低，步驟簡單，提取條件溫和，引入雜質(zhì)少，反應(yīng)產(chǎn)物無污 染，通過對反應(yīng)時間、反應(yīng)溫度、反應(yīng)pH值和硫酸鋁的濃度控制，可得到目標(biāo)產(chǎn)物，適合工 業(yè)化大生產(chǎn)。
具體實(shí)施方案 實(shí)施例l，細(xì)胞色素C制備方法，將5kg豬心絞碎，加入15L濃度為2X硫酸鋁溶液， pH值控制在3，降低溫度至0°C ，提取2小時，再經(jīng)過濾，得到的提取液經(jīng)沸石吸附，洗脫，鹽 析，超濾除鹽，凍干，得到產(chǎn)品0. 9g。
實(shí)施例2，將30kg牛心絞碎，置于夾層反應(yīng)罐中，加入60L濃度為3%硫酸鋁溶液， pH值控制在6，控制溫度至15°C ，提取3小時，再經(jīng)過濾，心渣可再經(jīng)硫酸鋁溶液按前述方法 分別提取2次，得到的所有提取液經(jīng)沸石吸附，洗脫，鹽析，超濾除鹽，凍干，得到產(chǎn)品5. 9g。
實(shí)施例3，將100kg馬心絞碎，加入400L濃度為6X硫酸鋁溶液，pH值控制在5，降 低溫度至30°C ，提取4小時，再經(jīng)過濾，心渣可再經(jīng)硫酸鋁溶液按前述方法分別提取8次，得 到的所有提取液經(jīng)沸石吸附，洗脫，鹽析，超濾除鹽，凍干，得到產(chǎn)品18. 5g。
權(quán)利要求
一種細(xì)胞色素C的制備方法，其特征是以哺乳動物心肌為原料，將心肌采用濃度為0.1-10％的硫酸鋁溶液采用提取法制備，得到細(xì)胞色素C。
2. 根據(jù)權(quán)利1要求所述的一種細(xì)胞色素C的制備方法，其特征是所述的制備方法是使 用硫酸鋁溶液一次或多次提取，提取時加入1-5倍心肌體積的硫酸鋁溶液，硫酸鋁溶液的 濃度為0. 1-10% ，控制pH值在3-6之間，控制溫度在0-3(TC之間，提取1_4小時，再經(jīng)過濾， 得到提取液，心渣可按前述方法反復(fù)提取，提取液經(jīng)沸石吸附，洗脫，鹽析，超濾除鹽，凍干， 得到細(xì)胞色素C。
3. 根據(jù)權(quán)利1和2要求所述的一種細(xì)胞色素C的制備方法，其特征是使用的原料為攪 碎的哺乳動物心肌。
全文摘要
本發(fā)明公布了一種細(xì)胞色素C的提取方法。以哺乳動物心肌為原料，采用硫酸鋁溶液提取法制備，提取過程中硫酸鋁的濃度控制在0.1-10％，硫酸鋁溶液的體積控制在1-5倍量心肌體積，提取pH值控制在3-6，反應(yīng)溫度控制在0-30℃，提取時間控制在1-4h。再經(jīng)吸附洗脫，最終得到細(xì)胞色素C。本發(fā)明具有方法成本低、步驟簡單、提取條件溫和、引入雜質(zhì)少、反應(yīng)物無污染、適合工業(yè)化大生產(chǎn)的特點(diǎn)。
文檔編號C07K1/14GK101709086SQ20091022951
公開日2010年5月19日 申請日期2009年10月26日 優(yōu)先權(quán)日2009年10月26日
發(fā)明者張立勇, 王建強(qiáng), 由守誼, 齊東綺 申請人:煙臺東誠生化股份有限公司