專(zhuān)利名稱(chēng)：：生長(zhǎng)激素融合蛋白的制作方法生長(zhǎng)激素融合蛋白本發(fā)明涉及生長(zhǎng)激素融合蛋白、編碼所述蛋白的核酸分子以及使用所述蛋白的治療方法。與受體相互作用產(chǎn)生生化應(yīng)答(biochemicalresponse)的配體被稱(chēng)細(xì)胞特異性生長(zhǎng)因子是充當(dāng)激動(dòng)劑并結(jié)合位于細(xì)胞表面的受體的配體。由配體特異性結(jié)合而導(dǎo)致的受體激活，通過(guò)激活細(xì)胞內(nèi)信號(hào)級(jí)聯(lián)促進(jìn)細(xì)胞增殖，其中，該信號(hào)級(jí)聯(lián)導(dǎo)致細(xì)胞周期特異性基因的表達(dá)以及激活靜態(tài)細(xì)胞從而增殖。被稱(chēng)為細(xì)胞因子的一組生長(zhǎng)因子涉及許多不同的細(xì)胞功能。其包括調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)、調(diào)控能量代謝以及控制生長(zhǎng)和發(fā)育。細(xì)胞因子通過(guò)表達(dá)于把細(xì)胞的細(xì)胞表面的受體介導(dǎo)其功能。細(xì)胞因子受體分成三種不同的亞類(lèi)。1型(生長(zhǎng)激素家族)受體的特征為位于其細(xì)胞內(nèi)區(qū)域的氨基末端部分的4個(gè)保守半胱氨酸殘基和存在于C-末端部分的Trp-Ser-Xaa-Trp-Ser基序。重復(fù)的Cys基序也存在于2型(干擾素家族)和ni型(肺瘤壞死因子家族)中。生長(zhǎng)激素(GH)是對(duì)兒童期的線(xiàn)性生長(zhǎng)和成人的正常身體組成重要的合成代謝細(xì)胞因子激素、目前的GH替代治療方案要求每天一次的皮下注射，這是不方便并且昂貴的。已經(jīng)采取許多方法制備長(zhǎng)效制劑，其包括聚乙二醇化2和緩釋制劑"。聚乙二醇化的缺點(diǎn)在于其降低激素對(duì)受體的親和力2,并且用后續(xù)純化進(jìn)行化學(xué)修飾是昂貴的。緩釋制劑已經(jīng)證明是有效的4—7,但是這些GH制劑的特征為突出的早期釋i文(early-release)i普，這導(dǎo)至爻超生理(supraphysiological)GHK平3,制備是昂貴的并且注射可能是痛苦的4。亟需將制造成本降至最低程度、具有好的藥物動(dòng)力學(xué)譜、容易給藥并且對(duì)患者是可以接受的細(xì)胞因子制劑。GH通過(guò)細(xì)胞表面1型細(xì)胞因子受體(GHR)起作用。與其它細(xì)胞因子受體一樣，GHR的胞外區(qū)域被蛋白酶剪切并且作為結(jié)合蛋白(GHBP)循環(huán)8。在生理?xiàng)l件下，GH以1:1的摩爾比被GHBP在循環(huán)中部分地結(jié)合并且該復(fù)合物是無(wú)生物活性的，從而避免清除和降解9，，GH與GHBP的交聯(lián)復(fù)合物延遲了清除但是沒(méi)有生物活性人以1:1的比率同時(shí)給予分別純化的GHBP和GH能增強(qiáng)GH的合成代謝作用12。因此，與許多激素系統(tǒng)一樣，循環(huán)中的結(jié)合提供了與活性的游離激素處于平衡的無(wú)活性激素循環(huán)儲(chǔ)存13。如生長(zhǎng)激素的細(xì)胞因子激素的血漿半衰期不長(zhǎng)并要求經(jīng)常給藥。例如，生長(zhǎng)激素(GH)替代療法包括每天注射。與其它細(xì)胞因子一樣，胞外區(qū)域GH受體作為結(jié)合蛋白循環(huán)并且自然地延長(zhǎng)了GH的生物半衰期。本公開(kāi)涉及GH與其胞外區(qū)域受體的配體-受體融合物(LR-融合物)生物作用。從哺乳動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)物純化這種遺傳工程處理的LR-融合蛋白。在大鼠中，LR-融合物的清除率比天然GH的清除率降低了300倍，并且一次給藥促進(jìn)生長(zhǎng)達(dá)IO天，這遠(yuǎn)高于用天然GH所觀察到的效果。降低的清除率在靈長(zhǎng)動(dòng)物模型中可以重現(xiàn)。LR-融合物形成相互頭尾結(jié)合的二聚體，其提供如GH與其結(jié)合蛋白天然發(fā)生的無(wú)活性激素的儲(chǔ)存。根據(jù)本發(fā)明的一方面，提供了包含核酸序列的核酸分子，該核酸序列選自i)SEQIDN0:1所示的核酸序列；ii)SEQIDNO:2所示的核酸序列；iii)SEQIDNO:3所示的核酸序列；iv)SEQIDNO:4所示的核酸序列；或v)核酸分子，其包含在嚴(yán)緊雜交條件下與SEQIDNO:l、SEQIDNO:2、SEQIDNO:3或SEQIDNO:4雜交的核酸序列，并且該核酸序列編碼具有生長(zhǎng)激素受體激動(dòng)劑活性的多肽。當(dāng)兩個(gè)互補(bǔ)核酸分子相互間產(chǎn)生許多氫鍵時(shí)，發(fā)生核酸分子的雜交。雜交的嚴(yán)緊性能根據(jù)核酸所處的環(huán)境條件、雜交方法的特點(diǎn)及所用的核酸分子的成分和長(zhǎng)度而變化。Sambrook等人,MolecularCloning:ALaboratoryManual(分子克隆試'驗(yàn)手冊(cè))(ColdSpringHarborLaboratoryPress,ColdSpringHarbor,NY,200l)和Tijssen，LaboratoryTechniquesinBiochemistryandMolecularBiology—HybridizationwithNucleicAcidProbesPartI，Chapter2(生物化學(xué)和分子生物學(xué)試驗(yàn)技術(shù)一核酸探針雜交，第一部分，第二章)(Elsevier,NewYork,1993)討論了為達(dá)到特定程度的嚴(yán)緊性，所要求的雜交條件的計(jì)算。Tm是核酸分子的一條鏈的50%與其互補(bǔ)鏈雜交的溫度。下文是一組示例性但非限制性的雜交條件極高嚴(yán)緊性(允許至少90%相同的序列雜交)雜交5xSSC于65。