專利名稱：從植物針葉原料中提取高純度聚戊烯醇的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于天然產(chǎn)物提取技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種聚戊烯醇的提 取方法，尤其是利用松屬、云杉屬、冷杉屬、杉木屬等植物的針葉為 原料，提取分離精制聚戊烯醇的方法。
背景技術(shù)：
聚戊烯醇(polyprenol)是由一系列異戊烯基單元和終端異戊烯 醇單元組成的長(zhǎng)鏈多萜類化合物，廣泛地存在于被子植物、裸子植物、 細(xì)菌、真菌及哺乳動(dòng)物的臟器中。在松樹(shù)、冷杉、云杉、杉木和銀杏 等高等植物的綠葉中含量較為豐富，它們是由14 24個(gè)異戊烯基單 元構(gòu)成，與哺乳動(dòng)物臟器中所含的多萜醇結(jié)構(gòu)相近。多萜醇是動(dòng)物組 織中糖蛋白合成時(shí)糖的載體，對(duì)維持機(jī)體生命活動(dòng)具有重要作用。體 內(nèi)多萜醇不足，將影響免疫功能、細(xì)胞分裂和再生，并導(dǎo)致一系列疾 病。外源性聚戊烯醇在體內(nèi)經(jīng)生物代謝可轉(zhuǎn)化為體內(nèi)所需的多萜醇， 參與細(xì)胞膜糖蛋白的生物合成。臨床實(shí)驗(yàn)表明，聚戊烯醇能夠促進(jìn)機(jī) 體造血功能、改善肝臟機(jī)能，對(duì)各種肝臟疾病、腎功能疾病、再生障 礙性貧血、糖尿病以及高血脂、痛風(fēng)、紅斑狼瘡等免疫功能疾病有顯 著療效，且無(wú)毒副作用，可用于保健食品和生物制藥行業(yè)，具有廣闊 的開(kāi)發(fā)利用前景。
中國(guó)專利ZL01113696.0公開(kāi)了一種從銀杏葉中制備銀杏葉聚戊 烯醇和銀杏葉提取物(GBE)的方法，該方法采用多種混合溶劑和硅 膠柱層析法制備70%以上聚戊烯醇，生產(chǎn)成本高，難以進(jìn)行工業(yè)化生
4產(chǎn)。中國(guó)專利ZL200410041670.4公開(kāi)了一種聚戊烯醇的分子蒸餾純 化方法，該方法真空度高達(dá)5xl(^mbar，蒸餾溫度高達(dá)300。C，工業(yè) 化生產(chǎn)較為困難。中國(guó)專利ZL200410074088.8公開(kāi)了一種含銀杏聚 戊烯醇的藥物組合物及其制備方法，該方法采用超臨界二氧化碳從聚 戊烯醇粗提物中萃取出雜質(zhì)，使萃取釜中聚戊烯醇得到純化，但與聚 戊烯醇極性和沸點(diǎn)相近的化合物仍會(huì)留在萃取釜中，無(wú)法得到純度較 高的聚戊烯醇。

發(fā)明內(nèi)容
針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)存在的聚戊烯醇的純度不高、生產(chǎn)成本高的不足， 本發(fā)明提供一種從植物針葉原料中提取高純度聚戊烯醇的方法，以針 葉植物的針葉為原料，提取分離精制聚戊烯醇。
本發(fā)明的技術(shù)方案為一種從植物針葉原料中提取高純度聚戊烯
醇的方法，包括步驟如下
1、 以松屬、冷杉屬、云杉屬、杉木屬等植物的針葉為原料，經(jīng) 切碎、烘干和粉碎后，原料的含水率〈12Xwt，按原料重量與溶劑體 積的比例為1:4 10加入石油醚溶劑，在5(TC 70。C條件下回流提取 2次，每次2 6小時(shí)，過(guò)濾，合并石油醚提取液，減壓濃縮回收溶 劑，得到石油醚提取物。
