專利名稱：制備可可多酚提濃物的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及獲得富含可可多酚的可可產(chǎn)品的方法，其中，原材料是未發(fā)酵的可可豆。更具體地說，本發(fā)明披露了用于從未發(fā)酵的可可豆制備液態(tài)和粉狀的可可多酚提濃物的方法。
背景技術(shù)：
目前人們極為關(guān)注可可多酚，不僅由于它們對香味的貢獻(xiàn)，而且由于它們的抗氧化活性以及可能的有益于健康的作用。在新鮮未發(fā)酵并經(jīng)脫脂和干燥的可可豆中的多酚總含量可以在12wt％(重量比)至20wt％的范圍內(nèi)變化。存在的主要多酚化合物是諸如(+)-兒茶素、(-)-表兒茶素的單體類黃酮化合物，以及諸如原花青素類的低聚類黃酮化合物，其一半是二聚體(B1-B8)。其它已鑒定的化合物是槲皮素和槲皮素糖苷、槲皮甙、木犀草素、芹菜素、香豆酸、咖啡酸(cafeic acid)、綠原酸等等。
制備可可涉及發(fā)酵，在發(fā)酵期間會發(fā)生許多生化反應(yīng)以產(chǎn)生巧克力顏色和香味的成分和前體。除了別的，發(fā)酵過程還降低可可的澀味、酸味、以及苦味。
在發(fā)酵過程中，新鮮的可可豆堆積成堆或堆積在木箱中，通常為5天。發(fā)酵可以分成兩個主要階段，厭氧發(fā)酵和需氧發(fā)酵。在厭氧發(fā)酵期間形成可可香味的前體。來自果肉的糖被分解成還原糖、果糖以及葡萄糖，而蛋白質(zhì)被分解成肽和游離氨基酸。這些產(chǎn)物形成梅拉德反應(yīng)(Maillard reaction)的前體，在該反應(yīng)中，在干燥和烘烤可可豆期間產(chǎn)生可可和巧克力特有的香味。厭氧發(fā)酵使得酶促褐變(一種通過多酚氧化酶(PPO)進(jìn)行的反應(yīng))的條件最優(yōu)化。通常，需氧發(fā)酵在發(fā)酵的第二天之后開始。在此階段，PPO催化多酚氧化成鄰醌，其鄰醌是高度活性的化合物。鄰醌一旦形成即經(jīng)歷自發(fā)聚合以產(chǎn)生高分子量化合物或棕色顏料(黑色素)。這些黑色素又可以和氨基酸和蛋白質(zhì)進(jìn)行反應(yīng)，加重了棕色。隨著聚合度的增加，這些高分子量縮聚物變得越來越不可溶。此外，它們比它們的前體具有更小的生物利用率。需氧發(fā)酵期間的條件對于和PPO的反應(yīng)很理想，而在干燥期間的高耗氧量可進(jìn)一步促進(jìn)發(fā)酵。
許多研究已集中于抑制或阻止PPO在食品中的活性。這些年來已開發(fā)出各種技術(shù)來抑制這些不希望的酶活性。可以應(yīng)用多種這樣的技術(shù)來防止酶促褐變。例如，在題目為“The manufacture of cocoapolyphenols as healthy supplements in food products”的論文中，Kattenberg等人描述了利用微波加熱來阻止未發(fā)酵可可豆中的PPO活性。然而，使用微波是昂貴的，因?yàn)樾枰獙ｉT的設(shè)備。此外，在利用微波處理時，很難控制未發(fā)酵可可豆內(nèi)的溫度。
未發(fā)酵可可豆既不具有和已發(fā)酵可可豆相同的感官特性，又不具有和已發(fā)酵可可豆相同的多酚特性。未發(fā)酵可可豆具有強(qiáng)烈的苦味和澀味，并且?guī)缀鯖]有明顯的巧克力香味。
在可可處理期間，在最初未發(fā)酵的原料可可豆中存在的黃酮醇(單體)的含量在很大程度上取決于收獲后的處理和加工技術(shù)。在可可粉和巧克力生產(chǎn)中的發(fā)酵和堿化步驟均可以大大降低單體的含量。在發(fā)酵期間，可可中多酚的總量降低到它們最初值的30％，而(-)-表兒茶素(可可多酚氧化酶(PPO)的主要底物)降低了90％，同時兒茶素的含量成比例增加。
發(fā)酵和干燥過程可改變多酚化合物的含量和組成。被發(fā)酵的可可豆包含較少量的低分子量酚和較高含量的縮合多酚。縮合多酚與蛋白-酚相互作用有關(guān)，并且可以促使酚和可可蛋白具有較低的可消化性和較小的生理價值。
研究已表明，可可多酚可增加LDL-C(低密度脂蛋白膽固醇)氧化的抗性和血漿的抗氧化能力，調(diào)節(jié)血小板活性，增加一氧化一氮的合成和血管舒張，調(diào)節(jié)類二十烷酸的合成，防止過二亞硝酸鹽(peroxynitrite)的傷害，以及調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)。
在我們的飲食中最豐富的多酚并不一定是最有益的，這是因?yàn)樗鼈冊谀c中吸收不良并快速排泄，或者因?yàn)樗鼈兊拇x物具有較低的內(nèi)在活性。單體黃酮醇類比聚合的原花色素能更好地被吸收。若干研究表明，原花青素在胃中不被吸收，所以它們的作用限于腸。另外，單體黃酮醇類(例如兒茶素和表兒茶素)在有關(guān)血漿的體外和體內(nèi)研究中，具有更大的抗氧化活性。

發(fā)明內(nèi)容
因此很明顯，需要簡單和經(jīng)濟(jì)的方法，借此可以從未發(fā)酵可可豆提取多酚，其中，多酚未經(jīng)歷由多酚氧化酶催化的聚合作用。
本發(fā)明提供了一種方法，用這種方法可獲得可可多酚提濃物，該方法包括以下步驟a)使未發(fā)酵的可可豆在85-100℃的水中經(jīng)過3至15分鐘的漂白步驟，以產(chǎn)生多酚氧化酶活性降低的未發(fā)酵可可豆；b)在低于85℃的溫度下干燥多酚氧化酶活性降低的未發(fā)酵可可豆，以獲得水分含量不大于15wt％的干燥的未發(fā)酵可可豆；
