專利名稱：抗小rna病毒化合物及其制備方法和用途的制作方法
技術(shù)領域：
和工業(yè)實用性本發(fā)明涉及肽和肽模擬化合物，這些化合物可以有效地抑制小RNA病毒3C蛋白酶，特別是鼻病毒3C蛋白酶(RVPs)的酶活性，并阻止病毒在細胞培養(yǎng)物中的生長。本發(fā)明還涉及這些化合物在制備藥物組合物和治療鼻病毒感染中的用途。本發(fā)明還涉及這些化合物的合成方法和用于這些合成中的化合物。
背景技術(shù)：
小RNA病毒是一類感染人和其它動物的含微小無被膜正鏈RNA的病毒。這些病毒包括人鼻病毒，人脊髓灰質(zhì)炎病毒，人柯薩奇病毒，人艾柯病毒，人和牛腸病毒，腦心肌炎病毒，腦膜炎病毒，口蹄疫病毒，甲肝病毒等。人鼻病毒是普通感冒的主要病因。至今為止，市場上出售的藥物還不能有效治療普通感冒，而只能減輕癥狀。
小RNA病毒感染可以通過抑制3C蛋白水解酶來治療。這些酶是小RNA病毒自然成熟所需要的。它們負責將基因組大的多元蛋白自動催化裂解成基本病毒蛋白。3C蛋白酶家族成員有半胱氨酸蛋白酶，其中巰基總是常常切割谷氨酰胺-甘氨酸的酰胺鍵。抑制3C蛋白酶被認為可以阻斷多元蛋白的蛋白水解，然后通過干擾病毒顆粒的產(chǎn)生能阻止病毒的成熟和復制。因此，用可被特異性識別的選擇性小分子抑制這種半胱氨酸蛋白酶的加工過程應該是治療和治愈這種性質(zhì)的病毒感染，特別是普通感冒的重要和有用的方法。
最近已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了一些小RNA病毒3C蛋白酶的酶活性的小分子抑制劑(即，抗小RNA病毒化合物)。例如，參見Webber等人提交的美國專利申請08/850,398(申請日1997年5月2日)；Dragovich等人提交的美國專利申請08/991,282(申請日1997年12月16日)；Webber等人提交的美國專利申請08/991,739(申請日1997年12月16日)，這些文獻在此一并引作參考。這些美國專利申請描述了一些抗小RNA病毒化合物。但仍需要發(fā)現(xiàn)作為特別有效的抗小RNA病毒劑的小分子化合物。
發(fā)明概述因此，本發(fā)明一個目的是要發(fā)現(xiàn)抗小RNA病毒特別有效的小分子量化合物。本發(fā)明另一目的是要提供用于所說蛋白酶抑制化合物合成的中間體和用于這些合成的合成方法。本發(fā)明還一個目的是要得到高效治療由小RNA病毒3C蛋白酶抑制介導的疾病如普通感冒的藥物組合物。
由于本發(fā)明化合物的發(fā)現(xiàn)這些目的都已經(jīng)達到。本發(fā)明化合物是小RNA病毒3C蛋白酶抑制劑，表現(xiàn)出特別強的抗病毒活性。我們驚喜地發(fā)現(xiàn)，這些含有5員雜環(huán)基的肽和肽模擬化合物具有很高的鼻病毒蛋白酶抑制活性。我們還驚喜地發(fā)現(xiàn)，通過用包括γ-或δ-內(nèi)酰胺的側(cè)鏈取代在一些已知鼻病毒蛋白酶抑制化合物中發(fā)現(xiàn)的谷氨酰胺類部分可以顯著地提高這些肽和肽模擬化合物的鼻病毒蛋白酶抑制活性。
本發(fā)明抑制劑可用通式(I)表示 其中Y是-N(Ry)-，-C(Ry)(Ry)-或-O-，其中每個Ry分別是-H或低級烷基；R1是-H，-F，-烷基，-OH，-SH或O-烷基；R2和R3分別是-H； 或
其中n是整數(shù)0-5，A1是CH或N，A2和各A3分別選自C(R41)(R41)，N(R41)，S，S(O)，S(O)2和O，A4是NH或NR41，其中各R41分別是H或低級烷基，條件是在上述A1，A2，(A3)n，A4和C＝O構(gòu)成的環(huán)中不能有兩個以上雜原子連續(xù)出現(xiàn)，而且至少R2和R3之一是 或 R5和R6分別是H，F(xiàn)，烷基，環(huán)烷基，雜環(huán)烷基，芳基或雜芳基；R7和R8分別是H，烷基，環(huán)烷基，雜環(huán)烷基，芳基，雜芳基，-OR17，-SR17，-NR17R18，-NR19NR17R18或-NR17OR18，其中R17，R18和R19分別是H，烷基，環(huán)烷基，雜環(huán)烷基，芳基，雜芳基或?；瑮l件是至少R7和R8之一是烷基，環(huán)烷基，雜環(huán)烷基，芳基，雜芳基，-OR17，-SR17，-NR17R18，-NR19NR17R18或-NR17OR18；R9是合適的有機部分；以及Z和Z1分別是H，F(xiàn)，烷基，環(huán)烷基，雜環(huán)烷基，芳基，雜芳基，-C(O)R21，-CO2R21，-CN，-C(O)NR21R22，-C(O)NR21OR22，-C(S)R21，-C(S)NR21R22，-NO2，-SOR21，-SO2R21，-SO2NR21R22，-SO(NR21)(OR22)，-SONR21，-SO3R21，-PO(OR21)2，-PO(R21)(R22)，-PO(NR21R22)(OR23)，-PO(NR21R22)(NR23R24)，-C(O)NR21NR22R23或-C(S)NR21NR22R23，其中R21，R22，R23和R24分別是H，烷基，環(huán)烷基，雜環(huán)烷基，芳基，雜芳基，酰基或硫?；騌21，R22，R23和R24中的任意兩個與它們相連的原子一起形成一個雜環(huán)烷基，條件是Z和Z1不能二者均為H；或Z1和R1與它們相連的原子一起形成一個環(huán)烷基或雜環(huán)烷基，其中除了不能形成環(huán)烷基或雜環(huán)烷基的基團之外Z1和R1的定義如上；或Z和Z1與它們相連的原子一起形成一個環(huán)烷基或雜環(huán)烷基，其中除了不能形成環(huán)烷基或雜環(huán)烷基的基團之外Z和Z1的定義如上。
本發(fā)明還涉及式I化合物的前藥，可藥用鹽，有藥物活性的代謝物和可藥用溶劑化物。
在式I化合物的優(yōu)選的實施方案中，R2和R3分別是-H； 或 n是整數(shù)0-5，各R41是H或低級烷基，在用*表示的碳原子位置的立體化學結(jié)構(gòu)可以是R或S；條件是至少R2和R3之一是 或 R9優(yōu)選是具有1-3個選自O，N和S雜原子的5員雜環(huán)。
在另一優(yōu)選的實施方案中，式I中的各變量如下Z和Z1分別是H，F(xiàn)，低級烷基，-CO2R21和-C(O)NR21R22，條件是Z和Z1不能二者均為H；其中R21和R22各自分別是H，烷基，環(huán)烷基，雜環(huán)烷基，芳基，雜芳基，酰基或硫?；?，或R21和R22與它們相連的原子一起形成一個雜環(huán)烷基。至少R2和R3之一是 或 另一個是H。R5和R6各自分別選自H，F(xiàn)，烷基，環(huán)烷基，雜環(huán)烷基，芳基和雜芳基，更優(yōu)選R5和R6之一是H，另一個是烷基或芳基(例如，未取代或取代的苯基甲基)。R7和R8分別是H，烷基，環(huán)烷基，雜環(huán)烷基，芳基或雜芳基；更優(yōu)選R7和R8之一是H，另一個是烷基(例如，2-丙基，2-甲基-2-丙基或2-甲基-1-丙基)或芳基甲基(例如，未取代或取代的苯基甲基或萘基甲基)。R9是具有1-3個選自O，N和S雜原子的5員雜環(huán)，更優(yōu)選有至少一個N雜原子和至少一個O雜原子的5員雜環(huán)[例如，未取代或取代的1，2-噁唑基(即，異噁唑基)，1，3-噁唑基(即，噁唑基)或噁二唑基(即，1，2，3-噁二唑基，1，2，4-噁二唑基或1，2，5-噁二唑基)]。當R9是噁二唑基時，優(yōu)選是未取代或一甲基取代的1，2，4-噁二唑基。在特別優(yōu)選的實施方案中，R9是3-異噁唑基或5-異噁唑基，既可以是未取代的，也可以是被一或兩個甲基和/或鹵素取代的，氯和氟是優(yōu)選的鹵素取代基。
在一個優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明化合物，前藥，可藥用鹽，有藥物活性的代謝物和溶劑化物在H1-HeLa細胞培養(yǎng)測定中具有EC50小于或等于100μM的抗小RNA病毒活性。更優(yōu)選地，在H1-HeLa細胞培養(yǎng)測定中具有EC50小于或等于10μM的抗小RNA病毒活性。
另一方面，本發(fā)明涉及式II中間體，優(yōu)選式II’，它們可用于某些化合物的合成過程， 其中p是整數(shù)0-5；A11是CH或N，A12和每個A13分別選自C(R61)(R61)，N(R61)，S，S(O)，S(O)2和O，A14是NH或NR61，其中各R61分別是H，烷基，?；蚍蓟?，條件是在上述A11，A12，(A13)n，A14和C＝O構(gòu)成的式II中的環(huán)中不能有兩個以上雜原子連續(xù)出現(xiàn)；每個R141分別是H或低級烷基；R51是H，烷基，?；蚍蓟?；R52，R53和R54分別選自H，羥基，烷基，?；头蓟?；或R52，R53和R54其中任意兩個一起構(gòu)成＝O或＝C(R57)(R58)，其中R57和R58各自分別選自H，烷基，CO2(C1-C6)烷基，C(O)N(C1-C6)烷基和CO2(芳基)；及R55和R56各自分別是H或氮的適當保護基。
本發(fā)明還涉及式II和II’化合物的可藥用鹽。
本發(fā)明還涉及藥物組合物，其中含有至少一種治療有效量的式I化合物，或其前藥，可藥用鹽，有藥物活性的代謝物或溶劑化物。此外，本發(fā)明還涉及抑制小RNA病毒3C蛋白酶的方法，包括施用至少一種治療有效量的式I化合物，或其前藥，可藥用鹽，有藥物活性的代謝物或溶劑化物。
發(fā)明詳述和優(yōu)選的實施方案本發(fā)明涉及通式I化合物， 其中Y，R1，R2，R3，R5，R6，R7，R8，R9，Z和Z1定義如上，涉及其可藥用鹽，前藥，活性代謝物和溶劑化物。
優(yōu)選地，這些化合物，可藥用鹽，前藥，活性代謝物和溶劑化物具有抗小RNA病毒活性，更優(yōu)選具有抗鼻病毒活性，在H1-HeLa細胞培養(yǎng)測定中相應于EC50小于或等于100μM，更優(yōu)選相應于在H1-HeLa細胞培養(yǎng)測定中EC50小于或等于10μM。
本發(fā)明還涉及式I-A，I-B和I-C優(yōu)選化合物，及其可藥用鹽，前藥，活性代謝物和溶劑化物， 其中，式I-A中的Ry是H或低級烷基，R1，R2，R3，R5，R6，R7，R8，R9，Z和Z1定義如上。
本發(fā)明式I-A化合物，以下稱為“類肽”化合物；I-B化合物，以下稱為“酮基亞甲基型”化合物；及I-C化合物，以下稱為“擬肽”化合物；它們之間的區(qū)別在于主鏈，這會影響具體的生物分布或其它物理特性；然而，它們都具有很強的鼻病毒蛋白酶抑制活性。
在上述式I-A，I-B和I-C化合物的優(yōu)選的實施方案中，R1是H，F(xiàn)或烷基；Ry(在式I-A中)是H或甲基；R3，R5和R8各為H；R2為下列基團之一； 和 R6是烷基，優(yōu)選有一個任選的芳基取代基；R7是烷基，環(huán)烷基，雜環(huán)烷基，芳基或雜芳基；R9是具有1-3個選自O，N和S雜原子的5員雜環(huán)，優(yōu)選至少一個雜原子是N雜原子，該雜環(huán)是未取代或取代的，其中任選的取代基優(yōu)選是鹵素或低級烷基，更優(yōu)選單-氯或-氟或甲基；及Z和Z1分別是H，F(xiàn)，烷基，環(huán)烷基，雜環(huán)烷基，芳基，雜芳基，-C(O)R21，-CO2R21，-CN，-C(O)NR21R22，-C(O)NR21OR22，-C(S)R21，-C(S)NR21R22，-NO2，-SOR21，-SO2R21，-SO2NR21R22，-SO(NR21)(OR22)，-SONR21，-SO3R21，-PO(OR21)2，-PO(R21)(R22)，-PO(NR21R22)(OR23)，-PO(NR21R22)(NR23R24)，-C(O)NR21NR22R23或-C(S)NR21NR22R23，其中Z和Z1不能二者均為H，而R21，R22，R23和R24分別是H，烷基，環(huán)烷基，雜環(huán)烷基，芳基，雜芳基，?；蛄蝓；?，或R21，R22，R23和R24中的任意兩個與它們相連的原子一起形成一個雜環(huán)烷基，或Z和Z1(二者定義如上)與它們相連的原子一起形成一個雜環(huán)烷基。
在優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明化合物是式I-A’，I-B’和I-C’化合物，
其中R1，Z和Z1定義如上；n是1或2；Ry(在式I-A’中)是H或低級烷基；R6是烷基，環(huán)烷基，雜環(huán)烷基，芳基或雜芳基；R7是烷基，環(huán)烷基，雜環(huán)烷基，芳基，雜芳基，-OR17，-SR17，-NR17R18，-NR19NR17R18或-NR17OR18，其中R17，R18和R19分別是H，烷基，環(huán)烷基，雜環(huán)烷基，芳基，雜芳基或酰基；R9是具有1-3個選自O，N和S雜原子的5員雜環(huán)，該雜環(huán)是未取代或取代的，其中任選的取代基優(yōu)選是一或兩個低級烷基和/或鹵素。
本發(fā)明還涉及這些化合物的前藥，可藥用鹽，有藥物活性的代謝物和溶劑化物。
在優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明RVP抑制劑選自式I-A”，I-B”和I-C”立體有擇化合物之一，及其可藥用鹽，前藥，活性代謝物和溶劑化物，
其中Ry，R1，R2，R6，R7，R9，Z和Z1定義如上。
在優(yōu)選的式I-A”，I-B”和I-C”化合物中，R1是H，F(xiàn)或甲基；Ry(在式I-A’中)是H或低級烷基；R2為下列基團之一； 和 R6是芳基甲基或芳硫基甲基，其中芳基優(yōu)選是任選地取代的苯基；R7是烷基，更優(yōu)選2-丙基，2-甲基-2-丙基，2-甲基-1-丙基，以及芳基甲基，其中芳基優(yōu)選苯基或萘基；R9是異噁唑基，噁唑基或噁二唑基，任選地被一或兩個低級烷基和/或鹵素取代；及Z是H，Z1是-CO2R21，-CN或-C(O)NR21R22，其中R21和R22定義如上，或Z和Z1一起形成一個環(huán)形酯或酰胺。
更優(yōu)選地，本發(fā)明RVP抑制劑是式I-A，I-B和I-C化合物之一，及其可藥用鹽，前藥，活性代謝物和溶劑化物，
其中n，Ry，R1，R20，R6，R7，R9，Z和Z1定義如上。
在優(yōu)選的式(I-A)，(I-B)和(I-C)化合物中，R1是H，F(xiàn)或甲基；Ry(在式I-A’中)是H或低級烷基；R20是氫；R6是芳基甲基或芳硫基甲基，其中芳基優(yōu)選未取代的苯基，或被鹵素，低級烷基和/或低級烷氧基取代的苯基；R7是烷基，更優(yōu)選的是選自2-丙基，2-甲基-2-丙基，2-甲基-1-丙基，以及芳基甲基，其中芳基優(yōu)選苯基或萘基；R9是異噁唑基，噁唑基或噁二唑基，任選地被一或兩個低級烷基和/或鹵素取代；及Z是H，Z1是-CO2R21，-CN或-C(O)NR21R22，其中R21和R22定義如上，或Z和Z1一起形成一個環(huán)形酯或酰胺。
在本發(fā)明特別優(yōu)選的通式(I)(及其子結(jié)構(gòu)式)化合物中，R1是H或F。
另一方面，本發(fā)明涉及式II和II’中間體化合物， 其中各變量(p，A11，A12，A13，A14，R51，R52，R53，R54，R55，R56和R141)定義如上。這些化合物被用于合成藥物上有用的式I化合物。
優(yōu)選的R55和R56基團是H和適當?shù)牡Ｗo基，例如，BOC(叔丁氧羰基)，CBZ(芐氧羰基)，F(xiàn)MOC(芴-9-甲氧羰基)，其它烷氧羰基(例如，甲氧羰基)，及三苯甲基。其它合適的氮保護基可由技術(shù)人員很容易地選擇(例如，參見Greene和Wutz的《化學合成中的保護基》，第2版，John Wiley & Sons，NY(1991))。優(yōu)選的R52，R53和R54基團是H，烷氧基，羥基和羰基。
優(yōu)選的式II化合物如下
其中PN是合適的氮保護基，q是1或2。
其它優(yōu)選的中間體如下 其中BOC是叔丁氧羰基。
當然，優(yōu)選的立體異構(gòu)體是 特別優(yōu)選的中間體包括下列化合物
