專利名稱：用于生成穩(wěn)定小分子水凝膠的多肽衍生物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明的技術(shù)方案涉及含多肽的化合物庫，具體地說是用于生成穩(wěn)定小分子水凝
膠的多肽衍生物。
背景技術(shù)：
基于多肽的小分子水凝膠生物相容度高，在組織工程材料、化妝品等領(lǐng)域具有極 高的潛在應(yīng)用價(jià)值。但是，目前為止，公知的基于多肽的小分子水凝膠在大量水溶液中無法 穩(wěn)定存在，易于溶解成均一的溶液，從而使得這類水凝膠無法得到廣泛的實(shí)際應(yīng)用。這在 已有文獻(xiàn)(Genove E， Shen C， Zhang SG， Semino CE， BIOMATERIALS， 2005， 16， 3341-3351 ; Ghanaati S， Webber MJ， Unger RE， 0rth C， Hulvat JF， Kiehna SE， BarbeckM， Rasic A， Stupp SI，Kirkpatrick CJ， BIOMATERIALS， 2009， 31， 6202-6212)中已經(jīng)有過報(bào)道。至今尚 未見到關(guān)于用于生成穩(wěn)定小分子水凝膠的多肽，或者說在大量水溶液中能夠穩(wěn)定存在的基 于多肽的小分子水凝膠的文獻(xiàn)報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供用于生成穩(wěn)定小分子水凝膠的多肽衍生物，
基于該多肽衍生物的小分子水凝膠在形成后能在大量水溶液中穩(wěn)定存在，外形能得到很好
地保持，具有生物相容度高，在組織工程和化妝品等領(lǐng)域得到廣泛的實(shí)際應(yīng)用。 本發(fā)明解決該技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案是用于生成穩(wěn)定小分子水凝膠的多肽
衍生物，其分子組成和結(jié)構(gòu)如下化合物結(jié)構(gòu)式所示
<formula>formula see original document page 3</formula> 該式中，&是芳環(huán)衍生物，R2是20種天然氨基酸中一種的側(cè)鏈基團(tuán)，R3是H或者
鹵素中的任意一種，R4是0Me基或者NHMe基，n = 1 3。 上述用于生成穩(wěn)定小分子水凝膠的多肽衍生物，所述&是
上述用于生成穩(wěn)定小分子水凝膠的多肽衍生物，所述R2是甘氨酸或賴氨酸的側(cè)鏈基團(tuán)。 本發(fā)明的有益效果是應(yīng)用本發(fā)明用于生成穩(wěn)定小分子水凝膠的多肽衍生物能夠 獲得在水溶液中穩(wěn)定存在、不易解離且生物相容度高的小分子水凝膠。其原因在于由于本 發(fā)明的多肽具有磷酸化的氨基酸，該類分子能在水溶液中良好的溶解。在加入磷酸酶的情 況下，磷酸根將被切除，從而獲得能白組裝成膠的分子，最終導(dǎo)致小分子水凝膠的生成。又 由于多肽的氨基和羧基都通過衍生化已經(jīng)去除，通過這種方法制備獲得的小分子水凝膠能 很好的保持其初始的外形，不易在大量水溶液存在的情況下解離成均一的水溶液。因此，本 發(fā)明用于生成穩(wěn)定小分子水凝膠的多肽衍生物能作為細(xì)胞等生物個(gè)體的載體在組織工程 材料領(lǐng)域獲得極高的應(yīng)用前景，并且在組織工程和化妝品等領(lǐng)域得到廣泛的實(shí)際應(yīng)用。
具體實(shí)施方式

實(shí)施例l 本發(fā)明的用于生成穩(wěn)定小分子水凝膠的多肽的合成方法步驟如下所示
i) Fmoc-OSu， DIPEA， Acetone;
ii) l2, triethyl phosphite, pyridine, DCM; TFA， DCM; iv) spps; v) TMSBr; vi) MeOH 其中，DIPEA為N， N-二異丙基乙基胺，Acetone為丙酮，12為碘，triethyl
phosphite為亞磷酸三乙酯，DCM為二氯甲烷，pyridine為吡啶，TFA為三氟乙酸，spps為
"多肽固相合成"的英文簡稱，TMSBr為三甲基溴硅烷，MeOH為甲醇。
