專利名稱：氧化白藜蘆醇的提取方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及物質(zhì)提取技術(shù)領(lǐng)域，特別是一種氧化白藜蘆醇的安全、高效、快速提取純 化方法。
背景技術(shù)：
氧化白藜蘆醇(Oxyresveratrol)為多羥基芪(polyhydroxystibene， PHS)，屬于二 苯乙烯類化合物。近年來大量的研究發(fā)現(xiàn)，除早已知道的抗菌作用以外，這類活性成分還 有擴(kuò)張毛細(xì)血管改善微循環(huán)、降血脂、降血糖、抗腫瘤，抑制過敏反應(yīng)、調(diào)控機(jī)體免疫防 御系統(tǒng)、抗血栓、美白以及抗氧化等作用。二苯乙烯類化合物的活性大多建立在抗氧化的 基礎(chǔ)上，其貢獻(xiàn)來源于結(jié)構(gòu)中的酚羥基，因此，酚羥基的多少和取代位置至關(guān)重要。氧化 白藜盧醇具有四個(gè)酚羥基，比重要活性化合物白藜蘆醇多一個(gè)酚羥基，比，制哮喘、美白 嫩膚的mulberrosideA (桑皮苷)多兩個(gè)酚羥基，其與目前市場上所用的抗氧化活性物質(zhì)蘆 丁、曲酸、維生素C、熊果苷等相比，具有更高的抗氧化活性。隨著人們對生活質(zhì)量要求 的日益提高，這類強(qiáng)抗氧化成分越來越受到人們的青睞，具有廣闊的應(yīng)用前景。
QIUF.報(bào)道，mulberrosideA通過小鼠后，可以代謝為活性更強(qiáng)的氧化白藜蘆醇。同時(shí)， Jeong-Ha Kim等在專利(Applicaton #: 20060216253， Class: 424062000 (USPTO))中報(bào)道， 從桑白皮(桑根皮)中提取分離mulberroside A時(shí)，在所得到的終產(chǎn)物中檢測到了含量為 2%—50%的氧化白藜盧醇。目前獲得氧化白藜戸醇的主要方法是用乙醇浸提桑白皮(桑根 皮)，繼而采用硅膠、凝膠、聚酰胺等反復(fù)柱層析。該方法層析柱洗脫液為毒性很強(qiáng)的甲 醇，過程繁瑣，得率和純度都較低，更重要的是它只提取分離得到了桑樹中己經(jīng)存在的氧 化白藜聲醇，最終產(chǎn)品為mulberroside A與氧化白藜蘆醇的混合物。桑皮+的二苯乙烯化 合物除了氧化白藜蘆醇外，還含有比氧化白藜蘆醇含量高得多的mulberrosideA，若在對桑 皮進(jìn)行浸提的同時(shí)將高含量的mulberroside A完全轉(zhuǎn)化成氧化白藜蘆醇，繼而對其總氧化 白藜戶醇進(jìn)行分離純化，不僅簡單、快速而且會(huì)大大提高提取物收率。到目前為止，尚無 相關(guān)研究報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種氧化白藜蘆醇的提取方法，該方法是從桑皮(桑枝皮或桑 根皮)中直接酶解提取，先將新鮮桑枝或桑根的皮剝下，晾干，粉碎，用添加糖苷水解酶的乙醇溶液酶解，過濾、濃縮，上聚酰胺層析柱，乙醇梯度洗脫，洗脫液回收后可得產(chǎn)品。 本發(fā)明依次通過下列步驟實(shí)現(xiàn)
(1) 取鮮桑枝或桑根的皮，自然曬干或者低于6(TC烘干，粉碎至80 120目；
(2) 將桑皮粉末加入質(zhì)量百分比濃度為30% 80%的乙醇溶液中，再加入糖苷水解酶， 桑皮粉末與乙醇溶液的質(zhì)量體積比為1: 5 1: 20，桑皮粉末與糖苷水解酶的質(zhì)量比為 10: 1 100: 1，攪拌均勻，于45'C 50'C密封酶解浸提6 72小時(shí)；
(3) 將酶解后的反應(yīng)液過濾，濾液濃縮后上60 300目聚酰胺層析分離柱，先用質(zhì) 量百分比濃度為60% 90°/。的乙醇溶液洗脫，然后用100%乙醇洗脫，收集100%乙醇的洗 脫液，濃縮后得氧化白藜蘆醇的粗品，其純度為40% 60%，乙醇的回收率為60% 80%;