根據(jù)本領域使用的習慣，這里結(jié)構(gòu)式中所用的 表示化學鍵，是基團或取代基與核心結(jié)構(gòu)或骨架結(jié)構(gòu)連接點。
化學結(jié)構(gòu)中包括手性碳；除非表示出具體方位，否則包括全部兩種立體異構(gòu)體形式。
本文所用術(shù)語“烷基”是要代表有飽和和/或不飽和碳原子和氫原子的直鏈或支鏈單價基團，如甲基(Me)，乙基(Et)，丙基，異丙基，丁基，異丁基，叔丁基，乙烯基，戊烯基，丁烯基，丙烯基，乙炔基，丁炔基，丙炔基，戊炔基，己炔基等，它們可以是未取代的(即，具有碳原子和氫原子)，或被一或多個合適的下面定義的取代基取代(例如，一或多個鹵素，如F，Cl，Br或I，其中優(yōu)選F和Cl)?！暗图壨榛笔侵告溕嫌?-4個碳原子的烷基。
“環(huán)烷基”指含有3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13或14個環(huán)碳原子的飽和或不飽和的非芳香族單價單環(huán)、雙環(huán)或三環(huán)基團，它可以是未取代的或者被一個或多個適當?shù)南旅娑x的取代基取代，而且，它可以與一個或多個未取代的或者被一個或多個取代基取代的雜環(huán)烷基，芳基或雜芳基稠合。環(huán)烷基的說明性實例包括下列結(jié)構(gòu) 和 “雜環(huán)烷基”指含有3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14，15，16，17或18個環(huán)原子的飽和或不飽和的非芳香族單價單環(huán)、雙環(huán)或三環(huán)基團，它可以是未取代的或者被一個或多個適當?shù)南旅娑x的取代基取代，環(huán)原子中包括1，2，3，4或5個選自氮，氧和硫的雜原子，而且，它可以與一個或多個未取代的或者被一個或多個適當?shù)娜〈〈碾s環(huán)烷基，芳基或雜芳基稠合。環(huán)烷基的說明性實例包括下列結(jié)構(gòu)
和 “芳基”指含有6，10，14或18個碳原子的芳香族單價單環(huán)、雙環(huán)或三環(huán)基團，它可以是未取代的或者被一個或多個適當?shù)南旅娑x的取代基取代，而且，它可以與一個或多個未取代的或者被一個或多個適當?shù)娜〈〈沫h(huán)烷基，雜環(huán)烷基或雜芳基稠合。環(huán)烷基的說明性實例包括下列結(jié)構(gòu) 和 “雜芳基”指含有4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14，15，16，17或18個環(huán)原子，其中包括1，2，3，4或5個選自氮，氧和硫的雜原子，的飽和或不飽和的非芳香族單價單環(huán)、雙環(huán)或三環(huán)基團，它可以是未取代的或者被一個或多個適當?shù)南铝腥〈〈?，環(huán)原子中而且，它可以與一個或多個未取代的或者被一個或多個取代基取代的環(huán)烷基，雜環(huán)烷基或芳基稠合。環(huán)烷基的說明性實例包括下列結(jié)構(gòu)
和 “雜環(huán)”指雜芳基或雜環(huán)烷基(它們定義如上，可以任選地被取代)。
“?；敝?C(O)-R，其中R是如下定義的取代基。
“硫代?；敝?C(S)-R，其中R是如下定義的取代基。
“磺酰基”指-SO2-R，其中R是如下定義的取代基。
“羥基”指-OH。
“氨基”指-NH2。
“烷基氨基”指-NHRa，其中Ra是烷基。
“二烷基氨基”指-NRaRb，其中Ra和Rb分別為烷基。
“烷氧基”指-ORa，其中Ra是烷基。烷氧基的實例包括甲氧基，乙氧基，丙氧基等。
“烷氧羰基”指-C(O)ORa，其中Ra是烷基。
“烷基磺?；敝?SO2Ra，其中Ra是烷基。
“烷基氨基羰基”指-C(O)NHRa，其中Ra是烷基。
“二烷基氨基羰基”指-C(O)NRaRb，其中Ra和Rb分別為烷基。
“巰基”指-SH。
“烷硫基”指-SRa，其中Ra是烷基。
“羧基”指-C(O)OH。
“氨基甲?；敝?C(O)NH2。
“芳氧基”指-ORc，其中Rc是芳基。
“雜芳氧基”指-ORd，其中Rd是雜芳基。
“芳硫基”指-SRc，其中Rc是芳基。
“雜芳硫基”指-SRd，其中Rd是雜芳基。
“合適的有機基團”指本領域技術(shù)人員可識別的，如通過常規(guī)試驗，且對本發(fā)明化合物的抑制活性沒有反作用的任何有機基團。合適的有機基團的說明性實例包括，但不限于，羥基，烷基，氧基，環(huán)烷基，雜環(huán)烷基，芳基，雜芳基，?；酋；?，巰基，烷硫基，烷氧基，羧基，氨基，烷基氨基，二烷基氨基，氨基甲?；剂蚧?，雜芳硫基等。
術(shù)語“取代基”或“適當?shù)娜〈敝副绢I域技術(shù)人員可識別或可選擇，如通過常規(guī)試驗，的任何合適的取代基。合適的有機基團的說明性實例包括，但不限于，羥基，鹵素，氧基，烷基，?；?，磺酰基，巰基，烷硫基，烷氧基，環(huán)烷基，雜環(huán)烷基，芳基，雜芳基，羧基，氨基，烷基氨基，二烷基氨基，氨基甲?；佳趸?，雜芳氧基，芳硫基，雜芳硫基等。
術(shù)語“任選地取代的”是要表示未取代的或被一或多個適當取代基取代的特定基團，除非任選的取代基是被明確規(guī)定的，在這種情況下該術(shù)語表示未取代的或被特定取代基取代的基團。正如上面所定義的，各種基團可以是未取代的或取代的(即，它們?nèi)芜x地被取代)，除非另外指明(例如，通過指出特定基團是未取代的)。
“前藥”指在生理條件下或通過溶劑分解被轉(zhuǎn)化成或代謝成具有藥物活性的特定化合物的化合物。
“有藥物活性的代謝物”指通過特定化合物在體內(nèi)的代謝生成的藥理學活性產(chǎn)物。
“溶劑化物”指仍保留特定化合物生物有效性的可藥用溶劑化物形式。溶劑化物的實例包括本發(fā)明化合物與水，異丙醇，乙醇，甲醇，DMSO，乙酸乙酯，乙酸或乙醇胺的結(jié)合物。
“可藥用鹽”指保留特定化合物的游離酸和堿生物有效性并且沒有不良的生物或其它作用的鹽?？伤幱名}的實例包括硫酸鹽，焦硫酸鹽，硫酸氫鹽，亞硫酸鹽，亞硫酸氫鹽，磷酸鹽，磷酸氫鹽，磷酸二氫鹽，偏磷酸鹽，焦磷酸鹽，氯化物，溴化物，碘化物，乙酸鹽，丙酸鹽，癸酸鹽，辛酸鹽，丙烯酸鹽，甲酸鹽，異丁酸鹽，己酸鹽，庚酸鹽，丙炔酸鹽，草酸鹽，丙二酸鹽，琥珀酸鹽，辛二酸鹽，癸二酸鹽，延胡索酸鹽，馬來酸鹽，丁炔-1，4-二酸鹽，己炔-1，6-二酸鹽，苯甲酸鹽，氯苯甲酸鹽，甲基苯甲酸鹽，二硝基苯甲酸鹽，羥基苯甲酸鹽，甲氧基苯甲酸鹽，鄰苯二甲酸鹽，磺酸鹽，二甲苯磺酸鹽，苯基乙酸鹽，苯基丙酸鹽，苯基丁酸鹽，檸檬酸鹽，乳酸鹽，γ-羥基丁酸鹽，乙醇酸鹽，酒石酸鹽，甲磺酸鹽，丙磺酸鹽，萘-1-磺酸鹽，萘-2-磺酸鹽和扁桃酸鹽。
如果本發(fā)明化合物是堿，所需的鹽可以用本領域已知的任何適當方法制備，包括用下列各種酸處理游離堿獲得無機酸，如鹽酸，氫溴酸，硫酸，硝酸，磷酸等；或有機酸，如乙酸，馬來酸，琥珀酸，扁桃酸，富馬酸，丙二酸，丙酮酸，草酸，乙醇酸，水楊酸；吡喃糖苷酸，如葡糖醛酸或半乳糖醛酸；α-羥基酸，如檸檬酸或酒石酸；氨基酸，如天冬氨酸或谷氨酸；芳香酸，如苯甲酸或肉桂酸；磺酸，如對甲苯磺酸或乙磺酸；等等。
如果本發(fā)明化合物是酸，所需的鹽可以用本領域已知的任何適當方法制備，包括用下列無機堿或有機堿處理游離酸獲得胺(伯、仲或叔胺)；堿金屬或堿土金屬氫氧化物；等等。合適鹽的說明性實例包括從下列物質(zhì)衍生的有機鹽氨基酸，如甘氨酸和精氨酸；伯、仲和叔胺；及環(huán)胺，如哌啶，嗎啉和哌嗪；以及從下列物質(zhì)衍生的無機鹽鈉，鈣，鉀，鎂，錳，鐵，銅，鋅，鋁和鋰。
如果本發(fā)明化合物或其鹽或溶劑化物是固體形式，則本領域技術(shù)人員應該理解，本發(fā)明化合物或其鹽或溶劑化物可以不同的晶體形式存在，所有這些形式都屬于本發(fā)明范圍和指定的結(jié)構(gòu)式。
本發(fā)明化合物可以單個立體異構(gòu)體和外消旋體形式存在，也可以對映體和/或非對映體混合物形式存在。所有這些單個的立體異構(gòu)體，外消旋體以及它們的混合物都屬于本發(fā)明范圍。但是，優(yōu)選使用光學純形式的本發(fā)明化合物。
正如本領域技術(shù)人員所理解的那樣，光學純化合物是一種對映體結(jié)構(gòu)純的化合物。本文所用術(shù)語“光學純”指至少是活性充足的化合物。優(yōu)選地，能產(chǎn)生具有所要藥理性能的純本發(fā)明化合物的光學量的單個對映體至少要含有90％單一異構(gòu)體(80％對映體過量(e.e.))，更優(yōu)選至少95％(90％e.e.)，更加優(yōu)選至少97.5％(95％e.e.)，最優(yōu)選至少99％(98％e.e.)。
式I化合物或其任一子結(jié)構(gòu)式中的R1優(yōu)選為H或F。
在式I化合物中，優(yōu)選R9是未取代的或是取代的異噁唑基，其中任選的取代基優(yōu)選是一個或兩個甲基和/或鹵素。
特別優(yōu)選的本發(fā)明的實施方案是下述式I-A”相關(guān)化合物 優(yōu)選的本發(fā)明化合物包括上述式I-A”中的肽(類肽)化合物(A-1)至(A-8)，其中R1是H，Z是H，Ry是H，且R2，R6，R7，Z1和R9分別定義如下(A-1)，R2是CH2CH2C(O)NH2，R6是CH2Ph，R7是CH2CH(CH3)2，Z1是CO2CH2CH3和R9是 (A-2)，R2是CH2CH2C(O)NH2，R6是CH2Ph，R7是CH2CH(CH3)2，Z1是CO2CH2CH3和R9是 (A-3)，R2是CH2CH2C(O)NH2，R6是 R7是C(CH3)3，Z1是CO2CH2CH3和R9是 (A-4)，R2是CH2CH2C(O)NH2，R6是 ，R7是C(CH3)3，Z1是CO2CH2CH3和R9是 (A-5)，R2是 ，R6是 ，R7是CH(CH3)2，Z1是CO2CH2CH3和R9是 (A-6)，R2是CH2CH2C(O)NH2，R6是 ，R7是CH(CH3)2，Z1是CO2CH2CH3和R9是 (A-7)，R2是 ，R6是 ，R7是C(CH3)3，Z1是CO2CH2CH3和R9是
(A-8)，R2是 ，R6是 ，R7是CH(CH3)2，Z1是CO2CH2CH3和R9是 優(yōu)選的式I-A類肽化合物還包括下列化合物(A-9)至(A-13)，其中R1是H，Z是H，Z1是CO2CH2CH3，Ry是CH3，及R2，R6，R7和R9分別定義如下(A-9)，R2是CH2CH2C(O)NH2，R6是 ，R7是 和R9是 (A-10)，R2是CH2CH2C(O)NH2，R6是CH2Ph，R7是CH2CH(CH3)2和R9是 (A-11)，R2是CH2CH2C(O)NH2，R6是 R7是 和R9是 (A-12)，R2是CH2CH2C(O)NH2，R6是 R7是CH2CH(CH3)2和R9是 (A-13)，R2是CH2CH2C(O)NH2，R6是 R7是 和R9是 其它優(yōu)選的類肽化合物包括下列化合物(A-14)至(A-28)


下述優(yōu)選的本發(fā)明酮基亞甲基型化合物(B-1)至(B-4)與式I-B”化合物相關(guān) (B-1)，R2是CH2CH2C(O)NH2，R6是 ，R7是CH(CH3)2，Z是H，Z1是CO2CH2CH3和R9是 (B-2)，R2是 ，R6是 ，R7是CH(CH3)2，Z是H，Z1是CO2CH2CH3和R9是 (B-3)，R2是 ，R6是 ，R7是CH(CH3)2，Z和Z1一起形成 其中羰基是順著對應于式I中R1的氫的，及R9是
(B-4)，R2是 R6是 R7是CH(CH3)2，Z是H，Z1是CO2CH2CH3和R9是 下述優(yōu)選的本發(fā)明擬肽型化合物(C-1)至(C-2)與式I-C”化合物相關(guān)，其中R1是H (C-1)，Z是H，R2是CH2CH2C(O)NH2，R6是 R7是CH(CH3)2，Z1是CO2CH2CH3和R9是 (C-2)，Z是H，R2是 R6是 R7是CH(CH3)2，Z1是CO2CH2CH3和R9是 通過從下列取代基中選取不同的變量可以制備與式I化合物相關(guān)的其它化合物Ry＝H或CH3；R1＝H或CH3； 或 或苯基甲基(即，芐基)，其中的芳基是任選地被一個、兩個或三個分別選自鹵素、甲氧基和甲基的取代基取代的芳基；R7＝2-甲基-1-丙基，2-丙基，2-甲基-2-丙基，芐基或 ；及
或 本發(fā)明還涉及抑制小RNA病毒3C蛋白酶活性的方法，包括將該蛋白酶與有效量式I化合物或其可藥用鹽，前藥，有藥物活性的代謝物或溶劑化物接觸。例如，可以通過施用式I化合物或其可藥用鹽，前藥，有藥物活性的代謝物或溶劑化物抑制哺乳動物組織中的小RNA病毒3C蛋白酶活性。更優(yōu)選地，本方法涉及到抑制鼻病毒蛋白酶活性。
“治療”指至少減輕包括人在內(nèi)的哺乳動物的病情，如通過抑制一種或多種小RNA病毒3C蛋白酶的活性緩解病情。所說小RNA病毒3C蛋白酶包括人鼻病毒，人脊髓灰質(zhì)炎病毒，人柯薩奇病毒，腦心肌炎病毒，腦膜炎病毒和甲肝病毒?！爸委煛边€包括(a)預防性地治療哺乳動物，特別是當發(fā)現(xiàn)哺乳動物已經(jīng)具有疾病癥狀但還沒有確診已經(jīng)患有這種疾病時所進行的預先處置；(b)抑制病情發(fā)展；和/或(c)整個或部分緩解病情。
作為小RNA病毒3C蛋白酶活性抑制劑的本發(fā)明化合物的活性可以用本領域技術(shù)人員已知的任何合適方法測量，包括體內(nèi)和體外測定。測量活性的合適測定法的實例包括本文所述的抗病毒H1-HeLa細胞培養(yǎng)測定法。
式I化合物及其可藥用鹽，前藥，有藥物活性的代謝物和溶劑化物的給藥方法可以根據(jù)本領域技術(shù)人員認可的給藥方式進行。合適的給藥方式的說明性實例包括口服，經(jīng)鼻，胃腸外，局部，透皮和直腸給藥。優(yōu)選鼻內(nèi)給藥。
本發(fā)明式I化合物或其可藥用鹽，前藥，有藥物活性的代謝物和溶劑化物可以藥物組合物形式以本領域技術(shù)人員可以識別的任何適合的藥物劑型給藥。合適的藥物劑型包括固體，半固體，液體或凍干制劑，例如，片劑，粉劑，膠囊劑，栓劑，懸浮劑，脂質(zhì)體和氣溶膠。本發(fā)明藥物組合物中還可含有適當賦形劑，稀釋劑，媒介物和載體，以及根據(jù)所要實現(xiàn)的用途而含有的其它有藥物活性的藥劑。在優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明藥物組合物是以栓劑形式鼻內(nèi)給藥。
制備藥物組合物適當劑型的可接受方法是已知的或可以由本領域技術(shù)人員按常規(guī)確定。例如，藥物制劑可以由藥劑師用常規(guī)技術(shù)制備，包括混合，制粒，在制作片劑時，如果需要，還要進行擠壓，或者進行混合，填充及適當?shù)貙⑺璩煞秩芙?，制成所要的用于口服，胃腸外，局部，陰道內(nèi)，鼻內(nèi)，支氣管內(nèi)，眼內(nèi)，耳內(nèi)和/或直腸給藥的產(chǎn)品。
固體或液體的可藥用載體，稀釋劑，媒介物或賦形劑可以用于藥物組合物。說明性固體載體包括淀粉，乳糖，硫酸鈣二水合物，白土，蔗糖，滑石，明膠，果膠，阿拉伯膠，硬脂酸鎂和硬脂酸。說明性液體載體包括糖漿，花生油，橄欖油，鹽水溶液和水。載體或稀釋劑中可以含有適當?shù)木忈尣牧希?，獨自使用或與蠟一起使用的一硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯。當使用液體載體時，制劑可以是糖漿，酏劑，乳液，軟明膠膠囊，無菌注射液(如溶液)，非水性或水性液體懸浮液形式。
藥物組合物的劑量至少含有治療有效量的活性化合物(即，含有式I化合物或其可藥用鹽，前藥，有藥物活性的代謝物和溶劑化物)，而且優(yōu)選制成一個或多個藥物劑量單位。將所選劑量以已知的或適當?shù)慕o藥方式給需要治療的哺乳動物如人類患者施用以抑制小RNA病毒3C蛋白酶活性。所用劑型包括局部給藥劑型如軟膏或乳膏；口服劑型；直腸劑型如栓劑；通過注射的胃腸外劑型；或陰道內(nèi)，鼻內(nèi)，支氣管內(nèi)，耳內(nèi)或眼內(nèi)的連續(xù)滴注劑型。