2、 按提取物重量與溶劑體積的比例為1: 1 2加入質(zhì)量百分比濃 度為10 20%的氫氧化鈉溶液，在50。C 70。C條件下攪拌反應(yīng)1 2 小時(shí)后，加入等體積的石油醚重復(fù)萃取4 6次，合并石油醚萃取液， 水洗至pH值為7止，減壓濃縮回收溶劑，得到針葉不皂化物。
3、 按不皂化物重量與溶劑體積的比例為1:5 10加入丙酮，加 熱攪拌溶解后，置于0"C 5"C條件下冷藏4 8小時(shí)，將析出物過(guò)濾 除去，濾液回收溶劑，得到聚戊烯醇粗提物。4、 按粗提物重量與溶劑體積的比例為l:4 8加入質(zhì)量百分比濃 度為85% 95%的乙醇溶液，加熱攪拌溶解后，靜置分層，吸取上清 液，沉淀物加入乙醇溶液，重復(fù)操作4 6次，得到乙醇不溶物。
5、 按不溶物重量與溶劑體積的比例為1: 5 10加入丙酮，攪拌 溶解后，置于-2(TC -24"C條件下冷凍4 8小時(shí)，過(guò)濾去除濾液， 濾餅加入丙酮溶解，重復(fù)操作4 6次，濾餅濃縮干燥后，即可得純 度為90°/。以上的淺黃色油狀聚戊烯醇。
有益效果
1) 選擇松屬、云杉屬、冷杉屬、杉木屬等植物的針葉為原料， 不但來(lái)源廣泛，不受季節(jié)限制，而且價(jià)格低廉、原料充足；
2) 在皂化、除雜及純化過(guò)程中不使用混合溶劑，方便溶劑回收 和重復(fù)利用，降低了溶劑損耗；
3) 分離提取過(guò)程反應(yīng)溫度低，操作條件溫和，保證了聚戊烯醇 品質(zhì)的穩(wěn)定性；
4) 提取工藝較為簡(jiǎn)單，無(wú)需柱層析，溶劑損耗低，產(chǎn)品純度高， 易于實(shí)現(xiàn)工業(yè)化生產(chǎn)。


圖1為針葉聚戊烯醇HPLC譜圖。
具體實(shí)施例方式
下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的詳細(xì)說(shuō)明，但它們并不是對(duì) 本發(fā)明的限制。
本發(fā)明的產(chǎn)物聚戊烯醇的純度測(cè)定使用的高效液相色譜法，色 譜柱為分析柱Kromasil C18 0DS1 (150mmX4. 6mm， 5 p m)，柱溫為室
6溫，紫外檢測(cè)波長(zhǎng)為206nm;流動(dòng)相為異丙醇甲醇正已垸水 =50:25:10:4(v/v);、流量為lmL/min。
如圖1所示，針葉聚戊烯醇主要由C75、 C8。、 C85、 C9。、 C95、 C1Q。-Prenol 等不同鏈長(zhǎng)的聚戊稀烯醇同系物組成，其中Cs5、 U-Prenol含量最高。
實(shí)施例1
松樹(shù)、冷杉、云杉或杉木等植物的針葉一種或幾種，經(jīng)切碎、烘 干和粉碎后，制成含水率在12%wt以下的針葉粉末。取500g針葉粉 末置于5000ml的圓底燒瓶中，加入2500ml石油醚加熱至70。C回流 提取2小時(shí)，過(guò)濾，濾渣再加入2000ml石油醚，重復(fù)提取1次。合 并兩次提取液，減壓濃縮回收溶劑后，得到石油醚提取物28.1g。石 油醚提取物加入60ml濃度為10°/。wt的氫氧化鈉溶液，在60。C溫度下 攪拌反應(yīng)2小時(shí)，用90ml石油醚萃取5次，合并石油醚萃取液，水 洗至pH值為7止，減壓濃縮回收溶劑，得到針葉不皂化物16.5g。 