專利名稱：：萘酰亞胺衍生物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種萘酰亞胺衍生物。
背景技術(shù)：
：腫瘤發(fā)生發(fā)展是一個(gè)多基因、多步驟、多階段的復(fù)雜過程，細(xì)胞凋亡在腫瘤發(fā)生發(fā)展過程中主要起負(fù)調(diào)控的作用，可以遏制腫瘤細(xì)胞迅速生長。目前，人類經(jīng)過幾十年來的不懈努力，惡性腫瘤的藥物治療已有了巨大的進(jìn)步。細(xì)胞凋亡研究越來越受到人們的重視，對細(xì)胞凋亡方面的研究也有了更高度的評價(jià)和肯定，開發(fā)誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡的藥物巳成為研究的熱點(diǎn)。萘酰亞胺類化合物是一類有較好抗癌活性的化合物，這類化合物能夠嵌入DNA的堿基對之間，抑制DNA和RNA的合成，并能夠抑制拓?fù)洚悩?gòu)酶II，從而達(dá)到抑制腫瘤的目的。本發(fā)明將多胺結(jié)構(gòu)和長碳鏈引入萘酰亞胺母體，希望得到對惡性腫瘤細(xì)胞表現(xiàn)出很強(qiáng)的抑制活性、并且具有很高的早期凋亡誘導(dǎo)能力的萘酰亞胺衍生物。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的在于，提供一種具有較強(qiáng)抑制腫瘤細(xì)胞活性、且具有較高早期誘導(dǎo)惡性腫瘤細(xì)胞凋亡能力的萘酰亞胺衍生物。本發(fā)明所說的萘酰亞胺衍生物具有式I所示結(jié)構(gòu)式II中，n為l6的整數(shù)，曲線表示取代位置，A為式III、IV、V或VI所示基團(tuán):式I中，R!和R2分別獨(dú)立選自dd2烷基或式II所示基團(tuán)中一種:<formula>formulaseeoriginaldocumentpage5</formula>式ni、IV、V和VI中，曲線表示取代位置，m為l6的整數(shù)。在本發(fā)明一個(gè)優(yōu)選技術(shù)方案中，R!為式II所示基團(tuán)(其中n為l3的整數(shù)，A為式III、IV或V所示基團(tuán))，R2為dd2烷基；更優(yōu)選的優(yōu)選技術(shù)方案是R,為式II所示基團(tuán)(其中n為l3的整數(shù)，A為式III、IV或V所示基團(tuán))，R2為CsCu烷基。在本發(fā)明另一個(gè)優(yōu)選技術(shù)方案中，Ri為Qd2烷基，R2為式II所示基團(tuán)(其中n為l3的整數(shù)，A為式m、IV或V所示基團(tuán))；更優(yōu)選的優(yōu)選技術(shù)方案是Rt為Csd2烷基，R2為式II所示基團(tuán)(其中n為l3的整數(shù)，A為式III、IV或V所示基團(tuán))。一種制備本發(fā)明所述萘酰亞胺衍生物的方法，其主要步驟是以4-溴-1,8-萘酐為原料，使其與結(jié)構(gòu)不同或相同的相應(yīng)的胺經(jīng)"亞酰胺化"反應(yīng)和"芳胺化"反應(yīng)后獲得目標(biāo)物。或/和，以4_溴-1,8-萘酐為原料，首先將4-溴-l，8-萘酐與相應(yīng)的羥胺進(jìn)行"亞酰胺化"反應(yīng)得中間體i，然后將中間體i再與相應(yīng)的胺經(jīng)"芳胺化"反應(yīng)得中間體ii，將中間體ii經(jīng)"溴化"反應(yīng)得中間體iii，最后將中間體iii經(jīng)"氨基化"反應(yīng)后得目標(biāo)物?；?和，以4-溴-l，8-萘酐為原料，首先將4-溴-l，8-萘酐與相應(yīng)的胺進(jìn)行"亞酰胺化"反應(yīng)得中間體iv，然后將中間體iv再與相應(yīng)的羥胺進(jìn)行"芳胺化"反應(yīng)得中間體v，將中間體v經(jīng)"溴化"反應(yīng)得中間體vi,最后將中間體vi經(jīng)"氨基化"反應(yīng)后得目標(biāo)物。具體實(shí)施例方式本文中所說的烷基包括直鏈烷基、支鏈垸基或合理穩(wěn)定的環(huán)狀烷基；所說的"亞酰胺化"反應(yīng)是指4-溴-l，8-萘酐中反應(yīng)官能團(tuán)之一一羧酸酐與相應(yīng)的胺的反應(yīng)生成亞酰胺的反應(yīng)。該"亞酰胺化"反應(yīng)所采用的反應(yīng)溶劑為無水脂肪族一元醇，其具體反應(yīng)條件包括常壓(latm)下，在回流狀態(tài)下保持1小時(shí)10小時(shí)(優(yōu)選2小時(shí)5小時(shí))。所說的"芳胺化"反應(yīng)是指4-溴-l，8-萘酐中反應(yīng)官能團(tuán)之二一芳環(huán)上的溴與相應(yīng)的胺的反應(yīng)生成芳胺的反應(yīng)。該"芳胺化"反應(yīng)所采用的反應(yīng)溶劑為沸點(diǎn)為10(TC15(TC的有機(jī)溶劑(如乙二醇甲醚等)，其具體反應(yīng)條件包括常壓(latm)下，在回流狀態(tài)下保持1小時(shí)10小時(shí)(優(yōu)選5小時(shí)10小時(shí))。所說的"溴化"反應(yīng)是指將中間體ii或中間體v中的羥基被溴取代的反應(yīng)；該"溴化"反應(yīng)的溴化劑優(yōu)選為四丁基溴化銨(詳見Tetrahedron2002,58,8689-8693)、反應(yīng)溶劑為dCe的鹵代烷，其具體反應(yīng)條件包括常壓(latm)及室溫(20'C25'C)條件下保持1小時(shí)10小時(shí)(優(yōu)選5小時(shí)10小時(shí))。所說的"氨基化"反應(yīng)是指中間體iii和中間體vi中的溴被相應(yīng)的胺取代的反應(yīng)；該"氨基化"反應(yīng)采用的反應(yīng)溶劑為為C,Ce的鹵代烷，其具體反應(yīng)條件包括在常壓(latm)及有惰性氣體存在條件下，于室溫(2(TC25。C)或回流狀態(tài)保持至少48小時(shí)。本發(fā)明設(shè)計(jì)并合成的萘酰亞胺衍生物經(jīng)MTT分析法對白血病細(xì)胞株(HL-60)、人宮頸癌細(xì)胞(Hela)、乳腺癌細(xì)胞(MCF-7)、結(jié)腸癌細(xì)胞(Lsl74)和胃癌細(xì)胞(MKN45)等五種細(xì)胞進(jìn)行抑制試驗(yàn)，試驗(yàn)表明本發(fā)明設(shè)計(jì)并合成的萘酰亞胺衍生物對乳腺癌、宮頸癌、結(jié)腸癌、胃癌和白血病等多種不同組織來源的腫瘤細(xì)胞的增殖都顯示出明顯的抑制活性。此外，經(jīng)AnnexinV-FITC/PI雙染細(xì)胞凋亡檢測試劑盒對本發(fā)明設(shè)計(jì)并合成的萘酰亞胺衍生物進(jìn)行抗凋亡活性分析，實(shí)驗(yàn)表明本發(fā)明設(shè)計(jì)并合成的萘酰亞胺衍生物具有高效的誘導(dǎo)早期凋亡的活性。如此為抗腫瘤新藥的研制奠定了基礎(chǔ)。下面通過實(shí)施例對本發(fā)明作進(jìn)一步闡述，其目的僅在于更好理解本發(fā)明的內(nèi)容，而非限制本發(fā)明的保護(hù)范圍。在以下實(shí)施例中，所說的室溫是指20'C25'C。