第一步，F(xiàn)moc-L-Tyr-0tBu的合成 將lOmmolL-酪氨酸叔丁酯和10分子的N，N- 二異丙基乙基胺溶解在75ml的丙酮 中，在攪拌的條件下加入含有9. 8mmo1的Fmoc-0Su的75ml的丙酮溶液，室溫下攪拌12小 時(shí)，然后用硅膠色譜柱分離，得到4. 4g產(chǎn)物Fmoc-L-Tyr-0tBu (即上述合成方法步驟中的化 合物3)，其產(chǎn)率為95. 8%，力NMR(300MHz，DMS0-d6) S 8. 03-8. 05(d，2H) ，7. 81-7. 85(t，2H)， 7. 56-7. 59 (t， 2H) ， 7. 46—7. 48 (m， 2H) ， 7. 19—7. 21 (d， 2H) ， 6. 81—6. 83 (d， 2H) ， 4. 30—4. 40 (m， 3H) ， 4. 2-4. 24 (m， 1H) ， 3. 30-3. 36 (m， 2H) ， 1. 50 (s， 9H) ， MS :calc. M" = 459. 2， obsvd. (M+l) + =459. 78。 第二步，F(xiàn)moc-L-Tyr (P0 (0Et) 2) _0力11的合成 將8mmo1亞磷酸三乙酯溶解在80ml 二氯甲烷中，加入7. 5mmo1碘，置于冰浴 中，反應(yīng)10min后使之溫度恢復(fù)到室溫，然后滴加到含有5. Ommol的由第一步合成得到 的化合物3和20. Ommol吡啶的50ml的二氯甲烷中，置于冰浴中，反應(yīng)2h，然后用100ml 乙醚和300ml乙酸乙酯萃取，有機(jī)相用每次100ml的5%的硫酸氫鉀洗三遍，再用飽 和氯化鈉洗一遍，然后該有機(jī)相用無水硫酸鎂干燥，過濾，濃縮，硅膠色譜柱分離，得到 Fmoc-L-Tyr (P0 (0Et) 2) -0^11 (即上述合成方法步驟中的化合物4)，其產(chǎn)率為85. 5 % 。 力畫R(300MHz， DMS0-d6) S 8. 03-8. 05(d，2H) ，7. 82-7. 84(d，2H) ，7. 57-7. 59 (t，2H)， 7. 42-7. 48 (m， 4H) ， 7. 25-7. 28 (d， 2H) ， 4. 10-4. 40 (m， 8H) ， 3. 11-3. 13 (m， 1H) ， 3. 03-3. 07 (m， 1H) ， 1. 49 (s，9H)， 1.37-1. 41 (t，6H).31P NMR( S-6. 366卯m). MS :calc. M+ = 595. 2， obsvd. (M+l)+ = 596. 01。第三步，F(xiàn)moc-L-Tyr (P0 (0Et) 2_0H的合成 在5ml 二氯甲烷和10ml三氟乙酸的混合液中加入lmmol第二步合成得到 的化合物4，再置于冰浴中，攪拌4小時(shí)，然后旋轉(zhuǎn)蒸干，再用甲苯共旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)兩次，得 到Fmoc-L-Tyr (P0 (0Et) 2_0H (即上述合成方法步驟中的化合物5)，其產(chǎn)率為98. 3 % ， 力畫R(300MHz， DMS0-d6) S 8. 23-8. 25 (d，2H) ，8. 01-8. 05(t，2H) ，7. 76-7. 79 (t，2H)， 7. 59-7. 62 (m， 4H) ， 7. 47—7. 52 (d， 2H) ， 4. 30-4. 60 (m， 8H) ， 3. 45—3. 48 (m， 1H) ， 3. 21-3. 27 (m， 1H) ， 1. 58-1. 61 (t，6H). 31P NMR( S-6. 348卯m).MS :calc.M+ = 539.2， obsvd. (M+H)+ = 540. 14。 第四步，如下結(jié)構(gòu)式所示的上述合成方法步驟中的化合物6的合成
<formula>formula see original document page 5</formula>
將第三步合成得到的化合物5通過在常溫下常用的多肽固相合成的方法合成上 述步驟中的化合物6。該固相合成的方法見Fmoc solid phase p印tide synthesis-A
practicalapproach edited by Weng c. chan and peterd. white OXFORD UNIVERSITY
PRESS,其中，多肽合成的原料為Fmoc保護(hù)的20種天然氨基酸和芳環(huán)衍生物，使用的縮合劑為1摩爾當(dāng)量的HBTU，加入2摩爾當(dāng)量的DIEA做催化劑。 第五步，如下結(jié)構(gòu)式所示的用于生成穩(wěn)定小分子水凝膠的多肽衍生物(即上述合
成方法步驟中的化合物1)的合成
