專利名稱：利用大孔樹脂制備貓爪草總苷提取物的方法及用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明公開了一種利用大孔樹脂制備貓爪草總苷提取物的方法及用途。
背景技術(shù)：
貓爪草，是五十年代河南信陽地區(qū)新發(fā)現(xiàn)的一種治療結(jié)核的良藥。具有 清熱解毒、散結(jié)消瘀，主治肺結(jié)核、淋巴結(jié)核、咽喉炎等。其原植物為毛茛
科毛茛屬植物小毛茛(i^"w"cw/w/er"a^sThunb.)。以貓爪草水煎浸膏制 成的貓爪草膠囊，臨床上用于多種結(jié)核病的治療，療效肯定。系統(tǒng)的化學成
分研究表明貓爪草含甾醇、Y-酮-s-戊內(nèi)酯、多種苷類化合物。我們通過藥理
活性研究表明總苷類化合物是其抗結(jié)核菌的有效部位。
大孔吸附樹脂是指由苯乙烯、a-甲基苯乙烯、甲基丙烯酸甲酯、丙腈等 為原料加入一定量致孔劑二乙烯苯聚合而成的球狀顆粒，直徑一般在 0.3-1.25 mm之間?，F(xiàn)己廣泛應(yīng)用提取純化天然植物中的活性成分，如苷、 黃酮、內(nèi)脂、生物堿等。根據(jù)大孔樹脂化學結(jié)構(gòu)不帶或帶有不同極性的功能 基以及樹脂的表面性質(zhì)，通常將大孔樹脂分為弱極性、弱極性和中極性等類 型。其中，弱極性大孔樹脂為含酯基的吸附樹脂，其表面兼有疏水和親水兩 部分，既可由極性溶劑中吸附弱極性物質(zhì)，又可由弱極性溶液中吸附極性物 質(zhì)，因而應(yīng)用范圍更為廣泛。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種利用大孔樹脂制備貓爪草總苷提取物的方法 及用途。
它是在粉碎的貓爪草藥材或貓爪草飲片中，加入6 15倍體積百分比濃 度為10%-80°/。的乙醇，加熱回流提取2 4次，每次l 3h，過濾，合并提 取液，減壓回收乙醇，提取液濃縮至每mL含0.25 2.0g生藥的溶液；過濾 或離心分離后通過填充有大孔樹脂的層析柱，提取液按貓爪草總苷含量計與 干樹脂的比例為1:5 10，上柱流速l 4BV/h，樹脂徑高比為1:3 1:9;用 水洗滌樹脂3 8BV，洗脫流速為2-4BV/h，水洗脫液棄去；用含體積百分 比濃度為20 95%含水乙醇洗脫，流速為2 4BV/h，乙醇洗脫液減壓濃縮 至相對密度為1.1 1.25，減壓或噴霧干燥，得貓爪草總苷。
所述的離心分離的離心轉(zhuǎn)速為4000 16000轉(zhuǎn)/分鐘。大孔樹脂為聚苯 乙烯型大孔樹脂。大孔樹脂優(yōu)選為弱極性大孔樹脂。
貓爪草總苷提取物用于制備治療結(jié)核病的藥物。
本發(fā)明采用的大孔樹脂對貓爪草總苷的吸附量大，被解吸完全，所得總 苷的含量高，因此，可以顯著提高貓爪草總苷的提取率，降低生產(chǎn)成本。由
本發(fā)明制備的貓爪草總苷提取物，總苷含量不低于20%，貓爪草苷D含量
不低于1.0%。該具有顯著的體外抑制結(jié)核菌的作用，可以用于制備治療結(jié)
核病的藥物。
具體實施例方式
貓爪草總苷的抗結(jié)核菌實驗
材料和方法
1. 培養(yǎng)基7H9液體培養(yǎng)基(含10。/。ADC、 0.03%瓊脂)。
2. 藥物及其處理(試管二倍稀釋法)貓爪草總苷由浙江大學現(xiàn)代中 藥研究所提供，以貓爪草D計總苷含量不低于30% 。異煙肼(INH)為Sigma 公司產(chǎn)品。貓爪草總苷用二甲基甲酰胺溶解制成初溶液(儲備液)，流通蒸 氣滅菌后，使其在培養(yǎng)基中為所設(shè)計的濃度。