實(shí)施例12-(3-(4-甲基哌嗪-l-yl)丙基)-6-(辛胺)-lH-苯并[de]異喹啉-l，3(2H)-二酮(化合物Ia)的合成將1.939克4-溴-l,8-萘酐(7.00mmol)放入50毫升單口燒瓶中，加入20毫升無水乙醇，加入0.631g正丙醇胺(8.40mmo1)，磁力攪拌，回流2小時(shí)，TLC跟蹤至無原料，降溫，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)得固體，水洗，濾餅干燥，經(jīng)柱層析分離(洗脫液為二氯甲垸甲醇=10:1)，得到6-溴-2-(3-羥基丙基)-lH-苯并[de]異喹啉-l，3(2H)-二酮(中間體ia)2.213克，產(chǎn)率95%。白色固體.熔點(diǎn)129.1-131.5'C。NMR(400MHz，CDC13):38.68((!，《/=7.2Hz,1H),8.60((!，/=8.0Hz，1H),8.43((!，/=7.6Hz,1H)，8.07(d，8Hz，1H),7.87(t,/=8.0Hz，2H)，4.36(t，J=6.0Hz,2H),3.62(t,■/=6.0Hz,2H)，2.63(s，1H)，2.01(m,2H);MS(EI+)計(jì)算值CisHuBrN03[M^333.0，試驗(yàn)值333.0。將1.961克6-溴-2-(3-羥基丙基)-lH-苯并[de]異喹啉-l,3(2H)-二酮(中間體ia)(5.87mmo1)放入50毫升單口燒瓶中，加入15毫升乙二醇甲醚，加入2.276g辛胺(17.6mmo1)，磁力攪拌，回流8小時(shí)，TLC跟蹤至無原料，降溫，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去大部分溶劑，倒入水中，析出濾餅干燥，經(jīng)柱層析分離(洗脫液為二氯甲烷甲醇=20:1)，得到2-(3-羥基丙萄-6-(辛胺)-111-苯并[de]異喹啉-l,3(2H)-二酮(中間體iia)2.022克，產(chǎn)率90。/。。黃色固體。熔點(diǎn)146.7-149.4°C。，H畫R(400固z，CDC13):<58.62(d，《/=8Hz，1H)，8.50(d，《/=8.4Hz，1H)，8.13(d，/=8.0Hz，1H)，7.65(t，</=8.0Hz，1H)，6.75(d,/=8.4Hz，1H),4.36(t，6.0Hz,2H),3.57(t,5.6Hz,2H)，3.43(t，《/=7.2Hz，2H)，2.00(m,2H)，1.84(m，2H)，1.56-1.32(br，10H),0.91(t，/=6.8Hz,3H);MS(ESI)計(jì)算值C23H31N203[M+H]+383.2，試驗(yàn)值383,2。將0.409克2,3-二氯誦5，6-二氰對苯酉昆(DDQ)(1.80mmol)(Tetrahedron2002,58,8689-8693),0.472克三苯基膦(L80mmo1)放入IOO毫升三口燒瓶中，加入干燥過的二氯甲烷10mL，室溫?cái)嚢?。均勻后加入溶于lOmL二氯甲垸的0.580克四丁基溴化銨(1.80mmo1)。之后將0.573克2-(3-羥基丙基)-6-(辛胺)-lH-苯并[de〗異喹啉-l,3(2H)-二酮(中間體iia)(1.50mmol)溶于二氯甲烷20mL。室溫?cái)嚢?小時(shí)，TLC跟蹤至無原料，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去溶劑，經(jīng)柱層析分離(洗脫液為二氯甲烷)，得到2-(3-溴丙基)-6-(辛胺)-lH-苯并[de]異喹啉-l,3(2H)-二酮(中間體iiia)0.503克，產(chǎn)率75%。橙色固體。熔點(diǎn)93.4-94.8°C。'HNMR(400MHz,CDC13):38.60(d,J=7.2Hz，1H)，8.48(d,J=8.8Hz，1H),8.11(d，8.4Hz，1H),7.64(t,/=8.0Hz，1H)，6.74(d,J=8.4Hz,1H)，5.32(s,1H),4.32(t,/=7.2Hz,2H),3.51(t，/=7.2Hz，2H)，3.42(t，7.2Hz,2H),2.35(m,2H),1.83(m，2H)，1.55-1.32(br,10H),0.91(t，J=6.8Hz，3H);MS(ESI)計(jì)算值C23H3QBrN202[M+H]+445.1，試驗(yàn)值445.2。將0.100克2-(3-溴丙基)-6-(辛胺)-lH-苯并[de]異喹啉-l，3(2H)-二酮(中間體ma)(0.225mmo1)，0.112克N-甲基哌嗪(l.12mmol)，0.045克碘化鉀(0.271mmo1)，及15mL干燥過的氯仿加入50毫升單口燒瓶中，氬氣保護(hù)下，磁力攪拌，回流2天。TLC跟蹤至無原料，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去溶劑，溶于10%的碳酸鈉水溶液，二氯甲烷多次萃取，合并二氯甲烷層，旋干。柱層析分離(洗脫液為二氯甲烷:甲醇:三乙胺=100:4:i)，得到2-(3-(4-甲基哌嗪-i-yi)丙基)-6-(辛胺)-lH-苯并[de]異喹啉-l，3(2H)-二酮(化合物Ia)0.072克，產(chǎn)率69%。橙色粘稠狀固體。&NMR(400MHz,CDC13):58.51(d，J=7.6Hz,1H)，8.40(d,/=8.4Hz，1H),8.10(d，</=7.6Hz，1H),7.54(t,/=7.6Hz,1H),6.66(d,J=8.4Hz,1H)，5.45(s，1H),4.19(t，《/=7.2Hz，2H)，3.37(m,2H),2.81-2.37(br，10H),2,21(s，3H)，1.91(m，2H)，1.78(m，2H)，1.50-1.24(br，IOH)，0.87(t,/=6.4Hz，3H);13CNMR(100MHz，CDC13):<5164.68,164.12，149.53,134.42，130.98，129.79,125.89,124.54,123.08，120.15，110.04,104.23,56.09，55.08,52.97,45.96，43.74,38.57，31.76，29.32,29.19,28.9527.17，25.28,22.61，14.07;HRMS(ESI)計(jì)算值C28FLuN402[M+Hf465.3230，試驗(yàn)值465.3209。實(shí)施例26-(十二垸基胺)-2-(3-(4-甲基哌嗪-l-yl)丙基)-lH-苯并[de]異喹啉-l,3(2H)-二酮(化合物Ib)的合成以十二胺替代實(shí)施例1中的辛胺，其它條件參見實(shí)施例1，可制得6-(十二垸基胺)-2-(3-羥基丙基)-lH-苯并[de]異喹啉-l，3(2H)-二酮(中間體iib)。黃色固體。熔點(diǎn)144.9-146.4°C。&畫R(400MHz,CDC13):38.62(<!，/=6.4Hz,1H)，8.50(d，/=8.4Hz,1H),8.13(d，/=8.4Hz，1H)，7.66(t，J=8.0Hz,1H)，6.76(d，</=8.4Hz，1H)，4.36(t，《/=6.0Hz，2H)，3.57(t，/=5.6Hz，2H)，3.44(t,/=7.2Hz,2H),2.00(m,2H),1.84(m，2H)，1.56-1.29(br，18H)，0.90(t，/=6.4Hz，3H);MS(ESI)計(jì)算值C27H38N203Na[M+Na]+461.3,試驗(yàn)值461.3。