專利名稱：地黃總苷提取物的提取工藝的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及具有多種醫(yī)藥用途的地黃總苷提取物及其提取工藝，地黃總苷提取物能有效地預防和治療哮喘病、過敏病癥和慢性阻塞性肺病(COPD)等。
背景技術(shù)：
地黃是玄參科植物地黃Rehmannia glutinosa Libsch.的新鮮塊莖或干燥塊莖，多年生草本，主要為栽培品，亦野生于海拔50-1100米的山坡及路旁荒地。分布于遼寧、內(nèi)蒙古、河北、河南、山西、陜西、山東、安徽、浙江、湖北、湖南、四川等地。文獻記載，地黃中含有環(huán)烯醚萜苷類、單萜及其苷、有機酸和有機酸酯苷、多糖、氨基酸、甾醇等多種化學成分，及鈣、鎂、鉀、鐵、鋅、錳等二十種金屬元素。

發(fā)明內(nèi)容
現(xiàn)行藥典記載，地黃有鮮地黃、生地黃、熟地黃之分。提取地黃總苷提取物使用的地黃是鮮地黃、生地黃以及鮮地黃自然干燥品(曬干或風干)或者鮮地黃用沸水煮5-10分鐘(殺酶)后，曬干或風干的干燥品。
本發(fā)明的目的是提供地黃總苷提取物的制備方法。地黃總苷提取物是從中藥地黃中提取的，地黃總苷提取物主要由以下化學成分組成梓醇(catalpol)、地黃苷A，B，C，D(rehmannioside A，B，C，D)、乙酰梓醇(acetylcatalpol)、二氫梓醇(dihydrocatalpol等本發(fā)明提供了地黃總苷提取物的提取、分離、純化的方法。該方法是1、取地黃切片，用水、或水與甲醇、乙醇、丙酮等溶劑組成的二種及多種混合溶劑提取，提取液在真空中70℃以下濃縮并蒸去有機溶劑(如無有機溶劑時可以不濃縮)，加水至合適的體積，去除沉淀(如有沉淀)。
2、上述水溶液通過活性炭分離柱。
3、用水常規(guī)洗去雜質(zhì)，至近無色，并且糖反應(yīng)試驗陰性(molish反應(yīng)陰性)。
4、用pH值8以上的堿性溶液洗脫后，用水洗脫至中性。
堿性溶液是氫氧化鈉，或者氫氧化鉀，或者氨水，或者碳酸鈉用水所制備的溶液。
5、為了提高地黃總苷的含量，再用水溶性有機溶劑低濃度水溶液洗脫多糖和其它雜質(zhì)。
水溶性有機溶劑低濃度水溶液是10％以下的稀乙醇，或是15％以下的稀甲醇，或是10％以下的稀丙酮，或是8％以下的稀丙醇。
6、用水溶性有機溶劑較高濃度的水溶液進行洗脫，收集洗脫液，濃縮至小體積。
水溶性有機溶劑較高濃度的水溶液是10％以上的乙醇水溶液，或是15％以上的甲醇水溶液，或是10％以上的丙酮水溶液，或是8％以上的丙醇溶液。
7、濃縮至小體積的提取液，加水溶性有機溶劑至有機溶劑含量45％-85％進行沉淀，分取上層部分，減壓濃縮干，即得地黃環(huán)烯醚萜苷總苷提取物。
水溶性有機溶劑是乙醇，或是丙酮，或是異丙醇，沉淀時，乙醇濃度為60％-85％，或者丙酮濃度為50％-80％，或者異丙醇濃度為45％-75％。
對上述提取物進行TLC分析，點上相應(yīng)的對照品，能很容易檢測出梓醇，也能檢出地黃苷A，B，C，D、乙酰梓醇、二氫梓醇等。檢測條件是高效硅膠板HSGF254板。展開劑是以下系統(tǒng)，1、乙酸乙酯-甲乙酮-甲酸-水(5∶3∶1∶1)；2、氯仿-甲醇-水(15∶10∶1)；3、氯仿∶甲醇∶水∶甲酸(30∶10∶1∶1)。顯色劑用碘蒸汽顯色，也可以用2％的硫酸香草醛溶液噴霧顯色。
