專(zhuān)利名稱(chēng)：：從北青龍衣中分離的新化合物及其制備方法及應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種新的化合物，該化合物是從中藥北青龍衣中提取分離得到的新物質(zhì)，具有抗腫瘤活性；本發(fā)明還涉及該化合物的制備方法；本發(fā)明還涉及該化合物在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：癌癥是威脅人類(lèi)生命的嚴(yán)重疾病，因此，抗癌藥物的研究一直是世界關(guān)注的熱點(diǎn)。中藥抗腫瘤在提高免疫力和降低致突變毒性方面比之化學(xué)藥物具有獨(dú)到之處，因此，從祖國(guó)醫(yī)藥寶庫(kù)中尋找療效確切的抗腫瘤中藥，明確其藥效物質(zhì)基礎(chǔ)，進(jìn)而開(kāi)發(fā)出高效低毒的新藥，成為中醫(yī)藥領(lǐng)域多年研究的焦點(diǎn)。北青龍衣為胡桃科植物核桃楸(/^7a/^Jfe77flfe力w^caMAXIM.)的未成熟果實(shí)，盛產(chǎn)于東北城郊各縣，在民間常用作治療各種癌癥和皮膚病以及各種疼痛的止痛藥。2001年北青龍衣被收載于黑龍江省藥材標(biāo)準(zhǔn)而成為一種中藥應(yīng)用于臨床和生產(chǎn)。北青龍衣的粗提物制劑治療胃癌、食管癌等消化道癌癥，有二十多年治療觀察的病例證明(李中原.青龍衣治療食管賁門(mén)癌120例臨床觀察.0^"莠#:唐，1988，(3):3)，其抗腫瘤作用是無(wú)庸置疑的。然而其藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究并沒(méi)有深入展開(kāi)，文獻(xiàn)報(bào)道多停留在其粗提物的藥理作用而缺乏其有效成分的抗腫瘤作用研究上(季宇彬，馬宏圖，楊波，汲晨鋒.北青龍衣不同提取部位的抗腫瘤作用研究.^享藥，2004，35(10):1145-1147),因而導(dǎo)致北青龍衣這一藥用資源開(kāi)發(fā)的嚴(yán)重滯后。我們?cè)卺槍?duì)北青龍衣抗腫瘤有效成分的研究中，經(jīng)過(guò)乙醇提取、色譜分離純化與細(xì)胞活性檢測(cè)相結(jié)合的方法，最終獲得了具有抗腫瘤活性的一個(gè)新的化合物，并采用質(zhì)譜與高分辨核磁共振技術(shù)，確定了該化合物的結(jié)構(gòu)。該化合物具有優(yōu)良的抗癌活性，可以與藥物賦形劑制成適合于臨床使用的抗腫瘤藥物，也可作為先導(dǎo)化合物，對(duì)其構(gòu)效關(guān)系進(jìn)行進(jìn)一步研究，合成一系列的抗癌藥物和藥物組合，更可以作為北青龍衣藥材及其制劑質(zhì)量控制的指標(biāo)成分，實(shí)現(xiàn)北青龍衣藥材及其制劑質(zhì)量的穩(wěn)定和可控，突破目前北青龍衣研究開(kāi)發(fā)的瓶頸。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是提供一種具有抗腫瘤活性、從中藥北青龍衣中提取分離得到的新化合物。該化合物的制備方法以及該化合物新用途。上述的目的通過(guò)以下的技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)從北青龍衣中分離的抗腫瘤新化合物，命名為青龍衣素A，該化合物的結(jié)構(gòu)式為所述的一種北青龍衣中抗腫瘤新化合物的制備，取新鮮的北青龍衣用乙醇浸泡提取，提取液濃縮，濃縮液加水分散，離心后取上清液，上清液通過(guò)大孔吸附樹(shù)脂，將吸附樹(shù)脂用乙醇洗脫，洗脫液蒸干后用甲醇溶解，過(guò)濾后注入葡聚糖凝膠，收集甲醇洗脫液，硅膠薄層定性，合并同一組分，得該化合物，純度98%。