“治療有效量”指當給需要的哺乳動物施用本發(fā)明化合物時其用量足以有效治療需要通過抑制小RNA病毒3C蛋白酶活性緩解的病情。所說小RNA病毒3C蛋白酶包括人鼻病毒，人脊髓灰質(zhì)炎病毒，人柯薩奇病毒，腦心肌炎病毒，腦膜炎病毒和甲肝病毒。要達到治療有效目的的本發(fā)明給定化合物的用量依賴于多種因素，如具體所用的化合物，病情和及其嚴重程度，需要治療的哺乳動物的特性，該用量可由醫(yī)生按常規(guī)確定。
為了說明起見，用于治療鼻病毒感染的本發(fā)明化合物的經(jīng)鼻給藥制劑可以制備如下，其中所有百分比均為重量/重量百分比(w/w％)，懸浮液均在純水中制成。將式I化合物微化使粒徑減小到D90＜10μm。制成所含活性化合物的最終濃度約為0.01-2％的懸浮液，優(yōu)選約0.2-2％。可以加入適當防腐劑，從本領域已知的防腐劑中選取，例如，苯扎氯銨/EDTA，合適的最終濃度約為，例如，0.02％/0.01％。還可以含有懸浮劑，如微晶纖維素(最終濃度約為1-1.5％，優(yōu)選約1.2％)和羧甲基纖維素鈉纖維素(最終濃度約為0.1-0.2％，優(yōu)選約0.13％)的混合物。所含表面活性劑如聚山梨糖酯80的最終濃度約為0.05-0.2％，優(yōu)選約0.1％。所含強力調(diào)節(jié)劑如葡萄糖的最終濃度約為4-6％，優(yōu)選約5％。用無毒酸和/或堿，如HCl和/或NaOH，將溶液的最終pH值適當調(diào)節(jié)到生理范圍，如pH 4-6。
實施例17所列的本發(fā)明化合物用于鼻內(nèi)給藥的示例性制劑具有下列組成，其中所有百分比均為重量/重量百分比(w/w％)，懸浮液均在純水中制成。
一般合成方法本發(fā)明式I化合物可以用本發(fā)明方法有效地制備，包括采用下述一般方法。這些一般方法中的R1，R2，R3，R5，R6，R7，R8，R9，Ry，Z和Z1定義如上，而所用R4(作為速記符)意指
其中R7，R8和R9定義如上。
在用來合成式I-A類肽化合物的一般方法I中，氨基酸A(其中P1是合適的氮的保護基)被用來與氨基醇(或其鹽)B進行形成酰胺的反應，生成酰胺C。然后將化合物C脫保護，得到游離胺(或其鹽)D。將胺D與氨基酸E(E既可以與R4基團合并，也可以與氮的保護基(P2)合并)進行形成鍵的反應，生成化合物F。將化合物F氧化成中間體G，然后將其轉(zhuǎn)變成不飽和產(chǎn)物H。如果保護基已經(jīng)用在氨基酸E或任意一個R基團(R1-R9)和/或Ry和/或Z和/或Z1上，則要將產(chǎn)物H脫保護和/或進一步修飾，生成脫保護的或修飾的H。
制備中間體F的另一種方法如下所述。將氨基酸E與氨基酸(或其鹽)I(其中P3是合適的氮的保護基)進行鍵形成反應，生成中間體J。將分子J進行脫保護，得到游離羧酸K，接著將其與氨基醇(或其鹽)B進行酰胺形成反應，得到中間體F。
在用來合成式I-A類肽化合物的一般方法II中，氨基酸L(其中P1是合適的氮的保護基)被轉(zhuǎn)化成羰基衍生物M，其中“Lv”代表離去基團。進行化合物M的反應，使Lv被R1置換，得到衍生物N。將衍生物N轉(zhuǎn)變成不飽和產(chǎn)物O。將不飽和化合物O脫保護后得到游離胺(或其鹽)P，或者先對Z或Z1進行修飾得到O’，然后脫保護得到P。接著將中間體P與羧酸K進行酰胺形成反應，得到終產(chǎn)物H。如果保護基已經(jīng)用在任意一個R基團(R1-R9)和/或Ry和/或Z和/或Z1上，則要將產(chǎn)物H脫保護和/或進一步修飾，生成脫保護的或修飾的H。
制備中間體N的另一種方法如下所述。將化合物M進行反應，其中“Lv”被還原成保護的氨基醇Q。接著將中間體Q氧化成衍生物N。
在用來合成式I-A類肽化合物的一般方法III中，氨基酸L(其中P1是合適的氮的保護基)被轉(zhuǎn)化成羰基衍生物M，其中“Lv”代表離去基團。將化合物M脫保護，得到游離胺(或其鹽)R，然后與羧酸K進行酰胺形成反應，得到中間體S。既可以將化合物S直接轉(zhuǎn)化成羰基中間體G，也可以先將化合物S還原成醇F，然后將其氧化成G。進行化合物G的反應，得到不飽和終產(chǎn)物H。如果保護基已經(jīng)用在任意一個R基團(R1-R9)和/或Ry和/或Z和/或Z1上，則要將產(chǎn)物H脫保護和/或進一步修飾，生成脫保護的或修飾的H。
在用來合成式I-A類肽化合物的一般方法IV中，通過與氨基酸A(其中P1是合適的氮的保護基)反應游離胺(或其鹽)P(按上述一般方法II所述從中間體O制備)被轉(zhuǎn)化成酰胺T。將化合物T進一步脫保護，得到游離胺(或其鹽)U，接著用氨基酸E將其轉(zhuǎn)化成H。如果保護基已經(jīng)用在任意一個R基團(R1-R9)和/或Ry和/或Z和/或Z1上，則要將產(chǎn)物H脫保護和/或進一步修飾，生成脫保護的或修飾的H。
在用來合成式I-B酮基亞甲基化合物的一般方法V中，經(jīng)過兩步反應(堿性水解和隨后的氧化反應)光學活性內(nèi)酯AA(其中P4是合適的氮的保護基，R5和R8分別是H)(可用下述方法或多個文獻中所述方法制備，包括(a)Herold等人，《有機化學雜志》(J.Org.Chem.)，541178(1989)；(b)Bradbury等人，《四面體通訊》(TetrahedronLett.)，303845(1989)；(c)Bradbury等人，《醫(yī)藥化學雜志》(J.Med.Chem.)，332335(1990)；(d)Wuts等人，《有機化學雜志》(J.Org.Chem.)，576696(1992)；(e)Jones等人，《有機化學雜志》(J.Org.Chem.)，582286(1993)；(f)Pegorier等人，《四面體通訊》(Tetrahedron Lett.)，362753(1995)；及(g)Dondoni等人，《有機化學雜志》(J.Org.Chem.)，607927(1995))被轉(zhuǎn)變成羧酸BB。產(chǎn)物不用分離，但要與胺(或其鹽)P進行酰胺形成反應，生成終產(chǎn)物CC。接著，將P4保護基及已經(jīng)用在任一R基團(包括R1，R2，R3，R6和/或R7)和/或Z和/或Z1上的任何其它保護基一起進行脫保護和/或進一步修飾，得到脫保護或修飾的CC。
可以用下面一般方法VI(見Herold等人，《有機化學雜志》(J.Org.Chem.)，541178(1989)；Bradbury等人，《四面體通訊》(Tetrahedron Lett.)，303845(1989)及Bradbury等人，《醫(yī)藥化學雜志》(J.Med.Chem.)，332335(1990))將內(nèi)酯AA制成光學活性形式。將與R7合并的γ，δ-不飽和羧酸DD轉(zhuǎn)變成相應的酰氯(未示出)。將酰氯與手性胺或手性噁唑烷酮進行酰胺形成反應，得到衍生物EE(其中X1是手性胺或手性噁唑烷酮)。接著，將化合物EE脫質(zhì)子化，并將所得烯醇化物用對應于R6的親電體進行非對映體選擇性烷基化反應，得到其中R5是H的化合物FF。將FF進行鹵代內(nèi)酯化反應，得到鹵代內(nèi)酯GG，其中R5和R8是H，“hal”代表Br或I。先將鹵代內(nèi)酯GG轉(zhuǎn)變成疊氮化物HH，然后將其轉(zhuǎn)化成內(nèi)酯AA(其中P4是合適的氮的保護基)。
γ，δ-不飽和羧酸DD可以用下面一般方法VII(見Herold等人，《有機化學雜志》(J.Org.Chem.)，541178(1989))制備。將與R7合并的醛II與乙烯基溴化鎂偶合，得到醇JJ，然后用以下三步過程將醇JJ轉(zhuǎn)變成γ，δ-不飽和羧酸DD(i)在160℃用丙二酸二酯和催化劑Ti(OEt)4處理1小時；(ii)在190℃加熱4小時；及(iii)用乙醇的KOH在回流溫度進行水解反應。
羧酸BB還可以用下面一般方法VIII(見Haffman等人，《四面體》(Tetrahedron)，537119(1997))制備。將與R7合并的氨基酸KK(其中P4是合適的氮的保護基)轉(zhuǎn)變成β-酮酯LL。將化合物LL脫質(zhì)子化，并將所得陰離子與合并了R6的三氟甲磺酸酯MM縮合。將所得偶合產(chǎn)物用三氟乙酸處理，得到酮酯NN，然后將其水解，得到羧酸BB。如果堿性水解導致差向異構(gòu)作用，則可以先將酮酯NN進行酯交換(丙烯醇，Ti(Oi-Pr)4)，然后在中性條件下(Pd(PPh3)4，嗎啉)進行脫保護，得到羧酸BB。用三氟甲磺酸酐和2，6-二甲基吡啶處理相應的醇可以依次制得三氟甲磺酸酯MM。
可以用一般方法IX(見Askin等人，《有機化學雜志》(J.Org.Chem.)，572771(1992)和McWilliams等人，《美國化學會會志》(J.Am.Chem.Soc.)，11811970(1996))制備內(nèi)酯AA。將合并了R7且其中P4是合適的氮的保護基的氨基酸KK用Luly等人(《有機化學雜志》(J.Org.Chem.)，521487(1987))所述方法轉(zhuǎn)變成環(huán)氧化物OO(單個非對映體)。將環(huán)氧化物OO與從化合物PP(合并了R6且其中X2是手性輔助劑，包括(1S，2R)-1-氨基-2，3-二氫化茚-2-醇丙酮化物)衍生的陰離子進行縮合，得到偶合產(chǎn)物QQ。然后在酸性條件下進行環(huán)化，得到內(nèi)酯AA?？梢杂肁skin等人(《有機化學雜志》(J.Org.Chem.)，572771(1992))所述方法從相應的羧酸(未示出)制備化合物PP。
用于制備式I-C擬肽化合物的一般方法X解釋了制備中間體TT的方法。將氨基酸E與醇RR(其中P5是合適的氧的保護基)進行酯鍵形成反應，生成中間體SS。將分子SS脫保護得到游離的羧酸TT，可以用它代替上述所有一般方法中的羧酸K。
具體合成方法下列具體方法也可以被用來制備多種本發(fā)明化合物。
具體方法I描述了具體中間體O1的制備過程，它可以被用來制備上述一般方法中的中間體O。因此，酯A1(按Chida等人，《化學會會志，化學通訊》(J.Chem.Soc.，Chem.Commun.)，1064(1992)，所述方法制備)經(jīng)水解得到酸B1，然后將其轉(zhuǎn)變成噁唑烷酮C1。將化合物C1脫質(zhì)子化，并將所得烯醇化物進行非對映體選擇性烷基化反應，得到烯丙基中間體D1。將所得產(chǎn)物通過臭氧分解進行氧化，并將所得的醛(未示出)進行還原性胺化反應，生成內(nèi)酰胺E1。E1經(jīng)過酸催化的甲醇分解反應得到醇F1。將此中間體用Swern方法(或其它合適的氧化反應條件)進行氧化，得到醛(未示出)，接著將其進行烯烴形成反應，得到具體的中間體O1。

具體方法II描述了具體中間體O2的制備過程，它可以被用來制備上述一般方法中的中間體O。將烯丙基中間體D1進行氫硼化反應/氧化反應，得到伯醇(未示出)。將所得產(chǎn)物用Swern方法(或其它合適的氧化反應條件)進行氧化，并將得到的醛(未示出)進行還原性胺化反應，生成內(nèi)酰胺G1。G1經(jīng)過酸催化的甲醇分解反應得到醇H1。該中間體用Swern方法(或其它合適的氧化反應條件)進行氧化，并將得到的醛(未示出)進行烯烴形成反應，得到具體的中間體O2。
下列中間體P1，P2和P3可用于上述一般方法，代替中間體O，改變R2位置上的取代基。
中間體P1的合成方法如下所述。將上述中間體C1脫質(zhì)子化，然后用適當二硫化物(對稱的或混合的)捕獲所得烯醇化物，得到硫化物p1(P是氧的適當保護基)。除去氧保護基得到醇p2。將此中間體用Swern方法(或其它合適的氧化反應條件)進行氧化，并將所得的醛(未示出)進行還原性胺化反應，得到內(nèi)酰胺p3。p3經(jīng)過酸催化的甲醇分解反應得到醇p4。將此中間體用Swern方法(或其它合適的氧化反應條件)進行氧化，并將所得的醛(未示出)進行烯烴形成反應，得到中間體p5?？捎迷撝虚g體代替上述一般合成方法中的中間體O；或者除去內(nèi)酰胺保護基，得到中間體P1。
為了合成中間體P2，中間體C1被脫質(zhì)子化，然后用適當?shù)挠H電子氧(如氧氮雜環(huán)丁烷(oxaziridine))源捕獲所得烯醇化物，得到醇p6。將此中間體用適當功能化的烷基鹵化物或三氟甲磺酸鹽烷基化，得到醚p7(P是氮的適當保護基)。除去氮保護基，將所得的胺(未示出)進行環(huán)化反應，得到內(nèi)酰胺p8。p8經(jīng)過酸催化的甲醇分解反應得到醇p9。將此中間體用Swern方法(或其它合適的氧化反應條件)進行氧化，并將所得的醛(未示出)進行烯烴形成反應，得到中間體P2。

具體中間體P3的合成方法如下所述。將中間體D1(如上所述)臭氧化，然后將所得醛(未示出)還原成相應的醇(也未示出)。對所得中間體進行保護，得到化合物p10(P1是氧的適當保護基)。將p10上的亞酰胺官能團水解成羧酸p11，并將該中間體與適當保護的羥胺衍生物偶合，得到酰胺p12(P2是氧的適當保護基，它對于除去P1的條件是穩(wěn)定的)。除去P1保護基，并將所得醇(p13)轉(zhuǎn)變成適當?shù)碾x去基團(鹵化物或三氟甲磺酸鹽，未示出)。除去P2保護基，并將所得異羥肟酸環(huán)化，得到中間體p14。p14經(jīng)過酸催化的甲醇分解反應得到醇p15。將此中間體用Swern方法(或其它合適的氧化反應條件)進行氧化，并將所得的醛(未示出)進行烯烴形成反應，得到中間體P3。
具體方法III描述了中間體Q1，Q2和Q3的制備方法，它們可用于上述一般方法。用公開發(fā)表方法(Ikuta等人，《醫(yī)藥化學雜志》(J.Med.Chem.)，301995(1987))的改進方法將已知的化合物I1轉(zhuǎn)變成文獻中的分子J1。另外，將氨基酸酯K1進行保護反應，得到甲硅烷基醚L1。用DIBAL(或用其它合適的還原反應條件)還原該醚，然后將所得醛(未示出)與中間體J1一起進行烯烴形成反應，生成M1。M1經(jīng)過甲硅烷基的脫保護反應得到醇N1。將此中間體進行多種氫化反應，得到中間體Q1，Q2和Q3。然后相繼通過氧化反應和烯化反應將這些中間體轉(zhuǎn)變成類似于中間體O1(見上述具體方法I)的中間體。

本領域技術(shù)人員將會認識到，本發(fā)明多種化合物可以按照上述一般和具體方法以及現(xiàn)有技術(shù)制備，包括本文引作參考的文獻，它們都一并公開在此作為參考。另外，本領域技術(shù)人員可以根據(jù)下述實施例或通過本文所述合成方法的改進方法制備各種本發(fā)明化合物。
實施例下面給出各種優(yōu)選式I化合物的實例。下列實例中化合物的結(jié)構(gòu)用以下一種或多種方法確定質(zhì)子核磁共振譜儀，紅外光譜儀，元素微量分析，質(zhì)譜分析，薄層色譜，熔點測定和沸點測定。如果給出的表示化合物的結(jié)構(gòu)式與其化學命名不符，以結(jié)構(gòu)式為準。
質(zhì)子核磁共振(1H NMR)譜是用Varian UNITY+300譜儀在300MHz場強下測定的?；瘜W位移用相對于內(nèi)標四甲基甲硅烷標準下移多少百萬分之一(ppm，δ)表示?；蛘?，1H NMR譜以殘余質(zhì)子溶劑信號形式表示如下CHCl3＝7.26ppm；DMSO＝2.49ppm；C6HD5＝7.15ppm。峰的多重性標示如下s＝單峰；d＝雙重峰；dd＝雙重雙重峰；t＝三重峰；q＝四重峰；br＝寬共振峰；及m＝多重峰。偶合常數(shù)用赫茲表示。紅外吸收(IR)光譜用Perkin-Elmer 1600系列的FTIR光譜儀獲得。元素微量分析由Atlantic Microlab Inc.(Norcross，GA)完成，給出的元素分析結(jié)果在理論值±0.4％范圍之內(nèi)。用硅膠60(Merck Art 9385)進行快速柱色譜。分析薄層色譜(TLC)用預包層Silica 60 F254(Merck Art 5719)進行。熔點(縮寫為mp)用Mel-Temp儀測得且不加修正。除非另有說明，否則，所有反應都在隔膜密封的燒瓶中在稍微正壓的氬氣下進行。所用的商品化試劑都是分別從它們各自的供應商那里得到，只有下列這些除外四氫呋喃(THF)是在使用前從鈉-二苯甲酮羰游基蒸餾而得；二氯甲烷(CH2Cl2)是在使用前從氫化鈣蒸餾而得；無水氯化鋰是在真空條件下在110℃加熱過夜后制得的。