本發(fā)明的創(chuàng)造性在于通過科學可行的方法從地黃中提取分離出了用于治療哮喘病和其它過敏性疾病的地黃環(huán)烯醚萜苷總苷有效部位。如前所述，本發(fā)明提供的用于治療哮喘病和其它過敏性疾病的藥物的有效成分是包括含有梓醇、地黃苷A，B、乙酰梓醇、二氫梓醇等的地黃總苷提取物。
具體實施例方式
用以下的實施例對本發(fā)明作具體說明，但本發(fā)明并不限于下列實施例包含的內(nèi)容。
取地黃500g，用70％的甲醇4000ml加熱回流提取1小時，傾取提取液，藥渣再用70％的甲醇4000ml加熱回流提取1小時，傾取提取液，藥渣再用70％的甲醇4000ml加熱回流提取1小時，傾取提取液，合并三次提取液，提取液在真空中70℃以下濃縮至1000ml，并且無乙醇味，加水1000ml，去除沉淀，上已處理好的活性炭(1kg活性炭140℃加熱烘烤4.5小時)分離柱，用水常規(guī)洗去雜質(zhì)，至近無色，并且糖反應(yīng)試驗陰性(molish反應(yīng)陰性)，續(xù)用5％的稀甲醇洗脫至洗脫液近無色，并且糖反應(yīng)試驗陰性(molish反應(yīng)陰性)后，用70％的甲醇5000ml洗脫。洗脫液真空濃縮至250ml，在攪拌下加酒精750ml，靜置，分取上層液，減壓濃縮至干，即得地黃總苷提取物12.4克?；瘜W成分主要含有梓醇、地黃苷A，地黃苷B、地黃苷C、地黃苷D、乙酰梓醇、二氫梓醇等。環(huán)烯醚萜苷總苷含量52.7％。
取地黃1kg，用50％的甲醇8000ml加熱回流提取1小時，傾取提取液，藥渣再用50％的甲醇8000ml加熱回流提取1小時，傾取提取液，藥渣再用50％的甲醇8000ml加熱回流提取1小時，傾取提取液，合并三次提取液，提取液在真空中70℃以下濃縮至1000ml，并且無甲醇味，加水1000ml，去除沉淀，上已處理好的活性炭(500g活性炭140℃加熱烘烤4.5小時)分離柱，用水常規(guī)洗去雜質(zhì)，至近無色，并且糖反應(yīng)試驗陰性(molish反應(yīng)陰性)，續(xù)用10％的稀甲醇洗至洗脫液近無色，并且糖反應(yīng)試驗陰性(molish反應(yīng)陰性)后，用50％的甲醇3000ml洗脫。洗脫液真空濃縮至500ml，在攪拌下加酒精1000ml，靜置，分取上層液，減壓濃縮至干，即得地黃總苷提取物23.6克?；瘜W成分主要含有梓醇、地黃苷A，地黃苷B、地黃苷C、地黃苷D、乙酰梓醇、二氫梓醇等。環(huán)烯醚萜苷總苷含量50.8％。
取地黃2kg，用30％的甲醇16升加熱回流提取1小時，傾取提取液，藥渣再用30％的甲醇16升加熱回流提取1小時，傾取提取液，藥渣再用30％的甲醇16升ml加熱回流提取1小時，傾取提取液，合并三次提取液，提取液在真空中70℃以下濃縮至1000ml，并且無甲醇味，加水1000ml，去除沉淀，上已處理好的活性炭(2kg活性炭140℃加熱烘烤4.5小時)分離柱，用水常規(guī)洗去雜質(zhì)，至近無色，并且糖反應(yīng)試驗陰性(molish反應(yīng)陰性)，續(xù)用13％的稀甲醇洗至洗脫液近無色，并且糖反應(yīng)試驗陰性(molish反應(yīng)陰性)后，用60％的甲醇10000ml洗脫。洗脫液真空濃縮至1000ml，在攪拌下加酒精4000ml，靜置，分取上層液，減壓濃縮至干，即得地黃總苷提取物42.5克?；瘜W成分主要含有梓醇、地黃苷A，地黃苷B、地黃苷C、地黃苷D、乙酰梓醇、二氫梓醇等。環(huán)烯醚萜苷總苷含量56.7％。