(4) 將上述氧化白藜蘆醇粗品用熱水溶解，再上200 600目聚酰胺詹析柱，先用質(zhì) 量百分比濃度為80% 90%的乙醇溶液洗脫，然后用100%乙醇洗脫，收集100%乙醇的洗 脫液，濃縮后得氧化白藜蘆醇的純品，其純度為95% 98%，乙醇的回收率為60% 80%。
本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是，打破傳統(tǒng)的單純醇提或單純水提，將酶解轉(zhuǎn)化和浸提相結(jié)合，工藝 簡單，操作方便，工藝過程無對人體有毒害的溶劑，所得產(chǎn)品安全，適用于工業(yè)化生產(chǎn)。
采用該方法提取的氧化白藜蘆醇的產(chǎn)品的含量為95% 98%，乙醇的回收率60% 80%。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例1:
(1) 取鮮桑枝的皮，自然曬干，粉碎至80 120目；
(2) 將桑皮粉末加入質(zhì)量百分比濃度為30%的乙醇溶液中，再加入糖苷水解酶，桑 皮粉末與乙醇溶液的質(zhì)量體積比為1: 10，桑皮粉末與糖苷水解酶的質(zhì)量比為100: 1， 攪拌均勻，于47"密封酶解浸提72小時(shí)；
(3) 將酶解后的反應(yīng)液過濾，濾液濃縮后上100目聚酰胺層析分離柱，先用質(zhì)量百 分比濃度為70%的乙醇溶液洗脫，然后用100%乙醇洗脫，收集100%乙醇的洗脫液，濃縮 后得氧化白藜蘆醇的粗品，其純度為44%，乙醇的回收率為78%;
(4) 將上述氧化白藜蘆醇粗品用熱水溶解，再上400目聚酰胺層析柱，先用質(zhì)量百 分比濃度為80%的乙醇溶液洗脫，然后用100%乙醇洗脫，收集100%乙醇的洗脫液，濃縮 后得氧化白藜蘆醇的純品，其純度為97%，乙醇的回收率為60%。
實(shí)施例2:
(1)取鮮桑枝的皮，42'C烘干，粉碎至80 120目；(2) 將桑皮粉末加入質(zhì)量百分比濃度為50%的乙醇溶液中，再加入糖苷水解酶，桑 皮粉末與乙醇溶液的質(zhì)量體積比為1: 5，桑皮粉末與糖苷水解酶的質(zhì)量比為10: 1， 攪拌均勻，于45'C密封酶解浸提48小時(shí)；
(3) 將酶解后的反應(yīng)液過濾，濾液濃縮后上60目聚酰胺層析分離柱，先用質(zhì)量百分 比濃度為60%的乙醇溶液洗脫，然后用100%乙醇洗脫，收集100%乙醇的洗脫液，濃縮后 得氧化白藜蘆醇的粗品，其純度為40%，乙醇的回收率為60%; '
(4) 將上述氧化白藜戸醇粗品用熱水溶解，再上200目聚酰胺層析柱，先用質(zhì)量百 分比濃度為80%的乙醇溶液洗脫，然后用100%乙醇洗脫，收集100%乙醇的洗脫液，濃縮 后得氧化白藜蘆醇的純品，其純度為95%，乙醇的回收率為76%。
實(shí)施例3:
(1) 取鮮桑根的皮，自然曬干，粉碎至80 120目；
(2) 將桑皮粉末加入質(zhì)量百分比濃度為60%的乙醇溶液中，再加入糖苷水解酶，桑
皮粉末與乙醇溶液的質(zhì)量體積比為h 15，桑皮粉末與糖苷水解酶的質(zhì)量比為80: 1,
攪拌均勻，于46"C密封酶解浸提12小時(shí)；
(3) 將酶解后的反應(yīng)液過濾，濾液濃縮后上300目聚酰胺層析分離柱，先用質(zhì)量百 分比濃度為90%的乙醇溶液洗脫，然后用100%乙醇洗脫，收集100%乙醇的洗脫液，濃縮 后得氧化白藜蘆醇的粗品，其純度為60%，乙醇的回收率為75%;
(4) 將上述氧化白藜蘆醇粗品用熱水溶解，再上600目聚酰胺層析柱，先用質(zhì)量百 分比濃度為90%的乙醇溶液洗脫，然后用100%乙醇洗脫，收集100%乙醇的洗脫液，濃縮 后得氧化白藜戸醇的純品，其純度為98%，乙醇的回收率為80%。
實(shí)施例4:
(1) 取鮮桑根的皮，40。C烘干，粉碎至80 120目；