以中間體iib替代實(shí)施例1中的中間體iia，其它條件與實(shí)施例1中相同，可制得2-(3-溴丙基)-6-(十二烷基胺)-lH-苯并[de]異喹啉-l，3(2H)-二酮(中間體iiib)熔點(diǎn)54.9-57.3°C。&NMR(400MHz，CDC13):<58.60(d，《/=7.6Hz,1H),8.48(d，/=8.4Hz,1H)，8.11((!，/=8.0Hz，1H)，7.64(t,/=8.0Hz，1H),6.75(<!，/=8.4Hz，1H)，5.30(s，1H)，4.32(t，J=6.8Hz，2H)，3.51(t，《/=7.2Hz，2H)，3.43(W=7.2Hz，2H),2.35(m,2H),1.84(m，2H)，1.55-1.29(br，18H),0"0(t，J-6.8Hz,3H);MS(ESI)計(jì)算值C27H37N202[M-Br]+421.3，試驗(yàn)值421.3。以中間體iiib替代實(shí)施例l中的中間體iiia，其它條件參見實(shí)施例1，可制得6-(十二烷基胺)-2-(3-(4-甲基哌嗪-l—yl)丙基)-lH-苯并[de]異喹啉-1,3(2印-二酮(化合物Ib)。橙色粘稠狀固體。&畫R(400MHz，CDC13):S8.52(d，7.2Hz，1H),8.41(d，《/=8.4Hz，1H)，8.10(d,J=7.6Hz,1H)，7.55(t，J-8.0Hz，1H)，6.67(d，《/=8.4Hz,1H)，5.43(s，1H)，4.20(t，《/=7.6Hz，2H)，3.37(m，2H)，2.81-2.38(br,10H),2.21(s，3H),1.92(m，2H),1.79(m，2H),1.51-1.25(br，18H),0.87(t，7=6.4Hz,3H);13CNMR(100MHz,CDC13):(5164.67，164.11，149.51，134.41，130.97，129.78，125.86，124.53,123.09，120.14,110.06,104.23，56.09，55.09,52.98,45.97，43.74，38.57，31.88，29.60，29,54,29.36,29.31，28.96，27.17,25.28，22.66,14.10:HRMS(ESI)計(jì)算值0)211491^402[1^+司+521.3856，試驗(yàn)值521.3862。實(shí)施例32-(3-(2-(二甲胺基)乙胺基)丙基)-6-(辛胺)-lH-苯并[de]異喹啉-l，3(2H)-二酮(化合物Ic)的合成以N，N-二甲基乙二胺替代實(shí)施例1中的N-甲基哌嗪，其它條件與實(shí)施例1相同，可制得2-(3-(2-(二甲胺基)乙胺基)丙基)-6-(辛胺)-lH-苯并[de]異喹啉-l,3(2H)-二酮(化合物Ic)，橙色粘稠狀固體。NMR(400MHz,CDCl3):38.48(d,>7.2Hz,1H),8.37((!,/=8.4Hz，1H)，8.11(d,/=8.4Hz，1H),7.52(t,8.0Hz,1H),6.63((!，/=8.8Hz，1H),5.59(s，1H),4.20(t,/=6.8Hz，2H)，3.35(m,2H),2.67(m，4H)，2.37(t，《/=6Hz,2H),2.17(s，6H)，1.92(m，2H)，1.76(m，2H),1.48-1.22(br，10H),0.85(t,/=6.8Hz，3H);13C麗R(100MHz，CDC13):<5164.69，164.11,149.65，134.48,131.02，129.75，126.10，124.48,122.87，120.12,109.74,104.17，59.23，47.45，47.30,45.57,43.71,38.00,31.76,29.33，29.20,28.90,28.51,27.18，22.62，l楊；HRMS(ESI)計(jì)算值C27H41N402[M+H]+453.3230，試驗(yàn)值453.3222。實(shí)施例42-(3-(2-(二甲胺基)乙胺基)丙基)-6-(十二垸基胺)-lH-苯并[de]異喹啉-l，3(2H)-二酮(化合物Id)的合成以N,N-二甲基乙二胺和2-(3-溴丙基)-6-(十二烷基胺)-lH-苯并[de]異喹啉-l，3(2H)-二酮(中間體iib)為原料，按實(shí)施例1所述的制備方法可制得2-(3-(2-(二甲胺基)乙胺基)丙基)-6-(十二垸基胺)-lH-苯并[de]異喹啉-l,3(2H)-二酮(化合物Id)。橙色粘稠狀固體。NMR(400MHz,CDC13):J8.49(d，J=7.2Hz,1H),8.39(<!,/=8.4Hz，1H),8.11(d,/=8.4Hz，1H)，7.53/=8.0Hz，1H)，6.65(d，J=8.4Hz，1H)，5.54(s，1H),4.21(t,/=6.8Hz,2H),3.36(m，2H)，2.68(m,4H)，2.37(t，/=6.0Hz，2H)，2.18(s,6H),1.93(m，2H),1.77(m，2H)，1.45-1.23(br,18H)，0.85(t，J=7.2Hz,3H);13CNMR(100MHz，CDC13):(5164.68,164.11,149.61,134.47,131.01,129.76，126.03,124.49,122,92,120.13,109.82,104.18，59.28，47.48,47.32，45.58，43.71，38.02,31.88,29.60，29.57，29.37,29.32,28.91，28.54,27.18，22.66,14.12;HRMS(ESI)計(jì)算值C31H49N402[M+H]+509.3856，試驗(yàn)值509.3848。實(shí)施例52-(3-(l,4，8,ll-四氮雜環(huán)十四烷-l-yl)丙基)-6-(辛胺)-lH-苯并[de]異喹啉-l，3(2H)-二酮(化合物Ie)的合成:稱0.100克(0.5mmo1)1,4,8,11-四氮雜環(huán)十四垸放入50mL三口燒瓶，加入10mL干燥過的氯仿，氬氣保護(hù)下室溫?cái)嚢?。?.089克(0.2mmo1)2-(3-溴丙基)-6-(辛胺)-lH-苯并[de]異喹啉-l，3(2H)-二酮(中間體iiia)溶于15mL氯仿中，緩慢滴加入燒瓶。反應(yīng)2天。TLC跟蹤至無原料，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去溶劑。經(jīng)柱層析分離(洗脫液為二氯甲烷甲醇氮水=200:30:4)，得到0.058克2-(3-(l，4，8，ll-四氮雜環(huán)十四烷-l-yl)丙基)-6-(辛胺)-lH-苯并[de]異喹啉-l,3(2H)-二酮(化合物Ie)，產(chǎn)率51%。橙色固體。熔點(diǎn)51.9-52.5°C。'