C達(dá)16小時(shí)洗滌兩次2xSSC每次在室溫(RT)達(dá)15分鐘洗滌兩次0.5xSSC每次于65。C達(dá)20分鐘高嚴(yán)緊性(允許至少80%相同的序列雜交)雜交5x-6xSSC于65°C-70。C達(dá)16-20小時(shí)洗滌兩次2xSSC每次在室溫(RT)達(dá)5-20分鐘洗滌兩次lxSSC每次于55°C-70°C達(dá)30分鐘低嚴(yán)緊性(允許至少50%相同的序列雜交)雜交6xSSC在RT至55°C達(dá)16-20小時(shí)至少洗滌兩次2x-3xSSC每次在RT至55°C達(dá)20-30分鐘。在本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案中，所述核酸分子包含或由SEQIDNO:1所示的核酸序列組成。在本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案中，所述核酸分子包含SEQIDNO:2所示的核酸序列或由其組成。在本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案中，所述核酸分子包含SEQIDNO:3所示的核酸序列或由其組成。在本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案中，所述核酸分子包含SEQIDNO:4所示的核酸序列或由其組成。根據(jù)本發(fā)明的一方面，提供了由本發(fā)明的核酸編碼的多肽。根據(jù)本發(fā)明的另一方面，提供了包含氨基酸序列的多肽，該氨基酸序列選自i)SEQIDNO:5所示的氨基酸序列；ii)SEQIDNO:6所示的氨基酸序列；iii)SEQIDNO:7所示的氨基酸序列；iv)SEQIDNO:8所示的氨基酸序列；v)SEQIDNO:9所示的氨基酸序列；vi)SEQIDNO:10所示的氨基酸序列；vii)SEQIDNO:11所示的氨基酸序列；viii)SEQIDNO:12所示的氨基酸序列；其中所述多肽具有生長(zhǎng)激素受體激動(dòng)劑活性。在本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案中，所述多肽包含SEQIDNO:5所示的氨基酸序列或由其組成。在本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案中，所述多肽包含SEQIDNO:6所示的氨基酸序列或由其組成。在本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案中，所述多肽包含SEQIDNO:7所示的氨基酸序列或由其組成。在本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案中，所述多肽包含SEQIDNO:8所示的氨基酸序列或由其組成。在本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案中，所述多肽包含SEQIDNO:9所示的氨基酸序列或由其組成。在本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案中，所述多肽包含SEQIDNO:10所示的氨基酸序列或由其組成。在本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案中，所述多肽包含SEQIDNO:11所示的氨基酸序列或由其組成。在本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案中，所述多肽包含SEQIDNO:12所示的氨基酸序列或由其組成。根據(jù)本發(fā)明的另一方面，提供了包含兩個(gè)多肽的同型二聚體，該多肽包含SEQIDNO:5或由其組成。根據(jù)本發(fā)明的另一方面，提供了包含兩個(gè)多肽的同型二聚體，該多肽包含SEQIDNO:6或由其組成。根據(jù)本發(fā)明的另一方面，提供了包含兩個(gè)多肽的同型二聚體，該多肽包含SEQIDNO:7或由其組成。根據(jù)本發(fā)明的另一方面，提供了包含兩個(gè)多肽的同型二聚體，該多肽包含SEQIDNO:8或由其組成。根據(jù)本發(fā)明的另一方面，提供了包含兩個(gè)多肽的同型二聚體，該多肽包含SEQIDNO:9或由其組成。根據(jù)本發(fā)明的另一方面，提供了包含兩個(gè)多肽的同型二聚體，該多肽包含SEQIDNO:IO或由其組成。根據(jù)本發(fā)明的另一方面，提供了包含兩個(gè)多肽的同型二聚體，該多肽包含SEQIDNO:11或由其組成。根據(jù)本發(fā)明的另一方面，提供了包含兩個(gè)多肽的同型二聚體，該多肽包含SEQIDNO:12或由其組成。根據(jù)本發(fā)明的另一方面，提供了包含本發(fā)明的核酸分子的載體。在本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案中，所述載體是適于表達(dá)本發(fā)明的核酸分子的表達(dá)載體。本發(fā)明的包含核酸的載體不需要包含啟動(dòng)子或其它調(diào)節(jié)序列，具體地，如果該載體被用于將核酸導(dǎo)入細(xì)胞以重組入基因組而實(shí)現(xiàn)穩(wěn)定的轉(zhuǎn)染。優(yōu)選地，所述載體中的核酸可操作地連接至在宿主細(xì)胞中轉(zhuǎn)錄的合適啟動(dòng)子或其它調(diào)節(jié)元件。所述載體可以是在多種宿主中起作用的雙功能表達(dá)載體。"啟動(dòng)子"是轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)上游的核苷酸序列，其含有轉(zhuǎn)錄要求的所有調(diào)節(jié)區(qū)。合適的啟動(dòng)子包括組成的、組織特異性的、誘導(dǎo)的、發(fā)育的或其它在真核或原核細(xì)胞中表達(dá)的啟動(dòng)子。"可操作地連接"表示連接成為相同核酸分子的部分，合適地放置和定向以起始從啟動(dòng)子的轉(zhuǎn)錄。