取地黃500g，用60％的丙酮4000ml加熱回流提取1小時，傾取提取液，藥渣再用60％的丙酮4000ml加熱回流提取1小時，傾取提取液，藥渣再用60％的丙酮4000ml加熱回流提取1小時，傾取提取液，合并三次提取液，提取液在真空中70℃以下濃縮至1000ml，并且無丙酮味，加水1000ml，去除沉淀，上已處理好的活性炭(5kg活性炭140℃加熱烘烤4.5小時)分離柱，用水常規(guī)洗去雜質(zhì)，至近無色，并且糖反應(yīng)試驗陰性(molish反應(yīng)陰性)，續(xù)用4％的稀丙酮洗至洗脫液近無色，并且糖反應(yīng)試驗陰性(molish反應(yīng)陰性)后，用30％的丙酮25000ml洗脫。洗脫液真空濃縮至250ml，在攪拌下加丙酮500ml，靜置，分取上層液，減壓濃縮至干，即得地黃總苷提取物13.6克?；瘜W成分主要含有梓醇、地黃苷A，地黃苷B、地黃苷C、地黃苷D、乙酰梓醇、二氫梓醇等。環(huán)烯醚萜苷總苷含量51.8％。
取地黃1kg，用45％的丙酮8000ml加熱回流提取1小時，傾取提取液，藥渣再用45％的丙酮8000ml加熱回流提取1小時，傾取提取液，藥渣再用45％的丙酮8000ml加熱回流提取1小時，傾取提取液，合并三次提取液，提取液在真空中70℃以下濃縮至1000ml，并且無丙酮味，加水1000ml，去除沉淀，上已處理好的活性炭(10kg活性炭140℃加熱烘烤4.5小時)分離柱，用水常規(guī)洗去雜質(zhì)，至近無色，并且糖反應(yīng)試驗陰性(molish反應(yīng)陰性)，續(xù)用7％的稀丙酮洗至洗脫液近無色，并且糖反應(yīng)試驗陰性(molish反應(yīng)陰性)后，用50％的丙酮50000ml洗脫。洗脫液真空濃縮至500ml，在攪拌下加丙酮1500ml，靜置，分取上層液，減壓濃縮至干，即得地黃總苷提取物15.4克?；瘜W成分主要含有梓醇、地黃苷A，地黃苷B、地黃苷C、地黃苷D、乙酰梓醇、二氫梓醇等。環(huán)烯醚萜苷總苷含量51.7％。
取地黃500g，用30％的丙酮4000ml加熱回流提取1小時，傾取提取液，藥渣再用30％的丙酮4000ml加熱回流提取1小時，傾取提取液，藥渣再用30％的丙酮4000ml加熱回流提取1小時，傾取提取液，合并三次提取液，提取液在真空中70℃以下濃縮至1000ml，并且無丙酮味，加水1000ml，去除沉淀，上已處理好的活性炭(500g活性炭140℃加熱烘烤4.5小時)分離柱，用水常規(guī)洗去雜質(zhì)，至近無色，并且糖反應(yīng)試驗陰性(molish反應(yīng)陰性)，續(xù)用10％的稀丙酮洗脫至洗脫液接近無色，并且糖反應(yīng)試驗陰性(molish反應(yīng)陰性)后，用70％的丙酮3000ml洗脫。洗脫液真空濃縮至250ml，在攪拌下加丙酮1000ml，靜置，分取上層液，減壓濃縮至干，即得地黃總苷提取物8.6克。化學成分主要含有梓醇、地黃苷A，地黃苷B、地黃苷C、地黃苷D、乙酰梓醇、二氫梓醇等。地黃總苷含量50.3％。