針葉不皂化物加入100ml丙酮，加熱攪拌溶解后，在2t:條件下靜置 5小時(shí)，過(guò)濾除去析出物，濾液減壓濃縮回收溶劑后，得到12.7g聚 戊烯醇粗提物。聚戊烯醇粗提物加入濃度為90%wt的乙醇溶液50ml， 加熱攪拌溶解后，冷卻至室溫，靜置分層，吸取上清液，沉淀物加入 乙醇溶液，重復(fù)操作5次，得到6.2g乙醇不溶物。乙醇不溶物加入 50ml丙酮，攪拌溶解后，在-20。C溫度下冷凍8小時(shí)，過(guò)濾除去濾液， 濾餅加入丙酮溶解，重復(fù)操作5次，合并濾液回收丙酮，濾餅濃縮干 燥后，得到3.1g聚戊烯醇含量在90.4%wt的淺黃色油狀物。
實(shí)施例2
取含水率10%wt的馬尾松針葉粉700g，置于5000ml的圓底燒 瓶中，加入3500ml石油醚加熱至7(TC回流提取3小時(shí)，過(guò)濾，濾渣 再加入2800ml石油醚，重復(fù)提取1次。合并兩次提取液，減壓濃縮回收溶劑后，得到石油醚提取物40.2g。石油醚提取物加入80ml濃 度為20%wt的氫氧化鈉溶液，在70。C溫度下攪拌反應(yīng)1小時(shí)，用120ml 石油醚萃取5次，合并石油醚萃取液，水洗至pH值為7止，減壓濃 縮回收溶劑，得到針葉不皂化物20.7g。針葉不皂化物加入200ml丙 酮，加熱攪拌溶解后，在0'C條件下靜置4小時(shí)，過(guò)濾除去析出物， 濾液濃縮回收溶劑后，得到16.9g聚戊烯醇粗提物。聚戊烯醇粗提物 加入濃度為92。/。wt的乙醇溶液80ml，加熱攪拌溶解后，冷卻至室溫， 靜置分層，吸取上清液，沉淀物加入乙醇溶液，重復(fù)處理5次，得到 9.2g乙醇不溶物。乙醇不溶物加入100ml丙酮，攪拌溶解后，在-22匸 溫度下冷凍6小時(shí)，過(guò)濾除去濾液，濾餅加入丙酮，重復(fù)操作5次， 合并濾液回收丙酮，濾餅濃縮干燥后，得到4.7g聚戊烯醇含量 91.2%wt的淺黃色油狀物。 實(shí)施例3
取冷杉石油醚提取物lOOg，加入200ml濃度為15%wt的氫氧化 鈉溶液，在60。C溫度下攪拌反應(yīng)2小時(shí)，用300ml石油醚萃取4次， 合并石油醚萃取液，水洗至pH值為7止，減壓濃縮回收溶劑，得到 針葉不皂化物57.4g。針葉不皂化物加入300ml丙酮，加熱攪拌溶解 后，在2"C條件下靜置6小時(shí)，將析出物過(guò)濾除去，濾液濃縮回收溶 劑后，得到40.7g聚戊烯醇粗提物。聚戊烯醇粗提物加入濃度為95%wt 的乙醇溶液200ml，加熱攪拌溶解后，冷卻至室溫，靜置分層，吸取 上清液，沉淀物加入乙醇，重復(fù)萃取5次，得到22.8g乙醇不溶物。 乙醇不溶物加入150ml丙酮，攪拌溶解后，在-20'C溫度下冷凍5小 時(shí)，過(guò)濾除去濾液，濾餅加入丙酮，重復(fù)操作5次，合并濾液回收丙 酮，濾餅濃縮干燥后，得到14.1g聚戊烯醇含量90.7。/。wt的淺黃色油 狀物。
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權(quán)利要求
