專利名稱:食蟹猴Toll樣受體3的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域:
本發(fā)明涉及食蟹猴Toll樣受體3(Cyn0TLR;3)及其用途。
背景技術(shù):
宿主免疫系統(tǒng)對微生物抗原的識(shí)別是通過先天免疫受體介導(dǎo)的,先天免疫受體的 活化代表炎癥反應(yīng)的引發(fā)的重要步驟。Toll樣受體(TLR)屬于先天免疫受體家族,其在介 導(dǎo)對外來抗原的免疫反應(yīng)方面具有重要的作用。TLR3為病原體相關(guān)分子模式識(shí)別受體, 其可以識(shí)別雙鏈RNA(dsRNA)以及合成的dsRNA類似物聚-核糖肌苷酸-核糖胞苷酸(聚 (I:C))。參見(例如)Alexopoulou et al. ,413 Nature 732 Q001) (Alexopoulou 等人, 《自然》,第413卷第732頁,2001年)。此外,已證實(shí)TLR3可識(shí)別內(nèi)源性配體(例如壞死細(xì) 胞釋放的mRNA),表明炎癥部位處的壞死細(xì)胞死亡可能有助于TLR3的活化。參見(例如) Kariko et al. ,26 T. Biol. Chem. 12542 (2004) (Kariko 等人,《生物化學(xué)雜志》,第洸卷第 12542 頁,2004 年)。dsRNA或聚(I:C)配體對TLR3的活化可引起促炎細(xì)胞因子和趨化因子的分泌,并 可以調(diào)節(jié)感染相關(guān)炎癥期間的疾病轉(zhuǎn)歸。重要的是,TLR3體內(nèi)活化在病毒感染或與炎癥相 關(guān)的壞死的情況下發(fā)生。參見 Tabeta et al.,101 Proc. Natl. Acad. Sci. USA 3516(2004) (Tabeta等人,《美國國家科學(xué)院院刊》,第101卷第3516頁,2004年);還可參見Kariko etal. ,26 T. Biol. Chem. 12542 (2004) (Kariko 等人,《生物化學(xué)雜志》,第洸卷第 12542 頁, 2004年)。例如,人TLR3肽鏈在需要控制HSV-I病毒感染的中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNQ中表達(dá),該 病毒通過顱神經(jīng)從上皮擴(kuò)散至中樞神經(jīng)系統(tǒng),在TLR3缺陷患者中引起單純皰疹性腦炎。參 見(例如)Zhang et al.,317 Science 1522(2007) (Zhang 等人,《科學(xué)》,第 317 卷第 1522 頁,2007年)。此外,人TLR3肽鏈活化可導(dǎo)致與諸如肝臟組織的原發(fā)性膽汁性肝硬化的病 理狀況相關(guān)的炎癥反應(yīng)。參見(例如)Takii et al. ,85 Lab. Invest. 836(2005) (Takii等 人,《實(shí)驗(yàn)室研究》,第85卷第836頁,2005年)??偟膩碚f,這些資料證明TLR3的活化可引發(fā)磷酸化和轉(zhuǎn)錄活化事件的級聯(lián),進(jìn) 而導(dǎo)致有助于先天免疫的多種炎性細(xì)胞因子的生成(參見Takeda and Akira, J. Derm. Sci. 34 :73-82(2004) (Takeda 和 Akira,《皮膚病學(xué)》,第 34 卷第 73-82 頁,2004 年)的綜 述)。另外,這些資料表明持續(xù)的TLR3活化是感染相關(guān)炎癥疾病的調(diào)控中的關(guān)鍵部分。 公布的資料為這個(gè)假說提供了進(jìn)一步支持,研究結(jié)果顯示,促炎細(xì)胞因子的過量生產(chǎn)與全 身炎癥反應(yīng)綜合征、感染相關(guān)急性細(xì)胞因子風(fēng)暴(參見Van Amersfoort et al. , Clin. Microbiol. Rev. 16 :379-414(2003) (Van Amersfoort 等人,《臨床微生物學(xué)評論》,第 16 卷 第379-414頁,2003年)的綜述)和免疫介導(dǎo)的慢性病(如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎)(參見Miossec et al.,Curr. Opin. Rheumatol. 16 :218-222(2004) (Miossec 等人,《風(fēng)濕病學(xué)近期評述》, 第16卷第218-222頁,2004年)的綜述)以及炎性腸疾病(參見Ogata and Hibi,Curr. Pharm. Des. 9 1107-1113 (2003) (Ogata 和 Hibi,《當(dāng)今制藥》,第 9 卷第 1107-1113 頁,2003 年)的綜述)有關(guān)。
目前,已采取以TLR3活化為目標(biāo)的多種不同治療方法來治療不同的適應(yīng)癥。這些 TLR3治療劑包括基于人肽鏈的TLR3治療劑、TLR3的單克隆抗體拮抗劑和TLR3配體激動(dòng)劑 (如dsRNA、聚(I:C))以及以TLR3活性為目標(biāo)的這些治療劑的功能類似物?;趩慰寺】?體拮抗劑的TLR3治療劑的可能適應(yīng)癥包括炎性病癥、敗血病、炎性腸疾病、炎性肺部疾病 以及自身免疫疾病。作為激動(dòng)劑的TLR3治療劑的可能適應(yīng)癥和用途包括病毒感染后疲勞 綜合征、神經(jīng)膠質(zhì)瘤、前列腺癌、抗病毒疫苗、膀胱癌、宮頸不典型增生、人乳頭狀瘤病毒感 染、乳腺癌、病毒感染預(yù)防、組織再生以及禽流感疫苗。任何供人類使用的TLR3治療劑在投入市場之前都需要進(jìn)行大量的安全性測試。 此類安全性測試將涉及TLR3治療劑的動(dòng)物模型體內(nèi)安全性測試以及體外測試。例如,基于 抗體的TLR3治療劑可能需要生成由特定模型動(dòng)物表達(dá)的抗TLR3肽的替代抗體,以及對這 種替代抗體進(jìn)行有效的體外表征。這種替代品生成和體外表征將需要使用來自合適的模型 動(dòng)物的TLR3多核苷酸和肽鏈。重要的是,鑒定用于這種安全性測試的合適動(dòng)物模型需要鑒 定能夠表達(dá)與人TLR3 (序列標(biāo)識(shí)號1 有高度同一性和同源性的TLR3的動(dòng)物種類。因此,需要鑒定編碼能夠在適于進(jìn)行TLR3治療劑安全性測試的動(dòng)物模型中表達(dá) TLR3s和TLR3肽鏈的多核苷酸。還需要相關(guān)的方法,例如表達(dá)肽鏈的方法以及在被確定為 適合進(jìn)行TLR3治療劑安全性評估的動(dòng)物模型中測試TLR3治療劑的安全性的方法。
圖1示出了編碼全長cyn0TLR3肽鏈的多核苷酸(序列標(biāo)識(shí)號21)編碼序列的特 征圖。圖2示出了全長cyn0TLR3肽鏈(序列標(biāo)識(shí)號2)的特征圖。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的一個(gè)方面是包含具有序列標(biāo)識(shí)號1中所示序列或其互補(bǔ)序列的多核苷 酸的分離多核苷酸。本發(fā)明的另一個(gè)方面是包含具有序列標(biāo)識(shí)號2中所示序列或其互補(bǔ)序列的多核 苷酸的分離多核苷酸。本發(fā)明的另一個(gè)方面是包含具有序列標(biāo)識(shí)號3中所示序列或其互補(bǔ)序列的多核 苷酸的分離多核苷酸。本發(fā)明的另一個(gè)方面是包含具有序列標(biāo)識(shí)號4中所示序列或其互補(bǔ)序列的多核 苷酸的分離多核苷酸。本發(fā)明的另一個(gè)方面是包含具有序列標(biāo)識(shí)號5中所示序列或其互補(bǔ)序列的多核 苷酸的分離多核苷酸。本發(fā)明的另一個(gè)方面是包含分離多核苷酸的載體,其中分離多核苷酸具有選自序 列標(biāo)識(shí)號1、2、3、4、5、6和7中所示的序列的序列。本發(fā)明的另一個(gè)方面是包含具有序列標(biāo)識(shí)號8中所示序列的肽鏈的分離肽鏈。本發(fā)明的另一個(gè)方面是包含具有序列標(biāo)識(shí)號9中所示序列的肽鏈的分離肽鏈。本發(fā)明的另一個(gè)方面是包含具有序列標(biāo)識(shí)號10中所示序列的肽鏈的分離肽鏈。本發(fā)明的另一個(gè)方面是包含具有序列標(biāo)識(shí)號11中所示序列的肽鏈的分離肽鏈。
本發(fā)明的另一個(gè)方面是表達(dá)肽鏈的方法,所述方法包括以下步驟提供編碼包含 序列標(biāo)識(shí)號8、序列標(biāo)識(shí)號9、序列標(biāo)識(shí)號10或序列標(biāo)識(shí)號11中所示序列的至少一條多肽 的RNA ;提供無細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)的組分;由提供的RNA啟動(dòng)無細(xì)胞表達(dá);以及確認(rèn)包含序列標(biāo) 識(shí)號8、序列標(biāo)識(shí)號9、序列標(biāo)識(shí)號10或序列標(biāo)識(shí)號11中所示序列的至少一條肽鏈的表達(dá)。本發(fā)明的另一個(gè)方面是確定TLR3治療劑是否會(huì)引起不良事件的方法,所述方法 包括提供TLR3治療劑、第一食蟹猴和第二食蟹猴;給第一食蟹猴施用TLR3治療劑;以及對 比第二食蟹猴確定第一食蟹猴是否呈現(xiàn)有害癥狀,如果第一食蟹猴呈現(xiàn)有害癥狀,則表明 TLR3治療劑是不安全的,如果第一食蟹猴沒有呈現(xiàn)有害癥狀,則表明TLR3治療劑是安全 的。
具體實(shí)施例方式本說明書中所引用的所有出版物(包括但不限于專利和專利申請)均以引用方式 并入本文,如同在本文中完整呈現(xiàn)。說明書和權(quán)利要求書中所用的“一”、“該”和“所述”等單數(shù)形式包括復(fù)數(shù)指代,除 非上下文清楚表明并非如此。因此,例如提及“一條肽鏈”是指一條或多條肽鏈并包括本領(lǐng) 域技術(shù)人員已知的其等同物。除非另有定義,否則本文使用的所有技術(shù)和科學(xué)術(shù)語的含義與本發(fā)明所屬領(lǐng)域的 普通技術(shù)人員通常所理解的含義相同。本文描述了示例性的組合物和方法,不過類似或等 同于本文所述的組合物和方法的任何組合物和方法都可用于本發(fā)明實(shí)踐或測試。本發(fā)明提供了分離的食蟹猴(Macacafascicularis)iToll 樣受體 3 (cynoTLR3) 多核苷酸、包含這些多核苷酸的載體、離體的宿主細(xì)胞、可由這些多核苷酸的表達(dá)獲得的肽 鏈、表達(dá)本發(fā)明肽鏈的方法,并公開了它們的用途。TLR3是病原體相關(guān)分子模式(PAMP)識(shí)別受體的Toll樣受體家族的成員。 TLR3通過雙鏈RNA的結(jié)合而被活化。雙鏈RNA(dsRNA)在病毒感染、由其他生物體引起 和由細(xì)胞損傷或壞死引起的感染期間產(chǎn)生。參見(例如)Kariko et al. ,279 J. Biol. Chem. 12542 (2004) (Kariko等人,《生物化學(xué)雜志》,第279卷第12542頁,2004年);還可參 見 Alexopoulou et al. ,413 Nature 732 Q001) (Alexopoulou 等人,《自然》,第 413 卷第 732頁,2001年)。TLR3響應(yīng)病毒感染相關(guān)的dsRNA或其他來源產(chǎn)生的dsRNAs的探測而被 活化,會(huì)引起NF-kB的活化,從而提高具有抗病毒和免疫系統(tǒng)刺激功能的I型干擾素的生 產(chǎn)。參見(例如)Takeda and Akira,5 Cell. Micro. 143,144(2003) (Takeda 和 Akira,《細(xì) 胞微生物學(xué)》,第5卷第143-144頁,2003年)。在病毒感染情況下TLR3活化的結(jié)果是刺激 先天和體液免疫系統(tǒng)的抗病毒防御。例如,人TLR3肽鏈在需要控制HSV-I病毒感染的中樞 神經(jīng)系統(tǒng)(CNQ中表達(dá),該病毒通過顱神經(jīng)從上皮擴(kuò)散至中樞神經(jīng)系統(tǒng),在TLR3缺陷患者 中引起單純皰疹性腦炎。參見(例如)Zhang et al. ,317 Science 1522 (2007) (Zhang等 人,《科學(xué)》,第317卷第1522頁,2007年)。然而,在其他情況下,人TLR3肽鏈活化可導(dǎo)致 與諸如肝臟組織的原發(fā)性膽汁性肝硬化的病理狀況相關(guān)的炎癥反應(yīng)。參見(例如)Takii et al.,85Lab. Invest. 836(2005) (Takii 等人,《實(shí)驗(yàn)室研究》,第 85 卷第 836 頁,2005 年)。 重要的是,全長cynoTLR3肽鏈序列(序列標(biāo)識(shí)號10)與得到很好表征的人TLR3肽鏈(序 列標(biāo)識(shí)號13)有95. 7%同一性和96. 8%相似性。
本發(fā)明的組合物和方法可用于多種具體應(yīng)用。本發(fā)明的多核苷酸和載體是可用 的,因?yàn)樗鼈兙幋a食蟹猴(Macaca fascicularis) TLR3 (cynoTLR3)肽鏈,可以用來表達(dá)這些 肽鏈。繼而這些CynoTLR3肽鏈也是可用的,因?yàn)楫?dāng)它們經(jīng)重組法過量表達(dá)時(shí)或由其他方法 導(dǎo)入宿主動(dòng)物或組織中時(shí),它們可用于在暴露于dsRNA或其他TLR3配體后提高或控制抗病