取地黃500g，用70％的乙醇4000ml加熱回流提取1小時，傾取提取液，藥渣再用70％的乙醇4000ml加熱回流提取1小時，傾取提取液，藥渣再用70％的乙醇4000ml加熱回流提取1小時，傾取提取液，合并三次提取液，提取液在真空中70℃以下濃縮至1000ml，并且無乙醇味，加水1000ml，去除沉淀，上已處理好的活性炭(3kg活性炭140℃加熱烘烤4.5小時)分離柱，用水常規(guī)洗去雜質(zhì)，至近無色，并且糖反應(yīng)試驗陰性(molish反應(yīng)陰性)，續(xù)用4％的稀乙醇洗至洗脫液近無色，并且糖反應(yīng)試驗陰性(molish反應(yīng)陰性)后，用20％的乙醇15000ml洗脫。洗脫液真空濃縮至250ml，在攪拌下加異丙醇750ml，靜置，分取上層液，減壓濃縮至干，即得地黃總苷提取物16.4克?；瘜W成分主要含有梓醇、地黃苷A，地黃苷B、地黃苷C、地黃苷D、乙酰梓醇、二氫梓醇等。環(huán)烯醚萜苷總苷含量52.7％。
取地黃500g，用50％的乙醇4000ml加熱回流提取1小時，傾取提取液，藥渣再用50％的乙醇4000ml加熱回流提取1小時，傾取提取液，藥渣再用50％的乙醇4000ml加熱回流提取1小時，傾取提取液，合并三次提取液，提取液在真空中70℃以下濃縮至1000ml，并且無乙醇味，加水1000ml，去除沉淀，上已處理好的活性炭(6kg活性炭140℃加熱烘烤4.5小時)分離柱，用水常規(guī)洗去雜質(zhì)，至近無色，并且糖反應(yīng)試驗陰性(molish反應(yīng)陰性)，續(xù)用7％的異丙醇洗至洗脫液近無色，并且糖反應(yīng)試驗陰性(molish反應(yīng)陰性)后，用40％的異丙醇30000ml洗脫。洗脫液真空濃縮至250ml，在攪拌下加異丙醇500ml，靜置，分取上層液，減壓濃縮至干，即得地黃總苷提取物12.6克?；瘜W成分主要含有梓醇、地黃苷A，地黃苷B、地黃苷C、地黃苷D、乙酰梓醇、二氫梓醇等。環(huán)烯醚萜苷總苷含量53.4％。
取地黃500g，用30％的乙醇4000ml加熱回流提取1小時，傾取提取液，藥渣再用30％的乙醇4000ml加熱回流提取1小時，傾取提取液，藥渣再用30％的乙醇4000ml加熱回流提取1小時，傾取提取液，合并三次提取液，提取液在真空中70℃以下濃縮至1000ml，并且無乙醇味，加水1000ml，去除沉淀，上已處理好的活性炭(8kg活性炭140℃加熱烘烤4.5小時)分離柱，用水常規(guī)洗去雜質(zhì)，至近無色，并且糖反應(yīng)試驗陰性(molish反應(yīng)陰性)，續(xù)用10％的稀乙醇洗至洗脫液近無色，并且糖反應(yīng)試驗陰性(molish反應(yīng)陰性)后，用40％的乙醇40000ml洗脫。洗脫液真空濃縮至250ml，在攪拌下加異丙醇1000ml，靜置，分取上層液，減壓濃縮至干，即得地黃總苷提取物12.5克。化學成分主要含有梓醇、地黃苷A，地黃苷B、地黃苷C、地黃苷D、乙酰梓醇、二氫梓醇等。地黃總苷含量53.8％。
取地黃500g，用水4000m1加熱煎煮0.5小時，傾取提取液，藥渣再用水3000ml加熱煎煮1小時，傾取提取液，藥渣再用水4000ml加熱煎煮0.5小時，傾取提取液，合并三次提取液，去除沉淀(如有沉淀)，通過活性炭(1kg活性炭105℃活化4小時)分離柱，用水常規(guī)洗去雜質(zhì)，至近無色，并且糖反應(yīng)試驗陰性(molish反應(yīng)陰性)，續(xù)用4％的稀乙醇洗至洗脫液近無色，并且糖反應(yīng)試驗陰性(molish反應(yīng)陰性)后，用40％的乙醇5000ml洗脫。40％的乙醇洗脫液真空濃縮至250ml，在攪拌下加異丙醇250ml，靜置，分取上層液，減壓濃縮至干，即得地黃總苷提取物13.3克。其化學成分主要含有梓醇、地黃苷A，地黃苷B、地黃苷C、地黃苷D、乙酰梓醇、二氫梓醇等。環(huán)烯醚萜苷總苷含量50.5％。