本文用到下列縮寫Et2O代表乙醚；DMF代表N，N-二甲基甲酰胺；DMSO代表二甲亞砜；及MTBE代表叔丁基甲醚。其它縮寫包括CH3OH(甲醇)，EtOH(乙醇)，EtOAc(乙酸乙酯)，DME(乙二醇二甲醚)，Ac(乙?；?，Me(甲基)，Ph(苯基)，Tr(三苯甲基)，Cbz(芐氧羰基)，Boc(叔丁氧羰基)，TFA(三氟乙酸)，DIEA(N，N-二異丙基乙胺)，DBU(1，8-二氮雜雙環(huán)[5.4.0]十一-7-烯)，HOBt(1-羥基苯并三唑水合物)，PyBOP(苯并三唑-1-基-氧基-三-吡咯烷基-六氟磷酸鏻)，HATU[O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-N，N，N’，N’-四甲基六氟磷酸脲鎓]，EDC[1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳化二亞胺鹽酸鹽]，DCC(二環(huán)己基碳化二亞胺)，DDQ(2，3-二氯-5，6-二氰基-1，4-苯并醌)，DMAP(4-二甲氨基吡啶)，Gln(谷氨酰胺)，Leu(亮氨酸)，Phe(苯丙氨酸)，Val(纈氨酸)，His(組氨酸)，1-Naphth(1-萘基丙氨酸)，2-Naphth(2-萘基丙氨酸)，α-t-Butyl-Gly(α-叔丁基甘氨酸)，(S)-Pyrrol-Ala[(2S，3’S)-2-氨基-3-(2’-氧吡咯烷-3’-基)丙酸]，及(S)-Piper-Ala[(2S，3’S)-2-氨基-3-(2’-氧-哌啶-3’-基)丙酸]。另外，“L”代表天然存在的氨基酸。
用于氨基酸縮寫的簡化命名系統(tǒng)被用來鑒定一些中間體和終產(chǎn)物。當命名化合物時，斜體的氨基酸縮寫表示在殘基的C端進行了修飾，其應用如下(1)丙烯酸酯被表示為“E”(反)丙烯酸酯；(2)取代的3-亞甲基-二氫呋喃-2-酮被表示為“E”(反)2-(α-乙烯基-γ-丁內(nèi)酯)；及(3)5-乙烯基異噁唑被表示為“E”(反)丙烯異噁唑。此外，對于所有肽序列，術(shù)語“AA1Ψ[COCH2]-AA2”表明通常由酰胺鍵連接的兩個氨基酸(AA1和AA2)被酮基亞甲基二肽等排物部分替代。對于所有肽序列，術(shù)語“AA1-NCH3-AA2”表明通常連接兩個氨基酸(AA1和AA2)的酰胺鍵被N-甲基酰胺鍵替代。對于所有肽序列，術(shù)語“AA1-O-AA2”表明通常連接兩個氨基酸(AA1和AA2)的酰胺鍵被酯鍵替代。
本發(fā)明實施方案的實施例如下所述實施例15-(3’-(Cbz-L-Leu-L-Phe-L-Gln)-E-丙烯)-異噁唑(對比化合物1)的制備
(對比化合物#1)中間體Cbz-L-(Tr-Gln)-OMe的制備將Cbz-L-(Tr-Gln)(0.26g，0.50mmol，1當量)加到乙酰氯(0.25ml，3.52mmol，7.0當量)的CH3OH(5ml)溶液中，并在23℃攪拌1小時。減壓除去溶劑，剩余物溶解于CH2Cl2(100ml)，然后相繼用水(100ml)，飽和NaHCO3(100ml)和鹽水(100ml)洗滌。有機相用Na2SO4干燥，然后濃縮。剩余物經(jīng)快速柱色譜(20％EtOAc于己烷)純化，得到Cbz-L-(Tr-Gln)-OMe(0.23g，產(chǎn)率84％)為白色固體mp＝139-140℃；IR(cm-1)1742，1207；1H NMR(DMSO-d6)δ1.16(t，1H，J＝7.0)，1.77(m，1H)，1.97(m，1H)，3.61(s，3H)，4.99(m，1H)，5.03(s，2H)，7.02-7.55(m，20H)，7.69(d，1H，J＝7.7)，8.59(s，1H)；Anal.(C33H32N2O5)C，H，N.
中間體Cbz-L-(Tr-谷氨醇)的制備將氯化鋰(0.24g，5.66mmol，2.0當量)加到Cbz-L-(Tr-Gln)-Ome(1.50g，2.79mmol，1當量)的2∶1 THF∶EtOH(30ml)溶液中，并將混合物在23℃攪拌直到固體全部溶解(約10分鐘)。加入硼氫化鈉(0.21g，5.55mmol，2.0當量)，并將混合物在23℃攪拌過夜。減壓除去溶劑，剩余物溶解于水(50ml)中，并用10％HCl將pH值調(diào)至2-3。用EtOAc(50ml)萃取產(chǎn)物，在用MgSO4干燥之前相繼用水(50ml)和鹽水(50ml)洗滌。濃縮有機相，剩余物經(jīng)快速柱色譜(梯度洗脫20→50％EtOAc于苯)純化，得到Cbz-L-(Tr-谷氨醇)(1.02g，產(chǎn)率72％)為白色玻璃狀固體mp＝66-70℃；IR(cm-1)3318，1699，1510，1240；1H NMR(DMSO-d6)δ1.40(m，1H)，1.72(m，1H)，2.26(m，2H)，3.17-3.50(m，3H)，4.64(t，1H，J＝5.0)，5.00(s，2H)，7.00-7.40(m，20H)，6.96(d，1H，J＝8.5)，8.54(s，1H)；Anal.(C32H32N2O4)C，H，N.
中間體L-(Tr-谷氨醇)的制備將Cbz-L-(Tr-谷氨醇)(1.93g，3.79mmol)的CH3OH(25ml)懸浮液和Pd/C(10％，0.19g)在氫氣罐中攪拌4小時，然后用一層Celite過濾。將濾液減壓濃縮后得到L-(Tr-谷氨醇)(1.38g，產(chǎn)率98％)為白色非晶狀固體mp＝191-193℃；IR(cm-1)3255(br)，1642，1527；1H NMR(DMSO-d6)δ1.29(m，1H)，1.53(m，1H)，2.29(m，2H)，3.08(m，1H)，3.18(m，2H)，3.38(s，br，2H)，4.43(s，br，1H)，7.14-7.28(m，15H)，8.62(s，1H).
中間體Cbz-L-Leu-L-Phe-L-(Tr-谷氨醇)的制備將羰基二咪唑(0.17g，1.05mmol，1.0當量)加到Cbz-L-Leu-L-Phe-OH(0.41g，1.0mmol，0.95當量)的THF(10ml)溶液中，并將反應混合物在23℃攪拌1小時。加入L-(Tr-谷氨醇)(0.39g，1.05mmol，1當量)，然后將所得溶液攪拌過夜。減壓除去揮發(fā)性物質(zhì)，剩余物經(jīng)快速柱色譜(梯度洗脫2→4％CH3OH于CHCl3)純化，得到Cbz-L-Leu-L-Phe-L-(Tr-谷氨醇)(0.47g，產(chǎn)率62％)為白色非晶狀固體mp＝92-95℃；IR(cm-1)3302，1657，1520，1238；1H NMR(DMSO-d6)δ0.79(t，6H，J＝7.0)，1.30(m，2H)，1.44(m，2H)，1.75(m，1H)，2.22(m，2H)，2.82(m，1H)，2.97(m，1H)，3.14(m，1H)，3.25(m，1H)，3.63(m，1H)，3.95(m，1H)，4.48(m，1H)，4.65(t，1H，J＝5.0)，4.96(d，1H，J＝13.0)，5.02(d，1H，J＝13.0)，7.07-7.33(m，25H)，7.42(d，1H，J＝8.0)，7.66(d，1H，J＝8.5)，7.86(d，1H，J＝8.0)，8.52(s，1H)；Anal.(C47H52N4O6·0.5H2O)C，H，N.
中間體Cbz-L-Leu-L-Phe-L-(Tr-Gln)-H的制備將鄰碘酰苯甲酸(0.63g，2.25mmol，3.0當量)加到23℃的Cbz-L-Leu-L-Phe-L-(Tr-谷氨醇)(0.58g，0.75mmol，1當量)的DMSO(7.5ml)溶液中。攪拌2小時后減壓除去DMSO。剩余物用CH2Cl2稀釋兩次，蒸發(fā)溶劑除去剩余的DMSO。用EtOAc(30ml)稀釋剩余物并過濾，濾液依次用5％Na2SO3/5％NaHCO3溶液(30ml)，水(30ml)和鹽水(30ml)洗滌，然后用Na2SO4干燥。減壓除去溶劑，得到Cbz-L-Leu-L-Phe-L-(Tr-Gln)-H(0.53g，產(chǎn)率92％)為白色玻璃狀固體，無需進一步純化即可直接使用1H NMR(DMSO-d6)δ0.79(m，6H)，1.00-1.98(m，5H)，2.27(m，2H)，2.84(m，1H)，3.02(m，1H)，3.98(m，2H)，4.58(m，1H)，4.99(s，2H)，7.14-7.32(m，25H)，7.39(d，1H，J＝8.1)，7.97(d，1H，J＝8.5)，8.38(d，1H，J＝8.0)，8.60(s，1H)，9.20(s，1H).
中間體5-{3’-(Cbz-L-Leu-L-Phe-L-(Tr-Gln))-E-丙烯}-異噁唑的制備將KN((CH3)3Si)2(0.95ml 0.5M的THF溶液，0.477mmol，1.0當量)加到0℃的異噁唑-5-基甲基-三苯基溴化鏻(0.222g，0.525mmol，1.1當量)的THF(20ml)懸浮液中，然后將反應混合物在0℃攪拌30分鐘。加入Cbz-L-Leu-L-Phe-L-(Tr-Gln)-H(0.366g，0.477mmol，1當量)的THF(10ml)溶液，然后將反應混合物在23℃攪拌過夜。真空除去溶劑，用MgSO4干燥。減壓除去溶劑，剩余物經(jīng)快速硅膠色譜(梯度洗脫0→1％CH3OH于CHCl3)純化，得到5-{3’-(Cbz-L-Leu-L-Phe-L-(Tr-Gln))-E-丙烯}-異噁唑(0.307g，產(chǎn)率70％)為白色非晶狀固體IR(cm-1)3423，1678，1568，1265，1043，711；1H NMR(DMSO-d6)δ0.77-0.81(m，6H)，1.21-1.36(m，2H)，1.40-1.55(m，1H)，1.60-1.80(m，2H)，2.34-2.45(m，2H)，2.82-2.87(m，1H)，2.91-3.04(m，1H)，3.95-4.00(m，1H)，4.41-4.50(m，1H)，4.53-4.60(m，1H)，4.99(q，2H，J＝6.0)，6.19(d，1H，J＝15.0)，6.36(dd，1H，J＝15.0，6.0)，6.46(s，1H)，7.15-7.33(m，20H)，7.42(d，1H，J＝9.0)，7.56-7.63(m，5H)，7.96(d，1H，J＝9.0)，8.08(d，1H，J＝9.0)，8.51(s，1H)，8.58(s，1H)；HRMS calcd.for C51H53N5O6+Cs964.3050(M+Cs)，found 964.3018.
產(chǎn)物5-{3’-(Cbz-L-Leu-L-Phe-L-Gln)-E-丙烯}-異噁唑的制備將三氟乙酸(1ml)加到5-{3’-(Cbz-L-Leu-L-Phe-L-(Tr-Gln))-E-丙烯}-異噁唑(0.214g，0.257mmol)的CH2Cl2(10ml)溶液中，然后將反應混合物在23℃攪拌過夜。真空除去溶劑，剩余物經(jīng)快速硅膠色譜(梯度洗脫0→1％CH3OH于CHCl3)純化，得到5-{3’-(Cbz-L-Leu-L-Phe-L-Gln)-E-丙烯}-異噁唑(0.054g，產(chǎn)率36％)為白色固體1H NMR(DMSO-d6)δ0.77-0.83(m，6H)，1.26-1.46(m，2H)，1.47-1.62(m，1H)，1.69-1.79(m，2H)，2.04-2.29(m，2H)，2.83-2.88(m，1H)，2.97-3.10(m，1H)，3.99-4.12(m，1H)，4.37-4.43(m，1H)，4.48-4.57(m，1H)，5.01(q，2H，J＝6.0)，6.20(d，1H，J＝15.0)，6.36(dd，1H，J＝15.0，6.0)，6.45(d，1H，J＝3.0)，6.75(s，1H)，7.14-7.29(m，6H)，7.31-7.40(m，5H)，7.45(d，1H，J＝9.0)，8.04(d，1H，J＝9.0)，8.07(d，1H，J＝9.0)，8.51(d，1H，J＝3.0)；Anal.(C32H39N5O6)C，H，N.
實施例23-((5’-甲基異噁唑-3’-羰基)-L-Leu-L-Phe-L-Gln)-E-丙烯酸乙酯(化合物A-1)的制備 中間體Boc-L-(Tr-Gln)-N(OMe)Me的制備將氯甲酸異丁酯(4.77ml，36.8mmol，1.0當量)加到0℃的Boc-L-(Tr-Gln)-OH(18.7g，36.7mmol，1當量)和4-甲基嗎啉(8.08ml，73.5mmol，2.0當量)的CH2Cl2(250ml)溶液中。將反應混合物在0℃攪拌20分鐘，然后加入N，O-二甲基羥胺鹽酸鹽(3.60g，36.7mmol，1.0當量)。將所得溶液在0℃攪拌20分鐘，然后在23℃攪拌2小時，之后，在水(150ml)和CH2Cl2(2×150ml)之間分配。合并的有機相用Na2SO4干燥，然后濃縮。剩余物經(jīng)快速柱色譜(梯度洗脫40→20％己烷于EtOAc)純化，得到Boc-L-(Tr-Gln)-N(OMe)Me(16.1g，產(chǎn)率82％)為白色泡沫IR(cm-1)3411，3329，3062，1701，1659；1H NMR(CDCl3)δ1.42(s，9H)，1.63-1.77(m，1H)，2.06-2.17(m，1H)，2.29-2.43(m，2H)，3.17(s，3H)，3.64(s，3H)，4.73(s，br，1H)，5.38-5.41(m，1H)，7.20-7.31(m，15H)；Anal.(C31H37N3O5)C，H，N.
中間體Boc-L-(Tr-Gln)-H的制備將二異丁基氫化鋁(50.5ml 1.5M的甲苯溶液，75.8mmol，2.5當量)加到-78℃的Boc-L-(Tr-Gln)-N(OMe)Me(16.1g，30.3mmol，1當量)的THF溶液中，并將反應混合物在-78℃攪拌4小時。連續(xù)加入甲醇(4ml)和1.0M HCl(10ml)，并將混合物升溫至23℃。用Et2O(150ml)稀釋所得懸浮液，再依次用1.0M HCl(3×100ml)，半飽和NaHCO3(100ml)和水(100ml)洗滌。有機相用MgSO4干燥，過濾，然后濃縮，得到粗Boc-L-(Tr-Gln)-H(13.8g，產(chǎn)率97％)為白色固體mp＝114-116℃；IR(cm-1)3313，1697，1494；1H NMR(CDCl3)δ1.44(s，9H)，1.65-1.75(m，1H)，2.17-2.23(m，1H)，2.31-2.54(m，2H)，4.11(s，br，1H)，5.38-5.40(m，1H)，7.11(s，1H)，7.16-7.36(m，15H)，9.45(s，1H).
中間體3-(Boc-L-(Tr-Gln))-E-丙烯酸乙酯的制備將雙(三甲基甲硅烷基)氨基鈉(22.9ml 1.0M的THF溶液，22.9mmol，1.0當量)加到-78℃的膦?；宜崛阴?5.59g，22.9mmol，1.0當量)的THF(200ml)溶液中，并將所得溶液在此溫度攪拌20分鐘。通過插管加入粗Boc-L-(Tr-Gln)-H(10.8g，22.9mmol，1當量)的THF(50ml)，然后將反應混合物在-78℃攪拌2小時。升溫至0℃10分鐘，然后在0.5MHCl(150ml)和1∶1 EtOAc∶己烷(2×150ml)的混合物之間分配。合并的有機相用Na2SO4干燥，然后濃縮，剩余物經(jīng)快速柱色譜(40％EtOAc于己烷)純化，得到3-(Boc-L-(Tr-Gln))-E-丙烯酸乙酯(10.9g，產(chǎn)率88％)為白色泡沫IR(cm-1)3321，1710；1H NMR(CDCl3)δ1.27(t，3H，J＝7.2)，1.42(s，9H)，1.70-1.78(m，1H)，1.80-1.96(m，1H)，2.35(t，2H，J＝7.0)，4.18(q，2H，J＝7.2)，4.29(s，br，1H)，4.82-4.84(m，1H)，5.88(dd，1H，J＝15.7，1.6)，6.79(dd，1H，J＝15.7，5.3)，6.92(s，1H)，7.19-7.34(m，15H)；Anal.(C33H38N2O5)C，H，N.