DNA可操作地連接至啟動(dòng)子即是在啟動(dòng)子的"轉(zhuǎn)錄起始調(diào)節(jié)之下"。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，啟動(dòng)子是組成的、誘導(dǎo)的或可調(diào)節(jié)的啟動(dòng)子。根據(jù)本發(fā)明的另一方面，提供了用本發(fā)明的核酸分子或載體轉(zhuǎn)染或轉(zhuǎn)化的細(xì)^^包。優(yōu)選地，所述細(xì)胞是真核細(xì)胞。或者，所述細(xì)胞是原核胞。在本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案中，所述細(xì)胞選自真菌細(xì)胞(例如，ft'c/z/as//、/SVzcc/wram;;c"s7/、A/^Mr仍/ora昆蟲(chóng)細(xì)月包(例々口，5po(io/tera^;)、哺乳動(dòng)物細(xì)胞(例如，COS纟田月包、CHO細(xì)胞)、植物細(xì)胞。根據(jù)本發(fā)明的另一方面，提供了包含本發(fā)明的多肽的藥物組合物，其含有賦形劑或載體。在本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案中，所述藥物組合物與另外的治療劑組合。給藥時(shí)，以藥物可接受的制劑給予本發(fā)明的藥物組合物。這些制劑通常含有藥物可接受濃度的鹽、緩沖劑、防腐劑、相容的載體以及任選的其它治療劑。能以包括注射在內(nèi)的常規(guī)途徑進(jìn)行本發(fā)明的藥物組合物的給藥。給藥和施用可以是，例如，口服、靜脈內(nèi)、腹膜內(nèi)、肌肉內(nèi)、腔內(nèi)、關(guān)節(jié)內(nèi)、皮下、局部(眼)、真皮(例如，插入皮膚或粘膜的脂溶性乳膏)、透皮或鼻內(nèi)。以有效量給予本發(fā)明的藥物組合物。"有效量"是單獨(dú)或與其它劑量或協(xié)同藥物一起，產(chǎn)生期望的應(yīng)答的藥物/組合物的量。這可可以?xún)H包括暫時(shí)延緩疾病的進(jìn)展，盡管更優(yōu)選地，其包括永久地停止疾病的進(jìn)展。這能通過(guò)常規(guī)方法進(jìn)行監(jiān)測(cè)或根據(jù)診斷方法進(jìn)行監(jiān)測(cè)。能根據(jù)不同的參數(shù)選擇給予個(gè)體的藥物組合物的劑量，特別是，根據(jù)所用的給藥方式和個(gè)體的情況(即年齡、性別)。給藥時(shí)，以藥物可接受的量和藥物可接受的組成應(yīng)用本發(fā)明的藥物組合物。使用時(shí)，藥物鹽應(yīng)當(dāng)是藥物可接受的，但是可以方便地使用非藥物可接受的鹽制備其藥物可接受的鹽，非藥物可接受的鹽并不被排除在本發(fā)明的范圍之外。這些藥物學(xué)和藥物可接受的鹽包括但不限于從下述酸制備的鹽鹽酸、氫溴酸、硫酸、硝酸、磷酸、馬來(lái)酸、乙酸、水楊酸、檸檬酸、曱酸、丙二酸、琥珀酸等。而且，藥物可接受的鹽能制備成堿金屬或^5威土金屬鹽，例如，鈉、鉀或鈣鹽。如需要，可以將藥物組合物與藥物可接受的載體組合。本文所用的術(shù)語(yǔ)"藥物可接受的載體"表示適合向人給藥的一種或多種相容的固體或液體填充物、稀釋劑或封裝物質(zhì)。術(shù)語(yǔ)"載體，，表示天然或合成的有機(jī)或無(wú)機(jī)成分，活性成分與其組合以促進(jìn)應(yīng)用。所述藥物組合物的組分還能以沒(méi)有基本上削弱期望的藥物療效的相互作用的方式，與本發(fā)明的分子以及互相共混合。藥物組合物可以含有合適的援沖劑，其包括乙酸鹽、檸檬酸鹽、硼酸鹽以及磷酸鹽。任選地，藥物組合物還可以含有合適的防腐劑，例如苯扎氯胺、氯丁醇、對(duì)羥基本曱酸酯和乙基汞硫代水楊酸鈉。藥物組合物可以方i"更地表現(xiàn)為單位劑量形式并且可以通過(guò)制藥領(lǐng)域中熟知的方法的任何一種進(jìn)行制備。所有的方法包括使活性成分與構(gòu)成一種或多種附屬成分的載體相結(jié)合的步驟。通常，通過(guò)均勻并充分地使活性化合物與液體載體、細(xì)碎固體載體或這兩者相結(jié)合，然后，若需要，成形產(chǎn)物，制備組合物。適合口服給藥的組合物可以為分離的單位，例如，每一個(gè)含有預(yù)定量活性化合物的膠嚢劑、片劑、錠劑。其它組合物包括水性液體或諸如糖漿、酏劑或乳劑的非水性液體形式的懸浮液。適合胃腸外給藥的組合物通常地包括無(wú)菌水性或非水性制劑，其優(yōu)選地與受者的血液等滲。可以利用合適的分散劑或潤(rùn)濕劑和懸浮劑，根據(jù)已知的方法制備這種制劑。無(wú)菌注射制劑還可以是無(wú)菌注射溶液或無(wú)毒的胃腸外可接受的稀釋劑或溶劑的懸浮液，例如，1，3-丁二醇的溶液?？梢允褂玫目山邮苋軇┲杏兴?、林格氏溶液(Ringer'ssolution)和等滲氯化鈉溶液。另外，常規(guī)地使用無(wú)菌的不揮發(fā)性油作為溶劑或懸浮介質(zhì)。為了該目的，可以使用包括合成單-或二-甘油酯在內(nèi)的任何溫和的不揮發(fā)性油。另外，諸如油酸的脂肪酸可用于制備注射劑。能在Remington'sPharmaceuticalSciences(雷明登氏制藥科學(xué))，MackPublishingCo.,Easton,PA中找到適合口服、皮下、靜脈內(nèi)、肌肉內(nèi)給藥的載體配方。根據(jù)本發(fā)明的另一方面，提供了治療患有生長(zhǎng)激素缺乏癥的人個(gè)體的方法，其包括給予有效量的至少一種本發(fā)明的多肽。在本發(fā)明的優(yōu)選方法中，所述多肽被靜脈內(nèi)給藥。在本發(fā)明的可選的優(yōu)選方法中，所述多肽;故皮下給藥。在本發(fā)明的另一優(yōu)選方法中，所述多肽以2天的間隔給藥，優(yōu)選地，以每周、每?jī)芍芑蛎吭碌拈g隔進(jìn)行所述多肽的給藥。在本發(fā)明的優(yōu)選方法中，所述生長(zhǎng)激素缺乏癥是兒童期生長(zhǎng)激素缺乏癥。在本發(fā)明的優(yōu)選方法中，所述生長(zhǎng)激素缺乏癥是成人生長(zhǎng)激素缺乏癥。