c)使經(jīng)干燥的未發(fā)酵可可豆經(jīng)過粒徑減小步驟，以獲得干燥的未發(fā)酵可可豆中間產(chǎn)物(中間體)，從而至少99wt％的中間產(chǎn)物具有小于或等于300μm的粒徑；d)從干燥的未發(fā)酵可可豆中間產(chǎn)物提取多酚以制得可可多酚提取物以及被提取過的固體；e)濃縮可可多酚提取物以產(chǎn)生可可多酚提濃物，其中，存在的多酚濃度至少為10wt％；以及其中，該方法進(jìn)一步包括在步驟d)之前進(jìn)行的脫脂步驟。
使用術(shù)語未發(fā)酵時，它是指從豆莢中剝出后最長5小時的可可豆。更優(yōu)選地，從豆莢中剝出后小于2小時的可可豆。發(fā)酵是一種從豆莢中剝出可可豆以后在溫和并且潮濕的條件下自然發(fā)生的過程。由于是自然過程，它相對于時間緩慢地進(jìn)行，因此從豆莢中剝出僅5小時的可可豆基本上是未發(fā)酵的。從商業(yè)角度看，很難找到這樣的可可豆的來源。
在本發(fā)明的一個具體實(shí)施方式
中，可以優(yōu)選地在步驟a)之前包括一步驟，以便維持未發(fā)酵可可豆的未發(fā)酵狀態(tài)。這樣的步驟可以包括，例如，將未發(fā)酵可可豆浸沒在水和抗壞血酸的溶液中。
步驟a)包括漂白步驟，它對于確保多酚發(fā)生最少的聚合、從而保持在未發(fā)酵的可可豆中存在高含量的單體多酚是重要的。漂白步驟在85-100℃溫度范圍的水中進(jìn)行。該溫度可確保多酚氧化酶變性，并因此失活。漂白步驟應(yīng)持續(xù)3分鐘至15分鐘范圍的時間段。如果該步驟的持續(xù)時間更長，那么可能發(fā)生其它不希望的非酶促褐變反應(yīng)，例如梅拉德反應(yīng)。
在漂白步驟中使用水不是傳統(tǒng)做法，因?yàn)橥ǔ５淖鞣ㄊ潜苊馐刮窗l(fā)酵可可豆?jié)駶?，因?yàn)榧尤氲娜魏嗡直仨氃谄浜蟮牟襟E中除去。然而，本申請人發(fā)現(xiàn)，引入使用水的漂白步驟可產(chǎn)生有益的結(jié)果，其中可以回收在最初未發(fā)酵可可豆中存在的高比例多酚。
在步驟a)以后，干燥多酚氧化酶活性降低的的未發(fā)酵可可豆。
新鮮未發(fā)酵可可豆中初始水分含量在45wt％和55wt％之間。干燥之后，最終的水分含量應(yīng)小于15wt％，優(yōu)選小于10wt％。
在本發(fā)明的一個具體實(shí)施方式
中，在收獲時天氣相對干燥的地區(qū)，多酚氧化酶活性降低的未發(fā)酵可可豆是在陽光下干燥。日照期間，將可可豆在席子、盤子、或平臺上鋪成約100mm厚的一層。不時地耙動可可豆，并在夜晚或下雨時堆積起來并加以保護(hù)。如在中美洲和南美洲常見的，淺盤可以全部是帶有頂棚的或在輪子上的臺面。這些淺盤在夜晚被推回去，以致若干淺盤可以被推到頂棚下面，一個在另一個之上，以節(jié)省空間。在西非，將可可豆鋪在任何合適的水平表面上(即，集中的平臺或聚乙烯板)。優(yōu)選的方法(其在加納是常見的)是將可可豆鋪在用劈開的竹子制成的席子上，然后將其放置在低木架上。在下雨時可以將這些席子卷起來以保護(hù)可可豆。這種方法具有若干優(yōu)點(diǎn)，它更容易揀選可可豆以便除去有缺陷的可可豆以及異物。另外，與在地面干燥的可可豆相比，存在更小的污染風(fēng)險。通常需要約一周的陽光天氣來使可可豆干燥至7wt％至8wt％的水分含量(其是預(yù)防儲存期間的霉菌所要求的)。
可替換地，在步驟b)中，多酚氧化酶活性降低的未發(fā)酵可可豆可以利用熱風(fēng)式干燥機(jī)(即，間歇干燥機(jī)、間歇式內(nèi)部再循環(huán)干燥機(jī)、混流式干燥機(jī)以及橫流干燥機(jī))、非熱風(fēng)式干燥機(jī)、熱風(fēng)式干燥機(jī)和非熱風(fēng)式干燥機(jī)的結(jié)合、商用谷物干燥機(jī)(像麥芽干燥機(jī))、間歇式流化床干燥機(jī)、在常壓或真空下的接觸式干燥器(即，真空淺盤(vaccum tray)、真空帶、平板、薄膜、輥筒，旋轉(zhuǎn)分批、水平攪動、間接旋轉(zhuǎn)垂直攪動)、或高頻干燥機(jī)(即，射頻和微波)來干燥。
在步驟b)中，可可豆中的溫度應(yīng)不超過85℃，并且應(yīng)優(yōu)選低于70℃，更優(yōu)選低于50℃。這是因?yàn)榭煽啥喾拥木酆显诟哂?0℃的溫度下發(fā)生。因此，在干燥過程中必須保持低溫。當(dāng)使用高頻干燥機(jī)時，必須選擇適當(dāng)?shù)念l率以避免聚合作用。例如，在射頻干燥機(jī)中，15MHz至35MHz之間的頻率是合適的，而在微波干燥機(jī)的情況下，可以使用900MHz和2300MHz之間的頻率。
在步驟b)中得到的經(jīng)干燥的未發(fā)酵可可豆中，保存了高比例的初始多酚含量。這是由PPO失活和溫和的條件雙重因素所致，其抑制多酚的降解和聚合。這些經(jīng)干燥的未發(fā)酵可可豆的主要特性是它們的強(qiáng)烈的紫色，其反映了多酚的穩(wěn)定。
可以利用幾種方法中的一種來測量樣品中的多酚含量。使用的最常見的方法是福林-喬卡梯奧法(Folin ciocalteau method)，該方法給出以wt％(重量百分比)表示的結(jié)果(Singleton等人，1999)。另外，用于定性和定量多酚性質(zhì)的其它方法也可以使用，例如高壓液相色譜(HPLC)系統(tǒng)和質(zhì)譜儀、LC-MS、HPLC和紫外檢測聯(lián)用、超臨界流體萃取(SFE)、借助二極管陣列分光光度法并利用雙檢測波長在線檢測的HPLC、質(zhì)譜分析法(HPLC-DAS-MS)以及LC-NMR。