(2) 將桑皮粉末加入質(zhì)量百分比濃度為80%的乙醇溶液中，再加入糖苷水解酶，桑 皮粉末與乙醇溶液的質(zhì)量體積比為1: 20，桑皮粉末與糖苷水解酶的質(zhì)暈比為50: 1， 攪拌均勻，于5(TC密封酶解浸提6小時(shí)；
G)將酶解后的反應(yīng)液過濾，濾液濃縮后上200目聚酰胺層析分離柱，先用質(zhì)量百 分比濃度為80%的乙醇溶液洗脫，然后用100%乙醇洗脫，收集100%乙醇的洗脫液，濃縮 后得氧化白藜蘆醇的粗品，其純度為52%，乙醇的回收率為80%;
(4)將上述氧化白藜蘆醇粗品用熱水溶解，再上500目聚酰胺層析柱，先用質(zhì)量百 分比濃度為90%的乙醇溶液洗脫，然后用100%乙醇洗脫，收集100%乙醇的洗脫液，濃縮后得氧化白藜蘆醇的純品，其純度為97.5%，乙醇的回收率為78%。
實(shí)施例5:
(1) 取鮮桑根的皮，40。C烘干，粉碎至80 120目；
(2) 將桑皮粉末加入質(zhì)量百分比濃度為50%的乙醇溶液中，再加入糖苷水解酶，桑
皮粉末與乙醇溶液的質(zhì)量體積比為1: 5，桑皮粉末與糖苷水解酶的質(zhì)量比為50: 1，
攪拌均勻，于45"C密封酶解浸提72小時(shí)；
(3) 將酶解后的反應(yīng)液過濾，濾液濃縮后上200目聚酰胺層析分離柱，先用質(zhì)量百 分比濃度為75%的乙醇溶液洗脫，然后用純乙醇洗脫，收集100%乙醇的洗脫液，濃縮后 得氧化白藜蘆醇的粗品，其純度為50%，乙醇的回收率為80%;
(4) 將上述氧化白藜蘆醇粗品用熱水溶解，再上400目聚酰胺層析柱，先用質(zhì)量百 分比濃度為90%的乙醇溶液洗脫，然后用純乙醇洗脫，收集100%乙醇的洗脫液，濃縮后 得氧化白藜蘆醇的純品，其純度為97%,乙醇的回收率為78%。
權(quán)利要求
1、一種氧化白藜蘆醇的提取方法，其特征在于，依次通過下列步驟實(shí)現(xiàn)(1)取鮮桑枝或桑根的皮，自然曬干或者低于60℃烘干，粉碎至80～120目；(2)將桑皮粉末加入質(zhì)量百分比濃度為30％～80％的乙醇溶液中，再加入糖苷水解酶，桑皮粉末與乙醇溶液的質(zhì)量體積比為1∶5～1∶20，桑皮粉末與糖苷水解酶的質(zhì)量比為10∶1～100∶1，攪拌均勻，于45℃～50℃密封酶解浸提6～72小時(shí)；(3)將酶解后的反應(yīng)液過濾，濾液濃縮后上60～300目聚酰胺層析分離柱，先用質(zhì)量百分比濃度為60％～90％的乙醇溶液洗脫，然后用100％乙醇洗脫，收集100％乙醇的洗脫液，濃縮后得氧化白藜蘆醇的粗品，其純度為40％～60％，乙醇的回收率為60％～80％；(4)將上述氧化白藜蘆醇粗品用熱水溶解，再上200～600目聚酰胺層析柱，先用質(zhì)量百分比濃度為80％～90％的乙醇溶液洗脫，然后用100％乙醇洗脫，收集100％乙醇的洗脫液，濃縮后得氧化白藜蘆醇的純品，其純度為95％～98％，乙醇的回收率為60％～80％。
全文摘要
一種氧化白藜蘆醇的提取方法，從桑皮(桑枝皮或桑根皮)中直接酶解提取，先將新鮮桑枝或桑根的皮剝下，晾干，粉碎，用添加糖苷水解酶的乙醇溶液酶解，過濾、濃縮，上聚酰胺層析柱，乙醇梯度洗脫，洗脫液回收后可得產(chǎn)品。該方法打破傳統(tǒng)的單純醇提或單純水提，將酶解轉(zhuǎn)化和浸提相結(jié)合，工藝簡單，操作方便，工藝過程無對人體有毒害的溶劑，所得產(chǎn)品安全，適用于工業(yè)化生產(chǎn)。采用該方法提取的氧化白藜蘆醇的產(chǎn)品的含量為95％～98％，乙醇的回收率60％～80％。
文檔編號C07C39/00GK101591680SQ20091010420
公開日2009年12月2日 申請日期2009年6月29日 優(yōu)先權(quán)日2009年6月29日
發(fā)明者春 伍, 余茂德, 劉峻池, 夏慶友, 立 徐 申請人:西南大學(xué)