將0. 4mmo1第四步制得的化合物6溶于10ml干燥二氯甲烷中，加入lOmmol三甲 基溴硅烷，室溫下攪拌24小時(shí)，然后旋轉(zhuǎn)蒸干得到固體，再加入10ml無水甲醇，此法得到的 R4是OMe基團(tuán)，或再加入含質(zhì)量百分?jǐn)?shù)為20%的甲基氨的甲醇溶液，此法得到的R4是NHMe 基團(tuán)，在室溫下攪拌反應(yīng)2小時(shí)，再旋轉(zhuǎn)蒸干，用高效液相色譜分離產(chǎn)物，得到如上面結(jié)構(gòu)
式所示的用于生成穩(wěn)定小分子水凝膠的多肽衍生物(即上述合成方法步驟中的化合物1)。
實(shí)施例2 如下結(jié)構(gòu)式(I)所示多肽化合物Nap-GFFY (p) -OMe的合成。
C I ) 第一步 第三步，均同實(shí)施例1。 第四步，化合物N即-GFFY (P0 (0Ft) 2) -OMe (即在實(shí)施例1的化合物6通式中，&為 采用Fmoc固相合成的方法，步驟是 第1步，稱取O. 5mmo1 2_氯三苯甲基氯樹脂于固相合成器中，加入2. 5mL的無水 二氯甲烷，通入氮?dú)?min，使2-氯三苯甲基氯樹脂充分溶脹； 第2步，用氮?dú)獍讯燃淄閺难b有2-氯三苯甲基氯樹脂的固相合成器中壓除干 凈； 第3步，將lmmol第三步合成得到的化合物5溶解在2mL的無水二氯甲烷里，取其 中l(wèi)mL(即0. 5mmol)，加入0. 5mmo1的N， N-二異丙基乙基胺，然后轉(zhuǎn)移到上述固相合成器 中，再補(bǔ)加0. 5mmo1的N， N- 二異丙基乙基胺，通入氮?dú)猓谑覝叵路磻?yīng)lh ;
第4步，把該固相合成器中液體除凈，然后用5mL無水二氯甲烷洗滌，每次lmin，共洗5次，加入配好的體積比為無水二氯甲烷n， n-二異丙基乙基胺無水甲醇=
17 : 1 : 2的溶液3mL，通入氮?dú)?，在室溫下反?yīng)10min ; 第5步，把該固相合成器中液體壓凈，用5mL無水二氯甲烷洗滌，每次lmin，共洗5 次，再用5mL N，N-二甲基甲酰胺洗滌，每次lmin，共洗5次，加入5mL含體積百分比為20% 的哌啶的N， N- 二甲基甲酰胺溶液，通入氮?dú)夥磻?yīng)30min，再用5mL含體積百分比為20%的 哌啶的N，N-二甲基甲酰胺溶液洗滌一次，然后用5mL N，N-二甲基甲酰胺洗滌，每次lmin， 共洗5次，進(jìn)行下一步反應(yīng)； 第6步，取多肽合成的原料Fmoc-苯丙氨酸2. 5mmol、苯并三氮唑-N，N，N'，N'-四 甲基脲六氟磷酸酯2. 5mmo1、 N， N- 二異丙基乙基胺5mmo1和3ml無水N， N- 二甲基甲酰胺 配制成溶液，把配好的溶液加入到上述固相合成器中，通入氮?dú)夥磻?yīng)2h ;
第7步，依次用多肽合成的原料Fmoc-苯丙氨酸.Fmoc-甘氨酸和多肽合成的原料 萘乙酸替換多肽合成的原料Fmoc-苯丙氨酸，重復(fù)第5步和第6步操作，最終獲得連接在 2_氯三苯甲基氯樹脂上的Nap-GFFY (P0 (0Et) 2) -C00 ; 第8步，按三氟乙酸與無水二氯甲烷的體積比為1 : 99，配制成體積百分比濃度
為lX的三氟乙酸溶液，取該三氟乙酸溶液每次3mL加入到上述固相合成器中，共加十次，
每次反應(yīng)時(shí)間為lmin，把產(chǎn)物從2-氯三苯甲基氯樹脂上切下，濃縮，加入兩次甲苯以除去
殘留的三氟乙酸，用油泵抽干，得到化合物N即-GFFY (P0 (0Et) 2) -C00H ; 第五步，用于生成穩(wěn)定小分子水凝膠的結(jié)構(gòu)式(I)所示多肽N即-GFFY(p)-OMe的
合成 將0. 4mmo1第四步制得的化合物Nap-GFFY (P0 (0Et) 2)-C00H溶于10ml干燥二氯 甲烷中，加入10mmol三甲基溴硅烷，室溫下攪拌24小時(shí)，然后旋轉(zhuǎn)蒸干得到固體，再加入 10ml無水甲醇，在室溫下攪拌反應(yīng)2小時(shí)，再旋轉(zhuǎn)蒸干，用高效液相色譜分離產(chǎn)物，由此合 成得到如上面結(jié)構(gòu)式(I)所示多肽N即-GFFY(p)-OMe，其產(chǎn)率為95. 0%，力NMR(400MHz， DMS0-d6) S 8. 48 (d， 1H， NH) ， 8. 19—8. 28 (m， 2H， NH) ， 8. 06 (d， 1H， NH) ， 7. 75—7. 88 (m， 3H)， 7. 754 (s， 1H) ， 7. 