可選地，然后可以將在步驟b)獲得的經(jīng)干燥的未發(fā)酵可可豆進(jìn)行破碎。此外，可以對干燥的可可豆進(jìn)行風(fēng)選處理以便分離外殼。這給出兩種產(chǎn)物，一種帶有外殼而另一種沒有外殼。在可可粉產(chǎn)業(yè)，用于這些過程的技術(shù)目前均可獲得。在具有外殼的產(chǎn)物(即，經(jīng)干燥的具有外殼的未發(fā)酵可可小片)中的多酚含量在3wt％至10wt％的范圍內(nèi)，而在沒有外殼的產(chǎn)物(即，經(jīng)干燥的沒有外殼的未發(fā)酵可可小片)中的多酚含量在4wt％至11wt％的范圍內(nèi)。
在步驟b)之后，使獲得的干燥未發(fā)酵可可豆經(jīng)過粒徑減小步驟c)。引入粒徑減小步驟是必要的，以有利于在后面提取步驟d)中的多酚的提取。在步驟c)之后，產(chǎn)生的干燥未發(fā)酵可可豆中間產(chǎn)物中至少99wt％具有小于或等于300μm的粒徑，優(yōu)選小于100μm，更優(yōu)選小于80μm，例如40μm。
在本發(fā)明的其中在步驟c)之前沒有對步驟b)的干燥未發(fā)酵可可豆進(jìn)行脫脂的具體實(shí)施方式
中，優(yōu)選步驟c)采用低溫研磨機(jī)。
低溫研磨機(jī)是獨(dú)特的，因?yàn)楫?dāng)溫度超過脂肪的熔點(diǎn)溫度時，其它研磨機(jī)將被經(jīng)干燥的未發(fā)酵可可豆所含有的脂肪所阻塞?？煽赏ǔ：?0％至55％之間的脂肪，其取決于可可的品種和類型。這種通常稱作可可脂的脂肪具有30℃至37℃之間的熔點(diǎn)。現(xiàn)有的磨碎技術(shù)在此溫度范圍內(nèi)工作，使機(jī)器內(nèi)的產(chǎn)物熔化而使得操作極其困難。氮或碳酸液體可以用作冷凍劑以降低磨碎過程的溫度。磨碎全部可可豆的適宜溫度應(yīng)當(dāng)?shù)陀?℃，優(yōu)選低于-5℃，更優(yōu)選低于-10℃，例如-15℃。目前商用的低溫研磨機(jī)可以用于此步驟。然而，有幾種研磨機(jī)可以適用于初步的低溫步驟，例如針磨機(jī)、切碎機(jī)、分級-分離研磨機(jī)、錘磨機(jī)等。低溫研磨機(jī)的其它優(yōu)點(diǎn)是，低溫可保持多酚的穩(wěn)定性，還可借助惰性氣氛避免氧化。這些積極的效果不僅適用于多酚而且適用于脂肪，脂肪對高溫和氧非常敏感。產(chǎn)生的經(jīng)干燥的未發(fā)酵可可豆中間產(chǎn)物中的多酚總含量在4wt％至11wt％的范圍內(nèi)。
在步驟c)之前已引入脫脂步驟的情況下，優(yōu)選在顆粒減小步驟使用研磨分離機(jī)。還有其它適用的研磨系統(tǒng)，例如，針磨機(jī)。在此步驟中也可以包括最后的分級階段，以產(chǎn)生其中至少99wt％具有小于120μm的粒徑的干燥的未發(fā)酵可可豆中間產(chǎn)物。在使用研磨分離機(jī)的情況下，最終顆粒大小是通過調(diào)節(jié)分離器速度和進(jìn)料流量來達(dá)到。在此具體實(shí)施方式
中，步驟c)的產(chǎn)物的多酚總含量在5wt％至23wt％的范圍內(nèi)。
本發(fā)明的方法包括從未發(fā)酵可可豆除去脂肪的脫脂步驟。其中包括脫脂步驟的階段可以變化，但它必須在提取步驟d)之前的階段進(jìn)行。在本發(fā)明的一個具體實(shí)施方式
中，脫脂步驟在步驟b)之后、但在步驟c)之前進(jìn)行。正是在此具體實(shí)施方式
中，步驟c)優(yōu)選采用研磨分離機(jī)?？商鎿Q地，在本發(fā)明的另一個具體實(shí)施方式
中，脫脂步驟是在步驟c)之后、但在步驟d)之前進(jìn)行。在這兩種情況下，可以用幾種技術(shù)來降低經(jīng)干燥的未發(fā)酵可可豆的脂肪含量，例如，壓榨、溶劑提取或超臨界流體萃取。
在本發(fā)明的一個具體實(shí)施方式
中，脫脂步驟涉及利用螺旋式壓榨機(jī)或螺旋壓床來壓榨經(jīng)干燥的未發(fā)酵可可豆或中間產(chǎn)物。優(yōu)選地，使用在高達(dá)50MPa的壓力下進(jìn)行壓榨的螺旋式壓榨機(jī)。得到的脫脂產(chǎn)物具有不大于15wt％的脂含量。脫脂過程提供了壓濾餅以及之后除去的脂肪。
螺旋式壓榨機(jī)的一個實(shí)例包括在圓筒形殼體(桶)內(nèi)旋轉(zhuǎn)的螺桿(或蝸桿)。要壓榨的物料加在螺桿和桶之間，然后被在平行于軸的方向旋轉(zhuǎn)的螺桿推進(jìn)。螺桿以及其軸的構(gòu)造使得當(dāng)物料向前移動時被向著圓筒的出料端逐漸壓縮。逐漸增加的壓力使油排出，其通過設(shè)置在桶周邊的狹槽流出壓榨機(jī)，同時壓濾餅繼續(xù)沿軸的方向上向著安裝在壓榨機(jī)的另一端的出料口移動。螺旋式壓榨機(jī)通常用在含油種子工業(yè)。螺旋式壓榨機(jī)的主要優(yōu)點(diǎn)在于可以除去較大量的脂肪，例如，使壓濾餅的脂肪含量降到約8wt％至9wt％。
壓榨過程中的溫度必須低于85℃，優(yōu)選在60℃至75℃之間。所獲得的脫脂中間產(chǎn)物中的脂肪含量低于20wt％，并且優(yōu)選低于15wt％，例如10wt％。在這些脫脂中間產(chǎn)物中多酚的總含量在5wt％至15％之間。
可替換地，可以采用溶劑提取，以便降低脂肪含量。該方法可以直接用于經(jīng)干燥的未發(fā)酵可可豆中間產(chǎn)物或用于通過壓榨在步驟b)或c)獲得的產(chǎn)物而獲得的脫脂中間產(chǎn)物。優(yōu)選對通過壓榨在步驟b)或c)中獲得的產(chǎn)物而獲得的脫脂中間產(chǎn)物進(jìn)行溶劑提取?？梢允褂靡淹?、乙醚、乙酸乙酯或其它適用于食品工業(yè)的非極性溶劑作為提取脂肪的溶劑。特別優(yōu)選已烷。在溶劑提取后，最終的脂肪含量應(yīng)低于10wt％，低于5wt％，優(yōu)選低于1wt％，例如，0.5wt％。在溶劑提取后，多酚的總含量在9wt％至23wt％的范圍內(nèi)。在溶劑提取后，必須除去殘余溶劑。