毒反應(yīng)。包含cyn0TLR3胞外域的肽鏈也可以用作配體接收型拮抗劑(ligandsink type antagonist),其可以結(jié)合TLR3活化所需的可得到的TLR3配體或TLR3相關(guān)蛋白質(zhì),從而 控制TLR3活性。還可以用cyn0TLR3肽鏈產(chǎn)生治療性抗體,以用于對CynoTLR3或來自其 他來源的TLR3的活性進(jìn)行正調(diào)控或負(fù)調(diào)控。這是所期望的,因?yàn)榧?dòng)型治療性抗體可用 于提高cyn0TLR3或其他TLR3的活化,以幫助控制感染,而拮抗型治療性抗體可用于降低 cynoTLR3或其他TLR3的活化,以幫助控制與TLR3受體活化所介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)相關(guān)的病理 狀況。cyn0TLR3肽鏈還可以用于體外或體內(nèi)測定,以鑒定能夠調(diào)控CyntoTLR3或其他TLR3 的活性的其他治療劑(如小分子)。本發(fā)明所公開的表達(dá)方法是可用的,因?yàn)檫@些方法使得 可以表達(dá)cyn0TLR3肽。本發(fā)明所公開的其他方法也是可用的,因?yàn)樗鼈兪沟每梢詫LR3 治療劑進(jìn)行安全性評估。術(shù)語“多核苷酸”是指包含由糖-磷酸主鏈或其他等同的共價(jià)化學(xué)方式所共價(jià)連 接的核堿基鏈的分子。雙鏈DNA和單鏈DNA以及雙鏈RNA和單鏈RNA是多核苷酸的典型例子。術(shù)語“互補(bǔ)序列”是指反向平行于第一分離多核苷酸序列并包含與第一多核苷酸 序列中的核堿基互補(bǔ)的核堿基的第二分離多核苷酸序列。通常,當(dāng)這種“互補(bǔ)序列”在適當(dāng) 的條件下與第一分離多核苷酸序列結(jié)合時(shí),能夠形成雙鏈多核苷酸分子,例如雙鏈DNA或 雙鏈RNA。術(shù)語“載體”是指能夠在生物系統(tǒng)內(nèi)復(fù)制或可以在此類系統(tǒng)間移動(dòng)的多核苷酸。載 體多核苷酸通常含有諸如復(fù)制起點(diǎn)或選擇標(biāo)記之類的元件,其功能是促進(jìn)這些多核苷酸在 生物系統(tǒng)中的復(fù)制或保持。此類生物系統(tǒng)的例子可包括細(xì)胞、病毒、動(dòng)物、植物和用能夠復(fù) 制載體的生物組分再造的生物系統(tǒng)。包含載體的多核苷酸可以是DNA或RNA分子或這些分 子的雜合體。術(shù)語“表達(dá)載體”是指可用于在生物系統(tǒng)或再造生物系統(tǒng)中指導(dǎo)由存在于表達(dá)載 體中的多核苷酸序列所編碼的肽鏈的翻譯的載體。術(shù)語“肽鏈”是指包含至少兩個(gè)由肽鍵連接形成鏈的氨基酸殘基的分子。超過50 個(gè)氨基酸的大肽鏈可以稱為“多肽”或“蛋白質(zhì)”。不到50個(gè)氨基酸的小肽鏈可以稱為“肽”。術(shù)語“抗體”是指包含多克隆抗體、單克隆抗體的免疫球蛋白或抗體分子,包括鼠、 人、人源化和嵌合單克隆抗體以及抗體片段、部分或變體。抗體是由血漿細(xì)胞組成性表達(dá)和 分泌的分泌蛋白質(zhì)。抗體可以為任何同種型,例如IgG、IgA或IgM,并可以包含抗體片段, 例如Fab片段??贵w也可以是特異性結(jié)合兩個(gè)不同的肽鏈表位的雙特異性抗體??梢杂糜郎难獫{細(xì)胞產(chǎn)生抗體,血漿細(xì)胞的永生化可通過標(biāo)準(zhǔn)方法(例如雜 交瘤生成)或通過將抗體重鏈和/或輕鏈基因轉(zhuǎn)染到永生化B細(xì)胞(例如骨髓瘤細(xì)胞)或 其他細(xì)胞類型(例如中國倉鼠卵巢(CHO)細(xì)胞、植物細(xì)胞和昆蟲細(xì)胞)中來進(jìn)行。本文所用的術(shù)語“單克隆抗體”(mAb)是指從基本上同種的抗體的群體所獲得的抗體(或抗體片段)。單克隆抗體具有高度特異性,其通常針對單一抗原決定簇。修飾語 “單克隆”表示抗體的基本上同種的性質(zhì),并不要求用任何特定方法產(chǎn)生抗體。例如,鼠單 克隆抗體可以用Kohler的雜交瘤方法制備,參見Kohler et al. ,256 Nature 495(1975) (Kohler等人,《自然》,第256卷第495頁,1975年)。可以用美國專利No. 4,816,567中所 公開的方法制備這樣的嵌合單克隆抗體,其包含衍生自供體抗體(通常為鼠科動(dòng)物)的輕 鏈和重鏈可變區(qū)和與之相結(jié)合的衍生自受體抗體(通常為另一種哺乳類物種,如人類)的 輕鏈和重鏈恒定區(qū)。可通過Queen等人所公開的技術(shù)獲得這樣的人源化單克隆抗體,其具 有衍生自非人類供體免疫球蛋白(通常為鼠科動(dòng)物)的CDR,且其分子的剩余免疫球蛋白衍 生部分衍生自一種或多種人免疫球蛋白,并任選地具有經(jīng)改變的骨架支撐殘基以保持結(jié)合 親和力,參見 Queen et al. ,86 Proc. Natl. Acad. Sci. (USA) 10029 (1989) (Queen 等人,《美 國國家科學(xué)院院刊》,第86卷第100 頁,1989年)和Hodgson et al. ,9Bio/Technology 421 (1991) (Hodgson等人,《生物技術(shù)》,第9卷第421頁,1991年)中所公開的技術(shù)獲得??捎糜谌嗽椿氖纠匀丝贵w骨架序列在(例如)以下網(wǎng)址和文獻(xiàn)中公開書 ncbi. nlm. nih. gov/ent rez/query, fcgi ;www. ncbi. nih. gov/igblast ;www. atcc. org/ phage/hdb. html ;www. mrc-cpe. cam. ac. uk/ALIGNMENTS. php ;www.kabatdatabase. com/ top.html ;ftp.ncbi.nih. gov/repository/kabat ;www.sciquest. com ;www.abeam, com ; www.antibodyresource, com/onlinecomp. html ;www. public, iastate. edu/ pedro/ research_tools. html ;www. whfreeman. com/immunology/CH05/kuby05. htm ;www. hhmi. org/grants/lectures/1996/vlab ;www. path. cam. ac. uk/ mrc7/mikeimages. html ; mcb.harvard.edu/BioLinks/Immunology, html ;www. immunologylink. com ;pathbox. wustl. edu/ hcenter/index, html ;www. appliedbiosystems, com ;www. nal. usda. gov/ awic/pubs/antibody ;www.m. ehime-u. ac. jp/ yasuhito/Elisa. html ;www. biodesign. com ;www. cancerresearchuk. org ;www. biotech. uf 1. edu ;www. isac-net. org ;baserv. uci. kun. nl/ jraats/linksl. html ;www. recab. uni-hd. de/immuno. bme. nwu. edu ;www. mrc-cpe. cam. ac. uk ; www. ibt. unam. mx/vir/V—mice, html ;http: //www. bio inf. org. uk/ abs ;antibody, bath. ac. uk ;www. unizh. ch ;www. cryst. bbk. ac. uk/ ubcg07s ;www. nimr. mrc. ac. uk/CC/ccaewg/ccaewg. html ;www. path. cam. ac. uk/ mrc7/humanisation/ TAHHP. html ;www. ibt. unam. mx/vir/structure/stat_aim. html ;www. biosci. missouri. edu/smithgp/index, html ;www. jerini. de ;以及 Kabat et al Sequences of Proteins of Immunological Interest^. S. Dept. Health (1987) (Kabat 等人,《免疫學(xué)相關(guān)蛋白質(zhì)序 列》,美國衛(wèi)生部,1987年),以上網(wǎng)址公幵內(nèi)容和文獻(xiàn)全文均以引用方式并入本文中。缺乏任何非人序列的完全人單克隆抗體可以通過(例如)以下文獻(xiàn)中提及的技術(shù) 從人免疫球蛋白轉(zhuǎn)基因小鼠制備Lonberg et al.,368Nature 856 (1994) (Lonberg等人, 《自然》,第 368 卷第 856 頁,1994 年);Fishwild et al.,14 Nature Biotech. 845(1996) (Fishwild等人,《自然生物技術(shù)》,第14卷第845頁,1996年)和Mendez et al.,15 Nature Genetics 146 (1997) (Mendez等人,《自然遺傳學(xué)》,第15卷第146頁,1997年)。人單克隆抗 體也可以通過(例如)以下文獻(xiàn)中提及的技術(shù)從噬菌體展示文庫制備和優(yōu)化Knappik et al.,296 .丁. Mol. Biol. 57 (2000) (Knappik 等人,《分子生物學(xué)雜志》,第 296 卷第 57 頁,2000 年)和 Krebs et al. ,254 J. Immunol. Meth. 67 (2001) (Krebs 等人,《免疫學(xué)方法雜志》,第254卷第67頁,2001年)??贵w分子或制品當(dāng)相對于結(jié)合第二非相同抗原而言以更高的親和力和以特異性 方式而不是非特異性方式結(jié)合給定抗原時(shí),則它“特異性結(jié)合”這個(gè)給定抗原。換句話說, 抗體分子或制品的“特異性結(jié)合”可用于區(qū)分兩種不同的肽鏈?!捌巍笔蔷哂邪景l(fā)明任何肽鏈的任何氨基酸序列的一部分(而不是全部)的 氨基酸序列的肽鏈。片段可以包括(例如)具有與信號肽、胞外域、跨膜域或胞質(zhì)域?qū)?yīng) 的一部分氨基酸序列的截短肽鏈,或它們的變體,例如包括異源氨基和/或羧基末端氨基 酸序列的連續(xù)一系列殘基。還包括由宿主細(xì)胞產(chǎn)生或在宿主細(xì)胞中產(chǎn)生的本發(fā)明肽鏈的降 解形式。其他示例性片段可通過結(jié)構(gòu)或功能特性來表征,例如包含α-螺旋或α-螺旋形 成區(qū)、折疊或折疊形成區(qū)、轉(zhuǎn)角或轉(zhuǎn)角形成區(qū)、卷曲或卷曲形成區(qū)、親水區(qū)、疏水區(qū)、 α -兩親區(qū)、β -兩親區(qū)、柔性區(qū)、表面形成區(qū)、底物結(jié)合區(qū)、胞外區(qū)和高抗原指數(shù)區(qū)的片段。 重要的是,本發(fā)明的肽鏈可以以片斷的形式使用或提供?!白凅w肽鏈”是其中已經(jīng)相對于第一肽鏈作出了氨基酸置換、插入、缺失或其組合 的第二肽鏈。天然存在的、修飾的或非典型的氨基酸可用于置換和插入。相對于具有序列 標(biāo)識(shí)號11中所示氨基酸序列的肽鏈,序列標(biāo)識(shí)號8和序列標(biāo)識(shí)號9所描述的肽鏈?zhǔn)鞘纠?變體肽鏈?!白凅w多核苷酸”是其中已相對于第一多核苷酸序列作出了核酸殘基置換、插入、 缺失或其組合的第二多核苷酸。天然存在的或修飾的核堿基可用于置換和缺失。相對于具 有序列標(biāo)識(shí)號4中所示氨基酸序列的多核苷酸,序列標(biāo)識(shí)號1、序列標(biāo)識(shí)號2、序列標(biāo)識(shí)號3 和序列標(biāo)識(shí)號5所描述的多核苷酸是示例性變體多核苷酸。術(shù)語“TLR3治療劑”是指據(jù)信可提供治療效果和據(jù)信部分地通過TLR3的活性提供 該治療效果的分子或制品。此類TLR3可以包含本發(fā)明的肽鏈。TLR3治療劑的例子包括已 知的TLR3配體(例如dsRNA或聚(I C)),其可結(jié)合并活化TLR3,以產(chǎn)生提高的抗病毒活性 和免疫系統(tǒng)刺激的治療效果。術(shù)語“有害癥狀”是指動(dòng)物所呈現(xiàn)的任何表明發(fā)生了對該動(dòng)物的傷害的癥狀。本發(fā)明的一個(gè)方面是包含具有序列標(biāo)識(shí)號1中所示序列或其互補(bǔ)序列的多核苷 酸的分離多核苷酸。序列標(biāo)識(shí)號1中所示的多核苷酸序列編碼包含cynoTLR3胞外域預(yù)測 成熟形式的肽鏈。本發(fā)明的多核苷酸可以通過化學(xué)合成產(chǎn)生,例如在自動(dòng)化多核苷酸合成儀上進(jìn)行 的固相多核苷酸合成。作為另外一種選擇,本發(fā)明的多核苷酸可以通過其他技術(shù)產(chǎn)生,如基 于PCR的復(fù)制、基于載體的復(fù)制或基于限制性內(nèi)切酶的DNA操作技術(shù)。產(chǎn)生或獲得具有給 定的已知序列的多核苷酸的技術(shù)是本領(lǐng)域熟知的。本發(fā)明的多核苷酸還可以包含至少一個(gè)非編碼序列,例如轉(zhuǎn)錄但不翻譯的序列、 終止信號、核糖體結(jié)合位點(diǎn)、mRNA穩(wěn)定序列、內(nèi)含子和聚腺苷酸化信號。多核苷酸序列還可 以包含編碼另外氨基酸的另外序列。這些另外的多核苷酸序列可以(例如)編碼標(biāo)記或 標(biāo)簽序列(例如六組氨酸肽),如 Gentz et al. ,86 Proc. Natl. Acad. Sci. (USA) 821 (1989) (Gentz等人,《美國國家科學(xué)院院刊》,第86卷第821頁,1989年)中所述,或編碼HA肽標(biāo) 簽,如 Wilson et al. ,37 Cell 767 (1984) (Wilson 等人,《細(xì)胞》,第 37 卷第 767 頁,1984 年)中所述,這些標(biāo)簽有利于融合多肽的純化。