HNMR(400MHz,CD3OD):<58.31(m，2H),8.14(d，/=8.4Hz,1H)，7.46(t,/=8.0Hz,lH)，6.548.8Hz,1H),4.08(t,/=7.6Hz,2H),3.33(t,/=6.8Hz，2H)，2.88-2.53(br，■),1.87-1.71(br，8H),1.49-1.29(br,10H),0.89(t,/=7.2Hz，3H);13CNMR(100MHz，CD3OD):3164.55，163.90,151.02，134.31，130.52，129.60，127.86，123.75，121.71,120.16,107.62，103.42,53.33，52.99,50.43，50.10,49.37，46.84，46.48,43.16，38.12，31.66，29.22，29.12,28.22,27.04，26.66,24.88，24.50,22.38，13.16;HRMS(ESI)計(jì)算值C33H53N602[M+H]+565.4230，試驗(yàn)值565.4228。實(shí)施例62-(3-(l，4，8，ll-四氮雜環(huán)十四烷-l-yl)丙基)-6-(十二烷基胺)-lH-苯并[de]異喹啉-l,3(2H)-二酮(化合物If)的合成除以2-(3-溴丙基)-6-(十二烷基胺)-lH-苯并[de]異喹啉-l，3(2H)-二酮(中間體iiib)替代實(shí)施例5中的中間體iiia夕卜，其它條件均與實(shí)施例5相同，可制得2-(3-(l,4，8,ll-四氮雜環(huán)十四烷-l-yl)丙基)-6-(十二烷基胺)-lH-苯并[de]異喹啉-l，3(2H)-二酮(化合物If),橙色粘稠狀固體。NMR(400MHz,CD3OD):(58.35(m，2H),8.17(d,/=8.8Hz，1H)，7.50(t,J=8.0Hz，1H),6.58(d,/=8.8Hz，1H)，4.10(s,2H)，3.35(m,2H)，2.89-2.54(br，18H)，1.85-1.78(br，8H),1.46-1.24(br,18H),0.88(t,/=7.2Hz,3H);13CNMR(100MHz，CD3OD):5164.59，163.94，151.07,134.37,130.57，129.64，127.90，123.79,121,74,120.22，107.63，103.45，53.35，52.89,50.42,50.11，49.36,46.80，46.44,43.15，38.12，31.72，29.41,29.13,28.19，27.02，26.55,24.84，24.53,22.39，13.18;HRMS(ESI)計(jì)算值C37H61N602[M+H〗+621.4856，試驗(yàn)值621.4857。實(shí)施例76-(2-(4-甲基哌嗪-l-yl)乙胺基)-2-辛基-lH-苯并[de]異喹啉-l，3(2H)-二酮(化合物Ig)的合成以辛胺代替實(shí)施例1中的丙醇胺外，其它條件與實(shí)施例1中所述相同，可制得6-溴-2-辛基-lH-苯并[de]異喹啉-l，3(2H)-二酮(中間體iva)，白色固體。熔點(diǎn)86.3-87.2°C。&NMR(400MHz,CDC13):38.68(d,J=7.2Hz,IH),8.59((!，/=7.6Hz，IH),8.44(d，/=8.0Hz,IH)，8.06(d,8.0Hz，IH)，7.87(t，/=7.6Hz，IH),4.18(t，J=8.0Hz,2H),1.75(m，2H),1.47-1.29(br，10H),0.89(t，J=7.2Hz，3H);MS(EI)計(jì)算值C2()H22BrN02[M+]387.1，試驗(yàn)值387.1。以乙醇胺和中間體^3為原料,按實(shí)施例1中所述方法可制得6-(2-羥基乙胺基)-2-辛基-出-苯并[de]異喹啉-l,3(2H)-二酮(中間體va)，黃色固體。熔點(diǎn)156.0-157.8°C。!HNMR(400MHz,CDCI3):58.57(d，/=7.2Hz,1H)，8.45(d,/=8.4Hz,IH),8.13(d，《/=8.4Hz，IH)，7.62(t，</=7.6Hz,IH)，6.74(d,/=8.4Hz，IH)，4.16(t,J=8.0Hz，2H)，4.09(t,J=5.2Hz,2H)，3.60(t，《/=5.2Hz，2H),1.73(m，2H),1.47-1.28(br,IOH)，0.89(t,7.2Hz,3H);MS(ESI)計(jì)算值(:2211291^203[]^+11]+369.2，試驗(yàn)值369.2。按實(shí)施例1中所述的"溴化"方法溴化中間體va，可得6-(2-溴乙胺基)-2-辛基-lH-苯并[de]異喹啉-l，3(2H)-二酮(中間體via)，橙色固體。熔點(diǎn)146.2-147.3°C。畫R(400MHz，CDC13):38.63(d，J=6.4Hz,1H),8.50(d，■/=8.4Hz,1H),8.16(d,>/=7.6Hz,1H)，7.69(t，J=8.0Hz,1H)，6.77(d，J=8.4Hz,IH),5.60(s,IH)，4.17(t，/=7.6Hz，2H)，3.89(d，《/=4.4Hz,2H),3.77(t，/=6.0Hz,2H),1.74(m，2H),1.47-1.28(br，IOH)，0.89(t,J=7.2Hz，3H);MS(ESI)計(jì)算值C22H28BrN202[M+H]+43U，試驗(yàn)值431.2。將中間體via與甲基哌嗪按實(shí)施例1中所述方法反應(yīng)，可制得6-(2-(4-甲基哌嗪-l-yl)乙胺基)-2-辛基-lH-苯并[de]異喹啉-l，3(2H)-二酮(化合物Ig)，橙色固體。熔點(diǎn)109.6-113.6°C。&NMR(400MHz,CDC13):(58.48(s，IH)，8.34(s，IH),8.19(d,J=8.4Hz,IH)，7.56(s,IH)，6.58(s，IH)，6.34(s，IH),4.08(s，2H),3.45(s，2H)，2.92-2.87(br,10H),2.56(s，3H),1.67(s,2H),1.36-1.22(br，10H),0.83(t，/=6.4Hz，3H);13CNMR(100MHz,CDC13):<5164.53,163.98,149.25,134.23,130.97,129.60,126.54，124.72,122.89,120.36，110.32，104.29,55.23，54.22,51.02,44.74，40.19,39.32，31.80，29.66，29.37，29.22，28.21，27.21，22.61,14.08;HRMS(ESI)計(jì)算值C27H39N402[M+H]+451.3073'試驗(yàn)值451.3085。實(shí)施例82-十二烷基-6-(2-(4-甲基哌嗪-l-yl)乙胺基)-lH-苯并[de]異喹啉-l，3(2H)-二酮(化合物Ih)的合成以十二胺代替實(shí)施例1中的丙醇胺外，其它條件與實(shí)施例1中所述相同，可制得6-溴-2-十二垸基-lH-苯并de]異喹啉-l，3(2H)-二酮(中間體ivb)，白色固體。熔點(diǎn)66.6-67.4°C。'HNMR(400MHz，CDC13):<58.68(d,J"=7.2Hz，1H),8.59(d,/=8.4Hz，IH)，8.44(d,J=7.6Hz，IH)，8.06((!，《/=8.0Hz，IH)，7.87(t，/=7.6Hz,1H),4.18(t，/=7.6Hz，2H)，1.75(m，2H)，1.47-1.27(br,18H)，0.90(t,/=7.2Hz,3H);MS(EI)計(jì)算值C24H3GBrN02[M+]443.1，試驗(yàn)值443.2。