在本發(fā)明的一種優(yōu)選具體實(shí)施方式
中，可以采用超臨界CO2和/或諸如丁烷或丙烷的其它超臨界氣體代替有機(jī)溶劑來提取可可脂。雖然此工藝更昂貴，但它避免在粉末中的溶劑殘余以及廢物處理的問題。在食品加工中使用超臨界CO2而不用有機(jī)溶劑的優(yōu)點(diǎn)在于，它在最終產(chǎn)物中沒有殘余物，并且不會熱損壞產(chǎn)物中的多酚。在超臨界CO2萃取之后，最終的脂肪含量應(yīng)低于10wt％，優(yōu)選低于5wt％，以及更優(yōu)選低于2wt％。
本發(fā)明的方法的重要步驟是從步驟c)的干燥未發(fā)酵可可豆中間產(chǎn)物提取天然存在的多酚。
優(yōu)選利用溶劑通過固體-液體提取來從干燥未發(fā)酵可可豆中間產(chǎn)物提取多酚。獲得的產(chǎn)物是可可多酚提取物。
為了提取可可多酚，可以采用若干種溶劑，優(yōu)選由CodexAlimentarius認(rèn)可的用于人消費(fèi)的極性溶劑。更優(yōu)選地，使用水、乙醇或兩者的混合物。
干燥未發(fā)酵可可豆中間產(chǎn)物與溶劑的副產(chǎn)物/溶劑比以重量計(jì)可以在1∶5至1∶30的范圍內(nèi)，例如1/10重量。提取溫度優(yōu)選低于75℃，例如在20℃至70℃之間，以避免在此過程期間的多酚聚合和氧化。在提取中，必須攪拌副產(chǎn)物和溶劑的混合物。提取步驟在反應(yīng)器中進(jìn)行。在這方面，必須使用用于食品工業(yè)的適當(dāng)設(shè)備，例如，由不銹鋼制成的316L反應(yīng)器、或甚至由不銹鋼制成的304L反應(yīng)器。
本發(fā)明的方法可以包括用于從可溶介質(zhì)提取多酚的副產(chǎn)物的初步增溶。
所需要的提取時間隨工藝的效率而變化。用于提取步驟的合適的時間是例如大于1小時，例如在2小時至5小時之間。在可能的情況下，最好利用多級間斷提取來從同一樣品中提取多酚。例如，可以在一個步驟中提取樣品，然后通過離心或過濾使液體(富含多酚)和經(jīng)提取的固體分離。在提取過的固體中的水分含量通常在55wt％至70wt％之間?？蛇x地，可以在先前描述的相同條件下對經(jīng)提取的固體重復(fù)該操作3或4次，其取決于所希望的提取產(chǎn)率。優(yōu)選地，進(jìn)行不超過4次的提取，因?yàn)閺某杀旧现v產(chǎn)率百分?jǐn)?shù)的增加是不合算的。
在本發(fā)明的另一個具體實(shí)施方式
中，固-液分離涉及離心作用。應(yīng)使用適當(dāng)?shù)碾x心設(shè)備，例如，用于分離0留在干燥未發(fā)酵可可豆中間產(chǎn)物中的油和水的潷析器。在市場上可獲得工業(yè)用潷析器。離心步驟一般產(chǎn)生大于1wt％的可溶提取物，優(yōu)選大于3wt％，更優(yōu)選大于5wt％。
作為另一種可采用的方法，步驟d)可以采用借助不銹鋼紙或纖維素塑料過濾器的過濾，過濾器具有10μm至150μm的孔徑，優(yōu)選在2μm至30μm的范圍內(nèi)。適當(dāng)?shù)倪^濾器是可從Bachiller S.A.(西班牙)獲得的Nutcha型過濾器。
在獲得的可可多酚提取物中的多酚含量在10％至30wt％的范圍內(nèi)，例如25wt％。獲得的可可多酚提取物呈液態(tài)。
在本發(fā)明的另一個具體實(shí)施方式
中，在第二提取步驟中可以使用離心法或可選的微孔過濾法(MF)，以便從在以上詳述的提取步驟中獲得的可可多酚提取物中進(jìn)一步除去溶解的固體。為了達(dá)到此目的，優(yōu)選離心法。
通過潷析器的離心法是基于兩種物料的分離，其中，驅(qū)動機(jī)理起因于兩種物料比重的差異以及來自角速度變化的外加力。盤型離心機(jī)達(dá)到10,000G。借助這種技術(shù)，可以從可可多酚提取物中除去粒徑大于0.45μm的溶解的固體。這些種類的離心機(jī)也稱作澄清器或脫懸浮器(deslunger)。這樣的離心機(jī)可以商業(yè)獲得(即，WestfaliaSeparator公司，Alfa Laval公司)。
微孔過濾可以作為交叉流分離(cross-flow separation)過程以及作為常規(guī)的死端過濾來進(jìn)行。在本發(fā)明中優(yōu)選使用利用交叉流原理的微孔過濾。在此方法中，固體、細(xì)菌以及脂肪小球通常是僅有的被除去的物質(zhì)。微孔過濾通常在低于207kPa(30psi)的壓力下進(jìn)行。
有若干種膜可用于利用微孔過濾來澄清在步驟d)獲得的可可多酚提取物。例如，可以使用金屬膜。這些膜具有穩(wěn)定的多孔基體，被壓縮和燒結(jié)。優(yōu)選地，這些膜必須具有精確的泡點(diǎn)(bubble point)控制、孔徑尺寸(通過ASTM-E-128測得)、均勻的滲透性、均勻的孔隙度0、高效、雙向流動、以及應(yīng)該由316L不銹鋼、鎳、英科耐爾(inconel)、哈氏合金(hastelloy)、以及鈦制成。這樣的膜可以商業(yè)上從Graver Technologies(即，Scepter)和Atech Innovations GmbH等獲得。