中間體3-(Boc-L-Phe-L-(Tr-Gln))-E-丙烯酸乙酯的制備將HCl的1，4-二噁烷(4.0M，15ml)加到23℃的3-(Boc-L-(Tr-Gln))-E-丙烯酸乙酯(3.26g，6.01mmol，1當量)的相同溶劑(15ml)的溶液中。2小時后減壓除去揮發(fā)性物質(zhì)，得到3-(H2N-L-(Tr-Gln))-E-丙烯酸乙酯·HCl。將其溶解于CH2Cl2(60ml)，然后依次加入Boc-L-Phe-OH(1.59g，6.01mmol，1.0當量)，HOBt(1.22g，9.02mmol，1.5當量)，4-甲基嗎啉(1.98ml，18.03mmol，3當量)和EDC(1.73g，9.02mmol，1.5當量)。將反應混合物在23℃攪拌過夜，然后在水(100ml)和CH2Cl2(2×100ml)之間分配。合并的有機相用Na2SO4干燥，然后濃縮，剩余物經(jīng)快速柱色譜(40％EtOAc于己烷)純化，得到3-(Boc-L-Phe-L-(Tr-Gln))-E-丙烯酸乙酯(3.55g，產(chǎn)率85％)為白色泡沫IR(cm-1)3306，1706，1661；1H NMR(CDCl3)δ1.29(t，3H，J＝7.2)，1.38(s，9H)，1.65-1.76(m，1H)，1.87-1.99(m，1H)，2.25-2.27(m，2H)，2.94-3.01(m，2H)，4.14-4.26(m，3H)，4.48-4.53(m，1H)，4.95(s，b r，1H)，5.64(d，1H，J＝15.8)，6.29(d，1H，J＝8.1)，6.64dd，1H，J＝15.8，5.4)，6.80(s，br，1H)，7.14-7.32(m，20H)；Anal.(C42H47N3O6)C，H，N.
中間體3-(Boc-L-Leu-L-Phe-L-(Tr-Gln))-E-丙烯酸乙酯的制備將HCl的1，4-二噁烷(4.0M，15ml)加到23℃的3-(Boc-L-Phe-L-(Tr-Gln))-E-丙烯酸乙酯(6.40g，9.28mmol，1當量)的相同溶劑(15ml)的溶液中。2小時后減壓除去揮發(fā)性物質(zhì)。將剩余物溶解于CH2Cl2(100ml)，然后依次加入Boc-L-Leu-OH(2.58g，11.1mmol，1.2當量)，HOBt(1.88g，13.9mmol，1.5當量)，4-甲基嗎啉(3.06ml，27.8mmol，3當量)和EDC(2.67g，13.92mmol，1.5當量)。將反應混合物在23℃攪拌過夜，然后在水(100ml)和CH2Cl2(2×100ml)之間分配。合并的有機相用Na2SO4干燥，然后濃縮，剩余物經(jīng)快速柱色譜(2％CH3OH于CH2Cl2)純化，得到3-(Boc-L-Leu-L-Phe-L-(Tr-Gln))-E-丙烯酸乙酯(6.46g，產(chǎn)率87％)為白色泡沫IR(cm-1)3284，1651，1515；1H NMR(CDCl3)δ0.86(d，3H，J＝6.0)，0.89(d，3H，J＝6.0)，1.29(t，3H，J＝7.2)，1.34(s，9H)，1.38-1.60(m，3H)，1.62-1.89(m，1H)，1.95-1.97(m，1H)，2.28-2.30(m，2H)，3.06-3.08(m，2H)，3.92-3.94(m，1H)，4.17(q，2H，J＝7.2)，4.48-4.51(m，2H)，4.67(m，1H)，5.66(d，1H，J＝15.9)，6.51-6.57(m，2H)，6.69(dd，1H，J＝15.6，5.1)，7.10-7.33(m，21H)；Anal.(C48H58N4O7·0.33H2O)C，H，N.
中間體3-((5’-甲基異噁唑-3’-羰基)-L-Leu-L-Phe-L-(Tr-Gln)-E-丙烯酸乙酯的制備將HCl的1，4-二噁烷(4.0M，3ml)加到23℃的3-(Boc-L-Leu-L-Phe-L-(Tr-Gln))-E-丙烯酸乙酯(0.216g，0.27mmol，1當量)的相同溶劑(3ml)的溶液中。2小時后減壓除去揮發(fā)性物質(zhì)。將剩余物溶解于CH2Cl2(15ml)，冷卻到0℃，然后依次加入三乙胺(0.112ml，0.81mmol，3.0當量)和5-甲基異噁唑-3-酰氯(0.058g，0.40mmol，1.5當量)。將反應混合物在0℃攪拌30分鐘，然后在水(50ml)和CH2Cl2(2×50ml)之間分配。合并的有機相用Na2SO4干燥，然后濃縮，剩余物經(jīng)快速柱色譜(2％CH3OH于CH2Cl2)純化，得到3-((5’-甲基異噁唑-3’-羰基)-L-Leu-L-Phe-L-(Tr-Gln))-E-丙烯酸乙酯(0.199g，產(chǎn)率91％)為白色泡沫IR(cm-1)3286，1650，1541；1H NMR(CDCl3)δ0.86(d，3H，J＝5.4)，0.89(d，3H，J＝5.7)，1.28(t，3H，J＝7.2)，1.43-1.59(m，2H)，1.67-1.75(m，1H)，1.95-1.99(m，2H)，2.28(t，2H，J＝7.2)，2.41(s，3H)，2.97-3.04(m，1H)，3.06-3.13(m，1H)，4.17(q，2H，J＝7.2)，4.31-4.33(m，1H)，4.48-4.52(m，2H)，5.72(d，1H，J＝15.9)，6.19(s，1H)，6.41(d，1H，J＝7.5)，6.59(d，1H，J＝8.1)，6.71(dd，1H，J＝15.3，6.0)，6.95(d，1H，J＝6.6)，7.09-7.21(m，21H)；Anal.(C48H53N5O7·H2O)C，H，N.
產(chǎn)物3-((5’-甲基異噁唑-3’-羰基)-L-Leu-L-Phe-L-Gln)-E-丙烯酸乙酯的制備將三異丙基甲硅烷(0.077ml，0.376mmol，1.8當量)和三氟乙酸(3ml)依次加到23℃的3-((5’-甲基異噁唑-3’-羰基)-L-Leu-L-Phe-L-(Tr-Gln))-E-丙烯酸乙酯(0.185g，0.21mmol，1當量)的CH2Cl2(3ml)溶液中，得到亮黃色溶液。將反應混合物在23℃攪拌30分鐘，其間它逐漸變得無色。減壓除去揮發(fā)性物質(zhì)，所得白色固體用Et2O(10ml)研制，過濾并風干，得到3-((5’-甲基異噁唑-3’-羰基)-L-Leu-L-Phe-L-Gln)-E-丙烯酸乙酯(0.87g，產(chǎn)率81％)為白色固體mp＝223-225℃；IR(cm-1)3298.1662，1544，1457，1278；1H NMR(DMSO-d6)δ0.81(d，3H，J＝6.0)，0.85(d，3H，J＝6.3)，1.23(t，3H，J＝6.9)，1.38-1.42(m，1H)，1.48-1.77(m，4H)，2.04(t，2H，J＝7.2)，2.46(s，3H)，2.78-2.86(m，1H)，2.93-3.00(m，1H)，4.11(q，2H，J＝7.2)，4.36-4.54(m，3H)，5.63(d，1H，J＝15.6)，6.56(s，1H)，6.68(dd，1H，J＝15.9，5.4)，6.76(s，br，1H)，7.19(m，6H)，8.09(d，1H，J＝8.1)，8.14(d，1H，J＝7.8)，8.58(d，1H，J＝7.5)；Anal.(C29H39N5O7)C，H，N.
實施例33-((異噁唑-5’-羰基)-L-Leu-L-Phe-L-Gln)-E-丙烯酸乙酯(化合物A-2)的制備 中間體3-((異噁唑-5’-羰基)-L-Leu-L-Phe-L-(Tr-Gln))-E-丙烯酸乙酯的制備采用上述(實施例2)制備3-((5’-甲基異噁唑-3’-羰基)-L-Leu-L-Phe-L-(Tr-Gln))-E-丙烯酸乙酯的方法，由3-(Boc-L-Leu-L-Phe-L-(Tr-Gln))-E-丙烯酸乙酯和異噁唑-5-酰氯制得該化合物IR(cm-1)3282，1643，1530；1H NMR(CDCl3)δ0.87(t，6H，J＝6.6)，1.29(t，3H，J＝7.2)，1.49-1.64(m，3H)，1.69-1.80(m，1H)，1.90-1.96(m，1H)，2.30(t，2H，J＝7.2)，2.92-2.96(m，1H)，3.02-3.09(m，1H)，4.17(q，2H，J＝7.2)，4.42-4.48(m，3H)，5.69(d，1H，J＝15.3)，6.65(s，br，1H)，6.66(dd，1H，J＝15.9，5.4)，6.76-6.79(m，2H)，7.00-7.31(m，22H)，8.24(s，1H)；Anal.(C47H51N5O7·0.75H2O)C，H，N.
3-((異噁唑-5’-羰基)-L-Leu-L-Phe-L-Gln)-E-丙烯酸乙酯的制備采用類似于上述(實施例2)制備3-((5’-甲基異噁唑-3’-羰基)-L-Leu-L-Phe-L-Gln)-E-丙烯酸乙酯的方法，由3-((異噁唑-5’-羰基)-L-Leu-L-Phe-L-(Tr-Gln))-E-丙烯酸乙酯制得標題化合物mp＝217-220℃；IR(cm-1)3302，1655，1541；1H NMR(DMSO-d6)δ0.81(d，3H，J＝6.0)，0.86(d，3H，J＝6.0)，1.21(t，3H，J＝7.2)，1.42-1.75(m，5H)，2.04(t，2H，J＝7.2)，2.78-2.87(m，1H)，2.94-3.01(m，1H)，4.11(q，2H，J＝7.2)，4.37(m，1H)，4.41-4.52(m，2H)，5.64(d，1H，J＝15.6)，6.68(dd，1H，J＝15.9，5.4)，6.76(s，br，1H)，7.12-7.19(m，7H)，8.02(d，1H，J＝8.1)，8.20(d，1H，J＝8.1)，8.74(d，1H，J＝1.8)，8.94(d，1H，J＝7.8)；Anal.(C28H37N5O7)C，H，N.
實施例43-((5’-甲基異噁唑-3’-羰基)-L-α-(叔丁基-Gly)-L-(4-Me-Phe)-L-Gln)-E-丙烯酸乙酯(化合物A-3)的制備 中間體3-(Boc-L-(4-Me-Phe)-L-(Tr-Gln))-E-丙烯酸乙酯的制備將3-(H2N-L-(Tr-Gln))-E-丙烯酸乙酯·HCl(按上面實施例2所述制備，1.37g，3.10mmol)溶解于23℃的DMF(10ml)。相繼加入二異丙基乙胺(1.08ml，6.20mmol)和Boc-L-(4-Me-Phe)-OH(0.87g，3.10mmol)。將反應物冷卻到0℃。加入HATU(1.18g，3.10mmol)，允許反應升溫至室溫。真空除去DMF，剩余物溶解于EtOAc(30ml)。有機相依次用10％HCl溶液(25ml)，飽和NaHCO3溶液(25ml)，H2O(25ml)和鹽水(25ml)洗滌。干燥(MgSO4)溶劑，過濾，剩余物經(jīng)快速柱色譜(梯度洗脫0→0.75％CH3OH于CHCl3)純化，得到3-(Boc-L-(4-Me-Phe)-L-(Tr-Gln))-E-丙烯酸乙酯(1.48g，產(chǎn)率68％)為白色非晶狀固體IR(cm-1)1713，1655，1491，1175；1H NMR(DMSO-d6)δ1.20(t，3H，J＝7.0)，1.30(s，9H)，1.62-1.66(m，2H)，2.23(s，3H)，2.32(m，2H)，2.72(m，1H)，2.84(nm，1H)，4.07-4.09(m，1H)，4.10(q，2H，J＝7.0)，4.38(m，1H)，5.64(d，1H，J＝15.5)，6.72(dd，1H，J＝15.5，5.5)，6.88(d，1H，J＝8.0)，7.04(d，2H，J＝7.7)，7.10(d，2H，J＝7.7)，7.14-7.28(m，15H)，8.02(d，1H，J＝8.0)，8.53(s，1H)；Anal.(C43H49N3O6)C，H，N.
中間體3-(Boc-L-α-(叔丁基-Gly)-L-(4-Me-Phe)-L-(Tr-Gln))-E-丙烯酸乙酯的制備將3-(Boc-L-(4-Me-Phe)-L-(Tr-Gln))-E-丙烯酸乙酯(1.45g，2.06mmol)溶解于1，4-二噁烷(27ml)，并加入HCl的1，4-二噁烷(4.0M，14ml)溶液。將反應物在室溫攪拌4小時。蒸除溶劑，將剩余物溶于EtOAc(50ml)。有機相依次用飽和NaHCO3溶液(50ml)和鹽水(50ml)洗滌，干燥(MgSO4)，減壓除去溶劑，得到1.23g米白色非晶狀固體。用上述合成3-(Boc-L-(4-Me-Phe)-L-(Tr-Gln))-E-丙烯酸乙酯的方法將所得固體與Boc-L-α-(叔丁基-Gly)-OH偶合，得到3-(Boc-L-α-(叔丁基-Gly)-L-(4-Me-Phe)-L-(Tr-Gln))-E-丙烯酸乙酯(產(chǎn)率49％)為白色非晶狀固體IR(cm-1)1655，1507，1248，1171；1H NMR(DMSO-d6)δ0.81(s，9H)，1.21(t，3H，J＝7.0)，1.37(s，9H)，1.52-1.70(m，2H)，2.22(s，3H)，2.26-2.28(m，2H)，2.73-2.91(m，2H)，3.86(d，1H，J＝9.6)，4.05-4.14(m，2H)，4.31-4.36(m，1H)，4.47-4.55(m，1H)，5.54(d，1H，J＝15.4)，6.37(d，1H，J＝9.6)，6.65(dd，1H，J＝15.8，5.5)，7.01(d，2H，J＝8.1)，7.07(d，2H，J＝7.7)，7.11-7.32(m，15H)，8.03(d，1H，J＝8.1)，8.10(d，1H，J＝7.7)，8.49(s，1H)；Anal.(C49H60N4O7·0.4H2O)C，H，N.
中間體3-((5’-甲基異噁唑-3’-羰基)-L-α-(叔丁基-Gly)-L-(4-Me-Phe)-L-(Tr-Gln))-E-丙烯酸乙酯的制備用上述3-(Boc-L-(4-Me-Phe)-L-(Tr-Gln))-E-丙烯酸乙酯脫保護方法將3-(Boc-L-α-(叔丁基-Gly)-L-(4-Me-Phe)-L-(Tr-Gln))-E-丙烯酸乙酯脫保護，然后將所得胺(0.22g，0.30mmol)溶解于CH2Cl2(3ml)。加入吡啶(0.025ml，0.32mmol)，然后冷卻到0℃。加入5-甲基異噁唑-3-酰氯(0.046g，0.32mmol)。允許反應物升至室溫，并攪拌1小時。真空除去溶劑，對剩余物進行快速柱色譜純化(梯度洗脫0→1％CH3OH于CH2Cl2)，得到3-((5’-甲基異噁唑-3’-羰基)-L-α-(叔丁基-Gly)-L-(4-Me-Phe)-L-(Tr-Gln))-E-丙烯酸乙酯(0.19g，產(chǎn)率77％)為白色非晶狀固體IR(cm-1)1651，1518；1H NMR(DMSO-d6)δ0.88(s，9H)，1.20(t，3H，J＝7.0)，1.55-1.67(m，2H)，2.14(s，3H)，2.18-2.28(m，2H)，2.45(s，3H)，2.70-2.77(m，1H)，2.86-2.93(m，1H)，4.07-4.14(m，2H)，4.46(d，1H，J＝9.6)，4.50-4.55(m，1H)，5.54(d，1H，J＝15.8)，6.59(s，1H)，6.65(dd，1H，J＝15.8，5.5，15.8)，6.95(d，2H，J＝8.1)，7.05(d，2H，J＝8.1)，7.13-7.28(m，15H)，7.60(d，1H，J＝9.6)，8.13(d，1H，J＝8.1)，8.41(d，1H，J＝8.1)，8.51(s，1H)；Anal.(C49H55N5O7)C，H，N.