41-7. 48 (m， 3H) ， 7. 07—7. 25 (m， 14H) ， 4. 46—4. 58 (m， 3H) ， 3. 70—3. 76 (m， 1H) ， 3. 6-3. 68 (s， 4H) ， 3. 58 (s， 3H) ， 2. 92—3. 03 (m， 4H) ， 2. 76—2. 81 (m， 1H) ， 2. 63—2. 69 (m， 1H). 31P NMR( S -6. 008ppm). MS :calc. M+ = 794. 27， obsvd. (M+Na)+ = 817. 30and(M+2Na) + =839. 25， (M-H)— = 793. 25。 本實(shí)施例制得的如上面結(jié)構(gòu)式(I)所示多肽N即-GFFY (p) -OMe分子能很好的溶解 在水溶液中，在磷酸酶的作用下磷酸根被切除，從而獲得水凝膠。該水凝膠穩(wěn)定性好，最低 成膠濃度極低_達(dá)到萬分之一。它能作為三維細(xì)胞培養(yǎng)的載體，由于使用了溶解度較低的 多肽衍生物作為成膠分子，要獲得膠體時(shí)化合物的用量大大降低，因此能提高所制得的小 分子水凝膠的生物相容度，細(xì)胞能在該類水凝膠中得到很好的生長。
實(shí)施例3 如下結(jié)構(gòu)式(II)所示多肽Nap-FFY(p)-0Me的合成。
(II) 除在第四步的第6 7步中的多肽合成的原料替換為Fmoc-苯丙氨酸和萘乙酸之 外，其他合成步驟的操作方法和參數(shù)同實(shí)施例2。 由此合成得得到如上面結(jié)構(gòu)式(II)所示多肽N即-FFY(p)-OMe，其產(chǎn)率為94%， 工H NMR(400MHz， DMS0_d6) S 8. 63(d， J = 7. 324， 1H) ，8. 39 (d， J = 8. 518， 1H) ，8. 28 (d， J = 8. 216， 1H) ， 7. 90-8. 00 (m， 3H) ， 7. 74 (s， 1H) ， 7. 62 (m， 2H) ， 7. 35-7. 40 (m， 3H) ， 7. 25-7. 40 (m， 10H) ， 7. 23-7. 25 (m， 2H) ， 4. 6-4. 8 (m， 3H) ， 3. 745 (s， 3H) ， 3. 60-3. 72 (m， 3H) ， 3. 000-3. 120 (m， 3H)，2. 3-2. 80(m，2H).MS :calc.M+= 737. 25， obsvd. (M+Na)+= 760. 35。
本實(shí)施例制得的如上面結(jié)構(gòu)式(II)所示多肽N即-FFY(p) _OMe分子能很好的溶解 在水溶液中，在磷酸酶的作用下磷酸根被切除，從而獲得水凝膠。該水凝膠穩(wěn)定性好，可制 備成各種形狀。
實(shí)施例4 如下結(jié)構(gòu)式(III)所示多肽Nap-GGFFY(p)-OMe的合成。
(III) 除在第四步的第6 7步中多肽合成的原料替換依次為Fmoc-苯丙氨酸,Fmoc-甘 氨酸.Fmoc-甘氨酸和萘乙酸之外，其他合成步驟的操作方法和參數(shù)同實(shí)施例2。
由此合成得得到如上面結(jié)構(gòu)式(III)所示多肽N即-GGFFY(p) -OMe，其產(chǎn) 率為88 %,H NMR(400MHz， DMS0_d6) S 8. 587(d， J = 7. 287， 1H) ， 8. 495-8. 520 (m， 1H)8. 227-8. 280 (m，2H) ，8. 147 (d， J = 8. 348， 1H) ， 7. 970-8. 030 (m， 3H) ，7. 922 (s， 1H) ， 7. 590-7. 650 (m， 3H) ， 7. 400-7. 420 (m， 4H) ， 7. 320-7. 360 (m， 8H) ， 7. 234 (d， J = 8. 3022H) ， 4. 614-4. 741 (m， 4H) 3. 881—3. 890 (m， 4H) ， 3. 819 (m， 3H) ， 3. 075—3. 186 (m， 5H)， 2. 936-2. 975 (m， 1H) ， 2. 813-2. 853 (m， 1H) MS :calc. M+ = 851. 29， obsvd. (M+Na) + = 874. 35。
本實(shí)施例制得的如上面結(jié)構(gòu)式(III)所示多肽N即-GGFFY(p)-OMe分子能很好的 溶解在水溶液中，在磷酸酶的作用下磷酸根被切除，從而獲得水凝膠。該水凝膠穩(wěn)定性好， 可制備成各種形狀。