1、一種從植物針葉原料中提取高純度聚戊烯醇的方法，其特征在于，該提取分離精制方法是通過(guò)以下步驟實(shí)現(xiàn)的第一步，以植物的針葉為原料，經(jīng)切碎、烘干和粉碎后，按原料重量與溶劑體積的比例為1∶4～10加入石油醚溶劑，在50℃～70℃條件下回流提取2次，每次2～6小時(shí)，過(guò)濾，合并石油醚提取液，減壓濃縮回收溶劑，得到石油醚提取物；第二步，將經(jīng)過(guò)第一步處理得到的石油醚提取物，按提取物重量與溶劑體積的比例為1∶1～2加入氫氧化鈉溶液，在50℃～70℃條件下攪拌反應(yīng)1～2小時(shí)后，加入等體積的石油醚重復(fù)萃取4～6次，合并石油醚萃取液，水洗至pH值為7止，減壓濃縮回收溶劑，得到針葉不皂化物；第三步，將經(jīng)過(guò)第二步處理得到的不皂化物按不皂化物重量與溶劑體積的比例為1∶5～10加入丙酮，加熱攪拌溶解后，置于0℃～5℃條件下冷藏4～8小時(shí)，將析出物過(guò)濾除去，濾液濃縮回收溶劑，得到聚戊烯醇粗提物；第四步，將經(jīng)過(guò)第三步處理得到的聚戊烯醇粗提物按粗提物重量與溶劑體積的比例為1∶4～8加入乙醇溶液，加熱攪拌溶解后，靜置分層，吸取上清液，沉淀物加入乙醇溶液，重復(fù)操作4～6次，得到乙醇不溶物；第五步，將經(jīng)過(guò)第四步處理得到的乙醇不溶物按不溶物重量與溶劑體積的比例為1∶5～10加入丙酮，攪拌溶解后，置于-20℃～-24℃條件下冷凍4～8小時(shí)，過(guò)濾去除濾液，濾餅加入丙酮溶解，重復(fù)操作4～6次，濾餅濃縮干燥后，即可得純度為90％wt以上的淺黃色油狀聚戊烯醇。
2、 按權(quán)利要求1所述的從植物針葉原料中提取高純度聚戊烯醇 的方法，其特征在于，所述的針葉植物指松屬、冷杉屬、云杉屬、杉 木屬植物中的任意一種或幾種的混合物。
3、 按權(quán)利要求1所述的從植物針葉原料中提取高純度聚戊烯醇的方法，其特征在于，第二步中的氫氧化鈉溶液的質(zhì)量百分比濃度為10 20%。
4、 按權(quán)利要求1所述的從植物針葉原料中提取高純度聚戊烯醇 的方法，其特征在于，第四步中的乙醇溶液的質(zhì)量百分比濃度為 850/0 95%。
5、 按權(quán)利要求1所述的從植物針葉原料中提取高純度聚戊烯醇 的方法，其特征在于，第一步中以植物的針葉為原料，經(jīng)切碎、烘干 和粉碎后的原料的含水率〈12^wt。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種從植物針葉原料中提取高純度聚戊烯醇的方法，該方法以松屬、云杉屬、冷杉屬、杉木屬等植物的針葉為原料，通過(guò)石油醚溶劑提取，提取液濃縮后加入氫氧化鈉溶液皂化，皂化液用石油醚溶劑萃取，萃取液濃縮后加入丙酮溶解，冷卻，過(guò)濾除雜，濾液濃縮后加入乙醇溶液萃取，去除萃取液，乙醇不溶物加入丙酮溶解，冷凍，過(guò)濾除雜，濾餅經(jīng)真空干燥后，得到所需的高純度聚戊烯醇。本發(fā)明工藝較為簡(jiǎn)單，無(wú)需柱層析，溶劑損耗低，產(chǎn)品純度高，易于工業(yè)化生產(chǎn)。
文檔編號(hào)C07C33/02GK101654398SQ20091003493
公開(kāi)日2010年2月24日 申請(qǐng)日期2009年9月9日 優(yōu)先權(quán)日2009年9月9日
發(fā)明者周維純, 強(qiáng) 宋, 王成章, 薄采穎, 鄭光耀 申請(qǐng)人:中國(guó)林業(yè)科學(xué)研究院林產(chǎn)化學(xué)工業(yè)研究所