產(chǎn)物3-((5’-甲基異噁唑-3’-羰基)-L-α-(叔丁基-Gly)-L-(4-Me-Phe)-L-Gln)-E-丙烯酸乙酯的制備在23℃將3-((5’-甲基異噁唑-3’-羰基)-L-α-(叔丁基-Gly)-L-(4-Me-Phe)-L-(Tr-Gln))-E-丙烯酸乙酯(0.17g，0.20mmol)溶解于的CH2Cl2(4ml)。加入三氟乙酸(0.4ml)，然后將反應物在室溫攪拌6小時。真空除去溶劑，對剩余物進行快速柱色譜純化(梯度洗脫0→2％CH3OH于CH2Cl2)，得到3-((5’-甲基異噁唑-3’-羰基)-L-α-(叔丁基-Gly)-L-(4-Me-Phe)-L-Gln)-E-丙烯酸乙酯(0.085g，產(chǎn)率73％)為白色非晶狀固體IR(cm-1)1661，1541，1206；1H NMR(DMSO-d6)δ0.88(s，9H)，1.21(t，3H，J＝7.0)，1.60-1.73(m，2H)，2.01-2.06(m，2H)，2.14(s，3H)，2.50(s，3H)，2.70-2.77(m，1H)，2.86-2.93(m，1H)，4.07-4.14(m，2H)，4.34-4.37(m，1H)，4.45(d，1H，J＝9.6)，4.50-4.55(m，1H)，5.57(d，1H，J＝15.8)，6.60(s，1H)，6.66(dd，1H，J＝15.8，5.5)，6.75(s，br，1H)，6.96(d，2H，J＝8.1)，7.06(d，2H，J＝7.7)，7.17(s，br，1H)，7.65(d，1H，J＝9.6)，8.14(d，1H，J＝8.1)，8.40(d，1H，J＝7.7)；Anal.(C30H41N5O7·0.5TFA·0.5H2O)C，H，N.
實施例53-((5’-甲基異噁唑-3’-羰基)-L-α-(叔丁基-Gly)-L-(4-F-Phe)-L-Gln)-E-丙烯酸乙酯(化合物A-4)的制備 中間體3-(Boc-L-(4-F-Phe)-L-(Tr-Gln))-E-丙烯酸乙酯的制備將Boc-L-(4-F-Phe)-OH(1.41g，5.0mmol)溶解于THF(50ml)。先后加入3-(H2N-L-(Tr-Gln))-E-丙烯酸乙酯·HCl(按上面實施例2所述制備，1.0g，5.0mmol)和Et3N(0.70ml，5.0mmol)。加入羰基二咪唑(0.81g，5.0mmol)，將反應物在室溫攪拌20小時。真空除去溶劑，剩余物經(jīng)快速柱色譜純化(梯度洗脫0→1％CH3OH于CH2Cl2)，得到3-(Boc-L-(4-F-Phe)-L-(Tr-Gln))-E-丙烯酸乙酯(1.13g，產(chǎn)率32％)為白色非晶狀固體IR(cm-1)1712，1666，1510，1169；1H NMR(DMSO-d6)δ1.20(t，3H，J＝7.0)，1.29(s，9H)，1.61-1.70(m，2H)，2.27-2.34(m，2H)，2.74-2.78(m，1H)，2.86-2.90(m，1H)，4.06-4.13(m，3H)，4.36-4.40(m，1H)，5.58(d，1H，J＝15.6)，6.71(dd，1H，J＝15.6，5.5)，6.98(d，1H，J＝8.1)，7.03-7.09(m，2H)，7.14-7.28(m，17H)，8.06(d，1H，J＝8.1)，8.53(s，1H)；LRMS(M+Na)730.
中間體3-(Boc-L-α-(叔丁基-Gly)-L-(4-F-Phe)-L-(Tr-Gln))-E-丙烯酸乙酯的制備用上述制備3-(Boc-L-α-(4-Me-Phe)-L-(Tr-Gln))-E-丙烯酸乙酯的方法先將3-(Boc-L-(叔丁基-Gly)-L-(4-F-Phe)-L-(Tr-Gln))-E-丙烯酸乙酯脫保護，然后與Boc-L-α-(叔丁基-Gly)-OH偶合，得到3-(Boc-L-α-(叔丁基-Gly)-L-(4-F-Phe)-L-(Tr-Gln))-E-丙烯酸乙酯(產(chǎn)率54％)為白色非晶狀固體IR(cm-1)1720，1651，1506，1168；1H NMR(DMSO-d6)δ0.80(s，9H)，1.20(t，3H，J＝7.0)，1.36(s，9H)，1.53-1.67(m，2H)，2.23-2.28(m，2H)，2.79-2.94(m，2H)，3.85(d，1H，J＝9.9)，4.09(q，2H，J＝7.0)，4.31-4.35(m，1H)，4.53-4.55(m，1H)，5.46(d，1H，J＝15.8)，6.36(d，1H，J＝9.2)，6.64(dd，1H，J＝15.8，5.5)，6.97-7.03(m，2H)，7.13-7.28(m，17H)，8.08(d，1H，J＝8.1)，8.14(d，1H，J＝8.1)，8.49(s，1H)；Anal.(C48H57N4O7F)C，H，N.
中間體3-((5’-甲基異噁唑-3’-羰基)-L-α-(叔丁基-Gly)-L-(4-F-Phe)-L-(Tr-Gln))-E-丙烯酸乙酯的制備用上述制備3-((5’-甲基異噁唑-3’-羰基)-L-α-(叔丁基-Gly)-L-(4-Me-Phe)-L-(Tr-Gln))-E-丙烯酸乙酯的方法先將3-(Boc-L-α-(叔丁基-Gly)-L-(4-F-Phe)-L-(Tr-Gln))-E-丙烯酸乙酯脫保護，然后與5-甲基異噁唑-3-酰氯偶合，得到3-((5’-甲基異噁唑-3’-羰基)-L-α-(叔丁基-Gly)-L-(4-F-Phe)-L-(Tr-Gln))-E-丙烯酸乙酯(產(chǎn)率74％)為白色非晶狀固體IR(cm-1)1659，1535，1510；1H NMR(DMSO-d6)δ0.88(s，9H)，1.20(t，3H，J＝7.4)，1.52-1.67(m，2H)，2.23-2.28(m，2H)，2.45(s，3H)，2.75-2.82(m，1H)，2.89-2.96(m，1H)，4.09(q，2H，J＝7.0)，4.32-4.36(m，1H)，4.45(d，1H，J＝9.6)，4.50-4.55(m，1H)，5.44(d，1H，J＝15.6)，6.58(s，1H)，6.63(dd，1H，J＝15.6，5.5，15.6)，6.93-6.99(m，2H)，7.13-7.28(m，17H)，7.64(d，1H，J＝9.6)，8.16(d，1H，J＝8.5)，8.46(d，1H，J＝8.1)，8.51(s，1H)；Anal.(C48H52N5O7F)C，H，N.
產(chǎn)物3-((5’-甲基異噁唑-3’-羰基)-L-α-(叔丁基-Gly)-L-(4-F-Phe)-L-Gln)-E-丙烯酸乙酯的制備用類似上述制備3-((5’-甲基異噁唑-3’-羰基)-L-α-(叔丁基-Gly)-L-(4-Me-Phe)-L-Gln)-E-丙烯酸乙酯的方法將3-((5’-甲基異噁唑-3’-羰基)-L-α-(叔丁基-Gly)-L-(4-F-Phe)-L-(Tr-Gln))-E-丙烯酸乙酯脫保護，得到3-((5’-甲基異噁唑-3’-羰基)-L-α-(叔丁基-Gly)-L-(4-F-Phe)-L-Gln)-E-丙烯酸乙酯(產(chǎn)率80％)為白色非晶狀固體IR(cm-1)1653，1543，1223；1H NMR.(DMSO-d6)δ0.88(s，9H)，1.21(t，3H，J＝7.0)，1.59-1.75(m，2H)，2.01-2.06(m，2H)，2.46(s，3H)，2.75-2.82(m，1H)，2.89-2.96(m，1H)，4.09(q，2H，J＝7.0)，4.33-4.36(m，1H)，4.44(d，1H，J＝9.6)，4.50-4.58(m，1H)，5.47(d，1H，J＝15.8)，6.59(s，1H)，6.64(dd，1H，J＝15.8，5.5)，6.75(s，br，1H)，6.94-7.00(m，2H)，7.16(s，br，1H)，7.18-7.23(m，2H)，7.69(d，1H，J＝9.6)，8.16(d，1H，J＝8.1)，8.44(d，1H，J＝8.1)；Anal.(C29H38N5O7F)C，H，N.
實施例63-{(5’-甲基異噁唑-3’-羰基)-L-Val-L-(4-F-Phe)-L-((S)-Pyrrol-Ala)}-E-丙烯酸乙酯(化合物A-5)的制備 中間體(4S)-4-(2’-羧乙基)-2，2-二甲基噁唑烷-3-羧酸叔丁酯的制備將氫氧化鈉(27ml 4.0M的H2O溶液，108mmol，3當量)加到(4S)-4-(2-甲氧羰基乙基)-2，2-二甲基噁唑烷-3-羧酸叔丁酯[按Chida等人所述方法制備《化學學會雜志，化學通訊》(J.Chem.Soc.，Chem.Commun.)，1064(1992))，10.5g，36.5mmol，1當量]的CH3OH(150ml)溶液中，然后將所得渾濁的反應混合物在23℃攪拌3.5小時。減壓濃縮混合物至約30ml，然后在0.5M HCl(150ml)和EtOAc(2×150ml)之間分配。合并的有機相用MgSO4干燥，然后重力過濾。減壓濃縮濾液，真空干燥剩余物，得到(4S)-4-(2’-羧乙基)-2，2-二甲基噁唑烷-3-羧酸叔丁酯(10.0g，粗產(chǎn)率為100％)。該產(chǎn)物無需純化即可使用。1H NMR(CDCl3，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體的混合物)δ1.49(s)，1.57(s)，1.60(s)，1.84-2.05(m)，2.39-2.41(m)，3.71-3.74(m)，3.91-4.05(m).
中間體(4S，4”S)-4-{3’-(4”-芐基-2”-氧-噁唑烷-3”-基)-3’-氧丙基}-2，2-二甲基噁唑烷-3-羧酸叔丁酯的制備在0℃將三乙胺(8.87ml，63.6mmol，3.0當量)和新戊酰氯(2.61ml，21.2mmol，1.0當量)依次加到(4S)-4-(2’-羧乙基)-2，2-二甲基噁唑烷-3-羧酸叔丁酯(5.80g，21.2mmol，1當量)的THF(450ml)溶液中。將渾濁的反應混合物在0℃攪拌3.5小時，然后依次加入氯化鋰(0.988g，23.3mmol，1.1當量)和(S)-(-)-4-芐基-2-噁唑烷酮(3.57g，20.1mmol，0.95當量)。升溫至23℃并攪拌19小時后將反應混合物在0.5M HCl(150ml)和EtOAc(2×150ml)之間分配。合并的有機相用半飽和Na2CO3(150ml)洗滌，MgSO4干燥，然后重力過濾。減壓濃縮濾液，剩余物經(jīng)快速柱色譜純化(30％EtOAc于己烷)，得到(4S，4”S)-4-{3’-(4”-芐基-2”-氧-噁唑烷-3”-基)-3’-氧丙基}-2，2-二甲基噁唑烷-3-羧酸叔丁酯(7.17g，產(chǎn)率83％)為無色油IR(cm-1)2978，1783，1694；1H NMR(CDCl3，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體的混合物δ1.49(s)，1.59(s)，1.63(s)，2.01-2.10(m)，2.76(dd，J＝13.5，9.8)，2.82-3.13(m)，3.30-3.41(m)，3.76-3.82(m)，3.90(s，br)，3.97(dd，J＝9.0，5.6)，4.10-4.19(m)，4.63-4.71(m)，7.22-7.36(m)；Anal.(C23H32N2O6)C，H，N.
中間體(2’S，4S，4”S)-4-{2’-(4”-芐基-2”-氧-噁唑烷-3”-羰基)-戊-4’-烯基}-2，2-二甲基噁唑烷-3-羧酸叔丁酯的制備在-78℃將(4S，4”S)-4-{3’-(4”-芐基-2”-氧-噁唑烷-3”-基)-3’-氧丙基}-2，2-二甲基噁唑烷-3-羧酸叔丁酯(7.17g，16.6mmol，1當量)的THF(50ml)溶液加到在相同溶劑(150ml)中的雙(三甲基甲硅烷基)氨基化鈉(16.6ml 1.0M的THF溶液，16.6mmol，1當量)溶液中。將反應混合物在-78℃攪拌20分鐘，然后加入烯丙基碘(4.55ml，49.8mmol，3.0當量)。在-78℃又攪拌3小時后將反應混合物保持在-45℃2小時，然后在半飽和NH4Cl和5％Na2S2O3(300ml)的2∶1混合物與EtOAc和己烷的1∶1混合物(2×200ml)之間分配。合并的有機相用H2O(200ml)洗滌，MgSO4干燥，然后重力過濾。減壓濃縮濾液，剩余物經(jīng)快速柱色譜純化(15％EtOAc于己烷)，得到(2’S，4S，4”S)-4-{2’-(4”-芐基-2”-氧-噁唑烷-3”-羰基)-戊-4’-烯基}-2，2-二甲基噁唑烷-3-羧酸叔丁酯(4.29g，產(chǎn)率55％)為無色油IR(cm-1)2978，1780，1695；1H NMR(CDCl3，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體的混合物)δ1.45(s)，1.49(s)，1.68-1.80(m)，2.13-2.47(m)，2.49-2.67(m)，3.32(dd，J＝13.4，3.1)，3.69-3.97(m)，4.11-4.21(m)，4.66-4.74(m)，5.06-5.13(m)，5.74-5.88(m)，7.20-7.36(m)；Anal.(C26H36N2O6)C，H，N.
中間體(1S，3S)-{3-(1’-(2”，4”-二甲氧基芐基)-2’-氧-吡咯烷-3’-基)-1-羥甲基丙基}-氨基甲酸叔丁酯的制備在-78℃將臭氧鼓入(2’S，4S，4”S)-4-{2’-(4”-芐基-2”-氧-噁唑烷-3”-基)-戊-4’-烯基}-2，2-二甲基噁唑烷-3-羧酸叔丁酯(4.29g，9.08mmol，1當量)的CH2Cl2(200ml)和CH3OH(0.735ml，18.1mmol，2.0當量)溶液直到藍色不再變化。用氬氣凈化反應混合物直到它變得無色。加入二甲硫醚(6.67ml，90.8mmol，10當量)，將混合物在-78℃攪拌3.5小時，然后在0℃保持1小時。將反應混合物在H2O(200ml)與EtOAc和己烷的1∶1混合物(2×200ml)之間分配后用MgSO4干燥合并的有機相，然后重力過濾。減壓濃縮濾液，剩余物無需進一步純化即可使用。
在23℃將上述產(chǎn)物溶解于THF和EtOH(240ml)的2∶1混合物，依次加入2，4-二甲氧基芐胺鹽酸鹽(7.40g，36.3mmol，4.0當量)，乙酸鈉(2.98g，36.2mmol，4.0當量)和氰基硼氫化鈉(1.14g，18.1mmol，2.0當量)。將所得懸浮液在23℃攪拌18小時，然后在0.5MHCl(400ml)和EtOAc(2×200ml)之間分配。用半飽和NaHCO3(300ml)洗滌合并的有機相，Na2SO4干燥，然后減壓濃縮。讓剩余物通過短硅膠柱(用50％EtOAc的己烷洗脫)，得到(3’S，4S)-{1’-(2”，4”-二甲氧基芐基)-2’-氧-吡咯烷-3’-基甲基}-2，2-二甲基-噁唑烷-3-羧酸叔丁酯及雜質(zhì)(S)-(-)-4-芐基-2-噁唑烷酮。
將產(chǎn)物溶解于CH3OH(100ml)，加入TsOH·H2O(0.345g，1.81mmol，0.20當量)。將反應混合物加熱到50℃，保持在此溫度2.5小時。冷卻到23℃后減壓濃縮反應混合物至約20ml，然后在半飽和NaHCO3(150ml)與CH2Cl2和CH3OH(2×150ml)的9∶1混合物之間分配。合并的有機相用Na2SO4干燥，然后減壓濃縮。剩余物經(jīng)快速柱色譜純化(3％CH3OH于CH2Cl2)，得到(1S，3’S)-{2-(1’-(2”，4”-二甲氧基芐基)-2’-氧-吡咯烷-3’-基)-1-羥甲基乙基}-氨基甲酸叔丁酯(1.62g，44％)為泡沫IR(cm-1)3328，1669；1H NMR(CDCl3)δ1.44(s，9H)，1.50-1.75(m，2H)，1.90-2.00(m，1H)，2.17-2.27(m，1H)，2.52-2.62(m，1H)，3.14-3.24(m，2H)，3.51-3.65(m，3H)，3.70-3.78(m，1H)，3.80(s，6H)，4.35(d，1H，J＝14.3)，4.48(d，1H，J＝14.3)，5.51-5.54(m，1H)，6.42-6.46(m，2H)，7.09-7.12(m，1H)；Anal.(C21H32N2O6)C，H，N.