實(shí)施例5
如下結(jié)構(gòu)式(IV)所示多肽Nap-GFY(p)-OMe的合成。
<formula>formula see original document page 9</formula>
(IV) 除在第四步的第6 7步中多肽合成的原料替換依次為Fmoc-甘氨酸和萘乙酸之 外，其他合成步驟的操作方法和參數(shù)同實(shí)施例2。 由此合成得得到如上面結(jié)構(gòu)式(IV)所示多肽N即-GFY(p)-OMe，其產(chǎn)率為96%， 丄H NMR (400MHz ， DMS0_d6) S 8. 46 (d， 1H) ， 8. 16—8. 25 (m， 1H) ， 8. 02 (d， 1H) ， 7. 65—7. 90 (m， 2H) ， 7. 754 (s， 1H) ， 7. 41—7. 48 (m， 3H) ， 7. 13—7. 32 (m， 10H) ， 4. 42—4. 56 (m， 2H) ， 3. 63 (s， 3H) ， 3. 58 (s， 4H) ， 2. 89—3. 01 (m， 2H) ， 2. 67—2. 78 (m， 1H) ， 2. 62—2. 67 (m， 1H) MS :calc. M+ = 647. 20， obsvd. (M+Na)+ = 670. 35。 本實(shí)施例制得的如上面結(jié)構(gòu)式(IV)所示多肽N即-GFY(p)-OMe分子能很好的溶解 在水溶液中，在磷酸酶的作用下磷酸根被切除，從而獲得水凝膠。該水凝膠穩(wěn)定性好，可制 備成各種形狀。
實(shí)施例6 如下結(jié)構(gòu)式(V)所示多肽Nap-GFFFY (p) _0Me的合成。
<formula>formula see original document page 9</formula>
(V) 除在第四步的第6 7步中多肽合成的原料替換依次為Fmoc-苯丙氨酸、Fmoc-苯 丙氨酸、？1110(3-甘氨酸和萘乙酸之外，其他合成步驟的操作方法和參數(shù)同實(shí)施例2。
由此合成得得到如上面結(jié)構(gòu)式(V)所示多肽N即-GFY(p)-OMe，其產(chǎn)率為92%， 力畫R(400MHz， DMS0-d6) S 8. 641 (d， J = 6. 998， 1H) ，8. 373 (s， 1H) ，8. 234-8. 373 (m， 2H) ， 8. 143-8. 157 (m， 1H) ， 7. 965-8. 025 (m， 3H) ， 7. 902 (s， 1H) ， 7. 564-7. 638 (m， 4H)， 7. 210-7. 561 (m， 18H) ， 4. 623-4. 766 (m， 4H) ， 3. 735-3. 887 (m， 3H) ， 3. 731 (s， 3H)， 2. 979-3. 163 (m， 5H) ， 2. 889-2. 917 (m， 2H) ， 2. 803-2. 876 (m， 1H) ， 2. 650-2. 763 (m， 1H) MS : calc. M+ = 941. 34， obsvd. (M+Na)+ = 964. 44。 本實(shí)施例制得的如上面結(jié)構(gòu)式(V)所示多肽N即-GFY(p) _0Me分子能很好的溶解在水溶液中，在磷酸酶的作用下磷酸根被切除，從而獲得水凝膠。該水凝膠穩(wěn)定性好，可制
備成各種形狀。 實(shí)施例7 如下結(jié)構(gòu)式(VI)所示多肽Nap-GFFY (p) -NHMe的合成。
除第五步中用含質(zhì)量百分?jǐn)?shù)為20%的甲基氨的甲醇溶液替換無水甲醇之外，其他 合成步驟的操作方法和參數(shù)同實(shí)施例2。 由此合成得得到如上面結(jié)構(gòu)式(VI)所示多肽N即-GFFY(p)-NHMe，其產(chǎn)率為85%， 工H畫R (400MHz ， DMS0-d6) S 8. 45 (d， 1H) ， 8. 16—8. 25 (m， 2H) ， 8. 03 (d， 1H) ， 7. 72—7. 85 (m， 4H) ， 7. 751 (s， 1H) ， 7. 38-7. 45 (m， 3H) ， 7. 04-7. 22 (m， 14H) ， 4. 43-4. 55 (m， 3H) ， 3. 67-3. 73 (m， 1H) ， 3. 60 (s， 2H) ， 3. 55 (s， 4H) ， 2. 88—3. 29 (m， 4H) ， 2. 73—2. 78 (m， 1H) ， 2. 60-2. 66 (m， 1H) 31P NMR( S -6. 008卯m).MS :calc.M+ = 793. 29， obsvd. (M+2Na)+ = 838. 22。