以乙醇胺和中間體ivb為原料，按實(shí)施例1中所述方法可制得2-十二烷基-6-(2-羥基乙胺基)-lH-苯并[de]異喹啉-l,3(2H)-二酮(中間體vb)，黃色固體。熔點(diǎn)149.9-152.2°C。畫R(400MHz,CDC13):<58.53(d，《/=7.2Hz，1H)，S.41(d,/=8.4Hz，1H)，8.11(d,■/=8Hz，1H),7.59(t，/=8.0Hz，1H)，6.71(d,/=8.4Hz，1H)，4.15(t,/=7.6Hz,2H)，4.09(t,/=5.2Hz,2H),3.58(t，J=5.2Hz，2H)，1.73(m,2H)，1.45-1.26(br，18H)，0.89(t,/=7.2Hz，3H);MS(ESI)計(jì)算值C26H37N203[M+H]+425.3，試驗(yàn)值425.3。按實(shí)施例1中所述的"溴化"方法溴化中間體vb，可得6-(2-溴乙胺基)-2-十二烷基-1&苯并[de]異喹啉-l，3(2H)-二酮(中間體vib)，橙色固體。熔點(diǎn)123.9-126.0°C。NMR(400MHz,CDC13):58.63((!，/=7.2Hz,1H)，8.50(d，7=8.4Hz，1H),8.16(d，■/=8.0Hz，1H)，7.69(t，/=8.4Hz，1H),6.77(d,/=8.4Hz，1H)，5.60(s，1H)，4.17(t，</=7.6Hz，2H)，3.89(t，■/=5.6Hz,2H),3.77(t，/=6.0Hz,2H)，1.74(m，2H)，1.45-1.27(br，10H),0.90(t,J=7.2Hz,3H);MS(ESI)計(jì)算值C26H36BrN202[M+H]+487.2,試驗(yàn)值487.2。將中間體vib與甲基哌嗪按實(shí)施例1中所述方法反應(yīng)，可制得2-十二烷基-6-(2-(4-甲基哌嗪-l-yl)乙胺基)-lH-苯并[de]異喹啉-l，3(2H)-二酮(化合物Ih)，橙色粘稠狀固體。&NMR(400MHz，CDC13):38.47(s,1H),8.34(s，1H),8.23((!，/=8.4Hz,IH)，7.55(s,IH)，6.58((!，</=5.6Hz，IH)，6.39(s，IH)，4.08(s，2H),3.47(s，2H),2.94(t,/=6.0Hz,IOH)，2.59(s，3H),1.66(s,2H)，1.36-1,20(br，18H),0.84(t,6.8Hz,3H);13CNMR(100MHz,CDC13):3164.51,163.96，149.21,134.20，130.98，129.59，126.63，124.72,122.88，120.39，110.40，104.24，55.21，53.95，50.76，44.50,40.19，39.32，31.87，29.66,29.59，29.42，29.31,28.21,27.21，22.65，14.10;HRMS(ESI)計(jì)算值C31H47N402[M+H]+507.3699，試驗(yàn)值507.3686。實(shí)施例96-(2-(2-(二甲胺基)乙胺基)乙胺基)-2-辛基-lH-苯并[de]異喹啉-l,3(2H)-二酮(化合物Ii)的合成以N，N-二甲基乙二胺和6-(2-溴乙胺基)-2-辛基-lH-苯并[de]異喹啉-l，3(2H)-二酮(中間體via)為原料，按實(shí)施例1中所述方法可制得6-(2-(2-(二甲胺基)乙胺基)乙胺基)-2-辛基-111-苯并[(16]異喹啉-1，3(211)-二酮(化合物Ii)，橙色粘稠狀固體。'H畫R(400MHz，CDC13):<58.51(d，《/=7.2Hz，1H),8,39(d,8.0Hz,1H),8.14(d，8.4Hz，1H)，7.54(t,/=8.0Hz,1H),6.61(d,</=8.4Hz，1H),6.42(s,lH),4.12(t,■/=7.6Hz,2H)，3.39(d,J=4.8Hz,2H),3.07(t，/=5.2Hz,2H),2.75(t，/=5.6Hz，2H)，2.44(t，《/=5.6Hz，2H),2.23(s,6H)，1.70(m,2H),1.41-1.24(br，IOH)，0.85(t，《/=6.8Hz，3H);13CNMR(100MHz，CDC13):5164.69，164.13,149.76,134.46，130.96,129.72,126.47，124.43，122.92，120.38，109.93，104.28，58.86，47.28，46.38，45.50，42.22，40.20，31.84，29.41,29.26,28.23，27.23，22.65，14.12;HRMS(ESI)計(jì)算值(:261139>1402[1^+巧+439.3073，試驗(yàn)值439.3075。實(shí)施例106-(2-(2-(二甲胺基)乙胺基)乙胺基)-2-十二垸基-lH-苯并[de]異喹啉-l,3(2H)-二酮(化合物Ij)的合成以N，N-二甲基乙二胺和6-(2-溴乙胺基)-2-十二垸基-lH-苯并[de]異喹啉-l,3(2H)-二酮(中間體vib)為原料，按實(shí)施例1中所述方法可制得6-(2-(2-(二甲胺基)乙胺基)乙胺基)-2沖二烷基-lH-苯并[de]異喹啉-l,3(2H)-二酮(化合物Ij)，橙色固體。熔點(diǎn)68.4-69.6'C。&麗R(400MHz，CDC13):58.54(d,/=7.2Hz，1H)，8.42(d，《/=8.4Hz，1H),8.17(d，</=8.4Hz，1H)，7.57(t，《/=8.0Hz,1H)，6.64((!，/=8.4Hz，1H)，6.42(s,1H)，4.14(t，/=7.6Hz，2H)，3.41(m，2H),3.09(t，</=5.2Hz，2H)，2.77(t,/=6.0Hz，2H),2.46(t，/=5.6Hz，2H)，2.25(s，6H)，1.71(m，2H)，1.43-1.24(br,18H),0.87(t，《/=6.4Hz，3H);13CNMR(100MHz，CDC13):3164.71，164.15，149.76，134.47,130.99,129.76,126.48,124.48，122.98，120.43,110.03，104.29,58.83，47.28，46.35，45.47，42.23，40.21，31.92,29.63，29.60,29.46，29.36，28.24，27.24，22.69,14.14;HRMS(ESI)計(jì)算值C3QH47N402[M+H]+495.3699，試驗(yàn)值495.3699。實(shí)施例116-(2-(l，4,8,ll-四氮雜環(huán)十四垸-l-yl)乙胺基)-2-辛基-lH-苯并[de]異喹啉-l，3(2H)-二酮(化合物Ik)的合成以6-(2-溴乙胺基)-2-辛基-lH-苯并[de]異喹啉-l，3(2H)-二酮(中間體via)和1，4,8,11-四氮雜環(huán)十四烷為原料，按實(shí)施例5所述方法可制得6-(2-(l,4,8，ll-l,4,8，ll-四氮雜環(huán)十四烷-l-yl)乙胺基)-2-辛基-lH-苯并[de]異喹啉-l,3(2H)-二酮(化合物Ik)，橙色固體。熔點(diǎn)125.8-127.5°C。'