中間體3-{Boc-L-[(N-2，4-二甲氧基芐基)-(S)-Pyrrol-Ala]}-E-丙烯酸乙酯的制備將DMSO(0.270ml，3.80mmol，3當量)滴加到-78℃的草酰氯(0.166ml，1.90mmol，1.5當量)的CH2Cl2(14ml)溶液中。將反應混合物攪拌20分鐘，用插管沿著反應容器壁加入(1S，3’S)-{2-(1’-(2”，4”-二甲氧基芐基)-2’-氧-吡咯烷-3’-基)-1-羥甲基乙基}-氨基甲酸叔丁酯(0.518g，1.27mmol，1當量)。攪拌20分鐘后滴加三乙胺(1.06ml，7.60mmol，6當量)，然后將反應混合物攪拌1.5小時。加入乙酸(0.479ml，8.37mmol，6.6當量)，將反應混合物升至0℃5分鐘，然后用MTBE(200ml)稀釋，依次用水，飽和NaHCO3和鹽水(各25ml)洗滌。有機相經(jīng)Na2SO4干燥和濃縮后得到粗產(chǎn)物醛(0.516g，定量(quant.))，無需進一步純化即可使用。
在-78℃將雙(三甲基甲硅烷基)氨基化鈉(1.23ml 1.0M的THF溶液，1.23mmol，1當量)加到膦酰基乙酸三乙酯(0.244ml，1.23mmol，1當量)的THF(15ml)溶液中，并將所得溶液在此溫度攪拌20分鐘。將上面制備的粗醛(0.500g，1.23mmol，1當量)的THF(13ml)用插管沿著反應容器壁加到反應容器中，然后將反應混合物在-78℃攪拌45分鐘。升溫至0℃7分鐘，在0.5M HCl(20ml)和MTBE(2×50ml)之間分配。合并的有機相在MgSO4上干燥，然后濃縮。剩余物經(jīng)快速柱色譜純化(60％EtOAc于己烷)，得到3-{Boc-L-[(N-2，4-二甲氧基芐基)-(S)-Pyrrol-Ala]}-E-丙烯酸乙酯(0.356g，61％)為白色泡沫Rf＝0.43(60％EtOAc于己烷)；IR(cm-1)3307，1708，1678；1H NMR(CDCl3)δ1.28(t，3H，J＝7.2)，1.43(s，9H)，1.52-1.70(m，2H)，1.98-2.09(m，1H)，2.21-2.34(m，1H)，2.48-2.59(m，1H)，3.16-3.24(m，2H)，3.80(s，6H)，4.18(q，2H，J＝7.2)，4.27-4.40(m，1H)，4.41(s，2H)，5.40(d，1H，J＝8.1)，5.95(dd，1H，J＝15.6，1.6)，6.41-6.48(m，2H)，6.86(dd，1H，J＝15.6，5.3)，7.08-7.13(m，1H)；Anal.(C25H36N2O7·0.25H2O)C，H，N.
中間體3-{Boc-L-(4-F-Phe)-L-[(N-2，4-二甲氧基芐基)-(S)-Pyrrol-Ala]}-E-丙烯酸乙酯的制備用類似于上述制備3-(Boc-L-(4-Me-Phe)-L-(Tr-Gln))-E-丙烯酸乙酯方法(實施例4)，由3-{Boc-L-[(N-2，4-二甲氧基芐基)-(S)-Pyrrol-Ala]}-E-丙烯酸乙酯和Boc-L-(4-F-Phe)-OH制備此中間體。Rf＝0.34(60％EtOAc于己烷)；IR(cm-1)3258，1705，1666；1H NMR(CDCl3)δ1.28(t，3H，J＝7.2)，1.45(s，9H)，1.51-1.66(m，2H)，1.78-1.90(m，1H)，2.06-2.23(m，2H)，2.99(dd，1H，J＝13.7，6.2)，3.11(dd，1H，J＝13.7，5.3)，3.17-3.23(m，2H)，3.80(s，3H)，3.81(s，3H)，4.18(q，2H，J＝7.2)，4.35(s，2H)，4.38-4.51(m，2H)，5.29-5.37(m，1H)，5.76(d，1H，J＝15.8)，6.43-6.47(m，2H)，6.72(dd，1H，J＝15.8，5.3)，6.83-6.91(m，2H)，7.09-7.17(m，3H)，7.92(br，1H)；Anal.(C34H44FN3O8)C，H，N.
中間體3-{Boc-L-Val-L-(4-F-Phe)-L-[(N-2，4-二甲氧基芐基)-(S)-Pyrrol-Ala]}-E-丙烯酸乙酯的制備用類似于上述制備3-(Boc-L-Phe-L-(Tr-Gln))-E-丙烯酸乙酯的方法(實施例2)，由3-{Boc-L-(4-F-Phe)-L-[(N-2，4-二甲氧基芐基)-(S)-Pyrrol-Ala]}-E-丙烯酸乙酯和Boc-L-Val-OH制備本化合物。Rf＝0.24(60％EtOAc于己烷)；IR(cm-1)3284，1713，1678br，1643；1H NMR(CDCl3)δ0.91(d，3H，J＝6.8)，0.97(d ，3H，.J＝6.8)，1.28(t，3H，J＝7.2)，1.45(s，9H)，1.50-1.62(m，2H)，1.66-1.82(m，1H)，1.90-2.02(m，1H)，2.08-2.21(m，2H)，2.94(dd，1H，J＝13.5，5.8)，3.17-3.27(m，3H)，3.80(s，3H)，3.82(s，3H)，3.97-4.05(m，1H)，4.17(q，2H，J＝7.2)，4.27(d，1H，J＝14.3)，4.29-4.38(m，1H)，4.40(d，1H，J＝14.3)，4.86-4.93(m，1H)，5.10(d，1H，J＝8.7)，5.76(dd，1H，J＝15.6，1.2)，6.45-6.52(m，2H)，6.70(dd，1H，J＝15.6，5.4)，6.79-6.88(m，3H)，7.12-7.22(m，3H)，8.30(d，1H，J＝5.9)；Anal.(C39H53FN4O9)C，H，N.
中間體3-{(5’-甲基異噁唑-3’-羰基)-L-Val-L-(4-F-Phe)-L-[(N-2，4-二甲氧基芐基)-(S)-Pyrrol-Ala]}-E-丙烯酸乙酯的制備用上述制備3-((5’-甲基異噁唑-3’-羰基)-L-Leu-L-Phe-L-(Tr-Gln))-E-丙烯酸乙酯的方法(實施例4)，由3-{Boc-L-Val-L-[(N-2，4-二甲氧基芐基)-(S)-Pyrrol-Ala]}-E-丙烯酸乙酯和異噁唑-5-酰氯制備本化合物。Rf＝0.36(5％CH3OH的CH2Cl2)；IR(cm-1)3284，1717，1650；1H NMR(CDCl3)δ0.97(d，3H，J＝6.8)，1.01(d，3H，J＝6.8)，1.28(t，3H，J＝7.2)，1.51-1.64(m，2H)，1.72-1.84(m，1H)，1.95-2.05(m，1H)，2.11-2.33(m，2H)，2.48(s，3H)，2.98(dd，1H，J＝13.7，5.6)，3.16-3.24(m，3H)，3.80(s，3H)，3.81(s，3H)，4.17(q，2H，J＝7.2)，4.23(d，1H，J＝14.3)，4.31-4.42(m，1H)，4.40(d，1H，J＝14.3)，4.44-4.50(m，1H)，4.88-4.96(m，1H)，5.79(dd，1H，J＝15.6，1.4)，6.43-6.49(m，3H)，6.71(dd，1H，J＝15.6，5.3)，6.80-6.88(m，2H)，6.94(d，1H，J＝9.3)，7.11-7.17(m，3H)，7.29(d，1H，J＝8.7)，8.33(d，1H，J＝6.2)；Anal.(C39H48FN5O9·0.5H2O)C，H，N.
產(chǎn)物3-{(5’-甲基異噁唑-3’-羰基)-L-Val-L-(4-F-Phe)-L-[S)-Pyrrol-Ala]}-E-丙烯酸乙酯的制備將3-{(5’-甲基異噁唑-3’-羰基)-L-Val-L-(4-F-Phe)-L-[(N-2，4-二甲氧基芐基)-(S)-Pyrrol-Ala]}-E-丙烯酸乙酯(0.263g，0.351mmol，1當量)，水(2滴)和DDQ(0.104g，0.458mmol，1.3當量)的懸浮液回流9小時，然后用8小時冷卻到室溫。用CH2Cl2(200ml)稀釋反應混合物，用飽和NaHCO3和1N NaOH的2∶1混合物(20ml)洗滌。干燥(MgSO4)有機相，然后蒸發(fā)。剩余物經(jīng)快速柱色譜純化(梯度洗脫2→3％CH3OH于CH2Cl2)，得到3-{(5’-甲基異噁唑-3’-羰基)-L-Val-L-(4-F-Phe)-L-[(S)-Pyrrol-Ala]}-E-丙烯酸乙酯(0.117g，56％)為白色固體mp＝219-220℃；Rf＝0.23(5％CH3OH的CH2Cl2)；IR(cm-1)3401br，3295，1655 br；1H NMR(CDCl3)δ0.94(d，3H，J＝6.8)，0.97(d，3H，J＝6.5)，1.29(t，3H，J＝7.2)，1.54-1.65(m，1H)，1.72-1.91(m，2H)，2.07-2.26(m，2H)，2.28-2.39(m，1H)，2.49(d，3H，J＝0.9)，3.01(dd，1H，J＝13.8，6.1)，3.12(dd，1H，J＝13.8，6.4)，3.26-3.38(m，2H)，4.18(q，2H，J＝7.2)，4.34(dd，1H，J＝8.7，7.2)，4.43-4.54(m，1H)，4.90(dt，1H，J＝9.0，6.2)，5.76(dd，1H，J＝15.6，1.6)，6.00(s，1H)，6.42(q，1H，J＝0.9)，6.72(dd，1H，J＝15.6，5.4)，6.86-6.94(m，2H)，7.01(d，1H，J＝9.0)，7.11-7.18(m，2H)，7.21(d，1H，J＝8.7)，7.76(d，1H，J＝7.2)；Anal.(C30H38FN5O7)C，H，N.
實施例73-[(5’-甲基異噁唑-3’-羰基)-L-Val-L-(4-F-Phe)-L-Gln]-E-丙烯酸乙酯(化合物A-6)的制備 中間體3-{Boc-L-(4-F)-Phe-L-(Tr-Gln)}-E-丙烯酸乙酯的制備用類似于上述制備3-(Boc-L-Phe-L-(Tr-Gln))-E-丙烯酸乙酯的方法.(實施例2)，由3-(Boc-L-(Tr-Gln))-E-丙烯酸乙酯和Boc-L-(4-F)-Phe-OH制備本化合物IR(cm-1)3328，1707，1506，1168；1H NMR(CDCl3)δ1.29(t，3H，J＝7.2)，1.37(s，9H)，1.66-1.78(m，1H)，1.88-1.98(m，1H)，2.32(t，2H，J＝6.6)，2.85-2.92(m，1H)，2.97-3.04(m，1H)，4.18(q，2H，J＝7.2)，4.52(m，1H)，4.96(m，1H)，5.60(d，1H，J＝15.6)，6.56(d，1H，J＝8.1)，6.66(dd，1H，J＝15.6，5.1)，6.80(s，br，1H)，6.92-6.98(m，2H)，7.08-7.12(m，2H)，7.17-7.23(m，6H)，7.24-7.33(m，10H)；Anal.(C42H46FN3O6)C，H，N.
中間體3-{Boc-L-Val-L-(4-F)-Phe-L-(Tr-Gln)}-E-丙烯酸乙酯的制備用類似于上述制備3-{Boc-L-Leu-L-Phe-L-(Tr-Gln)}-E-丙烯酸乙酯的方法(實施例2)，由3-{Boc-L-(4-F)-Phe-L-(Tr-Gln)}-E-丙烯酸乙酯和Boc-L-Val-OH制備本化合物IR(cm-1)3319，1657，1511，1172；1H NMR(CDCl3)δ0.78(d，3H，J＝6.9)，0.87(d，3H，J＝6.9)，1.29(t，3H，J＝7.2)，1.37(s，9H)，1.69-1.79(m，1H)，1.93-2.06(m，2H)，2.33(t，2H，J＝7.2)，2.97-3.04(m，1H)，3.73-3.77(m，1H)，4.18(q，2H，J＝7.2)，4.42-4.54(m，2H)，4.80(d，1H，J＝6.9)，5.61(dd，1H，J＝15.6，1.5)，6.44(d，1H，J＝7.8)，6.69(dd，1H，J＝15.9，5.4)，6.71(s，br，1H)，6.92-6.98(m，2H)，7.07-7.13(m，2H)，7.18-7.31(m，16H)，8.02(s，1H)；Anal.(C47H55FN4O7)C，H，N.
中間體3-{(5’-甲基異噁唑-3’-羰基)-L-Val-L-(4-F)-Phe-L-(Tr-Gln)}-E-丙烯酸乙酯的制備用類似于上述制備3-{(5’-甲基異噁唑-3’-羰基)-L-Leu-L-Phe-L-(Tr-Gln)}-E-丙烯酸乙酯的方法(實施例2)，由3-{Boc-L-Val-L-(4-F)-Phe-L-(Tr-Gln)}-E-丙烯酸乙酯和5-甲基異噁唑-3-酰氯制備本化合物IR(cm-1)3319，1657，1511，1172；1H NMR(CDCl3)δ0.84(d，3H，J＝6.9)，0.89(d，3H，J＝6.9)，1.30(t，3H，J＝7.2)，1.68-1.80(m，1H)，1.95-2.06(m，1H)，2.08-2.17(m，1H)，2.34(t，2H，J＝7.2)，2.44(s，3H)，2.87-2.94(m，1H)，3.01-3.08(m，1H)，4.18(q，2H，J＝7.2)，4.48-4.56(m，2H)，5.68(dd，1H，J＝15.6，1.8)，6.23(s，1H)，6.39(d，1H，J＝7.8)，6.70(dd，1H，J＝15.9，5.4)，6.84-6.90(m，3H)，7.04-7.08(m，4H)，7.17-7.30(m，16H)；Anal.(C47H50N5O7)C，H，N.
產(chǎn)物3-{(5’-甲基異噁唑-3’-羰基)-L-Val-L-(4-F)-Phe-L-Gln}-E-丙烯酸乙酯的制備用類似于上述制備3-{(5’-甲基異噁唑-3’-羰基)-L-Leu-L-Phe-L-Gln}-E-丙烯酸乙酯的方法(實施例2)，將3-{(5’-甲基異噁唑-3’-羰基)-L-Val-L-(4-F)-Phe-L-(Tr-Gln)}-E-丙烯酸乙酯脫保護，得到標題化合物IR(cm-1)3284，1652，1542；1H NMR(DMSO-d6)δ0.76(d，3H，J＝6.9)，0.79(d，3H，J＝6.9)，1.20(t，3H，J＝7.2)，1.57-1.76(m，2H)，1.96-2.06(3H)，2.46(s，3H)，2.75-2.83(m，1H)，2.89-2.96(m，1H)，4.09(q，2H，J＝7.2)，4.13-4.25(m，1H)，4.35(m，1H)，4.49-4.56(m，1H)，5.53(d，1H，J＝15.6)，6.57(s，1H)，6.66(dd，1H，J＝15.6，5.4)，6.75(s，br，1H)，6.97-7.03(m，2H)，7.17-7.24(m，3H)，8.15(d，1H，J＝7.8)，8.24(d，1H，J＝8.7)，8.32(d，1H，J＝8.1)；Anal.(C28H36N5O7)C，H，N.
實施例83-{(5’-甲基異噁唑-3’-羰基)-L-α-(叔丁基-Gly)-L-(4-F-Phe)-L-((S)-Pyrrol-Ala)}-E-丙烯酸乙酯(化合物A-7)的制備 中間體Boc-L-(4-F-Phe)-OBn的制備將DCC(0.765g，3.71mmol，1.05當量)，芐醇(0.347ml，3.35mmol，0.95當量)和DMAP(0.022g，0.18mmol，0.05當量)依次加到Boc-L-(4-F-Phe)-OH(1.0g，3.53mmol，1當量)的CH2Cl2(15ml)溶液中。攪拌18小時后濾除沉淀，濾液用MTBE(75ml)稀釋，先后用10％KHSO4和鹽水(各10ml)洗滌，然后用Na2SO4干燥和蒸發(fā)。剩余物經(jīng)快速柱色譜純化(12％EtOAc于己烷)，得到Boc-L-(4-F-Phe)-Obn(0.992g，79％)為白色固體。1H NMR譜數(shù)據(jù)與文獻上記載的相符(見Jackson等人，《有機化學雜志》(J.Org.Chem.)，573397(1992))。
中間體Boc-L-α-(叔丁基-Gly)-L-(4-F-Phe)-OBn的制備將Boc-L-(4-F-Phe)-Obn(2.0g，5.36mmol，1當量)在CH2Cl2(20ml)和TFA(10ml)的混合物中攪拌1小時，然后再加入TFA(10ml)，并將反應溶液再攪拌1小時。蒸發(fā)掉揮發(fā)性物質(zhì)，將剩余物溶解于DMF(30ml)。加入Boc-L-α-(叔丁基-Gly)-OH(1.24g，5.36mmol，1當量)，然后將溶液冷卻到0℃。依次加入N，N-二異丙基乙胺(2.80ml，16.1mmol，3當量)和HATU(2.04g，5.37mmol，1當量)。攪拌20分鐘后經(jīng)1小時讓反應混合物升至室溫，然后用MTBE(500ml)稀釋，先后用5％KHSO4(100ml)，飽和NaHCO3(50ml)和鹽水(50ml)洗滌。干燥有機相并蒸發(fā)。剩余物經(jīng)快速柱色譜純化(20％EtOAc于己烷)，得到Boc-L-α-(叔丁基-Gly)-L-(4-F-Phe)-Obn(2.04g，78％)為白色泡沫Rf＝0.49(25％EtOAc于己烷)；IR(cm-1)3307，1737，1655br；1H NMR(CDCl3)δ0.94(s，9H)，1.45(s，9H)，3.04(dd，1H，J＝14.2，5.8)，3.11(dd，1H，J＝14.2，6.1)，3.79(d，1H，J＝9.3)，4.88(dt，1H，J＝7.8，5.8)，5.08(d，1H，J＝12.0)，5.16-5.23(m，1H)，5.19(d，1H，J＝12.0)，6.08(d，1H，J＝7.8)，6.83-6.97(m，4H)，7.28-7.40(m，5H)；Anal.(C27H35FN2O5)C，H，N.