可用于微孔過濾的其它種類的膜是陶瓷膜。陶瓷膜是管狀和多通道的。它們通常由純α-Al2O3以及制備自α-Al2O3、TiO2或ZrO2的多孔膜層來制備。這樣的膜是化學(xué)穩(wěn)定的(pH 0-14，使用有機(jī)溶劑)、熱穩(wěn)定的(＞100℃，蒸氣滅菌)、機(jī)械穩(wěn)定的以及化學(xué)惰性的。這些種類的膜的例子有Atech Innovations GmbH，Pall公司(即Membralox)等制備的膜。
在微孔過濾中也可以使用聚合物膜。這樣的膜通常由聚丙烯、聚偏二氟乙烯(polyvinylidene fluoride)、聚四氟乙烯、以及聚丙烯腈制成。適宜的膜包括由Koch(即，MFK-618、MFK-601)、Alfa Laval等制備的膜。
在步驟d)制得的可可多酚提取物含有很高比例的存在于未發(fā)酵可可豆中的多酚，例如，至少80wt％。然而，提取物非常稀。因而在本發(fā)明的方法中必需包括濃縮步驟(步驟e)。包括此步驟的目的是除去所有過量的液體或溶劑以產(chǎn)生可可多酚提濃物。
在本發(fā)明的優(yōu)選具體實(shí)施方式
中，利用超濾作用對可可多酚提取物進(jìn)行濃縮。使用超濾作用(UF)是為了從可可多酚提取物中分離出最大的分子。UF涉及利用較大孔的膜以及相當(dāng)?shù)偷膲毫?。鹽、糖、有機(jī)酸、較小的肽以及多酚可以通過，而蛋白質(zhì)、脂肪、以及多糖則被棄除。為了這個可選方案，可以使用UF。這種系統(tǒng)應(yīng)能夠分離大于10,000道爾頓的分子(即，膜直徑在0.05μm至0.1μm之間)。
UF膜通常由陶瓷、纖維素塑料(sellulosics)、聚砜、以及聚偏二氟乙烯等制成。例如，管狀、空心纖維、平板、以及螺旋形膜可在商業(yè)上獲得。這樣的膜的實(shí)例是由Koch公司(即，HFM-116/100、HFM-180/513、HFK-618)、Alfa Laval公司、Inge AG公司(即，Dizzer系列)等提供的膜。這樣的膜在70kPa至700kPa(20psi至100psi)之間的壓力范圍內(nèi)工作。
在本發(fā)明描述的UF中，實(shí)際上所有多酚通過膜，而僅小部分留在截留物中。相對于可可多酚提取物或凈可可多酚提取物中的溶解固體總量，在截留物中的多酚損失應(yīng)不高于10wt％，優(yōu)選低于5wt％。
在UF操作之后，在透過液的總?cè)芙夤腆w中多酚的濃度應(yīng)高達(dá)30wt％，優(yōu)選大于40wt％，例如45wt％。
可選地，在先前的UF步驟中獲得的透過液可以通過非常薄的納濾(NF)膜，以便從溶液中除去溶解的礦物質(zhì)。NF還允許通過除去水來濃縮溶液。NF并不是像反滲透(RO)那樣精細(xì)的分離方法，它使用稍微更敞開的膜。然而，用于RO的膜也可以用于此步驟。NF允許小的離子通過，同時拒絕較大的離子以及絕大多數(shù)無機(jī)成分通過，其取決于分子的尺寸和形狀。在本發(fā)明中，使用的NF優(yōu)選具有大于50道爾頓的截留分子量。
NF膜通常由薄膜復(fù)合材料以及纖維素塑料制成。NF膜可以是空心纖維或旋管。這種膜的例子有由Koch公司(即，TFC-RO、TFC-S、TFC-SR3、SelFRO系列)、PCI Membrane Systems公司(即，B1型、C10型、AFC99)、Alfa Laval公司等提供的膜。用于NF的膜在0.001μm至0.01μm之間的范圍內(nèi)工作。本發(fā)明中描述的NF在2000kPa至5000kPa(300psi至700psi)之間進(jìn)行操作。
在描述的NF中，實(shí)際上所有多酚留在截留物中。相對于存在于在UF步驟之后獲得的透過液中的總?cè)芙夤腆w，從截留物損失的多酚應(yīng)不大于10wt％，優(yōu)選小于5wt％。
在NF操作之后，截留物的總?cè)芙夤腆w中的多酚的濃度在高于45wt％的范圍內(nèi)，優(yōu)選大于50wt％，例如55wt％。
在NF操作中重要的是除去了水。因此，在截留物中溶解固體總量高于在最初UF透過液中的溶解固體總量。在透過液中的溶解固體總量優(yōu)選大于5wt％，更優(yōu)選大于10wt％，例如高達(dá)20wt％。
一種可替代的濃縮步驟d)的可可多酚提取物的方法是利用真空蒸發(fā)。在使用這種方法的情況下，采用真空干燥器系統(tǒng)。此方法還可以進(jìn)一步用來濃縮UF透過液或NF截留物(在已包括這些步驟的情況下)。
市場上可獲得幾種適合于濃縮可可多酚提取物的工業(yè)用真空干燥器，例如臥式干燥機(jī)或立式干燥機(jī)。優(yōu)選地，該過程應(yīng)在低于70℃的溫度下進(jìn)行，更優(yōu)選低于60℃，例如40℃。為了除去作為溶劑的水，工作壓力應(yīng)小于30kPa(300毫巴)，優(yōu)選小于20kPa(200毫巴)。
在除去溶劑以后，得到含有大于15wt％的可溶固體的產(chǎn)物，優(yōu)選含有大于25wt％的可溶固體，例如在45wt％和65wt％之間的可溶固體。獲得的可可豆提濃物中可可多酚的總含量通常是至少10wt％，更優(yōu)選至少30wt％的可溶固體總量。
在步驟e)獲得的可可多酚提濃物呈液體狀態(tài)。對于某些用途，可以優(yōu)選可可多酚提濃物呈粉末狀態(tài)。因此，本發(fā)明的方法可以可選地包括最終干燥步驟，以產(chǎn)生粉狀的可可多酚提濃物。獲得的粉末優(yōu)選具有小于6wt％的最終水分含量，更優(yōu)選小于3wt％。
適宜的干燥設(shè)備包括盤式真空干燥器以及噴霧干燥器。在使用盤式真空干燥器的情況下，在干燥之后，獲得硬塊料。