所述的一種北青龍衣中抗腫瘤新化合物的制備，所述的取新鮮的北青龍衣用乙醇浸泡提取，提取液濃縮，是將新鮮的北青龍衣用75%乙醇浸泡一周，提取三次，合并提取液，減壓濃縮至相對(duì)密度1.10—1.14(50。C)。5所述的一種北青龍衣中抗腫瘤新化合物的制備，所述的濃縮液加水分散，離心后取上清液，上清液通過(guò)大孔吸附樹(shù)脂，將吸附樹(shù)脂用乙醇洗脫，是指濃縮液加10倍量水分散，離心，取上清液，注入到已處理好的大孔吸附樹(shù)脂中，濃縮液與樹(shù)脂的比例為1:50，流速為10ml/min,分別以3倍柱床體積的水洗、5倍柱床體積的30%乙醇洗，收集30%乙醇洗脫液，將洗脫液減壓蒸干得到殘?jiān)?，殘?jiān)蒙倭考状既芙?，過(guò)濾后注入葡聚糖凝膠，收集甲醇洗脫液，硅膠薄層定性，合并同一組分，得該化合物，純度98%。青龍衣中抗腫瘤新化合物的制備，所述的濾液注入葡聚糖凝膠，收集甲醇洗脫液，是指濾液注入葡聚糖凝膠LH-20柱上，色譜柱直徑2cm，柱長(zhǎng)2m，上樣量為lg殘?jiān)?每次，以甲醇洗脫，收集甲醇洗脫液，硅膠薄層定性，合并同一組分，得該化合物，純度98%。所述的一種北青龍衣中抗腫瘤新化合物的制備，所述收集甲醇洗脫液，硅膠薄層定性，合并同一組分，是指洗脫液在硅膠板上進(jìn)行薄層層析，展開(kāi)劑為氯仿-甲醇，體積份數(shù)比為84:16,合并Rf值為0.3的單一組分。所述的一種北青龍衣中抗腫瘤新化合物的制備，合并Rf值為0.3的單一組分，用甲醇重結(jié)晶得該化合物，純度為9896以上。從北青龍衣中分離的新化合物在抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。這個(gè)技術(shù)方案有以下有益效果l.本發(fā)明提供了一種未報(bào)道過(guò)的具有抗腫瘤作用的化合物，通過(guò)對(duì)癌細(xì)胞抑制試驗(yàn)和藥效學(xué)試驗(yàn)，證明了該化合物具有優(yōu)良的抗癌活性，可與藥物賦形劑制成適合于臨床使用的抗腫瘤藥物。2采用本實(shí)驗(yàn)的篩選方法導(dǎo)致了從中藥北青龍衣中分離純化了該化合物，且純度達(dá)到98%以上。該化合物為從天然植物中提取分離，具有結(jié)構(gòu)新穎、作用獨(dú)特的優(yōu)點(diǎn)，一方面可與藥物賦形劑制成適合于臨床使用的抗腫瘤藥物，另一方面也可作為先導(dǎo)化合物，對(duì)其構(gòu)效關(guān)系進(jìn)行進(jìn)一步研究，合成一系列的抗癌藥物和藥物組合。3中藥及其制劑質(zhì)量的穩(wěn)定和可控一直是中藥現(xiàn)代化的瓶頸，該化合物為中藥北青龍衣的有效成分之一，可以作為北青龍衣藥材及其制劑質(zhì)量控制的指標(biāo)，在此基礎(chǔ)上建立以該成分為指標(biāo)的鑒別和含量測(cè)定項(xiàng)目的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)，實(shí)現(xiàn)北青龍衣藥材及其制劑質(zhì)量的穩(wěn)定和可控，該化合物將作為中藥對(duì)照品廣泛使用。附圖1為本發(fā)明化合物的力-'HCOSY譜中觀察到的結(jié)構(gòu)圖。附圖2為本發(fā)明化合物的HMBC譜中觀察到的結(jié)構(gòu)圖。本發(fā)明的具體實(shí)施例方式實(shí)施例l:從北青龍衣中分離的抗腫瘤新化合物，命名為青龍衣素A，該化合物的結(jié)構(gòu)式為所述的一種北青龍衣中抗腫瘤新化合物的制備，取新鮮的北青龍衣用乙醇浸泡提取，提取液濃縮，濃縮液加水分散，離心后取上清液，上清液通過(guò)大孔吸附樹(shù)脂，將吸附樹(shù)脂用乙醇洗脫，洗脫液蒸干后用甲醇溶解，過(guò)濾后注入葡聚糖凝膠，收集甲醇洗脫液，硅膠薄層定性，合并同一組分，得該化合物，純度98%。