所述生長(zhǎng)激素缺乏癥的治療包括，例如，特納氏綜合征(TurnersSyndrome)、普拉德-威利綜合征(PraderWilliSyndrome)、子宮內(nèi)生長(zhǎng)遲緩、特發(fā)性身材矮小、腎衰竭、例如化療治療和AIDS治療期間的異化狀態(tài)的治療。在全部的描述和本說(shuō)明書(shū)的權(quán)利要求書(shū)中，詞語(yǔ)"包含(comprise)，，和"包含(contain)，，及其諸如"包含(comprising)，，和"包含(comprise)"的變化形式表示"包括但不限于，，并且不意圖(并且不)排除其它部分、添加物、組分、整體或步驟。在本說(shuō)明書(shū)的全部的描述和權(quán)利要求書(shū)中，除非上下文要求，單數(shù)形式包括復(fù)數(shù)形式。具體地，當(dāng)使用不定冠詞時(shí)，除非上下文要求，說(shuō)明書(shū)被理解為考慮復(fù)數(shù)形式以及單數(shù)形式。在本發(fā)明具體的方面、實(shí)施方案或?qū)嵤├忻枋龅奶匦?、整體、特征、化合物、化學(xué)部分或基團(tuán)應(yīng)理解為應(yīng)用于本文所述的任何其它方面、實(shí)施方案或?qū)嵤├桥c其不相容?，F(xiàn)在將僅通過(guò)實(shí)施例并參考下文的附圖來(lái)描述本發(fā)明的實(shí)施方案圖l顯示了GH、GH結(jié)合蛋白(GHBP)、LR-融合物以及基于公開(kāi)結(jié)構(gòu)的GHR"(pdb3HHR)的關(guān)系示意圖(a)1:1的復(fù)合物中GH結(jié)合GHBP的天然構(gòu)型。(b)GH，其從GHBP復(fù)合物釋放，結(jié)合至細(xì)胞表面GH受體。(c)GH連接至胞外GHR(exGHR)的單體形式的LR-融合物分子。(d)LR-融合物形成相互頭-尾結(jié)合的二聚體的模型，其中一個(gè)分子中的GH結(jié)合另一分子中的exGHR。最后，(e)單體形式LR-融合物能結(jié)合并激活GH受體。圖2顯示了LR-融合物的特征和生物活性(a)顯示通過(guò)SDS-PAGE,然后用考馬斯亮藍(lán)染色(coomassiestaining)(CS)和利用GH特異性抗體的蛋白質(zhì)印跡法(westernblotting)(WB)分離的LR-融合物。LR-融合物約為75kDa并且分離成相差約5kDa的兩條條帶。(b)顯示了非變性PAGE分離的LR-融合物，其顯示有快(F)和慢(S)的兩種蛋白形式。(c)切除來(lái)自非變性PAGE的各條帶(F和S)并通過(guò)還原條件SDS-PAGE進(jìn)一步分離，然后進(jìn)行使用GH特異性抗體的蛋白質(zhì)印跡法。兩條條帶(F和S)都跑(mn)在約75kDa處并分離成前面證明的雙峰。這表明通過(guò)非變性PAGE觀察到的兩條不同的條帶都由75kDa的LR-融合物組成并且可以以單體和二聚體的平#f存在于天然條件下。(d)顯示了凝膠過(guò)濾后的LR-融合物的洗脫譜。2個(gè)不同峰的分離再次表明了溶液中以單體和二聚體存在的LR-融合物。(e)GH和LR-融合物的基于細(xì)胞的GHR信號(hào)生物4企測(cè)。Y軸表示從Stat5熒光素酶報(bào)道檢測(cè)的修正的熒光素酶倍數(shù)誘導(dǎo)(foldinduction)。GH的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的范圍為OnM、0.25nM、0.5nM、1.0nM、2.0nM和5nM:LR-融合物的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的范圍為OnM、1nM、2nM、5nM、10nM、25nM、50nM、100nM和250nM。以5nM實(shí)現(xiàn)了GH的最大應(yīng)答，而與LR-融合物的最大應(yīng)答要求50nM至250nM;圖3顯示了皮下(sc)和靜脈內(nèi)(iv)給藥后測(cè)量的GH和LR-融合物的譜(a)顯示sc給藥后的早期(5小時(shí))；(b)顯示iv后的晚期(8天)；以及(c)sc給藥后的晚期；圖4顯示用GH和LR-融合物皮下處理后的體重變化(a)與安慰劑(只有媒介物)相比，每天用GH處理后的體重；(b)隔天注射；(c)第l天和第5天注射兩次；(d)第一天注射一次；以及(e)不同處理方案后體重變化的概要。***=GH與LR-融合物比較，p<0.0001;圖5示出1B7vO、1B7vl、1B7v2和1B7v3的體內(nèi)活性；圖6示出顯示纟合予1B7v0、1B7vl、1B7v2和1B7v3的大鼠體重增加的時(shí)間進(jìn)程；圖7示出皮下纟合藥后1B7v0、1B7vl、1B7v2和1B7v3的藥物動(dòng)力學(xué)；圖8示出靜月永內(nèi)纟會(huì)藥后1B7v0、1B7vl、1B7v2和1B7v3的藥物圖9示出以1mg/kg順序s/c劑量給予恒河猴后，1B7v2和1B7v3的藥物動(dòng)力學(xué)語(yǔ)。紅色虛線(xiàn)表示人生長(zhǎng)激素的最小有效濃度。表1顯示用GH或LR-融合物處理切除垂體的大鼠IO天后的結(jié)果(平均值土平均標(biāo)準(zhǔn)誤差)。材料與方法動(dòng)物和人樣品的^f吏用。本地倫理學(xué)委員會(huì)(localethicscommittee)批準(zhǔn)使用人的樣品并且患者提供了知情許可。依照涉及保護(hù)用于試驗(yàn)或其它科學(xué)目的動(dòng)物的法國(guó)法律(Frenchlaw)進(jìn)行所有的試驗(yàn)。材料。除非另外指出，所有的材料購(gòu)自Sigma(Poole,UK)。重組GH購(gòu)自Pfizer，DSL(DSLResearchReagents,Oxfordshire,UK)贈(zèng)送了結(jié)合檢測(cè)中使用的重組E.coli衍生人GH結(jié)合蛋白，并且NovoNordisk(NovoNordiskPark,Denmark)贈(zèng)送了碘化GH。