本發(fā)明的另一個(gè)方面是包含具有序列標(biāo)識(shí)號2中所示序列或其互補(bǔ)序列的多核 苷酸的分離多核苷酸。序列標(biāo)識(shí)號2中所示的多核苷酸序列編碼包含不帶氨基末端甲硫氨 酸殘基的預(yù)測CynoTLR3信號肽以及胞外域的肽鏈。本發(fā)明的另一個(gè)方面是包含具有序列標(biāo)識(shí)號3中所示序列或其互補(bǔ)序列的多核 苷酸的分離多核苷酸。序列標(biāo)識(shí)號3中所示的多核苷酸序列編碼包含cyn0TLR3胞外域預(yù) 測成熟形式、跨膜域和胞質(zhì)域的肽鏈。本發(fā)明的另一個(gè)方面是包含具有序列標(biāo)識(shí)號4中所示序列或其互補(bǔ)序列的多核 苷酸的分離多核苷酸。序列標(biāo)識(shí)號4中所示的多核苷酸序列編碼包含不帶氨基末端甲硫氨 酸殘基的預(yù)測CynoTLR3信號肽、胞外域、跨膜域和胞質(zhì)域的肽鏈。本發(fā)明的另一個(gè)方面是包含具有序列標(biāo)識(shí)號5中所示序列或其互補(bǔ)序列的多核 苷酸的分離多核苷酸。序列標(biāo)識(shí)號5中所示的多核苷酸序列是在開放讀框兩側(cè)具有5’和 3’序列的核酸,其編碼包含全長CynoTLR3的肽鏈。本發(fā)明的另一個(gè)方面是包含分離多核苷酸的載體,其中分離多核苷酸具有選自序 列標(biāo)識(shí)號1、2、3、4、5、6和7中所示的序列的序列。序列標(biāo)識(shí)號6中所示的多核苷酸序列為 標(biāo)號為P4078的多核苷酸(DNA)表達(dá)載體,其編碼包含全長cyn0TLR3的肽鏈。序列標(biāo)識(shí)號 7中所示的多核苷酸序列為標(biāo)號為P4037的多核苷酸(DNA)表達(dá)載體,其編碼這樣的肽鏈, 該肽鏈包含帶氨基末端甲硫氨酸殘基的預(yù)測CynoTLR3信號序列以及通過柔性甘氨酸和絲 氨酸接頭與六個(gè)氨基末端組氨酸氨基酸殘基標(biāo)簽融合的胞外域。序列標(biāo)識(shí)號1、2、3、4和5 中所示的多核苷酸在上文描述了。本發(fā)明的載體可用于保持多核苷酸、復(fù)制多核苷酸或驅(qū)動(dòng)本發(fā)明載體編碼的肽鏈 在生物系統(tǒng)(包括再造生物系統(tǒng))中的表達(dá)。載體可以為染色體載體、附加型載體和病毒衍生載體,例如衍生自細(xì)菌質(zhì)粒、噬菌 體、轉(zhuǎn)座子、酵母附加體、插入元件、酵母染色體元件、桿狀病毒、乳多空病毒(例如SV40)、 牛痘病毒、腺病毒、雞痘病毒、偽狂犬病病毒、小核糖核酸病毒和逆轉(zhuǎn)錄酶病毒的載體,以及 衍生自它們的組合的載體,例如粘粒和噬菌粒??梢杂米魟?、脂質(zhì)、緩沖劑或其他適用于具體應(yīng)用的賦形劑將本發(fā)明的載體配制 在微粒中。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例中,載體是表達(dá)載體。表達(dá)載體通常包含可控制、調(diào)節(jié)、引起或允許由這種載體編碼的肽鏈的表達(dá)的核 酸序列元件。此類元件可包含轉(zhuǎn)錄增強(qiáng)子結(jié)合位點(diǎn)、RNA聚合酶起始位點(diǎn)、核糖體結(jié)合位點(diǎn) 以及有利于被編碼肽鏈在給定表達(dá)系統(tǒng)中的表達(dá)的其他位點(diǎn)。此類表達(dá)系統(tǒng)可以是本領(lǐng)域 熟知的基于細(xì)胞的系統(tǒng)或無細(xì)胞系統(tǒng)。適用于被編碼肽鏈的表達(dá)的核酸序列元件和親本載 體序列也是本領(lǐng)域熟知的。本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施例是包含本發(fā)明載體的分離宿主細(xì)胞??捎糜诒景l(fā)明多肽的表達(dá)的示例性質(zhì)粒衍生表達(dá)載體包含大腸桿菌(E. coli)復(fù) 制起點(diǎn)、aph(3’)-la卡那霉素抗性基因、帶內(nèi)含子A的HCMV立即早期啟動(dòng)子、合成的polyA 序列和牛生長激素終止子。另一種示例性質(zhì)粒衍生表達(dá)載體包含大腸桿菌(E.coli)復(fù)制 起點(diǎn)、ant(4’)-Ia卡那霉素抗性基因、Rous肉瘤病毒長末端重復(fù)序列、HCMV立即早期啟動(dòng) 子和SV40晚期polyA序列。
代表性的宿主細(xì)胞例子包括古細(xì)菌細(xì)胞;細(xì)菌細(xì)胞,例如鏈球菌(Streptococci)、 葡萄球菌(Staphylococci)、腸球菌(Enterococci)、大腸桿菌(E. coli)、鏈霉菌
印tomyces)、藍(lán)細(xì)菌(cyancAacteria)、枯草芽孢桿菌(B. subtilis)和金黃色葡萄球 菌(S. aureus);真菌細(xì)胞,例如克魯弗氏酵母(Kluveromyces)、酵母菌(Saccharomyces)、 擔(dān)子菌(Basidomycete)、白色念珠菌(Candida albicans)或曲霉菌(Aspergillus);昆蟲 細(xì)胞,例如果蠅(Drosophila) S2和草地貪夜蛾(Spodoptera) Sf9 ;動(dòng)物細(xì)胞,例如CH0、C0S、 HeLa、C127、3T3、BHK、293、CV-l、BOWes黑素瘤和骨髓瘤;以及植物細(xì)胞,例如裸子植物或被 子植物細(xì)胞。本發(fā)明方法中的宿主細(xì)胞可以單個(gè)細(xì)胞或細(xì)胞群體的形式提供。細(xì)胞群體可 以包括分離的或培養(yǎng)的細(xì)胞群體或存在于基質(zhì)(例如組織)中的細(xì)胞群體。多核苷酸(例如載體)向宿主細(xì)胞中的導(dǎo)入可以通過本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的方 法來實(shí)現(xiàn),這些方法可從以下實(shí)驗(yàn)室手冊中找到,例如Davis et al. , Basic Methods in Molecular Biology, 2- ed. , Appleton &Lange, Norwalk, CT (1994) (Davis 等人,《分子生 物學(xué)基本方法(第二版)》,Appleton & Lange (Norwalk,CT),1994 年)和 Sambrook et al. ,Molecular CloninR :A Laboratory Manual,3rd ed. ,Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY(2001) (Sambrook等人,《分子克隆實(shí)驗(yàn)指南(第三版),Cold Spring HarborLaboratory 出版社(Cold Spring Harbor, NY),2001 年》)。這些方法包括 磷酸鈣轉(zhuǎn)染、DEAE葡聚糖介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染、顯微注射、陽離子脂質(zhì)介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染、電穿孔、轉(zhuǎn)導(dǎo)、刮 擦荷載(scrape loading)、基因槍法導(dǎo)入(ballistic introduction)和感染。本發(fā)明的另一個(gè)方面是包含具有序列標(biāo)識(shí)號8中所示序列的肽鏈的分離肽鏈。序 列標(biāo)識(shí)號8為包含cyn0TLR3胞外域預(yù)測成熟形式的肽鏈。本發(fā)明的肽鏈可以通過化學(xué)合成法產(chǎn)生,例如在自動(dòng)肽合成儀上進(jìn)行的固相肽合 成。作為另外一種選擇,本發(fā)明的肽鏈可以通過使用無細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)從編碼這些肽鏈的多 核苷酸獲得,無細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)的例子有基于網(wǎng)織紅細(xì)胞裂解物的表達(dá)系統(tǒng)、基于麥胚提取 物的表達(dá)系統(tǒng)以及基于大腸桿菌(Escherichia coli)提取物的表達(dá)系統(tǒng)。本發(fā)明的肽鏈 還可以用本領(lǐng)域熟知的技術(shù)通過從含有本發(fā)明核酸序列的細(xì)胞的表達(dá)和分離來獲得,所述 技術(shù)例如易分離的親和標(biāo)記肽鏈的重組表達(dá)。本領(lǐng)域的技術(shù)人員會(huì)認(rèn)識(shí)到其他用于獲得本 發(fā)明肽鏈的技術(shù)。本發(fā)明的肽鏈可以包括包含與第二肽鏈融合的本發(fā)明肽鏈的融合肽鏈。此類第二 肽鏈可以是前導(dǎo)序列或分泌信號序列、前體蛋白序列或蛋白原序列或前蛋白原序列、以及 天然存在的序列、或部分衍生自天然存在的序列的部分合成序列、或全合成序列??蛇x擇分 泌信號或前導(dǎo)肽鏈序列來引導(dǎo)本發(fā)明肽鏈分泌到內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的內(nèi)腔中或細(xì)胞外環(huán)境中;此類肽 鏈序列可以是任何來自食蟹猴的肽鏈的異源序列或內(nèi)源序列,或包含這些序列的雜合體。本發(fā)明的肽鏈還可配制在可藥用載體或稀釋劑中??梢允褂枚喾N含水載體,如 0.4%鹽水、0.3%甘氨酸等。這些溶液是無菌的,通常不含顆粒物質(zhì)。這些溶液可通過常規(guī) 的、熟知的除菌技術(shù)(如過濾)進(jìn)行除菌。組合物可以包含模擬生理?xiàng)l件所需的可藥用輔 助物質(zhì),例如PH調(diào)節(jié)劑和緩沖劑。本發(fā)明的肽鏈在這種藥物制劑中的濃度可以差別很大, 即從小于約0. 5重量% (通常為或至少約1重量% )至高達(dá)15或20重量%,要根據(jù)所選 的具體給藥方式主要依據(jù)流體體積、粘度和其他因素進(jìn)行選擇。本發(fā)明的肽鏈和核酸還可以以能以單位劑型提供的藥物制劑的形式提供,例如用于引發(fā)免疫反應(yīng)的疫苗。本領(lǐng)域的技術(shù)人員可以很容易地確定適當(dāng)?shù)闹委熡行┝俊H绻?必要,可將確定的劑量在治療期間以適當(dāng)?shù)臅r(shí)間間隔加以重復(fù),所述時(shí)間間隔是由醫(yī)生或 相關(guān)領(lǐng)域的其他技術(shù)人員(如護(hù)士、獸醫(yī)或獸醫(yī)技師)適當(dāng)選擇的。本發(fā)明的肽鏈可以凍干以便于儲(chǔ)存,使用之前可以在合適的載體中復(fù)原。該技術(shù) 已證實(shí)對常規(guī)的蛋白質(zhì)制品是有效的。凍干和復(fù)原技術(shù)是本領(lǐng)域所熟知的。本發(fā)明的另一個(gè)方面是包含具有序列標(biāo)識(shí)號9中所示序列的肽鏈的分離肽鏈。序 列標(biāo)識(shí)號9是包含不帶氨基末端甲硫氨酸殘基的預(yù)測cyn0TLR3信號肽以及胞外域的肽鏈。本發(fā)明的另一個(gè)方面是包含具有序列標(biāo)識(shí)號10中所示序列的肽鏈的分離肽鏈。 序列標(biāo)識(shí)號10是包含CynoTLR3胞外域預(yù)測成熟形式、跨膜域和胞質(zhì)域的肽鏈。本發(fā)明的另一個(gè)方面是包含具有序列標(biāo)識(shí)號11中所示序列的肽鏈的分離肽鏈。 序列標(biāo)識(shí)號11是包含不帶氨基末端甲硫氨酸殘基的預(yù)測cynoTLR3信號肽、胞外域、跨膜域 和胞質(zhì)域的肽鏈。本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施例是表達(dá)肽鏈的方法,所述方法包括以下步驟提供本發(fā)明 的宿主細(xì)胞;在足以表達(dá)包含序列標(biāo)識(shí)號8、序列標(biāo)識(shí)號9、序列標(biāo)識(shí)號10或序列標(biāo)識(shí)號11 中所示序列的至少一條肽鏈的條件下培養(yǎng)宿主細(xì)胞;以及確認(rèn)包含序列標(biāo)識(shí)號8、序列標(biāo) 識(shí)號9、序列標(biāo)識(shí)號10或序列標(biāo)識(shí)號11中所示序列的至少一條肽鏈的表達(dá)。宿主細(xì)胞可以在任何適合保持或增殖給定類型的宿主細(xì)胞并足以表達(dá)肽鏈的條 件下培養(yǎng)。足以表達(dá)肽鏈的培養(yǎng)條件、培養(yǎng)基和相關(guān)方法是本領(lǐng)域熟知的。例如,許多哺乳 類細(xì)胞類型可以在37°C下用適當(dāng)緩沖的DMEM培養(yǎng)基進(jìn)行有氧培養(yǎng),而細(xì)菌、酵母和其他細(xì) 胞類型可以在37°C和適當(dāng)?shù)拇髿鈼l件下在LB培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)。