H顧R(400MHz,CD3OD):J8.29(m，2H)，8.16(d，</=8.4Hz,1H),7.45(t,J-8.0Hz，1H),6.66(d,/=8.8Hz,1H)，3.99(t，/=7.2Hz,2H)，3.50(t,/=6.4Hz,2H),2.77-2.51(br,18H),1.77-1.62(br，6H)，1.31-1.23(br,■),0.85(t,/=7.2Hz,3H):l3CNMR(100MHz，CD3OD):5164.39，163.81，150.74,134.30,130.56，129,56,127.73，123.87,121.88,120.25,108.07,103.62，54.53，53.67,50.78，50.60，49.31，48.51,46.76，40.25，39.68，31.64，29.14，29.05,27.88，27.56，26.94，25.40，22.36，13.20;HRMS(ESI)計(jì)算值C32H51N602[M+H]+551.4074，試驗(yàn)值551.4070。實(shí)施例126-(2-(l，4,8，ll-四氮雜環(huán)十四烷-l-yl)乙胺基)-2-十二垸基-lH-苯并[de]異喹啉-l，3(2H)-二酮(化合物Il)的合成6-(2-溴乙胺基)-2-十二烷基-lH-苯并[de]異喹啉-l,3(2H)-二酮(中間體vib)禾B1，4,8,11-四氮雜環(huán)十四烷為原料，按實(shí)施例5所述方法可制得6-(2-(l，4，8，ll-四氮雜環(huán)十四烷-l-yl)乙胺基)-2沖二烷基-lH-苯并[de]異喹啉-l，3(2H)二酮(化合物I1)，橙色粘稠狀固體。&NMR(400MHz，CD3OD):38.31(m，2H)，8.18(d，/=8.4Hz,1H)，7.47(t，/=8.0Hz，1H),6.67(d,/=8.8Hz,1H)，4.00(t，/=7.2Hz，2H)，3.52(t,/=6.4Hz,2H)，2.78-2.53(br，18H)，1.77-1.63(br，6H)，1.31-1.19(br，18H)，0.85C7.2Hz,3H);13CNMR(100MHz,CD3OD):3164.40，163.83，150.74,134.33，130.58，129.60,127.77,123.89，121.92,120.28，108.12，103.62，54.49,53.69,50.81，50.61，49.31，48.51，46.75，40.28，39.70,31.73,29.44,29.21,29.15，27.92，27.51，26.95，25.40，22.41，13.25;HRMS(ESI)計(jì)算值C36H59N602[M+H]+607.4700，試驗(yàn)值607.4688。實(shí)施例136-(2-(l，4，8,ll-四氮雜環(huán)十四烷-l-yl)乙胺基)-2-甲基-lH-苯并[de]異喹啉-l，3(2H)-二酮(化合物Im)的合成以甲胺水溶液和4-溴-l，8-萘酐為原料，按實(shí)施例1中所述的方法可制得6-溴-2-甲基-lH-苯并[de]異喹啉-l，3(2H)-二酮(中間體A)，白色固體。熔點(diǎn)182.4183.4°C。'H畫R(400MHz，CDC13):<58.68((1,7=7.2Hz，1H)，8.59(d，《/=8.4Hz，1H)，8.44(d，/=8.0Hz,1H),8.06(d,>/=7.6Hz，1H)，7.86(t,/=8.4Hz，1H)，3.57(s，3H);MS(EI)計(jì)算值C13H8BrN02[M+〗289.0,試驗(yàn)值289.0,。以乙醇胺和中間體A為原料，按實(shí)施例1中所述的方法可制得:6-(2-羥基乙胺)-2-甲基-111-苯并[de]異喹啉-l，3(2H)-二酮(中間體B)，黃色固體。熔點(diǎn)223.7-224.5。C。'H畫R(400MHz,DMSO):38.68(d,J=8.4Hz，1H)，8.43(d,/=7.2Hz,1H),8.25(d,/=8.8Hz,1H),7.67(t,/=8.0Hz,1H),6.81(d,J=8.4Hz,1H),3.69(t,/=6.0,2H),3.46(t，/=6.0，2H):MS(EI)計(jì)算值Ci5H14N203[M+]270.1，試驗(yàn)值270.1.按實(shí)施例1中所述的溴化方法溴化中間體B可得6-(2-溴乙胺)-2-甲基-lH-苯并[de]異喹啉-l，3(2H)-二酮(中間體C),橙色固體，熔點(diǎn)208.8~211.8'C。'H麗R(500MHz,CDC13):38.63(d,/=7.3Hz,IH)，8.50((!，/=7.2Hz,1H),8.15(d，《/=8.3Hz，IH)，7.69(t,J=8.0Hz,IH)，6.75(d，J=6.9Hz，IH)，3.89(t，5.8Hz,2H),3.76(t，/=5.7Hz，2H)，3.54(s,3H);MS(EI)計(jì)算值Ci5H13BrN202[M+]332.0,試驗(yàn)值332.0。以中間體(:和1，4，8，11-四氮雜環(huán)十四烷為原料,按實(shí)施例5所述方法可制得:6-(2-(1，4，8，11-四氮雜環(huán)十四垸-l-yl)乙胺基)-2-甲基-lH-苯并[de]異喹啉-l,3(2H)-二酮(化合物Im)，橙色粘稠狀固體。'HNMR(400MHz,CD3OD):<58.21(m，2H)，8.05((!，/=8.4Hz，1H)，7.40(t，《/=8.4Hz，1H)，6.59(d，/=8.4Hz,1H)，3.50(t,/=7.2,2H)，3.34(s,3H)，2.78-2.53(br,18H),1.76(m，4H);13CNMR(100MHz，CD3OD):5164.90,164.37，150.86，134.32，130.67,129.58,127.81,123.98，121.81，120.38,107.94，103.68，54.35，53.48，50.74，50.47，49.15，48.34，46.69，40.19,27.40,25.33，24.05;HRMS(ESI)計(jì)算值C25H37N602[M+H]+453.2978,試驗(yàn)值453.2968。實(shí)施例142-十二垸基-6-(辛胺)-lH-苯并[de]異喹啉-1,3(211)-二酮(化合物In)的合成以辛胺和6-溴-2-十二烷基-lH-苯并[de]異喹啉-l，3(2H)-二酮(中間體ivb)為原料，按實(shí)施例1中所述的方法可制得2-十二垸基-6-(辛胺)-lH-苯并[de]異喹啉-l,3(2H)-二酮(化合物In)，黃色固體。熔點(diǎn)92.8-94.rC。!H觀R(400MHz，CDC13):38.56(d,J-7.2Hz,1H),8.44(d,/=8.4Hz,1H),8.11((!,/=8.0Hz,1H)，7.58(t，/=8.0Hz,1H),6.70(d，《/=8.4Hz,1H),5.41(s，1H)，4.16(t，</=7.6Hz，2H)，3.39O7.2Hz，2H)，1.77(m，4H),1.53-1.25(br,28H)，0.89(m，6H);13CNMR(100MHz，CDC13):(5164.66,164.12，149.46，134.42，131.01，129.78,125.81,124.57，123.16，120.16，110.18，104.26，43.76，40.24，31.93,31.79，29.63,29.60，29.45，29.35,29.22，28.99，28.25，27.23，27.20,22.69，22.64,14.13,14.09;HRMS(ESI)計(jì)算值C32H49N202[M+H]+493.3794，試驗(yàn)值493.3780。