除了mAbB07b和B24a,以及mAb263(AbDSerotec,Kidlington,Oxford,UK)，是Dr.Skriver(NovoNordiskPark,Denmark)贈(zèng)送的禮物，用于純化和表j正的GH和GHRmAb是自有(in-house)材料。GH-exGHRLR-融合物的純化。通過(guò)RT-PCR分別從人腦垂體和肝擴(kuò)增人GH和GH受體，并將其克隆至載體pSecTag-V5/FRT/Hist-TOPO(Invitrogen,Paisley,UK)中，并位于人GH分泌信號(hào)序列后。使用4個(gè)重復(fù)的Gly4Ser接頭連接人GH的天然C-末端至人GHR的天然N-末端。在CHOFlp-In細(xì)胞(Invitrogen,Paisley,UK)中制備穩(wěn)定的克隆，該細(xì)胞適合無(wú)蛋白質(zhì)的培養(yǎng)基并生長(zhǎng)于懸浮培養(yǎng)中。用自有ELISA證實(shí)LR-融合物的表達(dá)。利用GHmAb柱進(jìn)行親和純化。轉(zhuǎn)錄生物檢測(cè)。如以前的穩(wěn)定地表達(dá)人GHR的人293細(xì)胞所述進(jìn)行轉(zhuǎn)錄生物檢測(cè)16。ELISA基于夾心ELISA方法建立自有GH和LR-融合物ELISA在檢測(cè)中，在預(yù)包被了人GH抗體的小鼠抗體(mAb10A7)的孔中，用生物素標(biāo)記的抗人GH的小鼠抗體(mAb7F8)孵育標(biāo)準(zhǔn)品(GH或LR-融合物)、對(duì)照和未知物。檢測(cè)的檢測(cè)極限是2.5pg并且檢測(cè)內(nèi)和;險(xiǎn)測(cè)間CV小于10%。IGF-IELISA購(gòu)自DSL(DSL-10-2900ACTIVEmouse/ratIGF-Ikit;DSLResearchReagents,Oxfordshire,UK)。藥物動(dòng)力學(xué)試驗(yàn)。Y吏用來(lái)自Janvier(LeGenestSaintIsle,France)的7周大的正常SpragueDawley大鼠進(jìn)行藥物動(dòng)力學(xué)試驗(yàn)。在異氟烷麻醉下，進(jìn)行Sc或iv給藥(陰莖靜脈)和采血(眼窩竇)。給大鼠(11=4-6/組)iv或sc注射0.1mg/kg的rhGH或LR-融合物。從眼球后血管叢收集血液樣品。收獲血清并保存于-70。C直至檢測(cè)。利用非線(xiàn)性最小二乘回歸分析，將隨時(shí)間變化的激素濃度與房室模型擬合，來(lái)估算藥物動(dòng)力學(xué)參數(shù)。根據(jù)動(dòng)物重量標(biāo)準(zhǔn)化清除率值。利用從iv推注模型擬合獲得的系數(shù)和指數(shù)計(jì)算按動(dòng)物重量的清除率和終末半衰期(tj/2)。靈長(zhǎng)動(dòng)物藥物動(dòng)力學(xué)試驗(yàn)將試驗(yàn)物質(zhì)IB7v2和IB7v3配制在含有11.9mM磷酸鈉鉀、137mM氯化鈉、2.7mM氯化鉀、0.01%聚山梨酸酯80的溶液中，調(diào)整該:容液的pH為7.4。試驗(yàn)設(shè)計(jì)將動(dòng)物分成4個(gè)處理組(l個(gè)J某介物組、1個(gè)IB7v2測(cè)試組、1個(gè)IB7v3測(cè)試組)，其中々某介物組含有3個(gè)雄性動(dòng)物，2個(gè)處理組每組含有4個(gè)雄性動(dòng)物。下文的表中列出了劑量水平和給藥體積<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>從全部試驗(yàn)的所有動(dòng)物獲得血液樣品以測(cè)定血清中合適試驗(yàn)材料的濃度。在全部試驗(yàn)的許多時(shí)間點(diǎn)采取這些樣品。臨床終點(diǎn)和測(cè)量利用確認(rèn)的ELISA方法測(cè)定IB7v2和IB7v3的血清濃度。利用WinNonlinPro(v4.0.l)軟件，將血清中每種蛋白質(zhì)的濃度對(duì)時(shí)間作圖，從而測(cè)定每種蛋白質(zhì)的藥物動(dòng)力學(xué)譜。生長(zhǎng)試驗(yàn)。生長(zhǎng)試—險(xiǎn)使用切除垂體的大鼠并在來(lái)自CharlesRiver實(shí)-瞼室(Larbresle，F(xiàn)rance)的SpragueDawley大鼠上進(jìn)行該試驗(yàn)。在4周大時(shí)，由飼養(yǎng)員在異氟烷麻醉下切除大鼠的垂體，并且該大鼠在根據(jù)成功手術(shù)的體重標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行選擇一周后被送達(dá)。將動(dòng)物單獨(dú)關(guān)在籠中，并讓其在進(jìn)入試驗(yàn)期前再^f木息一周。賦形劑、rhGH和LR-融合物的注射溶液不超過(guò)2ml/kg。每天稱(chēng)重大鼠并根據(jù)給藥方案，使其接受10天的試驗(yàn)物質(zhì)注射。LR-融合物的表征。利用一組16個(gè)構(gòu)象敏感的hGH受體mAb檢查L(zhǎng)R-融合物的構(gòu)象。使用變性、非變性膠和蛋白質(zhì)印跡法分析LR-融合物，并且以對(duì)GH非構(gòu)象敏感進(jìn)行蛋白質(zhì)印跡法。利用SuperoseG200分析柱和分析超速離心，通過(guò)凝月交過(guò)濾確定溶液中形成的LR-融合蛋白的形式。通過(guò)沉積速度進(jìn)行分析超速離心(AUC)(分析服務(wù)，DrAndyBarry,Astbury，LeedsUniversity,Leeds,UK)。統(tǒng)計(jì)學(xué)。如果兩組的差異是正態(tài)分布的，使用Student檢驗(yàn)比較兩組，或者，如果兩組的差異不是正態(tài)分布的，使用Student-Satterthwaite檢驗(yàn)進(jìn)行比較。用F檢驗(yàn)檢驗(yàn)分布。使用單因素ANOVA比較3組或更多組的平均值，并且，如果顯著水平為p<0.05，使用Dunnett檢驗(yàn)進(jìn)行個(gè)體比較。