在本發(fā)明的方法中,可以用本領(lǐng)域熟知的多種不同技術(shù)確認(rèn)肽鏈的表達(dá)。例如,可 以用對所表達(dá)的肽鏈有特異性的檢測試劑(例如抗體或受體配體)確認(rèn)肽鏈的表達(dá)。特 異性結(jié)合本發(fā)明cynoTLR3肽鏈的抗體是此類試劑的一個(gè)例子。此類試劑的另一個(gè)例子是 TLR3受體配體,例如結(jié)合TLR3的dsRNA或聚(I:C)??梢酝ㄟ^將放射標(biāo)記物、熒光團(tuán)、發(fā)色 團(tuán)或其他可檢測分子結(jié)合到檢測試劑或摻入到檢測試劑中來對檢測試劑進(jìn)行標(biāo)記以便可 檢測。作為另外一種選擇,可以通過分析與TLR3活化有關(guān)的生物活性(例如NF-kB的活 化或I型干擾素產(chǎn)量增加)來確認(rèn)本發(fā)明cyn0TLR3肽鏈的表達(dá)。此類分析還可以使用可 響應(yīng)TLR3活化的報(bào)告基因構(gòu)建物。還可以通過在肽鏈制品中鑒定具有本發(fā)明肽鏈的物理特性的肽鏈來確認(rèn)肽鏈表 達(dá)。例如,采用諸如蛋白質(zhì)分子量或等電點(diǎn)等標(biāo)準(zhǔn)的SDS-PAGE技術(shù)和其他熟知的蛋白質(zhì)表 征技術(shù)可以用于確認(rèn)本發(fā)明肽鏈的表達(dá)。也可以使用蛋白質(zhì)純化技術(shù)(例如硫酸銨或乙醇 沉淀、酸萃取、高效液相色譜、陰離子或陽離子交換色譜、磷酸纖維素色譜、疏水作用色譜、 親和色譜、羥基磷灰石色譜和凝集素色譜)確認(rèn)本發(fā)明肽鏈的表達(dá)。重要的是,在本發(fā)明方法中,所表達(dá)的肽鏈不需要分離。因此,可確認(rèn)肽鏈的表達(dá) 已在(例如)細(xì)胞上或細(xì)胞中或肽鏈混合物中發(fā)生。適當(dāng)時(shí),也可以使用基于流式細(xì)胞術(shù) 的技術(shù)(例如熒光激活細(xì)胞分選術(shù)(FACS))來確認(rèn)細(xì)胞的肽鏈表達(dá)。如上文所述,可以用 本領(lǐng)域已知的任何合適技術(shù)來確認(rèn)肽鏈表達(dá)。本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施例是表達(dá)肽鏈的方法,所述方法包括以下步驟提供能夠被轉(zhuǎn)錄成編碼包含序列標(biāo)識(shí)號8、序列標(biāo)識(shí)號9、序列標(biāo)識(shí)號10或序列標(biāo)識(shí)號11中所示序列 的至少一條肽鏈的RNA的本發(fā)明多核苷酸;提供無細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)的組分;從所提供的多核 苷酸啟動(dòng)無細(xì)胞表達(dá);以及確認(rèn)包含序列標(biāo)識(shí)號8、序列標(biāo)識(shí)號9、序列標(biāo)識(shí)號10或序列標(biāo) 識(shí)號11中所示序列的至少一條肽鏈的表達(dá)。將多核苷酸轉(zhuǎn)錄成RNA的技術(shù)、獲得編碼肽鏈的RNA的技術(shù)或啟動(dòng)無細(xì)胞表達(dá)的 技術(shù)是本領(lǐng)域所熟知的,完成這些步驟的試劑盒可從多個(gè)來源商購獲得。在本發(fā)明方法的另一個(gè)實(shí)施例中,無細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)選自基于網(wǎng)織紅細(xì)胞裂解物的 表達(dá)系統(tǒng)、基于麥胚提取物的表達(dá)系統(tǒng)和基于大腸桿菌提取物的表達(dá)系統(tǒng)。本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施例是表達(dá)肽鏈的方法,所述方法包括以下步驟提供編碼包 含序列標(biāo)識(shí)號8、序列標(biāo)識(shí)號9、序列標(biāo)識(shí)號10或序列標(biāo)識(shí)號11中所示序列的至少一條肽 鏈的RNA ;提供無細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)的組分;從所提供的RNA啟動(dòng)無細(xì)胞表達(dá);確認(rèn)包含序列標(biāo) 識(shí)號8、序列標(biāo)識(shí)號9、序列標(biāo)識(shí)號10或序列標(biāo)識(shí)號11中所示序列的至少一條肽鏈的表達(dá)。在本發(fā)明方法的另一個(gè)實(shí)施例中,無細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)選自基于網(wǎng)織紅細(xì)胞裂解物的 表達(dá)系統(tǒng)、基于麥胚提取物的表達(dá)系統(tǒng)和基于大腸桿菌提取物的表達(dá)系統(tǒng)。本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施例是由本發(fā)明方法產(chǎn)生的肽鏈。此類肽鏈可以包括翻譯后修 飾,例如包括糖基化或磷酸化。此類肽鏈還可以包括選擇性肽鏈形式(例如剪接變體)、截 短形式或蛋白水解修飾形式。本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施例是特異性結(jié)合本發(fā)明肽鏈的抗體??梢杂帽景l(fā)明的肽鏈產(chǎn) 生抗cyn0TLR3的多克隆或單克隆抗體。使用蛋白或核酸免疫制備鼠、嵌合、人源化和完全 人單克隆抗體的技術(shù)是常規(guī)技術(shù)并為本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知。從上文可以找到此類技術(shù)的 另外的討論和描述。本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施例是特異性結(jié)合本發(fā)明肽鏈的單克隆抗體。本發(fā)明的另一個(gè)方面是確定TLR3治療劑是否安全的方法,所述方法包括提供LR3 治療劑、第一食蟹猴和第二食蟹猴;給第一食蟹猴施用TLR3治療劑;以及對比第二食蟹猴 確定第一食蟹猴是否呈現(xiàn)有害癥狀,如果第一食蟹猴呈現(xiàn)有害癥狀,則表明TLR3治療劑是 不安全的,如果第一食蟹猴沒有呈現(xiàn)有害癥狀,則表明TLR3治療劑是安全的。在本發(fā)明方法中,所提供的第一和第二食蟹猴在有害癥狀的呈現(xiàn)方面應(yīng)是等同 的。換句話說,兩個(gè)動(dòng)物在供試時(shí)應(yīng)該都不呈現(xiàn)有害癥狀或都呈現(xiàn)相同的有害癥狀。在本發(fā)明方法中,可以通過任何合適的途徑(例如胃腸外、皮下、靜脈內(nèi)等)施用 TLR3治療劑。適用于本發(fā)明方法的TLR3治療劑的例子包括(例如)已知的TLR3配體(例 如dsRNA或聚(1:0)和肽鏈(例如包含TLR3胞外域的肽鏈)。在本發(fā)明方法中,對比第二食蟹猴確定第一食蟹猴是否呈現(xiàn)有害癥狀是很容易實(shí) 現(xiàn)的。例如,本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員(例如獸醫(yī)、獸醫(yī)助理、動(dòng)物技師或研究科學(xué)家)可以 確定動(dòng)物所呈現(xiàn)的癥狀是否為有害癥狀。有害癥狀的例子包括死亡、昏迷、癲癇、發(fā)燒、器官 衰竭、組織畸形、器官功能受損、組織功能受損、癌癥、腫瘤、潰瘍、出血、感染等。在本發(fā)明方法的一個(gè)實(shí)施例中,TLR3治療劑是抗體。本發(fā)明現(xiàn)結(jié)合以下具體的、非限制性實(shí)例進(jìn)行描述。實(shí)例1編碼全長食蟹猴Toll樣受體3(Cyn0TLR3)的多核苷酸的分離、克隆以及測序
使用TRIZOL 試劑(nvitrogen,Carload,CA)根據(jù)制造說明書從食蟹猴外周血單 核細(xì)胞(PBMC)純化 RNA。反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)是用 SUPERSCRIPT 11 REVERSE TRANSCRIPTASE 試劑 盒進(jìn)行,用oligo-dT引物起動(dòng)。用于初始PCR克隆的引物根據(jù)編碼人TLR3肽鏈的多核苷 酸的序列進(jìn)行設(shè)計(jì)。然后利用2535引物(序列標(biāo)識(shí)號14)和沈64引物(序列標(biāo)識(shí)號15) 進(jìn)行PCR以克隆編碼全長cyn0TLR3肽鏈(序列標(biāo)識(shí)號11)的多核苷酸(序列標(biāo)識(shí)號5)。 每條引物取用lOOng,cDNA模板取用lOOng,按以下條件進(jìn)行PCR -MV 30秒,60°C 1分鐘, 680C 1分鐘,循環(huán)30次,然后68°C 5分鐘,循環(huán)1次。PCR反應(yīng)產(chǎn)物在瓊脂糖凝膠上進(jìn)行分 析,顯示獲得了與PCR克隆的多核苷酸相應(yīng)的大約2700bp的多核苷酸條帶。克隆的PCR 產(chǎn)物用 QIAQUICK PCR 純化儀(Qiagen,Valencia,CA))進(jìn)行純化。將 PCR產(chǎn)物克隆到pCR4 Τ0Ρ0 ΤΑ 載體中,以獲得該大約2700bp PCR產(chǎn)物的2535引物(序列 標(biāo)識(shí)號14)和2664引物(序列標(biāo)識(shí)號15)之間的序列。該大約2700bp PCR產(chǎn)物的被2535引物(序列標(biāo)識(shí)號14)和沈64引物(序列標(biāo) 識(shí)號15)覆蓋的序列通過5’和3’ RACE (cDNA末端的快速擴(kuò)增)方法進(jìn)行克隆。這是如下 完成的首先用如上所述獲得的cynoTLR3序列設(shè)計(jì)cyn0TL3 cDNA特異性2589引物(序列 標(biāo)識(shí)號17) ,2590引物(序列標(biāo)識(shí)號18)以及沈25引物(序列標(biāo)識(shí)號19)。3’引物(定位 于起始位點(diǎn)下游約150至250bp處)是設(shè)計(jì)用來與5,GENERACER 引物形成引物對,從而用 于編碼cyn0TLR3的全長多核苷酸cDNA的5’端的擴(kuò)增、克隆和測序。5’引物(定位于終止 位點(diǎn)上游約150至250bp處)是設(shè)計(jì)用來與3,GENERACER 引物形成引物對,從而用于編 碼cyn0TLR3的全長多核苷酸cDNA的3’端的擴(kuò)增、克隆和測序。然后將從這些擴(kuò)增中獲得 的PCR產(chǎn)物克隆到pCR4 Τ0Ρ0 ΤΑ 載體中,從這些多核苷酸獲得5’非翻譯序列、氨基末端 編碼序列、羧基末端編碼序列以及3’非翻譯序列。用于獲得附加序列的引物具有序列標(biāo)識(shí) 號17、序列標(biāo)識(shí)號18和序列標(biāo)識(shí)號19中所示的序列。然后對所獲得的序列進(jìn)行多序列對 比,得到包含5’非翻譯序列、編碼全長cynoTLR肽鏈(序列標(biāo)識(shí)號20)的編碼序列以及3’ 非翻譯序列的多核苷酸(序列標(biāo)識(shí)號5)。隨后使用 Vector NTI v9. 0. 0 軟件 Qnvitrogen Corp.,Carlsbad, CA)進(jìn)行序列 分析。在全長CynoTLR3肽鏈中鑒定的結(jié)構(gòu)域由圖1和圖2中所示的克隆的多核苷酸(序 列標(biāo)識(shí)號幻編碼。氨基末端甲硫氨酸由序列標(biāo)識(shí)號21的第1-3位核苷酸殘基編碼,并對 應(yīng)于序列標(biāo)識(shí)號20的第1位氨基酸殘基。信號肽由序列標(biāo)識(shí)號21的第1-69位核苷酸殘 基編碼,并對應(yīng)于序列標(biāo)識(shí)號20的第1-23位氨基酸殘基。胞外域由序列標(biāo)識(shí)號21的第 70-2112位核苷酸殘基編碼,并對應(yīng)于序列標(biāo)識(shí)號20的第M-704位氨基酸殘基??缒び蛴?序列標(biāo)識(shí)號21的第2113-2175位核苷酸殘基編碼,并對應(yīng)于序列標(biāo)識(shí)號20的第705-725 位氨基酸殘基。胞質(zhì)域由序列標(biāo)識(shí)號21的第2176-2712位核苷酸殘基編碼,并對應(yīng)于序列 標(biāo)識(shí)號20的第7沈-904位氨基酸殘基。終止密碼子由序列標(biāo)識(shí)號21的第2713-2715位核 苷酸殘基編碼。使用Vector NTI v9. 0. 0軟件的AlignX模塊所采用的CLUSTALW算法的默認(rèn)設(shè)置 進(jìn)行多序列比對分析。發(fā)現(xiàn)編碼cynoTLR3的全長多核苷酸編碼序列(序列標(biāo)識(shí)號21的第 1-2712位核苷酸殘基)與編碼得到很好表征的全長人TLR3肽鏈的全長多核苷酸編碼序列 (序列標(biāo)識(shí)號12的第1-2715位核苷酸殘基)有96. 8%同一性。發(fā)現(xiàn)全長cyn0TLR3肽鏈 (序列標(biāo)識(shí)號20)與得到很好表征的全長人TLR3肽鏈(序列標(biāo)識(shí)號13)有95. 7%同一性。發(fā)現(xiàn)cyn0TLR3胞外域肽鏈的成熟形式(序列標(biāo)識(shí)號1)與人TLR3肽鏈的胞外域(序列標(biāo) 識(shí)號13的第M至704位氨基酸殘基)有95. 