3. 結(jié)核菌及其在培養(yǎng)基中濃度實驗菌為結(jié)核分支桿菌標準株H37Rv。 將在改良羅氏培養(yǎng)基上生長良好的培養(yǎng)物，用瑪瑙乳缽磨成菌懸液，使其在 培養(yǎng)基中的濃度為10-2mg/mL。
4. 培養(yǎng)與觀察置37'C培養(yǎng)，以培養(yǎng)四周的結(jié)果為準。
結(jié)果
在7H9培養(yǎng)基中所試藥物的最小抑菌濃度(MIC)，貓爪草總苷1.25 mg/mL， INF為0.025 ug/mL，表明貓爪草總苷有較好的抑制結(jié)核菌的作用 實施例1
在粉碎的貓爪草藥材中，加入6倍體積百分比濃度為10%-的乙醇，加熱 回流提取2次，每次lh，過濾，合并提取液，減壓回收乙醇，提取液濃縮 至每mL含0.25g生藥的溶液；過濾后通過填充有D101大孔樹脂的層析柱， 提取液按貓爪草總苷含量計與干樹脂的比例為1:5，上柱流速lBV/h，樹脂 徑高比為1:3;用水洗滌樹脂3BV，洗脫流速為2BV/h，水洗脫液棄去；用 含體積百分比濃度為20%含水乙醇洗脫，流速為2BV/h，乙醇洗脫液減壓 濃縮至相對密度為l.l，減壓干燥，得貓爪草總苷。測得貓爪草苷含量為80 % (UV法；以貓爪草苷D計，重量百分比)，貓爪草苷D含量為1.9% (HPLC 法，重量百分比)。 實施例2
在貓爪草飲片中，加入15倍體積百分比濃度為80%的乙醇，加熱回流 提取4次，每次3h，過濾，合并提取液，減壓回收乙醇，提取液濃縮至每 mL含2.0g生藥的溶液；離心分離后通過填充有AB-8型大孔樹脂的層析柱， 提取液按貓爪草總苷含量計與干樹脂的比例為10，上柱流速4BV/h，樹脂 徑高比為1:9;用水洗滌樹脂8BV,洗脫流速為4BV/h，水洗脫液棄去；用 含體積百分比濃度為95%含水乙醇洗脫，流速為4BV/h，乙醇洗脫液減壓 濃縮至相對密度為1.25，噴霧干燥，得貓爪草總苷。測得貓爪草苷含量為 80% (UV法；以貓爪草苷D計，重量百分比)，貓爪草苷D含量為1.9X
(HPLC法，重量百分比)。 實施例3
取粉碎后的貓爪草藥材5kg，加8倍量70%乙醇，加熱回流提取3次， 每次lh，過濾，合并提取液，濃縮至1.0g生藥/mL;離心(4000轉(zhuǎn)/分鐘) 后通過AB-8型大孔樹脂，藥液按貓爪草總苷含量計與干樹脂的比例為1:5， 上柱流速2BV/h，樹脂徑高比為1:5;用水洗漆樹脂3BV，洗脫流速為4BV/h， 水洗脫液棄去；用含70X水乙醇洗脫3BV，流速為2BV/h，收集乙醇洗脫 液；乙醇液減壓濃縮至相對密度為1.1 (5(TC熱測)，減壓干燥，得貓爪草 總苷。測得貓爪草苷含量為65% (UV法；以貓爪草苷D計，重量百分比)， 貓爪草苷D含量為2.5X (HPLC法，重量百分比)。 實施例4
貓爪草藥材飲片5kg，加10倍量50%乙醇，加熱回流提取2次，每次 1.5h，過濾，合并提取液，濃縮至0.5g生藥/mL;過濾后通過D201型大孔 樹脂，藥液按貓爪草總苷含量計與干樹脂的比例為1:9,上柱流速3BV/h, 樹脂徑高比為1:7;用水洗滌樹脂5BV，洗脫流速為4BV/h，水洗脫液棄去； 用含50%水乙醇洗脫IOBV，流速為4BV/h，收集乙醇洗脫液；乙醇液減壓 濃縮至相對密度為1.25 (5(TC熱測)，噴霧干燥，得貓爪草總苷。測得貓爪 草苷含量為38% (UV法，以貓爪草苷D計，重量百分比)，貓爪草苷D 含量為1.3% (HPLC法，重量百分比)。 實施例5