在5%的顯著水平上，所有的統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)都是雙側(cè)的(two-sided)并且沒(méi)有估算缺失值。實(shí)施例LR-融合物的設(shè)計(jì)和表征生成重組基因(圖lc),該重組基因編碼通過(guò)柔性(Gly4Ser)4接頭連接至GHR胞外區(qū)域(exGHRl-238)的A&B區(qū)域的人GH。在CHO細(xì)胞中表達(dá)該LR-融合物，并利用GH的mAb抗體的親和介質(zhì)純化該LR-融合物至純度大于95%(圖2a)。利用16個(gè)構(gòu)象敏感的mAb，通過(guò)ELISA篩查L(zhǎng)R-融合物。所有這些mAb以與來(lái)自人血清的GHBP相當(dāng)?shù)挠H和力結(jié)合所述LR-融合物?？捡R斯亮藍(lán)染色和SDS-PAGE膠的蛋白印跡法顯示該LR-融合蛋白分離成約75kDa的雙峰，并且兩條條帶之間的差別約為5kDa。非變性PAGE膠分析(圖2b)沒(méi)有顯示凝集的證據(jù)。該LR-融合物表現(xiàn)出兩種不同的形式。從非變性PAGE膠切下這些不同的蛋白形式，快(F)和慢(S)，然后用還原條件SDS-PAGE再進(jìn)行分析。來(lái)自非變性PAGE的F&S形式都包含75kDa的雙峰(圖2c)。分析凝膠過(guò)濾證實(shí)了溶液存在兩種形式LR-融合物的證據(jù)(圖2d)。這些結(jié)果與LR-融合物以二聚體存在于溶液中的情況是一致的。分析超速離心證實(shí)了這種情況，其中單體的大小被i正實(shí)為75kDa。體外生物檢測(cè)和藥物動(dòng)力學(xué)利用GH特異性熒光素酶才艮道^r測(cè)測(cè)試了LR-融合物的體外生物活性16。LR-融合物的生物活性約為本靜態(tài)檢測(cè)系統(tǒng)中的GH的10%，盡管該LR-融合物即使在高于GH的濃度下，也能刺激最大的應(yīng)答(圖2e)。單次皮下(sc)或靜脈內(nèi)(iv)注射后，在正常大鼠中檢查了LR-融合物藥物動(dòng)力學(xué)譜(圖3)。LR-融合物證明了不分給藥途徑的延遲清除和sc給藥后的延遲吸收。iv推注后，LR-融合物的終末半衰期為21士2h，并且清除率為3.3±0.9ml.h十kg"。LR-融合物的清除比GH慢300倍2，12。單次sc給藥后，LR-融合物具有與GH相比延遲的峰(30小時(shí)比1小時(shí))。8天后仍然能檢測(cè)到LR-融合物而6小時(shí)后就不能檢測(cè)到GH。我們檢查了LR-融合物的異常藥物動(dòng)力學(xué)是否與大小有關(guān)。測(cè)試了具有相同接頭的兩種不同LR-融合物分子一種是與只有B區(qū)域exGHR連接的GH的LR-融合物(55kDa)，另一種是與exGHR連接的串聯(lián)(GH連接GH)(100kDa)。55kDa和100kDa的蛋白都在生物檢測(cè)中表現(xiàn)出與原始75kDaLR-融合物相比增加的激動(dòng)劑活性，但是這兩者iv給藥后的循環(huán)半衰期都小于4小時(shí)(精確的半衰期是不可能的，因?yàn)樗玫娜臃桨割A(yù)期較長(zhǎng)的半衰期)。結(jié)果證實(shí)原始75kDaLR-融合物的異常藥物動(dòng)力學(xué)并不是只與分子量有關(guān)。在t-0和t畫(huà)336小時(shí)(14天)的兩次以1mg/kg順序s/c劑量給藥后，靈長(zhǎng)類(lèi)試驗(yàn)中的IB7v2和IB7v3的藥物動(dòng)力學(xué)譜示于圖9中。能注意到，該水平迅速達(dá)到最大并隨與半衰期小于1小時(shí)的天然人生長(zhǎng)激素相比下降時(shí)間段明顯延長(zhǎng)。如隨順序劑量給藥的持續(xù)時(shí)間的虛線(xiàn)所明確的，該水平很好地保持在最小有效濃度之上。LR-融合物對(duì)GH的生長(zhǎng)促進(jìn)優(yōu)勢(shì)給予切除垂體(缺乏GH)的大鼠LR-融合物和GH以測(cè)試生物活性。每天給予GH在IO天中誘導(dǎo)連續(xù)生長(zhǎng)。然后通過(guò)隔日sc注射或10天中兩次注射或一次注射將LR-融合物與GH進(jìn)行比較。對(duì)于所有試驗(yàn)，使用了等摩爾劑量的GH和LR-融合物并且在IO天中提供了相同的總劑量220pg/kg/天，10天中約10nmo1，其類(lèi)似于以前獲4尋最大生長(zhǎng)應(yīng)答所使用的劑量12。LR-融合物促進(jìn)增重的升高，這大于相同注射方案下的GH并類(lèi)似于每天GH注射所觀察到的情況(圖4和表)。GH僅在注射后24小時(shí)內(nèi)表現(xiàn)出促進(jìn)增重。相比之下，甚至在以一次注射提供時(shí)，LR-融合物在十天中產(chǎn)生持續(xù)的增重。在股骨、脛骨、胸腺、肝和腎中觀察到類(lèi)似的生長(zhǎng)方式(表)。分析了所有動(dòng)物的10天末端血液中的GH依賴(lài)的生物標(biāo)記物、胰島素樣生長(zhǎng)因子-I(IGF-I)和GH以及LR-融合物水平(表)。給予LR-融合物后，甚至一次注射后，IGF-I水平明顯升高，并且明顯高于每天注射GH后所觀察到的IGF-I水平。所有的注射方案后，在末端血液中不能^^企測(cè)到GH的水平，而一次注射10天后可以檢測(cè)到LR-融合物的水平。我們-〖正明，GH的LR-融合物產(chǎn)生有效的激動(dòng)劑。我們-〖人為分子形成頭尾相互結(jié)合的二聚體(圖ld)的能力是其增強(qiáng)的體內(nèi)生物活性的原因。LR-融合物的設(shè)計(jì)基于GHR已知的晶體結(jié)構(gòu)17。我們使用了4次重復(fù)的柔性Gly4Ser接頭(預(yù)計(jì)長(zhǎng)度為80人)。選擇這種長(zhǎng)接頭作為GH和GHR之間相對(duì)柔性的系繩(tether)，/人而GH部分仍然能與細(xì)胞表面GHR相互作用(圖le)。由于穩(wěn)定性和沒(méi)有免疫原性，在重組單鏈Fv抗體制備中使用了類(lèi)似的Gly4Ser接頭18。