優(yōu)選地，這些塊料應(yīng)在研磨以前經(jīng)過粗粉碎，以便減小粒徑，進(jìn)而制成粉末。為了粗粉碎，可以使用錘式或刀式粉碎機(jī)。至于研磨，可以使用錘式粉碎機(jī)、針磨機(jī)(pin mill)、分級-分離粉碎機(jī)或這些粉碎機(jī)的結(jié)合。最終粒徑分布為99vol％(體積百分比)具有小于或等于300μm的粒徑，優(yōu)選200μm，更優(yōu)選100μm，例如75μm。
在使用噴霧干燥器的情況下，在干燥過程中可以使用幾種穩(wěn)定劑(例如瓜爾膠)作為載體。最終的粉末應(yīng)優(yōu)選包含小于10wt％的穩(wěn)定劑，優(yōu)選小于3wt％，例如1wt％。
在最終的粉末中可可多酚的總濃度是至少10％，優(yōu)選至少15wt％。優(yōu)選地，在干燥和粒徑減小步驟中，損失不大于5wt％的多酚總含量。


圖1是步驟a)至步驟c)的實(shí)施例的圖示；圖2是步驟d)和步驟e)的圖示；圖3圖示了對漂白步驟a)的必要時間和溫度的統(tǒng)計(jì)研究結(jié)果。
示出的結(jié)果是估計(jì)條件的3維曲面表示。
圖4示出了對步驟a)進(jìn)行的統(tǒng)計(jì)研究的進(jìn)一步結(jié)果。
圖5是統(tǒng)計(jì)研究步驟a)的條件的所得結(jié)果的表面等值線圖。
現(xiàn)將參照以下實(shí)施例來進(jìn)一步說明本發(fā)明。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例1
酶促褐變反應(yīng)會引起富含酚化合物的食品在其運(yùn)輸、儲存、以及加工期間變黑。食品中的這些不希望的反應(yīng)產(chǎn)生導(dǎo)致不愉快氣味和味道的物質(zhì)。
本發(fā)明的目的在于通過加熱，具體地說，通過在水中的熱處理(漂白)來滅活多酚氧化酶，以及研究關(guān)于控制酶促褐變反應(yīng)的滅活條件(時間-溫度關(guān)系)，其中酶促褐變反應(yīng)通過顏色變化(感覺的顏色分析)來測量。
在3種不同的時間和溫度的組合下，進(jìn)行了9個試驗(yàn)。
濕度＝75℃、85℃、以及95℃；時間＝5分鐘、10分鐘、以及15分鐘。1wt％的兒茶酚用作加速褐變的試劑。然后測量褐變以量化需要多長時間和什么樣的熱處理來最大抑制可可種子的褐變反應(yīng)(黑變病)。黑變病程度用來測量種子內(nèi)褐變的水平。
試驗(yàn)步驟原料新鮮的未發(fā)酵可可種子。
儀器 熱電偶秒表不銹鋼刀溫控水浴表面玻璃試劑 兒茶酚1wt％將80克可可浸沒在2升熱水中，并在水浴中保持上面指定的溫度和時間。用自來水盡可能快速地冷卻可可。將可可種子放置在表面玻璃中并用刀切成兩半。將數(shù)滴1wt％兒茶酚放置在表面上，然后觀察可可種子的顏色。結(jié)果記錄在以下的表1和表2中。
表1 用來描述黑變病的進(jìn)展的色標(biāo)

在水浴中引入種子引起溫度下降10℃。這是由溫度從水到種子的傳遞所導(dǎo)致的。在所有情況下，當(dāng)種子的溫度等于水的預(yù)置溫度時開始計(jì)時。
表2 PPO滅活的結(jié)果

從表2所示的結(jié)果可以看出，使多酚氧化酶失活最優(yōu)化的時間和溫度為95℃下5分鐘。在這些條件下，在可可種子中觀察到完全沒有黑變病或褐變。
根據(jù)圖3-5中所示的結(jié)果，可以看到，溫度的變化(p＜0.05)比時間的變化(p＞0.05)對黑變病的水平具有大得多的影響。隨著溫度的增加，可以看到對黑變病水平的影響減少，這是由多酚氧化酶的失活所導(dǎo)致的。此外，黑變病水平隨著時間增加而增加，這是由非酶促褐變反應(yīng)或梅拉德反應(yīng)(其取決于在延長期間升高的溫度)所導(dǎo)致的。因此，證實(shí)的為避免黑變病或褐變反應(yīng)所必要的熱處理是在95℃下5分鐘。較長的時間會由于梅拉德反應(yīng)而引起褐變。對于0-8之間的黑變病程度，在溫度為95℃、時間為5-7分鐘的情況下，黑變病發(fā)展的水平是0.8?？梢缘贸鼋Y(jié)論，延長2分鐘的熱處理將不會對黑變病程度產(chǎn)生高于1水平的影響。
實(shí)施例2 多酚增溶最初用水以1∶15(可可∶水)的比率提取25克干燥的經(jīng)脫脂的未發(fā)酵可可豆中間產(chǎn)物，該中間產(chǎn)物含有2.31克多酚總量(9.25wt％)。提取是在30℃的溫度下進(jìn)行2.5小時。
在首次提取后，離心分離混合物。獲得兩個部分液體和被提取過的固體。被提取過的固體再經(jīng)過上述提取過程兩次。條件保持相同，只是在最后兩次提取中固體∶溶劑的比率是1∶10。
實(shí)驗(yàn)的結(jié)果在表3中示出。
表3 可可多酚增溶的結(jié)果

從表3顯示的結(jié)果可以清楚地看到，在第三次提取以后，81.08wt％的多酚被回收在溶液中。獲得594ml的溶液，其中固體總量(0.98％)為5.84克，而多酚總量為1.42克。多酚總量表示24.27％的固體總量存在于溶液中。
實(shí)施例3未發(fā)酵新鮮可可豆平均含有50wt％的水分、24wt％的脂肪、3.5％的多酚總量、7.8％的外殼、以及14.7％的其它化合物。
在95℃的熱水中使1000Kg新鮮的未發(fā)酵可可豆漂白7分鐘以滅活PPO酶。在漂白以后，在冷水中漂洗可可豆。接著，水分含量為44wt％的可可豆在陽光下干燥一周，以將水分含量降低至6wt％。干燥以后，獲得532Kg干燥的未發(fā)酵可可豆，這些可可豆具有大大降低和/或失活的PPO活性。這種副產(chǎn)物含有6.57％的多酚。