4%同一性。發(fā)現(xiàn)編碼cyn0TLR3的全長多核苷酸編碼序列(序列標(biāo)識(shí)號21的第1-2712位核苷 酸殘基)與編碼恒河猴TLR3肽鏈的全長多核苷酸編碼序列(序列標(biāo)識(shí)號22的第1-2712位 核苷酸殘基)有99. 3%同一性。發(fā)現(xiàn)全長CynoTLR3肽鏈(序列標(biāo)識(shí)號20)與恒河猴TLR3 肽鏈(序列標(biāo)識(shí)號23)有98. 5%同一性。發(fā)現(xiàn)cyn0TLR3胞外域肽鏈的成熟形式(序列標(biāo) 識(shí)號1)與人TLR3肽鏈的胞外域(序列標(biāo)識(shí)號23的第M至704位氨基酸殘基)有98. 2% 同一性。Sanghavi和Reinhart報(bào)道過編碼恒河猴TLR3的多核苷酸(序列標(biāo)識(shí)號22)的 克隆° 參見 Sanghavi and Reinhart, 175 J. Immunol. 5314 (2005) (SanRhavi 禾口 Reinhart, 《免疫學(xué)雜志》,第175卷第5314頁,2005年)。實(shí)例2包含Cyn0TLR3胞外域的肽鏈的表汰和純化構(gòu)建編碼N末端甲硫氨酸、cyn0TLR3信號肽鏈以及通過柔性甘氨酸和絲氨酸接頭 與六氨基末端組氨酸氨基殘基標(biāo)簽融合的CynoTLR3胞外域的多核苷酸,并將其克隆到哺 乳動(dòng)物表達(dá)載體中,以產(chǎn)生P4037表達(dá)載體構(gòu)建物(序列標(biāo)識(shí)號7)。引物2523(序列標(biāo)識(shí) 號16)用來幫助p4037的產(chǎn)生。使用標(biāo)準(zhǔn)方法將p4037瞬時(shí)轉(zhuǎn)染HEK293細(xì)胞。該HEK293 細(xì)胞系來源于人胚腎細(xì)胞。隨后將這些HEK293細(xì)胞培養(yǎng)六天,并收集細(xì)胞培養(yǎng)基。然后按 照制造商(Clontech Laboratories Inc. ,Mountain View,CA)的說明,進(jìn)行TALON 樹脂純 化,將由P4037編碼的組氨酸標(biāo)記cyn0TLR3胞外域融合肽鏈從收集的培養(yǎng)基中分離出來。 然后對得自TAL0N 樹脂的洗脫液進(jìn)行SDS-PAGE分析,該分析是在非還原樣品和經(jīng)歷還原 條件的樣品上進(jìn)行。SDS-PAGE之后進(jìn)行蛋白質(zhì)印跡分析。蛋白質(zhì)印跡用組氨酸標(biāo)簽特異性 探針進(jìn)行探測。對還原和非還原樣品的蛋白質(zhì)印跡分析均顯示有分子量約為98kDal的明 顯單體蛋白得到表達(dá)并分離。由p4037編碼的cyn0TLR3組氨酸標(biāo)記cyn0TLR3胞外域融合 肽鏈的分子量計(jì)算值為約80kDal,比蛋白質(zhì)印跡中檢測到的98kDal組氨酸標(biāo)記肽鏈要小。 然而,由P4037編碼的肽鏈包含15個(gè)N-連接糖基化位點(diǎn),并且據(jù)信翻譯后的糖基化很大程 度上是造成所表達(dá)的組氨酸標(biāo)記蛋白的分子量增加的原因。本發(fā)明現(xiàn)已完整描述,但對于本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員而言將顯而易見的是,在不 脫離本發(fā)明所附權(quán)利要求的精神和范圍的前提下,可對本發(fā)明進(jìn)行多種修改和變型。序列表表解序列標(biāo)識(shí)號1來源食蟹猴(Macaca fascicularis)序列描述核酸序列,編碼包含CynoTLR3胞外域的預(yù)測成熟形式的肽鏈。tccaccaacaaatgcactgttagccaagaagttgctgactgcagccacctgaagttaactcaggtacccgatgatctccccacaaacataacagtgttgaatcttacccataatcaactcagaagattaccagctgccaattttacaagatatagccaactaactatcttggatgtaggatttaactccatctcaaaactggagccagaattgtgccaaaaacttcccatgttaaaagttttgaacctccagcacaatgagctatctcaactttctgataaaacttttgccttctgcacgaatttgacggaactccatctcatgtccaactcaatccagaaaattaaaaataatccctttgtaaagcagaagaatttaatcacattagatctgtctcataatggcttgtcatctacaaaattaggaactcaggttcagctggaaaatc
tccaagagcttctattatcaaacaataaaatccaagcgctaaaaagtgaagaacttggtatccttgccaattcatctttaaaaaagttagagttgtcatcgaatcaaattaaagagttttctccagggtgttttcacgcaattggaagattattgggcctctttctgaacaatgtccagctgggtccccgcctcacagagaagctatgtttggaattagcaaacacaagcgttcggaatctgtctctgagtaacagccagctgtccaccaccagcaatacaactttcttgggactaaagtggacaaacctcactatgctcgatctttcccacaacaacttaaatgtgattggtaacgattcctttgtttggcttccacatctagaatatttcttcctggagtataataatatacagcatttgctctctcactctttgcacgggcttttcaatgtgcggtacctgaatttgaaacggtcttttactaaacaaagtatttcccttgcttcgctccccaagattgatgatttttcttttcggtggctaacatgtttggagcaccttaacatggaagataatgatatttcaggcataaaaagcaatatgttcacaggattgataaacctgaaatacttaagtctatccaactcctttacaagtttgcaaactttgacaaatgaaacatttgtatcacttgctcattctcccttacacatactcaacctaaccaagaataaaatctcaaaaatagagagtggtgccttctcttggttgggccacctagaagtacttgacttgggccttaatgaaattgggcaagaactcacaggccaggaatggagtggtctagaaaatattttcgaaatctatctttcctacaacaagtacctgcaactgactaagaactcctttgccttggtccgaagccttcaacgactgatgctccgaagggtggcccttaaaaatgtggattgctctccttcaccattccagcctcttggtaacctgaccattctggatctaagcaacaacaacatagccaacataaatgatgacatgttggaaggtcttgagaaactagaaattctggatttgcagcataacaacttagcacggctctggaaacacgcaaaccctggtggtcctgtttatttcctaaagggtctgtctcacctccacatccttaacttggagtctaatggctttgacgagatcccagttgaggtcttcaaggatttatctgaactaaagatcattgatttaggattgaataatttaaacacacttccagcgtctgtctttgataatcaggtgtctctaaagtcattgaaccttcagaagaatctcataacatcagttgagaagaaggttttcgggccagctttcaggaacctgagtaacttagatatgcgctttaatccctttgattgcacatgtgaaagtattgcctggtttgttaattggattaacaagacccacgccaacatccctgagctgtcaagccactacctttgcaacactccaccccactatcatgggttcccagtgagactttttgatacatcatcctgcaaagacagtgccccctttgaactc序列標(biāo)識(shí)號2來源食蟹猴(Macaca fascicularis)序列描述核酸序列,編碼包含不帶氨基末端甲硫氨酸殘基的預(yù)測cyn0TLR3信號 肽以及胞外域的肽鏈。tccaccaacaaatgcactgttagccaagaagttgctgactgcagccacctgaagttaactcaggtacccgatgatctccccacaaacataacagtgttgaatcttacccataatcaactcagaagattaccagctgccaattttacaagatatagccaactaactatcttggatgtaggatttaactccatctcaaaactggagccagaattgtgccaaaaacttcccatgttaaaagttttgaacctccagcacaatgagctatctcaactttctgataaaacttttgccttctgcacgaatttgacggaactccatctcatgtccaactcaatccagaaaattaaaaataatccctttgtaaagcagaagaatttaatcacattagatctgtctcataatggcttgtcatctacaaaattaggaactcaggttcagctggaaaatctccaagagcttctattatcaaacaataaaatccaagcgctaaaaagtgaagaacttggtatccttgccaattcatctttaaaaaagttagagttgtcatcgaatcaaattaaagagttttctccagggtgttttcacgcaattggaagattattgggcctctttctgaacaatgtccagctgggtccccgcc
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序列標(biāo)識(shí)號4來源食蟹猴(Macaca fascicularis)序列描述核酸序列,編碼包含不帶氨基末端甲硫氨酸殘基的預(yù)測cyn0TLR3信號 肽、胞外域、跨膜域以及胞質(zhì)域的多肽。agacagactttgccttatacctacttttggtggggacttttgccctttgggatgctgtgtgcatcctccaccaacaaatgcactgttagccaagaagttgctgactgcagccacctgaagttaactcaggtacccgatgatctccccacaaacataacagtgttgaatcttacccataatcaactcagaagattaccagctgccaattttacaagatatagccaactaactatcttggatgtaggatttaactccatctcaaaactggagccagaattgtgccaaaaacttcccatgttaaaagttttgaacctccagcacaatgagctatctcaactttctgataaaacttttgccttctgcacgaatttgacggaactccatctcatgtccaactcaatccagaaaattaaaaataatccctttgtaaagcagaagaatttaatcacattagatctgtctcataatggcttgtcatctacaaaattaggaactcaggttcagctggaaaatctccaagagcttctattatcaaacaataaaatccaagcgctaaaaagtgaagaacttggtatccttgccaattcatctttaaaaaagttagagttgtcatcgaatcaaattaaagagttttctccagggtgttttcacgcaattggaagattattgggcctctttctgaacaatgtccagctgggtccccgcctcacagagaagctatgtttggaattagcaaacacaagcgttcggaatctgtctctgagtaacagccagctgtccaccaccagcaatacaactttcttgggactaaagtggacaaacctcactatgctcgatctttcccacaacaacttaaatgtgattggtaacgattcctttgtttggcttccacatctagaatatttcttcctggagtataataatatacagcatttgctctctcactctttgcacgggcttttcaatgtgcggtacctgaatttgaaacggtcttttactaaacaaagtatttcccttgcttcgctccccaagattgatgatttttcttttcggtggctaacatgtttggagcaccttaacatggaagataatgatatttcaggcataaaaagcaatatgttcacaggattgataaacctgaaatacttaagtctatccaactcctttacaagtttgcaaactttgacaaatgaaacatttgtatcacttgctcattctcccttacacatactcaacctaaccaagaataaaatctcaaaaatagagagtggtgccttctcttggttgggccacctagaagtacttgacttgggccttaatgaaattgggcaagaactcacaggccaggaatggagtggtctagaaaatattttcgaaatctatctttcctacaacaagtacctgcaactgactaagaactcctttgccttggtccgaagccttcaacgactgatgctccgaagggtggcccttaaaaatgtggattgctctccttcaccattccagcctcttggtaacctgaccattctggatctaagcaacaacaacatagccaacataaatgatgacatgttggaaggtcttgagaaactagaaattctggatttgcagcataacaacttagcacggctctggaaacacgcaaaccctggtggtcctgtttatttcctaaagggtctgtctcacctccacatccttaacttggagtctaatggctttgacgagatcccagttgaggtcttcaaggatttatctgaactaaagatcattgatttaggattgaataatttaaacacacttccagcgtctgtctttgataatcaggtgtctctaaagtcattgaaccttcagaagaatctcataacatcagttgagaagaaggttttcgggccagctttcaggaacctgagtaacttagatatgcgctttaatccctttgattgcacatgtgaaagtattgcctggtttgttaattggattaacaagacccacgccaacatccctgagctgtcaagccactacctttgcaacactccaccccactatcatgggttcccagtgagactttttgatacatcatcctgcaaagacagtgccccctttgaactctttttcatgatcaataccagtatcctgttgatttttatctttgttgtacttctcatccactttgagggctggaggatatctttttactggaatgtttcagtacatcgagttcttggtttcaaagaaataga