貓爪草藥材飲片5kg，加15倍量30%乙醇，加熱回流提取3次，每次 0.5h，過濾，合并提取液，濃縮至0.25g生藥/mL;離心(8000轉(zhuǎn)/分鐘)后 通過HPD450大孔樹脂，藥液按貓爪草總苷含量計與干樹脂的比例為1:6， 上柱流速4BV/h,樹脂徑高比為l:9;用水洗滌樹脂2BV，洗脫流速為3BV/h，
水洗脫液棄去；用含50X水乙醇洗脫5BV，流速為3BV/h，收集乙醇洗脫 液；乙醇液減壓濃縮至相對密度為1.2 (5(TC熱測)，噴霧干燥，得貓爪草 總苷。測得貓爪草苷含量為45% (UV法，以貓爪草苷D計，重量百分比)， 貓爪草苷D含量為1.6X (HPLC法，重量百分)。
權(quán)利要求
1.一種利用大孔樹脂制備貓爪草總苷提取物的方法，其特征在于在粉碎的貓爪草藥材或貓爪草飲片中，加入6～15倍體積百分比濃度為10％-80％的乙醇，加熱回流提取2～4次，每次1～3h，過濾，合并提取液，減壓回收乙醇，提取液濃縮至每mL含0.25～2.0g生藥的溶液；過濾或離心分離后通過填充有大孔樹脂的層析柱，提取液按貓爪草總苷含量計與干樹脂的比例為1:5～10，上柱流速1～4BV/h，樹脂徑高比為1:3～1:9；用水洗滌樹脂3～8BV，洗脫流速為2-4BV/h，水洗脫液棄去；用含體積百分比濃度為20～95％含水乙醇洗脫，流速為2～4BV/h，乙醇洗脫液減壓濃縮至相對密度為1.1～1.25，減壓或噴霧干燥，得貓爪草總苷。
2、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種利用大孔樹脂制備貓爪草總苷提取物的方 法，其特征在于所述的離心分離的離心轉(zhuǎn)速為4000 16000轉(zhuǎn)/分鐘。
3、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種利用大孔樹脂制備貓爪草總苷提取物的方 法，其特征在于所述的大孔樹脂為聚苯乙烯型大孔樹脂。
4、 根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種利用大孔樹脂制備貓爪草總苷提取物的方 法，其特征在于所述的大孔樹脂為弱極性大孔樹脂。
5、 一種如權(quán)利要求1所述方法利用大孔樹脂制備的貓爪草總苷提取物的 用途，其特征在于貓爪草總苷提取物用于制備治療結(jié)核病的藥物。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種運用大孔樹脂制備貓爪草總苷提取物的方法及用途。它是在粉碎的貓爪草藥材或貓爪草飲片中，加入6～15倍體積百分比濃度為10％-80％的乙醇，加熱回流提取，過濾，合并提取液，減壓回收乙醇，提取液通過填充有大孔樹脂的層析柱，用水洗滌樹脂，水洗脫液棄去；用含體積百分比濃度為20～95％含水乙醇洗脫，流速為2～4BV/h，乙醇洗脫液減壓濃縮至相對密度為1.1～1.25，減壓或噴霧干燥，得貓爪草總苷。貓爪草總苷含量不低于20％、貓爪草苷D含量不低于1.0％重量的貓爪草總苷提取物，用于治療結(jié)核病。本發(fā)明采用的大孔樹脂對貓爪草總苷的吸附量大，被解吸完全，所得總苷的含量高，因此，可以顯著提高結(jié)貓爪草總苷的提取率，降低生產(chǎn)成本。
文檔編號A61K36/185GK101361815SQ20081012108
公開日2009年2月11日 申請日期2008年10月6日 優(yōu)先權(quán)日2008年10月6日
發(fā)明者付紅偉, 琳 張, 欣 王, 田富饒, 田景奎 申請人:浙江大學