在下一步驟中，通過破碎以及其后的粉碎來使干燥可可豆的粒徑減小。利用錘式粉碎機(jī)進(jìn)行破碎，以獲得小片。在破碎以后，用低溫針磨機(jī)對小片進(jìn)行研磨，其間使用氮作為冷卻介質(zhì)以避免脂肪熔化。在低溫研磨期間，在-5℃下凍結(jié)副產(chǎn)物。最終的粒徑分布是99wt％在150μm以下。
對未發(fā)酵可可粉進(jìn)行脫脂以便促進(jìn)在后續(xù)操作中的溶解。為了脫脂，使用了超臨界CO2萃取系統(tǒng)。在萃取之后，得到295Kg未發(fā)酵脫脂可可豆中間產(chǎn)物。這種副產(chǎn)物含有11.86％的多酚總量以及1％的脂肪。還得到了237Kg可可脂。這種脂適于人消費(fèi)。
為了通過增溶提取的多酚，將295Kg未發(fā)酵的脫脂粉與4,425Kg的水(1∶15)混合，用于首次提取。將混合物在35℃的反應(yīng)器中攪動2.5小時進(jìn)行提取。在此提取中，溶液中有60％的初始多酚。在提取以后，利用潷析器、接著通過離心機(jī)對固體進(jìn)行分離。得到兩個部分。4,291Kg的液體部分，其含有1.88％的總?cè)芙夤腆wTDS(80.76Kg)，其中26％是多酚(21Kg)。將此部分稱作第一溶液。其它部分由428.48Kg含有50wt％水分的半提取過的固體組成。
被提取過的固體仍然含有40wt％的存在于未發(fā)酵可可豆中的多酚。428.48Kg被提取過的固體(50％的固體)在與先前相同的提取條件下與1,713.92Kg(1∶10)水一起經(jīng)過第二提取步驟。與前面的情況一樣，得到兩個部分。1760.58Kg的液體部分，其含有1.32％的總?cè)芙夤腆w(23.33Kg)，其中30t％是多酚(7Kg)。此部分稱作第二溶液。其余部分含有381.82Kg的被提取過的固體，其中50wt％是水分。該被提取過的固體仍然含有7Kg多酚，如果需要的話，可以在后來的提取中將其溶解。
在下一步驟中，在中間罐中將第一次和第二次提取獲得的溶液混合在一起。兩種溶液的混合物具有6052.1Kg，其含有1.71％的總?cè)芙夤腆w(104.1Kg)，其中26.9％是多酚(28Kg)。
然后，使溶液通過超濾膜以便除去較大的顆粒(即，蛋白質(zhì)、糖類等)。使用的膜具有10,000道爾頓的截留分子量。在超濾之后得到兩部分截留物和透過液。截留物重量為605.21Kg，并且含有6.21％的總?cè)芙夤腆w(37.6Kg)，其中3.72％是多酚(1.4Kg)。透過液重量為5,446.21Kg的溶液，其含有1.22％的其中40％是多酚(26.6Kg)的總?cè)芙夤腆w(66.5Kg)。
進(jìn)行的下一步驟是納濾，以便濃縮總?cè)芙夤腆w以及部分地消除鹽類。使5,446.21Kg的UF透過液通過納濾器。如在先前的膜分離操作中，得到兩部分。透過液有4,851.89Kg，其中含有0.14％總?cè)芙夤腆w(7Kg)，其主要是溶解的鹽。富集的截留物重量為595Kg，并且含有10％的總?cè)芙夤腆w(59.5Kg)，其中44.7％是多酚(26.6Kg)。
在下一步驟中，在55℃和300毫巴下，利用立式真空干燥器對595Kg的NF透過液進(jìn)行濃縮。在該干燥步驟中除去495.04Kg的水。最后得到99.16Kg液體可可多酚提濃物，該提濃物含有60％的總?cè)芙夤腆w(59.5Kg)。此產(chǎn)物含有26.82％的多酚(26.6Kg)。
可選地，可以進(jìn)一步干燥該液體可可多酚提濃物，以便獲得粉末。為此目的，將99.16Kg液體多酚提濃物和5Kg瓜爾膠進(jìn)行混合。然后使混合物通過噴霧干燥器。最后，得到67.1Kg粉狀可可多酚提濃物，該提濃物含有4wt％的水分以及39.64％的多酚。
權(quán)利要求
1.一種獲得可可多酚提濃物的方法，該方法包括以下步驟a)使未發(fā)酵可可豆在85-100℃的水中經(jīng)過3分鐘至15分鐘的漂白步驟，以產(chǎn)生多酚氧化酶活性降低的未發(fā)酵可可豆；b)在低于85℃的溫度下干燥所述多酚氧化酶活性降低的未發(fā)酵可可豆，以獲得水分含量不大于15％的干燥的未發(fā)酵可可豆；c)使所述干燥的未發(fā)酵可可豆經(jīng)過粒徑減小步驟以獲得干燥的未發(fā)酵可可豆中間產(chǎn)物，從而至少99wt％的所述產(chǎn)物具有小于或等于300μm的粒徑；d)從所述干燥的未發(fā)酵可可豆中間產(chǎn)物提取多酚，以獲得可可多酚提取物和被提取過的固體；e)濃縮所述可可多酚提取物，以得到可可多酚提濃物，其中存在的多酚濃度至少為10wt％；以及其中，所述方法進(jìn)一步包括在步驟d)之前進(jìn)行的脫脂步驟。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述脫脂步驟在步驟b)之后但在步驟c)之前進(jìn)行。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述脫脂步驟在步驟c)之后但在步驟d)之前進(jìn)行。
4.根據(jù)權(quán)利要求2或3所述的方法，其中，在所述脫脂步驟中，壓榨所述干燥的未發(fā)酵可可豆或可可豆中間產(chǎn)物以形成壓濾餅以及被除去的脂肪。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其中，所述壓榨是在約50MPa壓力下利用螺旋式壓榨機(jī)進(jìn)行。
6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其中，使形成的所述壓濾餅經(jīng)過破碎步驟，其中，所述粒徑被減小到小于或等于5000μm。