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gcttgacattggggaattcagcgagagcctgacctattgcatctcccgccgtgcacagggtgtcacgttgcaagacctgcctgaaaccgaactgcccgctgttctgcagccggtcgcggaggccatggatgcgatcgctgcggccgatcttagccagacgagcgggttcggcccattcggaccgcaaggaatcggtcaatacactacatggcgtgatttcatatgcgcgattgetgatccccatgtgtatcactggcaaactgtgatggacgacaccgtcagtgcgtccgtcgcgcaggctctcgatgagctgatgctttgggccgaggactgccccgaagtccggcacctcgtgcacgcggatttcggctccaacaatgtcctgacggacaatggccgcataacagcggtcattgactggagcgaggcgatgttcggggattcccaatacgaggtcgccaacatcttcttctggaggccgtggttggcttgtatggagcagcagacgcgctacttcgagcggaggcatccggagcttgcaggatcgccgcggctccgggcgtatatgctccgcattggtcttgaccaactctatcagagcttggttgacggcaatttcgatgatgcagcttgggcgcagggtcgatgcgacgcaatcgtccgatccggagccgggactgtcgggcgtacacaaatcgcccgcagaagcgcggccgtctggaccgatggctgtgtagaagtactcgccgatagtggaaaccgacgccccagcactcgtccggatcgggagatgggggaggctaactgaaacacggaaggagacaataccggaaggaacccgcgctatgacggcaataaaaagacagaataaaacgcacgggtgttgggtcgtttgttcataaacgcggggttcggtcccagggctggcactctgtcgataccccaccgagaccccattggggccaatacgcccgcgtttcttccttttccccaccccaccccccaagttcgggtgaaggcccagggctcgcagccaacgtcggggcggcaggccctgccatagccactggccccgtgggttagggacggggtcccccatggggaatggtttatggttcgtgggggttattattttgggcgttgcgtggggtcaggtccacgactggactgagcagacagacccatggtttttggatggcctgggcatggaccgcatgtactggcgcgacacgaacaccgggcgtctgtggctgccaaacacccccgacccccaaaaaccaccgcgcggatttctggcgtgccaagctagtcgaccaattctcatgtttgacagcttatcatcgcagatccgggcaacgttgttgccattgctgcaggcgcagaactggtaggtatggaagatctatacattgaatcaatattggcaattagccatattagtcattggttatatagcataaatcaatattggctattggccattgcatacgttgtatctatatcataatatgtacatttatattggctcatgtccaatatgaccgccat序列標(biāo)識(shí)號8來源食蟹猴(Macaca fascicularis)序列描述肽鏈,包含cyn0TLR3胞外域預(yù)測成熟形式。STNKCTVSQEVADCSHLKLTQVPDDLPTNITVLNLTHNQLRRLPAANFTRYSQLTILDVGFNSISKLEPELCQKLPMLKVLNLQHNELSQLSDKTFAFCTNLTELHLMSNSIQKIKNNPFVKQKNLITLDLSHNGLSSTKLGTQVQLENLQELLLSNNKIQALKSEELGILANSSLKKLELSSNQIKEFSPGCFHAIGRLLGLFLNNVQLGPRLTEKLCLELANTSVRNLSLSNSQLSTTSNTTFLGLKWTNLTMLDLSHNNLNVIGNDSFVWLPHLEYFFLEYNNIQHLLSHSLHGLFNVRYLNLKRSFTKQSISLASLPKIDDFSFRWLTCLEHLNMEDNDISGIKSNMFTGLINLKYLSLSNSFTSLQTLTNETFVSLAHSPLHILNLTKNKISKIESGAFSWLGHLEVLDLGLNEIGQELTGQEWSGLENIFEIYLSYNKYLQLTKNSFALVRSLQRLMLRRVALKNVDCSPSPFQPLGNLTILDLSNNNIANINDDMLEGLEKLEILDLQHNNLARLWKHANPGGPVYFLKGLSHLHILNLESNGFDEIPVEVFKDLSELKIIDLGLNNLNTLPASVFDNQVSLKSLNLQKNLITSVEKKVFGPAFRNLSNLDMRFNPFDCTCESIAWFVNWINKTHANIPELSSHYLCNTPPHYHGFPVRLFDTSSCKDSAPFEL
序列標(biāo)識(shí)號9來源食蟹猴(Macaca fascicularis)序列描述肽鏈,包含不帶氨基末端甲硫氨酸殘基的預(yù)測cyn0TLR3信號肽以及胞 外域。RQTLPYTYFWWGLLPFGMLCASSTNKCTVSQEVADCSHLKLTQVPDDLPTNITVLNLTHNQLRRLPAANFTRYSQLTILDVGFNSISKLEPELCQKLPMLKVLNLQHNELSQLSDKTFAFCTNLTELHLMSNSIQKIKNNPFVKQKNLITLDLSHNGLSSTKLGTQVQLENLQELLLSNNKIQALKSEELGILANSSLKKLELSSNQIKEFSPGCFHAIGRLLGLFLNNVQLGPRLTEKLCLELANTSVRNLSLSNSQLSTTSNTTFLGLKWTNLTMLDLSHNNLNVIGNDSFVWLPHLEYFFLEYNNIQHLLSHSLHGLFNVRYLNLKRSFTKQSISLASLPKIDDFSFRWLTCLEHLNMEDNDISGIKSNMFTGLINLKYLSLSNSFTSLQTLTNETFVSLAHSPLHILNLTKNKISKIESGAFSWLGHLEVLDLGLNEIGQELTGQEWSGLENIFEIYLSYNKYLQLTKNSFALVRSLQRLMLRRVALKNVDCSPSPFQPLGNLTILDLSNNNIANINDDMLEGLEKLEILDLQHNNLARLffKHANPGGPVYFLKGLSHLHILNLESNGFDEIPVEVFKDLSELKIIDLGLNNLNTLPASVFDNQVSLKSLNLQKNLITSVEKKVFGPAFRNLSNLDMRFNPFDCTCESIAWFVNWINKTHANIPELSSHYLCNTPPHYHGFPVRLFDTSSCKDSAPFEL序列標(biāo)識(shí)號10來源食蟹猴(Macaca fascicularis)序列描述肽鏈,包含cyn0TLR3胞外域預(yù)測成熟形式、跨膜域以及胞質(zhì)域。STNKCTVSQEVADCSHLKLTQVPDDLPTNITVLNLTHNQLRRLPAANFTRYSQLTILDVGFNSISKLEPELCQKLPMLKVLNLQHNELSQLSDKTFAFCTNLTELHLMSNSIQKIKNNPFVKQKNLITLDLSHNGLSSTKLGTQVQLENLQELLLSNNKIQALKSEELGILANSSLKKLELSSNQIKEFSPGCFHAIGRLLGLFLNNVQLGPRLTEKLCLELANTSVRNLSLSNSQLSTTSNTTFLGLKWTNLTMLDLSHNNLNVIGNDSFVWLPHLEYFFLEYNNIQHLLSHSLHGLFNVRYLNLKRSFTKQSISLASLPKIDDFSFRWLTCLEHLNMEDNDISGIKSNMFTGLINLKYLSLSNSFTSLQTLTNETFVSLAHSPLHILNLTKNKISKIESGAFSWLGHLEVLDLGLNEIGQELTGQEWSGLENIFEIYLSYNKYLQLTKNSFALVRSLQRLMLRRVALKNVDCSPSPFQPLGNLTILDLSNNNIANINDDMLEGLEKLEILDLQHNNLARLWKHANPGGPVYFLKGLSHLHILNLESNGFDEIPVEVFKDLSELKIIDLGLNNLNTLPASVFDNQVSLKSLNLQKNLITSVEKKVFGPAFRNLSNLDMRFNPFDCTCESIAWFVNWINKTHANIPELSSHYLCNTPPHYHGFPVRLFDTSSCKDSAPFELFFMINTSILLIFIFVVLLIHFEGWRISFYWNVSVHRVLGFKEIDRQTEQFEYAAYIIHAHKDKDffVffEHFSSMEKEDQSLKFCLEERDFEAGVFELEAIVNSIKRSRKIIFIITHHLLKDPLCKRFKVHHAVQQAIEQNLDSIILIFLEEI
PDYKLNHALCLRRGMFKSHCILNWPVQKERIGAFHHKLQVALGSKNSVH序列標(biāo)識(shí)號11來源食蟹猴(Macaca fascicularis)序列描述肽鏈,包含不帶氨基末端甲硫氨酸殘基的預(yù)測cyn0TLR3信號肽、胞外 域、跨膜域以及胞質(zhì)域。RQTLPYTYFWWGLLPFGMLCASSTNKCTVSQEVADCSHLKLTQVPDDLPTNITVLNLTHNQLRRLPAANFTRYSQLTILDVGFNSISKLEPELCQKLPMLKVLNLQHNELSQLSDKTFAFCTNLTELHLMSNSIQKIKNNPFVKQKNLITLDLSHNGLSSTKLGTQVQLENLQELLLSNNKIQALKSEELGI
LANSSLKKLELSSNQIKEFSPGCFHAIGRLLGLFLNNVQLGPRLTEKLCLELANTSVRNLSLSNSQLSTTSNTTFLGLKWTNLTMLDLSHNNLNVIGNDSFVWLPHLEYFFLEYNNIQHLLSHSLHGLFNVRYLNLKRSFTKQSISLASLPKIDDFSFRWLTCLEHLNMEDNDISGIKSNMFTGLINLKYLS