本實(shí)施例制得的如上面結(jié)構(gòu)式(VI)所示多肽N即-GFFY (p) -NHMe分子能很好的溶 解在水溶液中，在磷酸酶的作用下磷酸根被切除，從而獲得水凝膠。該水凝膠穩(wěn)定性好，可 制備成各種形狀。
實(shí)施例8 如下結(jié)構(gòu)式(VII)所示多肽Nap-GF(f)F(f)Y(p)-OMe的合成。
除在第三步的Fmoc-氨基酸為Fmoc-4-氟-苯丙氨酸，第四步的第6 7步中多 肽合成的原料替換依次為Fmoc-4-氟-苯丙氨酸，F(xiàn)moc-甘氨酸和萘乙酸之外，其他合成步 驟的操作方法和參數(shù)同實(shí)施例2。 由此合成得得到如上面結(jié)構(gòu)式(VII)所示多肽N即-GF (f) F (f) Y (p) _OMe，其 產(chǎn)率為92 %,H NMR(400MHz， DMS0-d6) S 8. 48(d， 1H) ，8. 21-8. 26(m，2H) ，8. lO(d， 1H)， 7. 70-7. 81 (m， 3H) ， 7. 76 (s， 1H) ， 7. 40—7. 48 (m， 3H) ， 7. 10—7. 25 (m， 12H) ， 4. 47—4. 58 (m，3H) ， 3. 71-3. 76 (m， 1H) ， 3. 65 (s， 2H) ， 3. 60 (s， 4H) ， 2. 95—3. 03 (m， 4H) ， 2. 80—2. 85 (m， 1H)， 2. 65-2. 70(m， 1H). 31P NMR( S-6. 012ppm). MS :calc. M+ = 830. 25， obsvd. (M+2Na)+ = 853. 35。 本實(shí)施例制得的如上面結(jié)構(gòu)式(VII)所示多肽N即-GF(f)F(f)Y(p)-OMe分子能很 好的溶解在水溶液中，在磷酸酶的作用下磷酸根被切除，從而獲得水凝膠。該水凝膠穩(wěn)定性 好，可制備成各種形狀。
實(shí)施例9 如下結(jié)構(gòu)式(VIII)所示多肽biPhenyl-GFFY(p)-OMe的合成。
OH 0二+-OH
(VI) 除在第四步的第6 7步中多肽合成的原料替換依次為Fmoc-苯丙氨酸.Fmoc-甘 氨酸和聯(lián)苯乙酸之外，其他合成步驟的操作方法和參數(shù)同實(shí)施例2。 由此合成得得到如上面結(jié)構(gòu)式(VIII)所示多肽biPhenyl-GFFY(p)-OMe，其 產(chǎn)率為93 %,H NMR (600MHz ， DMS0_d6) S 8.590(d， J = 7. 011， 1H) ， 8. 303-8. 367 (m， 2H) ，8. 171 (d， J = 8. 301， 1H) ，7. 771-7. 785 (d， 2H) ， 7. 707-7. 722(d，2H) ，7. 602(m，2H)， 7. 486-7. 501 (m， 3H) ， 7. 301—7. 402 (m， 11H) ， 7. 227—7. 242 (m， 2H) ， 4. 620—4. 720 (m， 3H)， 3. 857-3. 895 (m， 1H) ， 3. 729 (m， 4H) ， 3. 649 (m， 2H) ， 3. 143-3. 178 (m， 2H) ， 3. 086-3. 113 (m， 2H) ，2. 930-2. 980 (m， 1H) ， 2. 80-2. 85 (m， 1H). MS :calc. M+820. 29，obsvd. (M+Na)+ = 843. 39。
本實(shí)施例制得的如上面結(jié)構(gòu)式(VIII)所示多肽biPhenyl-GFFY(p)-OMe分子能很 好的溶解在水溶液中，在磷酸酶的作用下磷酸根被切除，從而獲得水凝膠。該水凝膠穩(wěn)定性 好，可制備成各種形狀。
實(shí)施例10 如下結(jié)構(gòu)式(IX)所示多肽biOMePhenyl-GFFY(p)-OMe的合成。
(IX) 除在第四步的第6 7步中多肽合成的原料替換依次為Fmoc-苯丙氨酸.Fmoc-甘氨酸和3，4- 二甲氧基苯乙酸之外，其他合成步驟的操作方法和參數(shù)同實(shí)施例2。 由此合成得得到如上面結(jié)構(gòu)式(IX)所示多肽biOMePhenyl-GFFY(p)-OMe，其產(chǎn)