所述的一種北青龍衣中抗腫瘤新化合物的制備，所述的取新鮮的北青龍衣用乙醇浸泡提取，提取液濃縮，是將新鮮的北青龍衣用75%乙醇浸泡一周，提取三次，合并提取液，減壓濃縮至相對(duì)密度1.10-1.14(50。C)。所述的一種北青龍衣中抗腫瘤新化合物的制備，所述的濃縮液加水分散，離心后取上清液，上清液通過(guò)大孔吸附樹(shù)脂，將吸附樹(shù)脂用乙醇洗脫，是指濃縮液加10倍量水分散，離心，取上清液，注入到已處理好的大孔吸附樹(shù)脂中，濃縮液與樹(shù)脂的比例為1:50,流速為10ml/min，分別以3倍柱床體積的水洗、5倍柱床體積的30%乙醇洗，收集30%乙醇洗脫液，將洗脫液減壓蒸干得到殘?jiān)?，殘?jiān)蒙倭考状既芙猓^(guò)濾后注入葡聚糖凝膠，收集甲醇洗脫液，硅膠薄層定性，合并同一組分，得該化合物，純度98%。青龍衣中抗腫瘤新化合物的制備，所述的濾液注入葡聚糖凝膠，收集甲醇洗脫液，是指濾液注入葡聚糖凝膠LH-20柱上，色譜柱直徑2cm，柱長(zhǎng)2m,上樣量為lg殘?jiān)?每次，以甲醇洗脫，收集甲醇洗脫液，硅膠薄層定性，合并同一組分，得該化合物，純度98%。所述的一種北青龍衣中抗腫瘤新化合物的制備，所述收集甲醇洗脫液，硅膠薄層定性，合并同一組分，是指洗脫液在硅膠板上進(jìn)行薄層層析，展開(kāi)劑為氯仿-甲醇，體積份數(shù)比為84:16，合并Rf值為0.3的單一組分。所述的一種北青龍衣中抗腫瘤新化合物的制備，合并Rf值為0.3的單一組分，用甲醇重結(jié)晶得該化合物，純度為98%以上。從北青龍衣中分離的新化合物在抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。實(shí)施例2:化合物的制備材料來(lái)源北青龍衣為胡桃科植物核桃楸(/收7朋sife/wfe力i/w'caMAXIM.)的未成熟果實(shí)，于7月中旬采于黑龍江省五?？h，植物標(biāo)本樣本收藏于黑龍江省藥品檢驗(yàn)所中藥標(biāo)本館。提取和分離將新鮮的北青龍衣用75%乙醇浸泡一周，共提取三次，合并提取液，減壓濃縮，濃縮至相對(duì)密度l.10-1.14(50°C)的濃縮液，濃縮液加10倍量水分散，離心，取上清液，注入已處理好的DiaionHP-20大孔吸附樹(shù)脂中(濃縮液與樹(shù)脂的比例為1:50)，流速10ml/min，分別以3倍柱床體積的水洗、5倍柱床體積的30%乙醇洗，收集30%乙醇洗脫液，洗脫液減壓蒸干得到殘?jiān)?，殘?jiān)蒙倭考状既芙?，濾過(guò)，濾液注入葡聚糖凝膠LH-20柱上(色譜柱直徑2cm,柱長(zhǎng)2m，上樣量為lg殘?jiān)?每次)，以甲醇洗脫，流速1.0ml/min，洗脫液在硅膠板上進(jìn)行薄層層析，展開(kāi)劑為氯仿-甲醇(84:16),合并Rf值為0.3的單一組分，用甲醇重結(jié)晶得該化合物，純度為98%以上?；衔锏慕Y(jié)構(gòu)測(cè)定結(jié)構(gòu)測(cè)定用ShimadzuUV-160分光光度計(jì)測(cè)定紫外光譜，用JASCOFT/IR-300E(KBr壓片)分光光度計(jì)測(cè)定紅外光譜，用JASC0DIP-370digitalpolarimeter測(cè)定旋光度，用IXQmassanalyzer測(cè)定ESI-MS,用JEOLMstationspectrometer測(cè)定HR-FAB-MS，!H-和13C-NMR譜用JE0LECP-500spectrometer,TMS作內(nèi)標(biāo)?；衔锏睦砘再|(zhì)化合物為無(wú)定形粉末。