7.根據(jù)權(quán)利要求2或3所述的方法，其中，在所述脫脂步驟中使用超臨界CO2萃取。
8.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一權(quán)項(xiàng)所述的方法，其中，在所述粒徑減小步驟中，研磨所述干燥的未發(fā)酵可可豆。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，其中，在所述粒徑減小步驟中，利用低溫研磨機(jī)來研磨所述干燥的未發(fā)酵可可豆。
10.根據(jù)權(quán)利要求1至7中任一權(quán)項(xiàng)所述的方法，其中，在所述粒徑減小步驟中，利用研磨分離器來研磨所述干燥的未發(fā)酵可可豆。
11.根據(jù)權(quán)利要求10所述的方法，其中，所述研磨步驟包括最后的分級步驟，以產(chǎn)生干燥的未發(fā)酵可可豆中間產(chǎn)物，從而至少99wt％的所述中間產(chǎn)物具有小于或等于120μm的粒徑。
12.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一權(quán)項(xiàng)所述的方法，其中，在步驟d)中是利用溶劑提取所述多酚。
13.根據(jù)權(quán)利要求12所述的方法，其中，所述溶劑是水或乙醇或兩者的混合物。
14.根據(jù)權(quán)利要求12或13所述的方法，其中，所述干燥的未發(fā)酵可可豆中間產(chǎn)物與溶劑的比率在重量比1∶5至1∶30的范圍內(nèi)，所述提取在不高于75℃的溫度下進(jìn)行，并且在所述提取期間連續(xù)攪拌。
15.根據(jù)權(quán)利要求1至11中任一權(quán)項(xiàng)所述的方法，其中，在步驟d)是通過離心或過濾來分離出所述多酚。
16.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一權(quán)項(xiàng)所述的方法，其中，步驟d)包括初步增溶步驟。
17.根據(jù)權(quán)利要求16所述的方法，其中，在步驟d)獲得的可可多酚提取物要經(jīng)過進(jìn)一步的提取步驟。
18.根據(jù)權(quán)利要求17所述的方法，其中，所述進(jìn)一步的提取步驟使用離心或微孔過濾。
19.根據(jù)權(quán)利要求1至18中任一權(quán)項(xiàng)所述的方法，其中，在步驟e)中是通過超濾來濃縮所述可可多酚提取物，以得到可可多酚透過液。
20.根據(jù)權(quán)利要求19所述的方法，其中，在步驟e)中，在超濾之后進(jìn)行進(jìn)一步的納濾步驟以得到可可多酚截留物。
21.根據(jù)權(quán)利要求1至18中任一權(quán)項(xiàng)所述的方法，其中，在步驟e)中是通過真空蒸發(fā)來濃縮所述可可多酚提取物。
22.根據(jù)權(quán)利要求19或20所述的方法，其中，通過真空蒸發(fā)來進(jìn)一步濃縮所述可可多酚透過液和/或截留物。
23.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一權(quán)項(xiàng)所述的方法，其進(jìn)一步包括干燥所述可可多酚提濃物以獲得粉狀可可多酚提濃物的最后步驟。
24.根據(jù)權(quán)利要求23所述的方法，其中，利用真空干燥器或噴霧干燥器來干燥所述可可多酚提濃物。
25.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，在步驟b)之后并在步驟c)之前包括附加的破碎和風(fēng)選步驟。
26.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一權(quán)項(xiàng)所述的方法，其中，在步驟b)中，通過暴露在陽光下來干燥所述多酚氧化酶活性降低的未發(fā)酵可可豆。
27.根據(jù)權(quán)利要求1至25中任一權(quán)項(xiàng)所述的方法，其中，在步驟b)中，利用熱風(fēng)式干燥機(jī)、非熱風(fēng)式干燥機(jī)、商用谷物干燥機(jī)、間歇式流化床干燥機(jī)、在真空下和/或高頻干燥機(jī)來干燥所述多酚氧化酶活性降低的未發(fā)酵可可豆。
全文摘要
一種獲得可可多酚提濃物的方法，該方法包括以下步驟a)使未發(fā)酵可可豆在85－100℃的水中經(jīng)過3分鐘至15分鐘的漂白步驟，以產(chǎn)生多酚氧化酶活性降低的未發(fā)酵可可豆；b)在低于85℃的溫度下干燥該多酚氧化酶活性降低的未發(fā)酵可可豆，以獲得水分含量不大于15％的干燥的未發(fā)酵可可豆；c)使干燥的未發(fā)酵可可豆經(jīng)過粒徑減小步驟，以獲得干燥的未發(fā)酵可可豆中間產(chǎn)物，從而至少99wt％的產(chǎn)物具有小于或等于300μm的粒徑；e)從干燥的未發(fā)酵可可豆中間產(chǎn)物提取多酚以給出可可多酚提取物和被提取過的固體；d)濃縮可可多酚提取物以產(chǎn)生可可多酚提濃物；以及其中，該方法進(jìn)一步包括在步驟d)之前進(jìn)行的脫脂步驟。
文檔編號C07B63/00GK1933736SQ200580008335
公開日2007年3月21日 申請日期2005年4月20日 優(yōu)先權(quán)日2004年5月24日
發(fā)明者何塞－比森特·龐斯－安德魯, 埃萊娜·西恩富戈斯－霍維利亞諾斯, 阿爾文·伊瓦拉 申請人:納崔塞迪卡股份有限公司