LR-融合物合適地折疊，從而在非變性PAGE膠和凝膠過(guò)濾中表現(xiàn)為兩種不同的類(lèi)型，即潛在的單體和二聚體。用分析超速離心證實(shí)了存在的二聚體。我們認(rèn)為，LR-融合物通過(guò)每個(gè)LR-融合物分子中的GH部分與另一LR-融合物分子中的受體部分的分子間結(jié)合形成相互頭尾結(jié)合的二聚體(圖ld)?？赡苡捎谔腔?，LR-融合物在SDS-PAGE中表現(xiàn)為兩條條帶，并且分子量差別為5kDa19'2G。與GH相比，LR-融合物在體內(nèi)更有效，但是在體外其生物活性卻低10倍。這種差別能歸因于LR-融合物的二聚作用。在靜態(tài)體外生物檢測(cè)中，如用天然GH/GHBP復(fù)合物所觀察到的，二聚體沒(méi)有生物活性。然而，在體內(nèi)，二聚體提供了與生物活性單體處于平衡的無(wú)活性激素的儲(chǔ)存。向大鼠iv給藥后，本發(fā)明的LR-融合物的清除率比GH降低300倍，并且比之前才艮道的GH/GHBP復(fù)合物或軛合物的清除率降低10至30倍21，22。我們測(cè)試了兩種其它LR-融合物變體，一個(gè)為55kDa,另一個(gè)為100kDa。兩種蛋白質(zhì)都不顯示出相同的延遲清除。因此，我們認(rèn)為，單獨(dú)的單體的大小不會(huì)導(dǎo)致LR融合物的延遲清除。腎對(duì)GH清除率在人中估計(jì)為25-53%23,在大鼠中估計(jì)為67%24。因此，僅降低腎清除率預(yù)計(jì)只能大約減半GH清除2。由于GH清除與GH受體機(jī)制相對(duì)獨(dú)立25，據(jù)推測(cè)蛋白質(zhì)水解是主要的促成因素。我們認(rèn)為，本發(fā)明的LR-融合物清除率的明顯降低不但歸因于降低的腎清除率，還歸因于防止蛋白水解的構(gòu)象。在切除垂體的大鼠中，僅在10天期間提供一次的本發(fā)明的LR-融合物產(chǎn)生了類(lèi)似于每天注射GH所觀察到的增重。上文已經(jīng)顯示，與GH以1:1摩爾比的復(fù)合物共給藥的GHBP促進(jìn)了生長(zhǎng)12。使用相同的方案，本發(fā)明的LR-融合蛋白在一次注射后的10天內(nèi)促進(jìn)了生長(zhǎng)，而GH/GHBP復(fù)合物要求每天注射并且本發(fā)明的LR-融合物產(chǎn)生比GH/GHBP共給藥后所觀察到的IGF-I水平更高的IGF-I水平。與GHBP軛合時(shí)，GH沒(méi)有生物活性，并且非共價(jià)連接的復(fù)合物缺乏LR-融合物的穩(wěn)定性1U2。LR-融合物的更強(qiáng)的生物作用可能與其增強(qiáng)的穩(wěn)定性及其激活單體形式GHR的能力有關(guān)。在人中，IGF-I水品通常是GH活性的良好的生物標(biāo)記物。然而，在切除垂體的大鼠中，IGF-I水平并不總是反映對(duì)GH的生長(zhǎng)應(yīng)答2'12。給予LR-融合物導(dǎo)致與GH注射相比明顯升高的IGF-I水平。我們認(rèn)為對(duì)GH的生長(zhǎng)和IGF-I的劑量應(yīng)答在切除垂體的大鼠中是不同的。因此，本發(fā)明的試驗(yàn)中所用的LR-融合物的劑量超出促進(jìn)最大生長(zhǎng)應(yīng)答所要求的劑量，但仍然能刺激產(chǎn)生IGF-I。大鼠表現(xiàn)出比人更快的腎清除，這使得難以預(yù)測(cè)人所要求的劑量給藥方案?？梢灶A(yù)計(jì)，能以比GH更低的劑量和低得多的頻率使用LR-融合物。細(xì)胞因子激素與血清白蛋白的融合物和聚乙二醇化已經(jīng)用于延長(zhǎng)循環(huán)半衰期"e。本發(fā)明的LR-融合物分子比這兩種方法有較大的優(yōu)勢(shì)。聚乙二醇化高效地延遲蛋白質(zhì)的清除，但其要求化學(xué)修飾并降低了配體對(duì)其受體的親和力2。因此，對(duì)于聚乙二醇化，要求更大的劑量，而對(duì)于本發(fā)明的LR-融合物，類(lèi)似的劑量有比天然GH更大的效果。對(duì)于GH與白蛋白的融合物，白蛋白融合生長(zhǎng)激素(Albutropin),因?yàn)榭梢岳斫獾厥?，其已?jīng)從臨床試驗(yàn)中撤除了，所以了解得很少。在一個(gè)PK試驗(yàn)中26,當(dāng)以s.c.提供時(shí)，白蛋白融合生長(zhǎng)激素的終末半衰期比GH的終末半衰期長(zhǎng)6倍，而以i.v.提供時(shí)，本發(fā)明的LR-融合蛋白的終末半衰期比GH公開(kāi)的終末半衰期長(zhǎng)100倍、對(duì)于天然人GH:清除值為18.6ml/min.kg=1116ml/hr.kg并且Vd=336ml/kg,因此T1/2=0.693x336/l116=0.21hrs)。GH天然地結(jié)合循環(huán)外GHR,因此本發(fā)明的LR-融合物與其它蛋白質(zhì)的融合物相比不大可能是免疫原性的，并且大規(guī)模硅片T細(xì)胞表位篩選表明在LR-融合物分子上沒(méi)有位點(diǎn)(數(shù)據(jù)未顯示)。參考文獻(xiàn)1.Woodhouse，LJ"Mukherjee,A.,Shalet,S.M.&Ezzat，S.Theinfluenceofgrowthhormonestatusonphysicalimpairments,functionallimitations,andhealth-relatedqualityoflifeinadults(生長(zhǎng)5敫素^l犬'態(tài)^f成人身體損傷、功能限制以及健康相關(guān)的生活質(zhì)量的影響).EndocrRev.27,287317(2006).2.Clark,R.etal.Long-actinggrowthhormonesproducedbyconjugationwithpolyethyleneglycol(用與聚乙二醇共輒制備的長(zhǎng)效生長(zhǎng)激素).JournalofBiologicalChemistry.271，2196921977(1996).3.Cook,D.M.etal.Thepharmacokineticandpharmacodynamiccharacteristicsofalong-actinggrowthhormone(GH)preparation(nutropindepot)inGH-deficientadults(缺乏GH的成人中長(zhǎng)效生長(zhǎng)激素(GH)制劑(重組生長(zhǎng)激素緩釋劑)的藥物動(dòng)力學(xué)和藥效學(xué)特征).JClinEndocrinolMetab.87,450814(2002).4.Reiter,E.O.etal.AmulticenterstudyoftheefficacyandsafetyofsustainedreleaseGHinthetreatmentofnaivepediatricpatientswithGHdeficiency(緩釋GH治療患有GH缺乏癥的無(wú)經(jīng)歷(naive)兒科患者的療效和安全性多中心研究).JClinEndocrinolMetab,86,47006(2001).5.Jostel，A.，Mukherjee，A.,Alenfall,J.，Smethurst,L.&Shalet,S.M.Anewsustained-releasepreparationofhumangrowthhormoneanditspharmacokinetic,pharmacodynamicandsafetyprofile(人生長(zhǎng)激素新緩釋制劑及其藥物動(dòng)力學(xué)、藥效學(xué)和安全性譜).ClinEndocrinol(OxT).62，6237(2005).6.Laursen，T.etal.Long-termeffectsofcontinuoussubcutaneousinfusionversusdailysubcutaneousinjectionsofgrowthhormone(GH)ontheinsulin-likegrowthfactorsystem,insulinsensitivity,bodycomposition,andboneandlipoproteinmetabolisminGH-deficientadults(生長(zhǎng)激素(GH)的持續(xù)皮下輸注與每天皮下注射相比對(duì)缺乏GH的成人的類(lèi)胰島素生長(zhǎng)因子系統(tǒng)、胰島素敏感性、身體成分及骨和脂蛋白代謝的長(zhǎng)期影響).JClinEndocrinolMetab.86，12228(2001).7.Laursen，T.,Jorgensen,J,O.，Jakobsen,G.，Hansen,B.L.&Christiansen,J.S.Continuousinfusionversusdailyinjectionsofgrowthhormone(GH)for4weeksinGH-deficientpatients(缺乏GH的患者中的與每天注射相比的4周生長(zhǎng)激素(GH)連續(xù)輸注).JClinEndocrinolMetab.80，24108(1995).8.Muller-Newen,G.,Kohne,C.&Heinrich,P.C.Solublereceptorsforcytokinesandgrowthfactors(細(xì)胞因子和生長(zhǎng)因子的可溶性受體).[Review][58refs].InternationalArchivesofAllergy&Immunology.Ill,99106(1996).9.Baumann,G,,Amburn,K.D.&Buchanan,TATheeffectofcirculatinggrowthhormone-bindingproteinonmetabolicclearance,distribution,anddegradationofhumangro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NO:8。20.包含兩個(gè)多肽的同型二聚體，所述多肽包含SEQIDNO:9。21.包含兩個(gè)多肽的同型二聚體，所述多肽包含SEQIDNO:10。22.包含兩個(gè)多肽的同型二聚體，所述多肽包含SEQIDNO:11。23.包含兩個(gè)多肽的同型二聚體，所述多肽包含SEQIDNO:12。24.載體，其包含權(quán)利要求1所述的核酸分子。25.如權(quán)利要求24所述的載體，其中所述載體是表達(dá)載體。26.用權(quán)利要求25所述的載體轉(zhuǎn)染或轉(zhuǎn)化的細(xì)胞。27.如權(quán)利要求26所述的細(xì)胞，其中所述細(xì)胞是真核細(xì)胞。28.如權(quán)利要求26所述的細(xì)胞，其中所述細(xì)胞是原核細(xì)胞。29.包含權(quán)利要求7所述的多肽的藥物組合物，其含有賦形劑或載體。30.治療患有生長(zhǎng)激素缺乏癥的人個(gè)體的方法，包括進(jìn)行有效量的至少一種權(quán)利要求7所述多肽的給藥。31.如權(quán)利要求30所述的方法，其中所述多肽被靜脈內(nèi)給藥。32.如^i利要求30所述的方法，其中所述多肽^L皮下給藥。33.如^l利要求30所述的方法，其中所述多肽以2天的間隔給藥。34.如權(quán)利要求30所述的方法，其中所述多肽以每周的間隔給藥。35.如權(quán)利要求30所述的方法，其中所述多肽以2周的間隔給藥。36.如權(quán)利要求30所述的方法，其中所述多肽以每月的間隔給藥。37.如權(quán)利要求30所述的方法，其中所述生長(zhǎng)激素缺乏癥是兒童期生長(zhǎng)激素缺乏癥。38.如權(quán)利要求30所述的方法，其中所述生長(zhǎng)激素缺乏癥是成人生長(zhǎng)激素缺乏癥。全文摘要本申請(qǐng)公開(kāi)了體內(nèi)穩(wěn)定性和活性增加的生長(zhǎng)激素融合蛋白、編碼所述蛋白的核酸分子以及使用所述蛋白治療生長(zhǎng)激素缺乏癥的方法。文檔編號(hào)C07K14/61GK101679504SQ200880021473公開(kāi)日2010年3月24日申請(qǐng)日期2008年7月16日優(yōu)先權(quán)日2007年7月20日發(fā)明者喬恩·塞耶斯,彼得·阿蒂米克,理查德·羅斯申請(qǐng)人:埃斯特瑞恩有限公司