實(shí)施例156-(2-(二甲胺基)乙胺基)-2-十二垸基-lH-苯并[de]異喹啉-l,3(2H)-二酮(化合物Io)的合成以N,N-二甲基乙二胺和6-溴-2-十二烷基-lH-苯并[de]異喹啉-l，3(2H)-二酮(中間體ivb)為原料，按實(shí)施例1中所述的方法可制得6-(2-(二甲胺基)乙胺基)-2沖二烷基-lH-苯射de]異喹啉-l,3(2H).二酮(化合物Io),橙色固體，熔點(diǎn)97.6-99.2'C。NMR(400MHz，CDC13):38.55(d，《/=7.2Hz，1H),8.42(d，8.4Hz,1H)，8.11(d，/=8.0Hz,1H)，7.59(t，</=8.0Hz，1H)，6.63((!，《/=8.4Hz，1H),6.28(s，1H)，4.14(t，■/=7.6Hz,2H),3.36(m，2H)，2.72(t，《/=5.6Hz,2H)，2.33(s，6H),1.72(m，2H),1.45-1.24(br，18H),0.87(t,/=6.4Hz，3H);13CNMR(100MHz,CDC13):(5164.62,164.05,149.54,134.39,130.93,129.65,126.30，124.47，122.92,120.26,109.98,104.27，56.87,45.04，40.17,40.12,31.91,29,62,29.44,29.34，28.23，27.23,22.68，14.13;HRMS(ESI)計(jì)算值C28H42N302[M+H]+452.3277，試驗(yàn)值452.3254。實(shí)施例162-(3-(二甲胺基)丙基)-6-(甲胺)-lH-苯并[de]異喹啉-l,3(2H)-二酮(化合物Ip)的合成'.除以N,N-二甲基丙二胺代替實(shí)施例1中的正丙醇胺外，其它條件與實(shí)施例1(第1步)相同，可制得6-溴-2-(3-(二甲胺基)丙基)-lH-苯并[de異喹啉-l，3(2H)-二酮(中間體D)，白色固體，熔點(diǎn)99.4跳8'C。!HNMR(400MHz，CDC13):38.66((!，/=7.2Hz，1H)，8.57((!，/=8.8Hz,1H),8.417.6Hz，1H)，8.04(d，J=8.0Hz，1H),7.85(t,>/=8.0Hz，1H)，4.23(t，/=7.6Hz,2H),2.45(t,/=7.2Hz，2H)，2.27(s，6H)，1.93(m，2H);MS(EI)計(jì)算值C17H17BrN202[M勺360.0,試驗(yàn)值360.1。稱0.500克(1.39mtnol)中間體D和0.335克(2.1mmol)無水硫酸銅于15mL單口燒瓶中，力口入15mL甲胺水溶液，磁力攪拌，加熱至回流，反應(yīng)2小時(shí)。TLC跟蹤至無原料，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去溶劑。經(jīng)柱層析分離(洗脫液為二氯甲垸甲醇=10:1)，得到0.357克2-(3-(二甲胺基)丙基)-6-(甲胺)-lH-苯并[de]異喹啉-l，3(2H)-二酮(化合物Ip)，產(chǎn)率82%。橙色固體。熔點(diǎn)169.9~170.6°C。^NMR(400MHz，CDC13):38.48(d，《/=7.2Hz，1H),8.40(d,</=8.4Hz，1H)，8.09(d，/=8.4Hz,1H),7.52(t，/=8.0Hz,1H)，6.62(d，J=8.8Hz,1H),5.75(s,1H),4.19(t,7.6Hz,2H),3.10(d，J-4.8Hz，3H)，2.44(t，J-7.6Hz,2H),2.26(s,6H)，1.91(m,2H);13C麗R(100MHz,CDC13):<5164.63,164.11,150.44,134.41,130.94,129.61，126.03，124.56，122.93，120.22，110.09,103.82,57.35，45.35，38.44，30.44，26.17;HRMS(ESI)計(jì)算值C18H22N302[M+H]+312.1712，試驗(yàn)值312.1721。實(shí)施例172-(3-(二甲胺基)丙基)-6-(辛胺)-lH-苯并[de]異喹啉-l,3(2H)-二酮(化合物Iq)的合成以辛胺和6-溴-2-(3-(二甲胺基)丙基)-lH-苯并[de]異喹啉-l，3(2H)-二酮為原料，按實(shí)施例16)中所述的方法(最后一步)可制得2-(3-(二甲胺基)丙基)-6-(辛胺)-lH-苯并[de]異喹啉-l，3(2H)-二酮(化合物Iq)，橙色固體。熔點(diǎn)56.3-59.8°C。NMR(400MHz,CDC13):<58.32((!，/=6.8Hz，1H),8.23(d,■/=8.0Hz，2H)，7.35(t,/=7.2Hz，1H)，6.488.4Hz，1H)，6.16(s，lH)，4.06(t,/=7.2Hz，2H)，3.24(s,2H)，2.28(t,J=5.6Hz，2H)，2.10(s,6H),1.78(t，J=6.4Hz,2H),1.65(t,■/=6.0Hz,2H),1.33-1.10(br，10H),0.73(s,3H);13CNMR(100MHz，CDC13):3164.53，163.91，150.04，134.33，130.76，129.66,126.90，124.17，122.46,120.16，109.07，103.86，57.27，45.30，43.63，38.32，31.68,29.28，29.14，28.71,27.16,26.18,22.52，14.01;HRMS(ESI)計(jì)算值C25H36N302[M+H]+410.2808，試驗(yàn)值410.2798。實(shí)施例18體外抑制腫瘤細(xì)胞生長活性測定用MTT分析法對白血病細(xì)胞株(HL-60)，人宮頸癌細(xì)胞(Hela)，乳腺癌細(xì)胞(MCF-7)，結(jié)腸癌細(xì)胞(Lsl74),胃癌細(xì)胞(MKN45)等五種細(xì)胞進(jìn)行抑制試驗(yàn)。該分析法以活細(xì)胞代謝物還原劑3-(4，5)-dimethylthiahiazo(-z-yl)-3，5-di-phenytetrazoliumromide,MTT噻唑藍(lán)為基礎(chǔ)。MTT為黃色化合物，是一種接受氫離子的染料，可作用于活細(xì)胞線粒體中的呼吸鏈，在琥珀酸脫氫酶和細(xì)胞色素C的作用下tetrazolium環(huán)開裂，生成藍(lán)色的formazan結(jié)晶，formazan結(jié)晶的生成量僅與活細(xì)胞數(shù)目成正比(死細(xì)胞中琥珀酸脫氫酶消失，不能將MTT還原)。還原生成的formazan結(jié)晶用DMSO來溶解，利用酶標(biāo)儀測定492nm，630nm處的光密度OD值，以反映出活細(xì)胞數(shù)目?