LSNSFTSLQTLTNETFVSLAHSPLHILNLTKNKISKIESGAFSWLGHLEVLDLGLNEIGQELTGQEWSGLENIFEIYLSYNKYLQLTKNSFALVRSLQRLMLRRVALKNVDCSPSPFQPLGNLTILDLSNNNIANINDDMLEGLEKLEILDLQHNNLARLffKHANPGGPVYFLKGLSHLHILNLESNGFDEIPVEVFKDLSELKIIDLGLNNLNTLPASVFDNQVSLKSLNLQKNLITSVEKKVFGPAFRNLSNLDMRFNPFDCTCESIAWFVNWINKTHANIPELSSHYLCNTPPHYHGFPVRLFDTSSCKDSAPFELFFMINTSILLIFIFVVLLIHFEGWRISFYWNVSVHRVLGFKEIDRQTEQFEYAAYIIHAHKDKDffVWEHFSSMEKEDQSLKFCLEERDFEAGVFELEAIVNSIKRSRKIIFIITHHLLKDPLCKRFKVHHAVQQAIEQNLDSIILIFLEEIPDYKLNHALCLRRGMFKSHCILNWPVQKERIGAFHHKLQVALGSKNSVH序列標(biāo)識(shí)號12來源智人序列描述多核苷酸,編碼全長人TLR3肽鏈。atgagacagactttgccttgtatctacttttgggggggccttttgccctttgggatgctgtgtgcatcctccaccaccaagtgcactgttagccatgaagttgctgactgcagccacctgaagttgactcaggtacccgatgatctacccacaaacataacagtgttgaaccttacccataatcaactcagaagattaccagccgccaacttcacaaggtatagccagctaactagcttggatgtaggatttaacaccatctcaaaactggagccagaattgtgccagaaacttcccatgttaaaagttttgaacctccagcacaatgagctatctcaactttctgataaaacctttgccttctgcacgaatttgactgaactccatctcatgtccaactcaatccagaaaattaaaaataatccctttgtcaagcagaagaatttaatcacattagatctgtctcataatggcttgtcatctacaaaattaggaactcaggttcagctggaaaatctccaagagcttctattatcaaacaataaaattcaagcgctaaaaagtgaagaactggatatctttgccaattcatctttaaaaaaattagagttgtcatcgaatcaaattaaagagttttctccagggtgttttcacgcaattggaagattatttggcctctttctgaacaatgtccagctgggtcccagccttacagagaagctatgtttggaattagcaaacacaagcattcggaatctgtctctgagtaacagccagctgtccaccaccagcaatacaactttcttgggactaaagtggacaaatctcactatgctcgatctttcctacaacaacttaaatgtggttggtaacgattcctttgcttggcttccacaactagaatatttcttcctagagtataataatatacagcatttgttttctcactctttgcacgggcttttcaatgtgaggtacctgaatttgaaacggtcttttactaaacaaagtatttcccttgcctcactccccaagattgatgatttttcttttcagtggctaaaatgtttggagcaccttaacatggaagataatgatattccaggcataaaaagcaatatgttcacaggattgataaacctgaaatacttaagtctatccaactcctttacaagtttgcgaactttgacaaatgaaacatttgtatcacttgctcattctcccttacacatactcaacctaaccaagaataaaatctcaaaaatagagagtgatgctttctcttggttgggccacctagaagtacttgacctgggccttaatgaaattgggcaagaactcacaggccaggaatggagaggtctagaaaatattttcgaaatctatctttcctacaacaagtacctgcagctgactaggaactcctttgccttggtcccaagccttcaacgactgatgctccgaagggtggcccttaaaaatgtggatagctctccttcaccattccagcctcttcgtaacttgaccattctggat
ctaagcaacaacaacatagccaacataaatgatgacatgttggagggtcttgagaaactagaaattctcgatttgcagcataacaacttagcacggctctggaaacacgcaaaccctggtggtcccatttatttcctaaagggtctgtctcacctccacatccttaacttggagtccaacggctttgacgagatcccagttgaggtcttcaaggatttatttgaactaaagatcatcgatttaggattgaataatttaaacacacttccagcatctgtctttaataatcaggtgtctctaaagtcattgaaccttcagaagaatctcataacatccgttgagaagaaggttttcgggccagctttcaggaacctgactgagttagatatgcgctttaatccctttgattgcacgtgtgaaagtattgcctggtttgttaattggattaacgagacccataccaacatccctgagctgtcaagccactacctttgcaacactccacctcactatcatgggttcccagtgagactttttgatacatcatcttgcaaagacagtgccccctttgaactctttttcatgatcaataccagtatcctgttgatttttatctttattgtacttctcatccactttgagggctggaggatatctttttattggaatgtttcagtacatcgagttcttggtttcaaagaaatagacagacagacagaacagtttgaatatgcagcatatataattcatgcctataaagataaggattgggtctgggaacatttctcttcaatggaaaaggaagaccaatctctcaaattttgtctggaagaaagggactttgaggcgggtgtttttgaactagaagcaattgttaacagcatcaaaagaagcagaaaaattatttttgttataacacaccatctattaaaagacccattatgcaaaagattcaaggtacatcatgcagttcaacaagctattgaacaaaatctggattccattatattggttttccttgaggagattccagattataaactgaaccatgcactctgtttgcgaagaggaatgtttaaatctcactgcatcttgaactggccagttcagaaagaacggataggtgcctttcgtcataaattgcaagtagcacttggatccaaaaactctgtacat序列標(biāo)識(shí)號13來源智人序列描述肽鏈,包含全長人TLR3肽鏈。MRQTLPCIYFWGGLLPFGMLCASSTTKCTVSHEVADCSHLKLTQVPDDLPTNITVLNLTHNQLRRLPAANFTRYSQLTSLDVGFNTISKLEPELCQKLPMLKVLNLQHNELSQLSDKTFAFCTNLTELHLMSNSIQKIKNNPFVKQKNLITLDLSHNGLSSTKLGTQVQLENLQELLLSNNKIQALKSEELDIFANSSLKKLELSSNQIKEFSPGCFHAIGRLFGLFLNNVQLGPSLTEKLCLELANTSIRNLSLSNSQLSTTSNTTFLGLKWTNLTMLDLSYNNLNVVGNDSFAWLPQLEYFFLEYNNIQHLFSHSLHGLFNVRYLNLKRSFTKQSISLASLPKIDDFSFQWLKCLEHLNMEDNDIPGIKSNMFTGLINLKYLSLSNSFTSLRTLTNETFVSLAHSPLHILNLTKNKISKIESDAFSWLGHLEVLDLGLNEIGQELTGQEWRGLENIFEIYLSYNKYLQLTRNSFALVPSLQRLMLRRVALKNVDSSPSPFQPLRNLTILDLSNNNIANINDDMLEGLEKLEILDLQHNNLARLffKHANPGGPIYFLKGLSHLHILNLESNGFDEIPVEVFKDLFELKIIDLGLNNLNTLPASVFNNQVSLKSLNLQKNLITSVEKKVFGPAFRNLTELDMRFNPFDCTCESIAWFVNWINETHTNIPELSSHYLCNTPPHYHGFPVRLFDTSSCKDSAPFELFFMINTSILLIFIFIVLLIHFEGWRISFYWNVSVHRVLGFKEIDRQTEQFEYAAYIIHAYKDKD
WVWEHFSSMEKEDQSLKFCLEERDFEAGVFELEAIVNSIKRSRKIIFVITHHLLKDPLCKRFKVHHAVQQAIEQNLDSIILVFLEEIPDYKLNHALCLRRGMFKSHCILNWPVQKERIGAFRHKLQVALGSKNSVH序列標(biāo)識(shí)號14來源人工合成
序列描述化學(xué)合成的多核苷酸引物,用于編碼cyn0TLR3肽鏈的多核苷酸的PCR 擴(kuò)增。cccaagcttgccaccatgagacagactttgccttgtatctac序列標(biāo)識(shí)號15來源人工合成序列描述化學(xué)合成的多核苷酸引物,用于編碼cyn0TLR3肽鏈的多核苷酸的PCR 擴(kuò)增。cccctcgagttaatgtacagagtttttggatccaagtgct序列標(biāo)識(shí)號16來源人工合成序列描述化學(xué)合成的多核苷酸引物,用于編碼cyn0TLR3肽鏈的多核苷酸的PCR 擴(kuò)增。catggatccttcaaagggggcactgtctttgc序列標(biāo)識(shí)號17來源人工合成序列描述化學(xué)合成的多核苷酸引物,用于編碼cyn0TLR3肽鏈的多核苷酸的PCR 擴(kuò)增。cactgttatgtttgtggggagatcatcgg序列標(biāo)識(shí)號18來源人工合成序列描述化學(xué)合成的多核苷酸引物,用于編碼cyn0TLR3肽鏈的多核苷酸的PCR 擴(kuò)增。atcctacatccaagatagttagttggctat序列標(biāo)識(shí)號19來源人工合成序列描述化學(xué)合成的多核苷酸引物,用于編碼cyn0TLR3肽鏈的多核苷酸的PCR 擴(kuò)增。caaggtacatcatgccgttcaac序列標(biāo)識(shí)號20來源食蟹猴(Macaca fascicularis)序列描述肽鏈,包含全長cyn0TLR3肽鏈。該肽鏈包含帶氨基末端甲硫氨酸殘基 的預(yù)測CynoTLR3信號肽、胞外域、跨膜域以及胞質(zhì)域。MRQTLPYTYFWWGLLPFGMLCASSTNKCTVSQEVADCSHLKLTQVPDDLPTNITVLNLTHNQLRRLPAANFTRYSQLTILDVGFNSISKLEPELCQKLPMLKVLNLQHNELSQLSDKTFAFCTNLTELHLMSNSIQKIKNNPFVKQKNLITLDLSHNGLSSTKLGTQVQLENLQELLLSNNKIQALKSEELGILANSSLKKLELSSNQIKEFSPGCFHAIGRLLGLFLNNVQLGPRLTEKLCLELANTSVRNLSLSNSQLSTTSNTTFLGLKWTNLTMLDLSHNNLNVIGNDSFVWLPHLEYFFLEYNNIQHLLSHSLHGLFNVRYLNLKRSFTKQSISLASLPKIDDFSFRWLTCLEHLNMEDNDISGIKSNMFTGLINLKYLSLSNSFTSLQTLTNETFVSLAHSPLHILNLTKNKISKIESGAFSWLGHLEVLDLGLNEIGQELT
GQEffSGLENIFEIYLSYNKYLQLTKNSFALVRSLQRLMLRRVALKNVDCSPSPFQPLGNLTILDLSNNNIANINDDMLEGLEKLEILDLQHNNLARLWKHANPGGPVYFLKGLSHLHILNLESNGFDEIPVEVFKDLSELKIIDLGLNNLNTLPASVFDNQVSLKSLNLQKNLITSVEKKVFGPAFRNLSNLDMRFNPFDCTCESIAWFVNWINKTHANIPELSSHYLCNTPPHYHGFPVRLFDTSSCKDSAPFELFFMINTSILLIFIFVVLLIHFEGWRISFYWNVSVHRVLGFKEIDRQTEQFEYAAYIIHAHKDKDWVWEHFSSMEKEDQSLKFCLEERDFEAGVFELEAIVNSIKRSRKIIFIITHHLLKDPLCKRFKVHHAVQQAIEQNLDSIILIFLEEIPDYKLNHALCLRRGMFKSHCILNWPVQKERIGAFHHKLQVALGSKNSVH序列標(biāo)識(shí)號21來源食蟹猴(Macaca fascicularis)序列描述多核苷酸,編碼包含全長cyn0TLR3肽鏈的肽鏈。該肽鏈包含帶氨基末 端甲硫氨酸殘基的預(yù)測cynoTLR3信號肽、胞外域、跨膜域、胞質(zhì)域。該多核苷酸序列中還包 含終止密碼子。