率為82 %,H NMR (600MHz ， DMS0-d6) S 8. 298 (d， 1H) ， 8. 11-8. 16 (m， 3H) ， 7. 308-7. 451 (m，
10H) ， 7. 226-7. 242 (m， 3H) ， 6. 912—7. 029 (m， 2H) ， 6. 775—6. 847 (m， 2H) ， 4. 705—4. 713 (m，
1H) ， 4. 61-4. 65 (m， 2H) ， 3. 852-3. 884 (m， 8H) ， 3. 730-3. 775 (m， 5H) ， 3. 084-3. 175 (m， 4H)，
2. 283-2. 289(d，2H).MS :calc. M+ = 804. 28， obsvd. (M+Na)+ = 827. 39。 本實(shí)施例制得的如上面結(jié)構(gòu)式(IX)所示多肽biOMePhenyl-GFFY(p)-OMe分子能
很好的溶解在水溶液中，在磷酸酶的作用下磷酸根被切除，從而獲得水凝膠。該水凝膠穩(wěn)定
性好，可制備成各種形狀。 實(shí)施例11 如下結(jié)構(gòu)式(X)所示多肽NitroPhenyl-GFFY(p)-OMe的合成。
(X) 除在第四步的第6 7步中多肽合成的原料替換依次為Fmoc-苯丙氨酸.Fmoc-甘 氨酸和4-硝基苯乙酸之外，其他合成步驟的操作方法和參數(shù)同實(shí)施例2。
由此合成得得到如上面結(jié)構(gòu)式(X)所示多肽NitroPhenyl-GFFY (p) _0Me，其 產(chǎn)率為80 ^ H NMR(600MHz， DMS0-d6) S 8. 402(d，2H)8. 293(d， 1H) ，8. 124-8. 162(m， 3H) ， 7. 942 (d， 2H) ， 7. 551-7. 675 (m， 10H) ， 7. 372-7. 386 (m， 2H) ， 6. 908-7. 027 (m， 2H)， 4. 452-4. 621 (m， 3H) ， 3. 682—3. 758 (m， 1H) ， 3. 626 (s， 2H) ， 3. 579 (s， 4H) ， 2. 918—3. 032 (m， 4H) ， 2. 758-2. 805 (m， 1H) ， 2. 629-2. 685 (m， 1H) MS :calc. M+ = 789. 24， obsvd. (M+Na) + = 811. 34。 本實(shí)施例制得的如上面結(jié)構(gòu)式(X)所示多肽NitroPhenyl-GFFY(p)-OMe分子能很 好的溶解在水溶液中，在磷酸酶的作用下磷酸根被切除，從而獲得水凝膠。該水凝膠穩(wěn)定性 好，可制備成各種形狀。
實(shí)施例12 如下結(jié)構(gòu)式(XI)所示多肽biClPhenyl-GFFY(p)-OMe的合成。
(XI)
12
除在第四步的第6 7步中多肽合成的原料替換依次為Fmoc-苯丙氨酸.Fmoc-甘 氨酸和3，4- 二氯苯乙酸之外，其他合成步驟的操作方法和參數(shù)同實(shí)施例2。
由此合成得得到如上面結(jié)構(gòu)式(XI)所示多肽biClPhenyl-GFFY(p)-OMe，其產(chǎn) 率為81 ^ H NMR(600MHz， DMS0_d6) S 8. 304 (d， 1H) ，8129-8. 172(m，3H) ，7. 312-7. 458 (m， 10H) ， 7. 230-7. 245 (m， 3H) ， 6. 909—7. 034 (m， 2H) ， 6. 772—6. 851 (m， 2H) ， 4. 701—4. 716 (m， 1H) 4. 609-4. 634 (m， 2H) ， 3. 848-3. 875 (m， 7H) ， 3. 728 (s， 3H) ， 3. 124-3. 180 (m， 4H)， 2. 281-2. 287(d，2H).MS :calc.M+ = 812. 18， obsvd. (M+2Na)+ = 857. 20， (M_H)— = 811. 30。
本實(shí)施例制得的如上面結(jié)構(gòu)式(XI)所示多肽biClPhenyl-GFFY(p)-OMe分子能很 好的溶解在水溶液中，在磷酸酶的作用下磷酸根被切除，從而獲得水凝膠。該水凝膠穩(wěn)定性 好，可制備成各種形狀。
實(shí)施例13 如下結(jié)構(gòu)式(XII)所示多肽Nap-KFFY(p)-NHMe的合成。
NH.