；具^程如下①接種細(xì)胞用1640培養(yǎng)液配成單個(gè)細(xì)胞懸液，以1000-10000個(gè)細(xì)胞接種到96孔板，每孔體積100ul。②培養(yǎng)細(xì)胞同一般培養(yǎng)條件，培養(yǎng)4h。③加藥藥物用DMSO溶解后用培養(yǎng)液以終濃度分別為25、12.5、6.25、3.125、0PM配制藥物，每孔100ul。呈色培養(yǎng)24h后，每孔加MTT溶液10ul繼續(xù)孵育4小時(shí)，終止培養(yǎng)，小心吸棄孔內(nèi)培養(yǎng)上清液，每孔加100ulDMSO，振蕩10分鐘，使結(jié)晶物充分融解。比色選擇492nm、630nm雙波長檢測法，在酶聯(lián)免疫監(jiān)測儀上測定各孔光吸收值，記錄結(jié)果，以時(shí)間為橫坐標(biāo)，吸光值為縱坐標(biāo)繪制細(xì)胞生長曲線。結(jié)果見表l表l化合物相對五株細(xì)胞的半數(shù)抑制濃度IC50(單位:<table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table>由表1可知本發(fā)明的化合物具有廣泛的抗腫瘤活性，對乳腺癌、宮頸癌、結(jié)腸癌、胃癌和白血病等多種不同組織來源的腫瘤細(xì)胞的增殖都顯示出明顯的抑制活性，且抑制活性相對于amonofide有明顯的提高。實(shí)施例19用AnnexinV-FITC/PI雙染細(xì)胞凋亡檢測試劑盒對化合物的抗凋亡活性分析實(shí)驗(yàn)步驟如下(1)lxl()S個(gè)Hela細(xì)胞用不同濃度藥物處理24h。(2)消化、收集細(xì)胞(1500卬m,5min)，用PBS緩沖液洗細(xì)胞2次，離心收集(1500rpm，5min)。(3)加入AnnexinV—FITC試劑5ixl，4。C15min。(4)加入PI試齊Ul0nl，4'C5min。(5)使用FACSCalibur流式細(xì)胞儀檢測。結(jié)果見表2表2化合物對Hela細(xì)胞的半數(shù)抑制濃度，加藥濃度及凋亡率化合物IC50/fiM加藥濃度/MM早期凋亡率(％)晚期凋亡率(％)化合物Ia8.182.5197.45化合物Ib2.89384.8414.96化合物Ic楊474.2525.70化合物Id4.7142.1997.74化合物Ie7.6571.4998.46化合物If10.421059.5232.47化合物Ig7.90746.1553.82化合物Ih5.45586.9612.75化合物Ii4.5490.079.82化合物Ij16.841679.2120.72化合物Ik9.8939.4760.48化合物I19.39987.1212.83化合物Im16.411686.4013.54化合物In46.434692.027.81化合物Io9.13911.0488.88化合物Ip23.372386.4813.39化合物Iq8.5281.4898.49amonofide10.67102.3296.79由表2可知本發(fā)明的化合物具有高效的誘導(dǎo)早期凋亡的活性。權(quán)利要求1、一種萘酰亞胺衍生物，其具有式I所示結(jié)構(gòu)式I中，R1和R2分別獨(dú)立選自C1～C12烷基或式II所示基團(tuán)中一種式II中，n為1～6的整數(shù)，曲線表示取代位置，A為式III、IV、V或VI所示基團(tuán)式III、IV、V和VI中，曲線表示取代位置，m為1～6的整數(shù)。2、如權(quán)利要求1所述的萘酰亞胺衍生物，其特征在于，R,為式II所示基團(tuán)，其中n為13的整數(shù)，A為式III、IV或V所示基團(tuán)，R2為dC!2垸基。3、如權(quán)利要求2所述的萘酰亞胺衍生物，其特征在于，R!為式II所示基團(tuán)，其中n為l3的整數(shù)，A為式III、IV或V所示基團(tuán)，R2為Qd2烷基。4、如權(quán)利要求3所述的萘酰亞胺衍生物，其特征在于，所述的萘酰亞胺衍生物是2-(3-(4-甲基哌嗪-l-yl)丙基)-6-(辛胺)-lH-苯并[de]異喹啉-l，3(2H)-二酮，6-(十二烷基胺)-2-(3-(4-甲基哌嗪-1-yl)丙基)-1H-苯并[de]異喹啉-1，3(2H)-二酮，2-(3-(2-(二甲胺基)乙胺基)丙基)-6-(辛胺)-lH-苯并[de]異喹啉-l，3(2H)-二酮，2-(3-(2-(二甲胺基)乙胺基)丙基)-6-(十二垸基胺)-111-苯并[de]異喹啉-l，3(2H)-二酮，2-(3-(l，4，8，ll-四氮雜環(huán)十四垸-l-yl)丙基)-6-(辛胺)-lH-苯并[de]異喹啉-l，3(2H)-二酮或2-(3-(l，4,8,ll-四氮雜環(huán)十四垸小yl)丙基)-6-(十二烷基胺)-lH-苯并[de]異喹啉-l，3(2H)-二酮。5、如權(quán)利要求1所述的萘酰亞胺衍生物，其特征在于，R!為dCi2烷基，R2為式II所示基團(tuán)，其中n為l3的整數(shù)，A為式m、IV或V所示基團(tuán)。6、如權(quán)利要求5所述的萘酰亞胺衍生物，其特征在于，R!為Qd2烷基，R2為式II所示基團(tuán)，其中n為l3的整數(shù)，A為式III、IV或V所示基團(tuán)。7、如權(quán)利要求6所述的萘酰亞胺衍生物，其特征在于，所述的萘酰亞胺衍生物是6-(2-(4-甲基哌嗪-l-yl)乙胺基)-2-辛基-lH-苯并[de]異喹啉-l，3(2H)-二酮，2-十二烷基-6-(2-(4-甲基哌嗪-1-^)乙胺基)-111-苯并[<16]異喹啉-1，3(211)-二酮，6-(2-(2-(二甲胺基)乙胺基)乙胺基)-2-辛基-111-苯并[de]異喹啉-l，3(2H)-二酮，6-(2-(2-(二甲胺基)乙胺基)乙胺基)-2-十二烷基-lH-苯并[de]異喹啉-l,3(2H)-二酮，6-(2-(l，4，8，ll-四氮雜環(huán)十四垸-l-yl)乙胺基)-2-辛基-lH-苯并[de]異喹啉-1，3(2印-二酮，6-(2-(l，4，8,ll-四氮雜環(huán)十四烷-l-yl)乙胺基)-2-十二烷基-lH-苯并[de]異喹啉-1,3(2H)-二酮或6-(2-(1，4，8，11-四氮雜環(huán)十四烷-1-yl)乙胺基)-2-甲基-1H-苯并[de]異喹啉-1，3(2印-二酮。全文摘要本發(fā)明涉及一種萘酰亞胺衍生物，其由將多胺結(jié)構(gòu)和長碳鏈引入萘酰亞胺母體所得。經(jīng)MTT法分析發(fā)現(xiàn)本發(fā)明設(shè)計(jì)并合成的萘酰亞胺衍生物對乳腺癌、宮頸癌、結(jié)腸癌、胃癌和白血病等多種不同組織來源的腫瘤細(xì)胞的增殖都顯示出明顯的抑制活性。此外，經(jīng)AnnexinV-FITC/PI雙染細(xì)胞凋亡檢測試劑盒對本發(fā)明設(shè)計(jì)并合成的萘酰亞胺衍生物進(jìn)行抗凋亡活性分析，實(shí)驗(yàn)表明本發(fā)明設(shè)計(jì)并合成的萘酰亞胺衍生物具有高效的誘導(dǎo)早期凋亡的活性。文檔編號C07D221/00GK101633640SQ20091005655公開日2010年1月27日申請日期2009年8月18日優(yōu)先權(quán)日2009年8月18日發(fā)明者劉建文,徐玉芳,東曠,朱維平,欣梁,新王,譚紹英,錢旭紅,卓陳申請人:華東理工大學(xué)