atgagacagactttgccttatacctacttttggtggggacttttgccctttgggatgctgtgtgcatcctccaccaacaaatgcactgttagccaagaagttgctgactgcagccacctgaagttaactcaggtacccgatgatctccccacaaacataacagtgttgaatcttacccataatcaactcagaagattaccagctgccaattttacaagatatagccaactaactatcttggatgtaggatttaactccatctcaaaactggagccagaattgtgccaaaaacttcccatgttaaaagttttgaacctccagcacaatgagctatctcaactttctgataaaacttttgccttctgcacgaatttgacggaactccatctcatgtccaactcaatccagaaaattaaaaataatccctttgtaaagcagaagaatttaatcacattagatctgtctcataatggcttgtcatctacaaaattaggaactcaggttcagctggaaaatctccaagagcttctattatcaaacaataaaatccaagcgctaaaaagtgaagaacttggtatccttgccaattcatctttaaaaaagttagagttgtcatcgaatcaaattaaagagttttctccagggtgttttcacgcaattggaagattattgggcctctttctgaacaatgtccagctgggtccccgcctcacagagaagctatgtttggaattagcaaacacaagcgttcggaatctgtctctgagtaacagccagctgtccaccaccagcaatacaactttcttgggactaaagtggacaaacctcactatgctcgatctttcccacaacaacttaaatgtgattggtaacgattcctttgtttggcttccacatctagaatatttcttcctggagtataataatatacagcatttgctctctcactctttgcacgggcttttcaatgtgcggtacctgaatttgaaacggtcttttactaaacaaagtatttcccttgcttcgctccccaagattgatgatttttcttttcggtggctaacatgtttggagcaccttaacatggaagataatgatatttcaggcataaaaagcaatatgttcacaggattgataaacctgaaatacttaagtctatccaactcctttacaagtttgcaaactttgacaaatgaaacatttgtatcacttgctcattctcccttacacatactcaacctaaccaagaataaaatctcaaaaatagagagtggtgccttctcttggttgggccacctagaagtacttgacttgggccttaatgaaattgggcaagaactcacaggccaggaatggagtggtctagaaaatattttcgaaatctatctttcctacaacaagtacctgcaactgactaagaactcctttgccttggtccgaagccttcaacgactgatgctccgaagggtggcccttaaaaatgtggattgctctccttcaccattccagcctcttggtaacctgaccattctggatctaagcaacaacaacatagccaacataaatgatgacatgttggaaggtcttgagaaactagaaattctggatttgcagcataacaacttagcacggctctggaaacacgcaaaccctggtggtcctgt
ttatttcctaaagggtctgtctcacctccacatccttaacttggagtctaatggctttgacgagatcccagttgaggtcttcaaggatttatctgaactaaagatcattgatttaggattgaataatttaaacacacttccagcgtctgtctttgataatcaggtgtctctaaagtcattgaaccttcagaagaatctcataacatcagttgagaagaaggttttcgggccagctttcaggaacctgagtaacttagatatgcgctttaatccctttgattgcacatgtgaaagtattgcctggtttgttaattggattaacaagacccacgccaacatccctgagctgtcaagccactacctttgcaacactccaccccactatcatgggttcccagtgagactttttgatacatcatcctgcaaagacagtgccccctttgaactctttttcatgatcaataccagtatcctgttgatttttatctttgttgtacttctcatccactttgagggctggaggatatctttttactggaatgtttcagtacatcgagttcttggtttcaaagaaatagacagacagacagaacagtttgaatatgcagcatatataattcacgcccataaagataaggattgggtctgggaacatttctcttcaatggaaaaggaagaccaatctctcaaattttgtctggaagaaagggactttgaggcaggtgtttttgaactggaagcaattgttaacagcatcaaaagaagcagaaaaattatttttattataacacaccatctattaaaagacccattatgcaaaagattcaaggtacatcatgccgttcaacaagctattgaacaaaatctggattccattatattgattttccttgaggagattccagattataaactgaaccatgcactctgtttgcgaagaggaatgtttaaatctcactgcatcttgaactggccagttcagaaagaacggataggtgcctttcatcataaactgcaagtagca
cttggatccaaaaactcagtacattaa序列標(biāo)識(shí)號22來源食蟹猴(Macaca fascicularis)序列描述多核苷酸,編碼全長恒河猴TLR3肽鏈。atgagacagactttgccttatacctacttttggtggggacttttgccctttgggatgctgtgtgcatcctccaccaacaaatgcactgttagccaagaagttgctgactgcagccacctgaagttaactcaggtacccgatgatctccccacaaacataacagtgttgaatcttacccataatcaactcagaagattaccagctgccaattttacaagatatagccaactaactatcttggatgtaggatttaactccatctcaaaaccggagccagaattgtgccaaaaacttcccatgttaaaagttttgaacctccagcacaatgagctatctcaactttccgataaaacttttgccttctgcatgaatttgacggaactccattccctgtcccactcaatccagaaaattaaaaataatccctttgtcaagcagaagaatttaatcacattagatctgtctcataatggcttgtcatctataaaattaggaactcaggttcagatggaaaatctccaagagcttctattatcaaacaataaaatccaagcgctaaaaagtgaagaacttggtatccttgccaattcatctttaaaaaagttagagttgtcatcgaatcaaattaaagagttttctccagggtgttttcacgcaattggaagatcattgggcctcttcctgaacaatgtccagctgggtccccgcctcacagagaagctatgtttggaattagcaaacacaagcgttcggaatctgtctctgagtaacagccagctgtctaccaccagcaatacaactttcttgggactaaagtggacaaacctcactatgcttgatctttcccacaacaacttaaatgtggttggtaacgattcctttgcttggcttccacaactagaatatttcttcctggagtataataatatacagcatttgctctctcactctttgcacgggcttttcaatgtgcggtacctgaatttgaaacggtcttttactaaacaaagtatttcccttgcttcgctccccaagattgatgatttttcttttcggtggctaacatgtttggagcaccttaacatggaagataatgatatttcaggcataaaaagcaatatgttcacaggattgataaacctgaaatacttaagtctatccaactcctttacaagtttgcaaactttgacaaatgaaacatttgtatcacttgctc
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權(quán)利要求
1.一種分離多核苷酸,其包含具有序列標(biāo)識(shí)號1中所示序列或其互補(bǔ)序列的多核苷酸。
2.一種分離多核苷酸,其包含具有序列標(biāo)識(shí)號2中所示序列或其互補(bǔ)序列的多核苷酸。
3.一種分離多核苷酸,其包含具有序列標(biāo)識(shí)號3中所示序列或其互補(bǔ)序列的多核苷酸。
4.一種分離多核苷酸,其包含具有序列標(biāo)識(shí)號4中所示序列或其互補(bǔ)序列的多核苷酸。
5.一種分離多核苷酸,其包含具有序列標(biāo)識(shí)號5中所示序列或其互補(bǔ)序列的多核苷酸。
6.一種包含分離多核苷酸的載體,所述分離多核苷酸具有選自序列標(biāo)識(shí)號1、2、3、4、 5、6和7中所示的序列的序列。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的載體,其為表達(dá)載體。
8.一種分離宿主細(xì)胞,其包含權(quán)利要求6所述的載體。
9.一種分離宿主細(xì)胞,其包含權(quán)利要求7所述的載體。
10.一種分離肽鏈,其包含具有序列標(biāo)識(shí)號8中所示序列的肽鏈。
11.一種分離肽鏈,其包含具有序列標(biāo)識(shí)號9中所示序列的肽鏈。
12.—種分離肽鏈,其包含具有序列標(biāo)識(shí)號10中所示序列的肽鏈。
13.一種分離肽鏈,其包含具有序列標(biāo)識(shí)號11中所示序列的肽鏈。
14.一種表達(dá)肽鏈的方法,所述方法包括以下步驟a)提供權(quán)利要求9所述的宿主細(xì)胞;b)在足以表達(dá)包含序列標(biāo)識(shí)號8、序列標(biāo)識(shí)號9、序列標(biāo)識(shí)號10或序列標(biāo)識(shí)號11中所 示序列的至少一條肽鏈的條件下培養(yǎng)所述宿主細(xì)胞;以及c)確認(rèn)包含序列標(biāo)識(shí)號8、序列標(biāo)識(shí)號9、序列標(biāo)識(shí)號10或序列標(biāo)識(shí)號11中所示序列 的至少一條肽鏈的表達(dá)。
15.一種表達(dá)肽鏈的方法,所述方法包括以下步驟a)提供權(quán)利要求1、2、3、4、5、6或7所述的,能夠被轉(zhuǎn)錄為編碼包含序列標(biāo)識(shí)號8、序列 標(biāo)識(shí)號9、序列標(biāo)識(shí)號10或序列標(biāo)識(shí)號11中所示序列的至少一條肽鏈的RNA的多核苷酸;b)提供無細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)的組分;c)從所提供的所述多核苷酸啟動(dòng)無細(xì)胞表達(dá);和d)確認(rèn)包含序列標(biāo)識(shí)號8、序列標(biāo)識(shí)號9、序列標(biāo)識(shí)號10或序列標(biāo)識(shí)號11中所示序列 的至少一條肽鏈的表達(dá)。
16.根據(jù)權(quán)利要求15所述的方法,其中所述無細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)選自基于網(wǎng)織紅細(xì)胞裂解 物的表達(dá)系統(tǒng)、基于麥胚提取物的表達(dá)系統(tǒng)和基于大腸桿菌提取物的表達(dá)系統(tǒng)。
17.—種表達(dá)肽鏈的方法,所述方法包括以下步驟a)提供編碼包含序列標(biāo)識(shí)號8、序列標(biāo)識(shí)號9、序列標(biāo)識(shí)號10或序列標(biāo)識(shí)號11中所示 序列的至少一條肽鏈的RNA ;b)提供無細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)的組分;c)從所提供的所述RNA啟動(dòng)無細(xì)胞表達(dá);和d)確認(rèn)包含序列標(biāo)識(shí)號8、序列標(biāo)識(shí)號9、序列標(biāo)識(shí)號10或序列標(biāo)識(shí)號11中所示序列 的至少一條肽鏈的表達(dá)。
18.根據(jù)權(quán)利要求17所述的方法,其中所述無細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)選自基于網(wǎng)織紅細(xì)胞裂解 物的表達(dá)系統(tǒng)、基于麥胚提取物的表達(dá)系統(tǒng)和基于大腸桿菌提取物的表達(dá)系統(tǒng)。
19.一種肽鏈,其用權(quán)利要求14所述的方法產(chǎn)生。
20.一種肽鏈,其用權(quán)利要求15所述的方法產(chǎn)生。
21.一種肽鏈,其用權(quán)利要求17所述的方法產(chǎn)生。
22.—種分離抗體,其特異性結(jié)合權(quán)利要求10、11、12、13、19、20、21或22所述肽鏈。
23.一種單克隆抗體,其特異性結(jié)合權(quán)利要求10、11、12、13、19、20、21或22所述肽鏈。
24.一種評估TLR3治療劑安全性的方法,所述方法包括a)提供TLR3治療劑、第一食蟹猴和第二食蟹猴;b)給所述第一食蟹猴施用所述TLR3治療劑;和c)對比第二食蟹猴確定第一食蟹猴是否呈現(xiàn)有害癥狀,如果第一食蟹猴呈現(xiàn)有害癥 狀,則表明TLR3治療劑是不安全的,如果第一食蟹猴沒有呈現(xiàn)有害癥狀,則表明TLR3治療 劑是安全的。
25.根據(jù)權(quán)利要求M所述的方法,其中所述TLR3治療劑是抗體。
全文摘要
本發(fā)明涉及食蟹猴Toll樣受體3(cynoTLR3)及其用途。本發(fā)明公開了編碼食蟹猴Toll樣受體3(cynoTLR3)的分離多核苷酸、可從這些多核苷酸的表達(dá)獲得的多肽、重組細(xì)胞、以及它們的方法和用途。
文檔編號C07K14/705GK102083984SQ200880126883
公開日2011年6月1日 申請日期2008年12月23日 優(yōu)先權(quán)日2007年12月26日
發(fā)明者H·貝克, J·卡頓 申請人:森托科爾奧索生物科技公司