IR(KBr)vnax:3414，2924,2857，2372,1618,1456，1391，1263，1116，618。UV(Me0H)hax(logs):209nm(3.52)，263nm(3.92)，344nm(4.41)。[a]D25-21。(c=0.1，Me0H)。'H-腿(500MHz,CD30D)和"C-NMR(125MHz,00300)譜數(shù)據(jù)見(jiàn)表l。ESI-MS(positive)邊/么379.1[M+Na];HR-FAB-MS(positive)379.1002[M+Na](計(jì)算值d9H,ANa379.1005)。化合物的力-NMR譜中顯示有五個(gè)芳香質(zhì)子，在S6.67(lH,dd，8.2，1.1)，S7.42(1H，dd，/=8.2，7.8)，S7.29(1H，dd，/=7.8，1.l)為一套ABC偶合系統(tǒng)，S6.53(1H,s)，57.06(1H，s)為一套對(duì)位氫取代的芳香系統(tǒng)，在高場(chǎng)區(qū)S2.50(1H，dd，/=12.4，4.2)，S2.57(1H，dd，/=12.4，1.8)為一個(gè)亞甲基和一個(gè)次甲基在S3.15(1H，d，/=4.2，1.8)鄰位偶合，其余三個(gè)質(zhì)子分別在S3.31(1H，m)和S2.68(2H，m)鄰位偶合，這些在'H」HCOSY譜中得到確證(見(jiàn)附圖l)。"C-NMR譜結(jié)合HMQC譜可知S208.7為羰基碳，在S48.9和S36.7分別為一個(gè)亞甲基和一個(gè)次甲基，S70.9為連有羥基的叔碳。HMBC譜中S2.50(H-3)，S2.57(H-3)的亞甲基與S208.7(C-l)羰基相關(guān)，S3.15(H-2)的次甲基與570.9(C-4)相關(guān)，可以推斷分子中含有四氫萘酮結(jié)構(gòu)。HMBC譜中S6.67(H-5)與S70.9(C-4)相關(guān)也證明了這一點(diǎn)，且表明四氫萘酮中的苯環(huán)為ABC偶合系統(tǒng)。另外一套芳香系統(tǒng)是連接在S70.9(C-4)上，這在HMBC譜中可以觀察到S7.06(H-5')與S70.9(C-4)的相關(guān)峰。在HMBC譜中S3.31(H-7，)與5116.1(C-2，)相關(guān)，S6,53(H-2，)與織3(C-7，)相關(guān)，表明S40.3(C-7')和S45.6(C-8')連接在另一個(gè)苯環(huán)上。其中52.68(H-8，)和48.9(C-2)遠(yuǎn)程相關(guān)，S3.31(H-7，)柳208.7(C-l)遠(yuǎn)程相關(guān)，表明C-7'連接在C-2上，這可以通過(guò)S3.31(H-7')與S36.7(C-3)，S2.50(H—3)，S2.57(H-3)與S40.3(C-7，)的遠(yuǎn)程相關(guān)得到確證。從苯環(huán)上的取代基看，四氫萘酮上有兩個(gè)羥基，分別位于C-4和C-8，另一個(gè)苯環(huán)上有兩個(gè)鄰位羥基，分子式中尚有兩個(gè)氧原子，結(jié)合"C-NMR譜(5176.9)數(shù)據(jù)，表明有一個(gè)羧基存在，它只能連接在C-8'上。因此，化合物的力-NMR和13C-NMR數(shù)據(jù)排布如表l。從HMBC譜(附圖2)中，該化合物的結(jié)構(gòu)得到了確證。表1化合物的^-NMR和13C-NMR數(shù)據(jù)No.SHSc120823.15dd(4.2，1.8)48,32.50dd(12.4，4.2)362.57dd(12.4，1.8)47056.67dd(8.2,1.1)11667.42dd(8.2，7.8)13877.29dd(7.8，1.1)1148163,911510155,1'128,2'6.53s1163'146.4'145.5'7.06s113.6'135.7'3.31m40.8'2.68(2H，m)45.9'176.