取地黃1kg，用水6000ml加熱煎煮0.5小時，傾取提取液，藥渣再用水4000ml加熱煎煮1小時，傾取提取液，藥渣再用水4000ml加熱煎煮1小時，傾取提取液，合并三次提取液，去除沉淀(如有沉淀)，通過活性炭(1kg活性炭110℃活化4小時)分離柱，用水常規(guī)洗去雜質(zhì)，至近無色，并且糖反應(yīng)試驗陰性(molish反應(yīng)陰性)，續(xù)用7％的稀乙醇洗至洗脫液近無色，并且糖反應(yīng)試驗陰性(molish反應(yīng)陰性)后，用40％的乙醇4000ml洗脫。40％的乙醇洗脫液真空濃縮至500ml，在攪拌下加丙酮500ml，靜置，分取上層液，減壓濃縮至干，即得地黃總苷提取物23.3克。其化學成分主要含有梓醇、地黃苷A，地黃苷B、地黃苷C、地黃苷D、乙酰梓醇、二氫梓醇等。環(huán)烯醚萜苷總苷含量52.9％。
取地黃2kg，用水12升加熱煎煮0.5小時，傾取提取液，藥渣再用水8升加熱煎煮1小時，傾取提取液，藥渣再用水8升加熱煎煮小時，傾取提取液，合并三次提取液，去除沉淀(如有沉淀)，通過活性炭(1kg活性炭120℃活化4小時)分離柱，用水常規(guī)洗去雜質(zhì)，至近無色，并且糖反應(yīng)試驗陰性(molish反應(yīng)陰性)，續(xù)用10％的稀乙醇洗至洗脫液近無色，并且糖反應(yīng)試驗陰性(molish反應(yīng)陰性)后，用40％的乙醇4000ml洗脫。40％的乙醇洗脫液真空濃縮至干，即得地黃總苷提取物42.5克?；瘜W成分主要含有梓醇、地黃苷A，地黃苷B、地黃苷C、地黃苷D、乙酰梓醇、二氫梓醇等。環(huán)烯醚萜苷總苷含量53.5％。
取地黃500g，用水4000ml加熱煎煮0.5小時，傾取提取液，藥渣再用水3000ml加熱煎煮1小時，傾取提取液，藥渣再用水3000ml加熱煎煮1小時，傾取提取液，合并三次提取液，去除沉淀(如有沉淀)，通過活性炭(1kg活性炭130℃活化4小時)分離柱，用水常規(guī)洗去雜質(zhì)，至近無色，并且糖反應(yīng)試驗陰性(molish反應(yīng)陰性)，用40％的乙醇4000ml洗脫。40％的乙醇洗脫液真空濃縮至干，即得地黃總苷提取物48.6克。其化學成分主要含有梓醇、地黃苷A，地黃苷B、地黃苷C、地黃苷D、乙酰梓醇、二氫梓醇等。環(huán)烯醚萜苷總苷含量36.5％。
取地黃10kg，用水60升加熱煎煮30小時，傾取提取液，藥渣再用水50升加熱煎煮1小時，傾取提取液，藥渣再用水50升加熱煎煮1小時，傾取提取液，合并三次提取液，去除沉淀，上已處理好的活性炭(10kg活性炭140℃加熱烘烤4.5小時)分離柱，用水常規(guī)洗去雜質(zhì)，至近無色，并且糖反應(yīng)試驗陰性(molish反應(yīng)陰性)，續(xù)用5％的稀乙醇洗至洗脫液近無色，并且糖反應(yīng)試驗陰性(molish反應(yīng)陰性)后，用40％的乙醇50000ml洗脫。洗脫液真空濃縮至5000ml，在攪拌下加酒精15000ml，靜置，分取上層液，減壓濃縮至干，即得地黃總苷提取物485克。其化學成分主要含有梓醇、地黃苷A，地黃苷B、地黃苷C、地黃苷D、乙酰梓醇、二氫梓醇等。環(huán)烯醚萜苷總苷含量31.7％。