(xn) 除在第四步的第6 7步中多肽合成的原料替換依次為Fmoc-苯丙氨酸、Fmoc-賴 氨酸和奈乙酸；并且第五步中用含質(zhì)量百分?jǐn)?shù)為20%的甲基氨的甲醇溶液替換無水甲醇 之外，其他合成步驟的操作方法和參數(shù)同實(shí)施例2。 由此合成得得到如上面結(jié)構(gòu)式(XII)所示多肽N即-KFFY (p) -NHMe，其產(chǎn)率 為78 畫R(600MHz， DMS0-d6) S 8. 478(d， 1H) ，8. 182-8. 276(m，2H) ，8. 053(d，，
1H) ， 7. 746-7. 875 (m， 3H) ， 7. 754 (s， 1H) ， 7. 387-7. 462 (m， 3H) ， 7. 065-7. 243 (m， 15H)， 4. 923 (m， 2H) ， 4. 458—4. 575 (m， 3H) ， 3. 689—3. 754 (m， 1H) ， 3. 625 (s， 2H) ， 3. 564 (s， 4H)， 2. 910-3. 018 (m， 4H) ， 2. 724-2. 791 (m， 1H) ， 2. 673-2. 715 (m， 2H) ， 1. 953-1. 976 (m， 2H)， 1. 435-1. 468 (m，2H) ， 1. 258-1. 360 (m，2H). MS :calc. M- = 863. 50， obsvd. (M+Na) + = 887. 45。 本實(shí)施例制得的如上面結(jié)構(gòu)式(XII)所示多肽N即-KFFY(p)-NHMe分子能很好的
溶解在水溶液中，在磷酸酶的作用下磷酸根被切除，從而獲得水凝膠。 上述實(shí)施例中所用縮合劑HBTU的英文全名為O-Benzotriazole-N， N， N'， N' -te
tramethyl-uronium-hexafluoro-phosphate，是做多肽合成的技術(shù)人員都知道的。催化劑
DIEA的中文名稱為二異丙基乙級(jí)胺。這兩個(gè)化學(xué)品以及所有的Fmoc保護(hù)的氨基酸都從吉
爾生化購買獲得。
權(quán)利要求
用于生成穩(wěn)定小分子水凝膠的多肽衍生物，其特征在于其分子組成和結(jié)構(gòu)如下化合物結(jié)構(gòu)式所示該式中，R1是芳環(huán)衍生物，R2是20種天然氨基酸中一種的側(cè)鏈基團(tuán)，R3是H或者鹵素中的任意一種，R4是Ome基或者NHMe基。n＝1～3。F2009102291867C0000011.tif
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于生成穩(wěn)定小分子水凝膠的多肽衍生物，其特征在于所 述&是
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于生成穩(wěn)定小分子水凝膠的多肽衍生物，其特征在于所述R2是甘氨酸或賴氨酸的側(cè)鏈基團(tuán)。
全文摘要
本發(fā)明用于生成穩(wěn)定小分子水凝膠的多肽衍生物，涉及含多肽的化合物庫，其分子組成和結(jié)構(gòu)如下化合物結(jié)構(gòu)式所示該式中，R1是芳環(huán)衍生物，R2是20種天然氨基酸中一種的側(cè)鏈基團(tuán)，R3是H或者鹵素中的任意一種，R4是OMe基或者NHMe基，n＝0～3?；谠摱嚯难苌锏男》肿铀z在形成后能在大量水溶液中穩(wěn)定存在，外形能得到很好地保持，具有生物相容度高，在組織工程和化妝品等領(lǐng)域得到廣泛的實(shí)際應(yīng)用。
文檔編號(hào)C07K7/06GK101704878SQ20091022918
公開日2010年5月12日 申請日期2009年12月15日 優(yōu)先權(quán)日2009年12月15日
發(fā)明者楊志謀, 王懷民, 王景玉, 王玲 申請人:南開大學(xué)