實(shí)施例3:一種上述化合物在抗癌領(lǐng)域的應(yīng)用。抑制人HL-60白血病細(xì)胞，人Kato-III胃癌細(xì)胞和人A柳肺癌細(xì)胞的活性實(shí)驗(yàn)細(xì)胞培養(yǎng)人HL-60白血病細(xì)胞，人Kato-ni胃癌細(xì)胞和人&49肺癌細(xì)胞培養(yǎng)于RPMI1640培養(yǎng)基，補(bǔ)加10%FBS、L-glutamine、100U/ml青霉素以及100網(wǎng)/ml鏈霉素。取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞計(jì)數(shù)，以3xl04個(gè)/ml的濃度接種于96孔板，每孔180^1，在37。C、5%0)2的孵箱中培養(yǎng)24小時(shí)。細(xì)胞毒測(cè)定不同濃度(1-100jiM)的藥物以EtOH-H20(l:9)為溶劑溶解至20nl，空白組加入20nl的EtOH-H20(l:9)溶液，細(xì)胞繼續(xù)培養(yǎng)72小時(shí)，然后采用MTT法進(jìn)行測(cè)定，即培養(yǎng)后的細(xì)胞，加入l(HilMTT(5mg/ml)磷酸鹽緩沖液，37°C、5%C02培養(yǎng)箱中培養(yǎng)4小時(shí)，離心，取上清液150pi棄去，加入175filDMSO,振搖10分鐘后，用酶標(biāo)儀在550nm測(cè)定吸光值。根據(jù)下面的公式計(jì)算，繪圖得IC5。。抑制率(％)=(對(duì)照孔A值-空白孔A值)-(試驗(yàn)孔A值-空白孔A值)X100%對(duì)照孔A值-空白孔A值對(duì)照孔僅加細(xì)胞不加藥物空白孔僅加溶劑不加細(xì)胞和藥物實(shí)驗(yàn)孔加細(xì)胞再加藥物試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表2。結(jié)果表明，化合物對(duì)三種腫瘤細(xì)胞均有不同程度的抑制作用。表2.化合物抑制三種腫瘤細(xì)胞的IC5oOiM)值樣品HL-60KATOIIIA549CDDP化合物0.3±0.0618.0±8.43.3±0.8112.8±9.32.7±0.7132.5±16.4注每個(gè)數(shù)值為三次獨(dú)立實(shí)驗(yàn)的平均值i標(biāo)準(zhǔn)偏差藥效學(xué)試驗(yàn)試驗(yàn)動(dòng)物昆明種小鼠，體重18g-22g,雌雄兼用。藥物與試劑注射用生理鹽水(空白對(duì)照)，環(huán)磷酰胺(陽(yáng)性對(duì)照)，化合物。瘤株:小鼠肝癌H22。試驗(yàn)方法1、對(duì)小鼠瘤重及免疫器官指數(shù)的影響:小鼠隨機(jī)分組，雌雄各半。分別為化合物組，環(huán)磷酰胺組，生理鹽水組。各組小鼠于右前腋皮下常規(guī)接種H22瘤細(xì)胞懸液0.2ml(約lX106-2X106個(gè)細(xì)胞)，接種后各組ip給藥，連續(xù)7d。末次給藥后處死小鼠，稱(chēng)體重，稱(chēng)瘤塊、胸腺及脾臟質(zhì)量，計(jì)算抑瘤率、胸腺指數(shù)和脾指數(shù)。2、對(duì)H22小鼠生命延長(zhǎng)率的影響小鼠腹腔接種H22瘤細(xì)胞懸液0.2ml，每天觀察并記錄小鼠死亡情況。結(jié)果見(jiàn)下表<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>注與生理鹽水組比較，*P〈0.05;與環(huán)磷酰胺組比較，一〈0.05。