地黃總苷膠囊的制備地黃總苷200克；淀粉50克；水適量。
取淀粉加水制成15％的淀粉漿，加入RGTG50混勻制成軟材，10-20目篩制粒，40-60℃干燥，分裝于1000粒膠囊。即為本發(fā)明的地黃苷膠囊制劑。規(guī)格為200mg/粒。
地黃總苷片的制備地黃總苷200克；乳糖32克；蔗糖32克；金合歡膠(Acacia rubber)4克；滑石粉4克；硬脂酸鎂0.4克；純化水適量。
將地黃總苷、乳糖、蔗糖和金合歡膠混合，加入適量水，通過8號篩選粒，再將濕粒在40℃干燥，然后通過10號篩制成小顆粒，加入滑石粉和硬脂酸鎂，壓片1000片。
權(quán)利要求
1.一種地黃總苷提取物的制備方法，其特征是地黃提取液通過活性炭吸附分離地黃總苷。
2.按照權(quán)利要求1中所述的方法，其中地黃提取水溶液通過活性炭分離柱，用堿性溶液洗脫除去酸性雜質(zhì)，再用水洗脫，用含有機溶劑的水溶液洗脫地黃總苷部分。
3.按照權(quán)利要求2中所述的方法，其中地黃提取水溶液通過活性炭分離柱，用堿性溶液洗脫除去酸性雜質(zhì)，用水洗脫，用含有機溶劑濃度較低的水溶液洗脫，再用有機溶劑濃度較高的水溶液洗脫地黃總苷部分。
4.按照權(quán)利要求3中所述的方法，其中地黃提取水溶液通過活性炭分離柱，用堿性溶液洗脫除去酸性雜質(zhì)，用水洗脫，用含有機溶劑濃度較低的水溶液洗脫，再用有機溶劑濃度較高的水溶液洗脫，收集有機溶劑濃度較高的洗脫液，濃縮成小體積后，加入有機溶劑進行沉淀，分取上層清液地黃總苷部分。
5.按照權(quán)利要求2，或3，或4中所述的方法，其中的有機溶劑是乙醇，或甲醇，或丙醇，或丙酮。
6.按照權(quán)利要求4中所述的方法，其中的用于沉淀的有機溶劑是乙醇，或丙醇，或丙酮。
7.按照權(quán)利要求3，或4中所述的方法，其中含有機溶劑濃度較低的水溶液是低于10％的乙醇水溶液，或者低于15％的甲醇水溶液，或者低于10％的丙酮，或者低于8％的丙醇水溶液；含有機溶劑濃度較高的水溶液是高于10％的乙醇水溶液，或者高于15％的甲醇水溶液，或者高于10％的丙酮水溶液，或者高于8％的丙醇溶液。
8.按照權(quán)利要求6中所述的方法，其中的用于沉淀的有機溶劑的濃度是乙醇濃度為60％-85％，或者是丙酮濃度為50％-80％，或者是異丙醇濃度為45％-75％。
9.按照權(quán)利要求2，或3，或4中所述的方法，其中堿性溶液是用氫氧化鈉，或者氫氧化鉀，或者氨水，或者碳酸鈉所制備的溶液。
10.按照權(quán)利要求1中所述的方法，其中活性炭是40目以上的顆粒。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種地黃總苷提取物的制備方法，該方法是將地黃的提取物的水溶液用活性炭吸附處理，用堿水洗去酸性成分，再用水洗至中性后，用水溶性有機溶劑的低濃度水溶液洗脫糖和其它雜質(zhì)，再用水溶性有機溶劑較高濃度的水溶液進行洗脫，洗脫液濃縮成小體積，加乙醇產(chǎn)生沉淀后，分取上清液，減壓濃縮至干，即得地黃總苷提取物。地黃總苷提取物的主要有效成分是環(huán)烯醚萜苷類化合物。
文檔編號C07H17/00GK1637009SQ20041009118
公開日2005年7月13日 申請日期2004年11月23日 優(yōu)先權(quán)日2003年12月22日
發(fā)明者羅何生 申請人:羅何生