本發(fā)明提供的化合物對(duì)H22生長(zhǎng)有明顯的抑制作用，并可明顯延長(zhǎng)小鼠生存時(shí)間，具有良好的抗腫瘤作用。權(quán)利要求1.一種從北青龍衣中分離的抗腫瘤新化合物，命名為青龍衣素A，其特征是該化合物的結(jié)構(gòu)式為2.—種權(quán)利要求1所述的一種北青龍衣中抗腫瘤新化合物的制備，其特征是取新鮮的北青龍衣用乙醇浸泡提取，提取液濃縮,濃縮液加水分散，離心后取上清液，上清液通過(guò)大孔吸附樹(shù)脂，將吸附樹(shù)脂用乙醇洗脫，洗脫液蒸干后用甲醇溶解，過(guò)濾后注入葡聚糖凝膠，收集甲醇洗脫液，硅膠薄層定性，合并同一組分，得該化合物，純度98%。3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種北青龍衣中抗腫瘤新化合物的制備，其特征是所述的取新鮮的北青龍衣用乙醇浸泡提取，提取液濃縮，是將新鮮的北青龍衣用75%乙醇浸泡一周，提取三次，合并提取液，減壓濃縮至相對(duì)密度1.10-1.14(50°C)。4.根據(jù)權(quán)利要求2或3所述的一種北青龍衣中抗腫瘤新化合物的制備，其特征是所述的濃縮液加水分散，離心后取上清液，上清液通過(guò)大孔吸附樹(shù)脂，將吸附樹(shù)脂用乙醇洗脫，是指濃縮液加io倍量水分散，離心，取上清液，注入到已處理好的大孔吸附樹(shù)脂中，濃縮液與樹(shù)脂的比例為l:50，流速為10ml/min，分別以3倍柱床體積的水洗、5倍柱床體積的30%乙醇洗，收集30%乙醇洗脫液，將洗脫液減壓蒸干得到殘?jiān)?，殘?jiān)蒙倭考状既芙?，過(guò)濾后注入葡聚糖凝膠，收集甲醇洗脫液，硅膠薄層定性，合并同一組分，得該化合物，純度98%。5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種北青龍衣中抗腫瘤新化合物的制備，其特征是所述的濾液注入葡聚糖凝膠，收集甲醇洗脫液，是指濾液注入葡聚糖凝膠LH-20柱上，色譜柱直徑2cm，柱長(zhǎng)2m，上樣量為lg殘?jiān)?每次，以甲醇洗脫，收集甲醇洗脫液，硅膠薄層定性，合并同一組分，得該化合物，純度98%。6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種北青龍衣中抗腫瘤新化合物的制備，其特征是所述收集甲醇洗脫液，硅膠薄層定性，合并同一組分，是指洗脫液在硅膠板上進(jìn)行薄層層析，展開(kāi)劑為氯仿-甲醇，體積份數(shù)比為84:16，合并Rf值為0.3的單一組分。7.根據(jù)權(quán)利要求2或3或4或5或6所述的一種北青龍衣中抗腫瘤新化合物的制備，其特征是合并Rf值為0.3的單一組分，用甲醇重結(jié)晶得該化合物，純度為98%以上。8.—種從北青龍衣中分離的新化合物在抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。全文摘要從北青龍衣中分離的新化合物及其制備方法及應(yīng)用。采用乙醇提取、色譜分離純化與細(xì)胞活性檢測(cè)相結(jié)合的方法，從北青龍衣中分離了一種從未報(bào)道過(guò)的抗腫瘤作用新化合物，并采用質(zhì)譜與高分辨核磁共振技術(shù)確定了該化合物的結(jié)構(gòu)。所述的新化合物的結(jié)構(gòu)式為右式(Ⅰ)，本發(fā)明應(yīng)用于醫(yī)學(xué)領(lǐng)域。文檔編號(hào)C07C62/38GK101468950SQ20071014496公開(kāi)日2009年7月1日申請(qǐng)日期2007年12月28日優(yōu)先權(quán)日2007年12月28日發(fā)明者劉麗娟,巍李申請(qǐng)人:黑龍江大學(xué)