中間體3-{Boc-L-α-(叔丁基-Gly)-L-(4-F-Phe)-L-((N-2，4-二甲氧基芐基)-(S)-Pyrrol-Ala)}-E-丙烯酸乙酯的制備將HCl的1，4-二噁烷(4.0M，8ml)溶液加到3-{Boc-L-((N-2，4-二甲氧基芐基)-(S)-Pyrrol-Ala)}-E-丙烯酸乙酯(0.309g，0.648mmol，1當量)的1，4-二噁烷(8ml)溶液中。攪拌1.5小時后蒸發(fā)掉揮發(fā)性物質(zhì)，得到粗胺鹽為泡沫。
將鈀炭(10％，200mg)加到Boc-L-α-(叔丁基-Gly)-L-(4-F-Phe)-Obn(2.04g，4.19mmol)的EtOAc(200ml)溶液中。用氫氣罐改變反應氛圍。攪拌3小時后將氣氛改為氬氣，并用#3和#5Whatman濾紙過濾反應混合物。蒸發(fā)濾液，得到白色泡沫。
將所得泡沫與上步制備的粗胺鹽在DMF(5ml)中合并，然后冷卻到0℃。相繼加入N，N-二異丙基乙胺(0.339ml，1.95mmol，3當量)和HATU(0.247g，0.650mmol，1當量)。攪拌20分鐘后經(jīng)1小時讓反應混合物升至室溫，然后用MTBE(100ml)稀釋，先后用5％KHSO4，飽和NaHCO3和鹽水(各15ml)洗滌。干燥有機相并蒸發(fā)。剩余物經(jīng)快速柱色譜純化(60％EtOAc于己烷)，得到3-{Boc-L-α-(叔丁基-Gly)-L-(4-F-Phe)-L-((N-2，4-二甲氧基芐基)-(S)-Pyrrol-Ala)}-E-丙烯酸乙酯(0.364g，74％)為白色泡沫Rf＝0.34(60％EtOAc于己烷)；IR(cm-1)3284，1713，1655；1H NMR(CDCl3)δ1.01(s，9H)，1.28(t，3H，J＝7.2)，1.46(s，9H)，1.50-1.63(m，2H)，1.68-1.81(m，1H)，1.85-1.99(m，1H)，2.09-2.20(m，1H)，2.94(dd，1H，J＝13.5，5.4)，3.15-3.26(m，3H)，3.80(s，3H)，3.82(s，3H)，3.97(d，1H，J＝9.3)，4.17(q，2H，J＝7.2)，4.27-4.38(m，1H)，4.29(d，1H，J＝14.3)，4.42(d，1H，J＝14.3)，4.84-4.92(m，1H)，5.22(d，1H，J＝9.6)，5.74(dd，1H，J＝15.6，1.6)，6.45-6.53(m，2H)，6.69(dd，1H，J＝15.6，5.4)，6.76-6.87(m，3H)，7.10-7.28(m，3H)，8.26(d，1H，J＝5.9)；Anal.(C40H55FN4O9)C，H，N.
中間體3-{(5’-甲基異噁唑-3’-羰基)-L-α-(叔丁基-Gly)-L-(4-F-Phe)-L-((N-2，4-二甲氧基芐基)-(S)-Pyrrol-Ala)}-E-丙烯酸乙酯的制備用上述制備3-{(5’-甲基異噁唑-3’-羰基)-L-Leu-L-Phe-L-(Tr-Gln)}-E-丙烯酸乙酯的方法(實施例2)，由3-{Boc-L-α-(叔丁基-Gly)-L-(4-F-Phe)-L-((N-2，4-二甲氧基芐基)-(S)-Pyrrol-Ala)}-E-丙烯酸乙酯和異噁唑-5-酰氯制備本化合物Rf＝0.60(10％CH3OH的CHCl3)；IR(cm-1)3295，1713，1666，1643；1H NMR(CDCl3)δ1.07(s，9H)，1.29(t，3H，J＝7.2)，1.51-1.64(m，2H)，1.71-1.83(m，1H)，1.96-2.07(m，1H)，2.11-2.21(m，1H)，2.49(s，3H)，2.99(dd，1H，J＝13.7，5.9)，3.13-3.26(m，3H)，3.80(s，3H)，3.81(s，3H)，4.18(q，2H，J＝7.2)，4.23-4.48(m，4H)，4.85-4.93(m，1H)，5.76(dd，1H，J＝15.6，1.4)，6.40-6.52(m，3H)，6.71(dd，1H，J＝15.6，5.3)，6.79-6.88(m，2H)，6.92(d，1H，J＝9.0)，7.09-7.22(m，3H)，7.37(d，1H，J＝9.0)，8.27(d，1H，J＝6.2)；Anal.(C40H50FN5O9·0.25H2O)C，H，N.
產(chǎn)物3-{(5’-甲基異噁唑-3’-羰基)-L-α-(叔丁基-Gly)-L-(4-F-Phe)-L-((S)-Pyrrol-Ala)}-E-丙烯酸乙酯的制備用上述制備3-{(5’-甲基異噁唑-3’-羰基)-L-Val-L-(4-F-Phe)-L-((S)-Pyrrol-Ala)}-E-丙烯酸乙酯的方法(實施例6)，由3-{(5’-甲基異噁唑-3’-羰基)-L-α-(叔丁基-Gly)-L-(4-F-Phe)-L-((N-2，4-二甲氧基芐基)-(S)-Pyrrol-Ala)}-E-丙烯酸乙酯制備本化合物Rf＝0.30(5％CH3OH的CH2Cl2)；IR(cm-1)3307br，1684，1660；1H NMR(CDCl3)δ1.02(s，9H)，1.29(t，3H，J＝7.2)，1.51-1.61(m，1H)，1.75-1.97(m，2H)，2.14-2.25(m，1H)，2.28-2.40(m，1H)，2.50(s，3H)，3.03(d，2H，J＝6.5)，3.27-3.42(m，2H)，4.18(q，2H，J＝7.2)，4.36(d，1H，J＝9.8)，4.52-4.63(m，1H)，4.86-4.95(m，1H)，5.71(dd，1H，J＝15.6，1.4)，6.44(s，1H)，6.57-6.64(m，1H)，6.73(dd，1H，J＝15.6，5.3)，6.83-6.91(m，2H)，7.09-7.15(m，2H)，7.28-7.36(m，2H)，7.59(d，1H，J＝8.1)；Anal.(C31H40FN5O7)C，H，N.
實施例93-{(5’-甲基異噁唑-3’-羰基)-L-Val-L-(4-F-Phe)-L-((S)-Piper-Ala)}-E-丙烯酸乙酯(化合物A-8)的制備 中間體(2’S，4S，4”S)-4-{2’-(4”-芐基-2”-氧-噁唑烷-3”-羰基)-5’-羥戊基}-2，2-二甲基噁唑烷-3-羧酸叔丁酯的制備將硼烷-四氫呋喃復合物(0.96ml 1.0M的THF溶液，0.96mmol，1當量)溶液加到0℃的(2’S，4S，4”S)-4-{2’-(4”-芐基-2”-氧-噁唑烷-3”-羰基)-戊-4’-烯基}-2，2-二甲基噁唑烷-3-羧酸叔丁酯(按實施例6所述制備，0.455g，0.963mmol，1當量)的THF(3ml)溶液中。攪拌30分鐘后加水(3ml)和過硼酸鈉四水合物(0.148g，0.962mmol，1當量)，并除去冰浴。1小時后用MTBE(125ml)稀釋，然后用水(15ml)和鹽水(2×15ml)洗滌，干燥(Na2SO4)并濃縮。剩余物經(jīng)快速柱色譜純化(50％EtOAc于己烷)，得到(2’S，4S，4”S)-4-{2’-(4”-芐基-2”-氧-噁唑烷-3”-羰基)-5’-羥戊基}-2，2-二甲基噁唑烷-3-羧酸叔丁酯(0.339g，72％)為無色玻璃Rf＝0.41(50％EtOAc于己烷)；IR(cm-1)3486，1780，1693；1H NMR(CDCl3)δ1.42-1.85(m，21H)，2.13-2.24(m，1H)，2.70(dd，1H，J＝13.1，10.0)，3.29-3.38(m，1H)，3.61-4.22(m，8H)，4.63-4.76(m，1H)，7.19-7.38(m，5H)；Anal.(C26H38N2O7·0.5H2O)C，H，N.
中間體(1S，3’S)-{2-(1’-(2”，4”-二甲氧基芐基)-2’-氧-哌啶-3’-基)-1-羥甲基乙基}-氨基甲酸叔丁酯的制備將(2’S，4S，4”S)-4-{2’-(4”-芐基-2”-氧-噁唑烷-3”-基)-5’-羥戊基}-2，2-二甲基噁唑烷-3-羧酸叔丁酯(3.88g，7.92mmol，1當量)溶解于Et3N(3.97ml，28.51mmol，3.6當量)。將混合物冷卻到-12℃，然后以保持溫度在8-17℃之間的速度加入三氧化硫-吡啶復合物(5.04g，31.67mmol，4當量)的DMSO(150ml)溶液。將溶液在23℃攪拌3小時，然后在冰水浴中冷卻，并加入H2O(150ml)淬滅反應。所得溶液用EtOAc萃取(2×150ml)。合并的有機相先后用5％檸檬酸(100ml)和鹽水(100ml)洗滌，Na2SO4干燥，然后過濾。減壓除去溶劑，真空干燥剩余物，得到白色泡沫(3.53g)。
在所得產(chǎn)物(3.53g，7.22mmol，1當量)于THF和EtOH(120ml)的2∶1混合物溶液中加入2，4-二甲氧基芐胺鹽酸鹽(5.88g，28.89mmol，4.0當量)，NaOAc(2.37g，28.89mmol，4當量)和NaBH3CN(0.908g，14.45mmol，2當量)。將反應混合物攪拌過夜(20小時)，用MTBE(200ml)稀釋。有機相依次用10％KHSO4(100ml)，飽和NaCO3(100ml)和鹽水(100ml)洗滌，干燥(Na2SO4)并濃縮，得到淺黃色泡沫。
在該泡沫(3.34g，7.22mmol，1當量)的CH3OH(50ml)溶液中加入對甲苯磺酸(0.275g，1.44mmol，0.2當量)。將反應混合物在50℃攪拌2.5小時，然后用CH2Cl2(100ml)稀釋。有機相用飽和NaHCO3(100ml)洗滌，Na2SO4干燥并濃縮。剩余物經(jīng)快速柱色譜純化(3％CH3OH于CH2Cl2)，得到(1S，3’S)-{2-(1’-(2”，4”-二甲氧基芐基)-2’-氧-哌啶-3’-基)-1-羥甲基乙基}-氨基甲酸叔丁酯(1.33g，三步的總產(chǎn)率44％)為白色泡沫1H NMR(CDCl3)δ1.44(s，9H)，1.71-1.85(m，2H)，1.92-1.98(m，2H)，2.40-2.48(m，1H)，2.71-2.78(m，1H)，3.19-3.32(m，2H)，3.45-3.69(m，4H)，4.11-4.20(m，2H)，4.68(m，1H)，5.47(m，1H)，6.44(s，1H)，7.20-7.33(m，2H).
產(chǎn)物3-{(5’-甲基異噁唑-3’-羰基)-L-Val-L-(4-F-Phe)-L-((S)-Piper-Ala)}-E-丙烯酸乙酯的制備用類似上述將(1S，3’S)-{2-(1’-(2”，4”-二甲氧基芐基)-2’-氧-哌啶-3-基)-1-羥甲基乙基}-氨基甲酸叔丁酯轉(zhuǎn)化成產(chǎn)物3-{(5’-甲基并噁唑-3’-羰基)-L-Val-L-(4-F-Phe)-L-((S)-Pyrrol-Ala)}-E-丙烯酸乙酯的方法(實施例6)，將(1S，3’S)-{2-(1’-(2”，4”-二甲氧基芐基)-2’-氧-哌啶-3’-基)-1-羥甲基乙基}-氨基甲酸叔丁酯轉(zhuǎn)化成產(chǎn)物3-{(5’-甲基異噁唑-3’-羰基)-L-Val-L-(4-F-Phe)-L-((S)-Piper-Ala)}-E-丙烯酸乙酯。
Rf＝0.24(5％CH3OH的CH2Cl2)；IR(cm-1)3284br，1713，1655，1637br；1H NMR(CDCl3)δ0.94(d，3H，J＝6.8)，0.98(d，3H，J＝6.8)，1.29(t，3H，J＝7.2)，1.43-1.56(m，2H)，1.66-1.78(m，1H)，1.83-2.05(m，4H)，2.16-2.28(m，1H)，2.49(s，3H)，3.00(dd，1H，J＝13.7，6.2)，3.13(dd，1H，J＝13.7，5.9)，3.21-3.37(m，2H)，4.18(q，2H，J＝7.2)，4.36-4.45(m，2H)，4.80-4.88(m，1H)，5.76(dd，1H，J＝15.6，1.6)，5.96(s，1H)，6.43(s，1H)，6.70(dd，1H，J＝15.6，5.3)，6.81(d，1H.J＝8.7)，6.86-6.98(m，2H)，7.09-7.19(m，2H)，7.22-7.29(m，1H)，8.07(d，1H，J＝6.5).
實施例103-{(5’-甲基異噁唑-3’-羰基)-L-ValΨ(COCH2)-L-(4-F-Phe)-L-Gln}-E-丙烯酸乙酯(化合物B-1)的制備
中間體反-6-甲基-庚-4-烯酸的制備將異丁醛(9.59g，133mmol，1當量)的THF(50ml)溶液用添加漏斗滴加到0℃乙烯基溴化鎂(133ml 1.0M的THF溶液，133mmol，1.0當量)的THF(300ml)溶液中。添加完畢后將反應混合物在0℃攪拌30分鐘，然后加入乙基丙二酰氯(17.0ml，133mmol，1.0當量)。在0℃攪拌1小時后將反應混合物在飽和NH4Cl(150ml)與EtOAc和己烷(2×200ml)的1∶1混合物之間分配。合并有機相，Na2SO4干燥，濃縮。剩余物經(jīng)硅膠過濾純化(用5％EtOAc的己烷洗脫)，得到中間體丙二酸酯(11.5g，40％)。無法描繪該酯的特性，但可以將其與Ti(OEt)4(1.13ml，5.39mmol，0.10當量)(凈)混合，在190℃加熱4小時，然后冷卻到60℃。依次加入EtOH(50ml)和6.0M KOH(50ml)，將所得棕色混合物回流4小時。冷卻到23℃后用中等玻璃料過濾反應混合物，濾液在水(150ml)和Et2O(2×150ml)之間分配。水相用濃鹽酸酸化至pH＝2(用pH試紙測定)，然后用EtOAc和己烷(2×150ml)1∶1混合物萃取。剩余物經(jīng)減壓蒸餾得到反-6-甲基-庚-4-烯酸(3.58g，47％)，為無色液體bp 107-112℃(1Torr)；IR(cm-1)2960，1711；1H NMR(CDCl3)δ0.96(d，6H，J＝6.5)，2.18-2.45(m，5H)，5.31-5.50(m，2H)；Anal.(C8H14O2)C，H.
中間體反-6-甲基-庚-4-烯酸(2R-羥基-1R-甲基-2-苯基乙基)-甲基酰胺的制備在23℃將草酰氯(2.25ml，25.8mmol，1.05當量)加到反-6-甲基-庚-4-烯酸(3.50g，24.6mmol，1當量)和N，N-二甲基甲酰胺(0.03ml，0.39mmol，0.016當量)的苯(60ml)溶液中。將反應混合物在23℃攪拌2小時，然后減壓濃縮。將所得油溶解于THF(20ml)，然后通過插管加到0℃的(1R，2R)-(-)-假麻黃素(3.87g，23.4mmol，1當量)和三乙胺(3.92ml，28.1mmol，1.2當量)的THF(150ml)溶液中。將反應混合物在0℃攪拌30分鐘，然后在半飽和NH4Cl(150ml)和EtOAc(2×150ml)之間分配。合并有機相，Na2SO4干燥，濃縮。剩余物經(jīng)快速柱色譜純化(梯度洗脫40→50％EtOAc的己烷)，得到反-6-甲基-庚-4-烯酸(2R-羥基-1R-甲基-2-苯基乙基)-甲基酰胺(6.31g，93％)為粘稠的油Rf＝0.35(50％EtOAc于己烷)；IR(cm-1)3382，1622；1H NMR(CDCl3，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體的混合物)δ0.96(d，J＝6.8)，0.97(d，J＝6.5)，1.11(d，J＝6.9)，2.18-2.59(m)，2.82(s)，2.92(s)，3.99-4.04(m)，4.32-4.42(m)，4.44-4.49(m)，4.55-4.62(m)，5.32-5.49(m)，7.24-7.42(m)；Anal.(C18H27NO2)C，H，N.
中間體反-6-甲基-2S-(4-氟芐基)-庚-4-烯酸(2R-羥基-1R-甲基-2-苯基乙基)-甲基酰胺的制備在-78℃將正丁基鋰(32.5ml 1.6M己烷溶液，52.0mmol，3.1當量)加到無水氯化鋰(7.18g，169mmol，10當量)和二異丙胺(7.80ml，55.7mmol，3.3當量)的THF(250ml)懸浮液中。將反應混合物在-78℃攪拌30分鐘，在0℃保持5分鐘后再冷卻到-78℃。通過插管加入反-6-甲基-庚-4-烯酸(2R-羥基-1R-甲基-2-苯基乙基)-甲基酰胺(4.91g，17.0mmol，1當量)的THF(50ml)，然后將所得溶液在-78℃攪拌1.75小時，在0℃保持20分鐘后在23℃攪拌5分鐘，然后再冷卻到0℃。加入4-氟芐基溴(6.34ml，50.9mmol，3當量)的THF(15ml)溶液，然后在半飽和NH4Cl(230ml)與EtOAc和己烷(200ml，2×150ml)的1∶1混合物之間分配。合并有機相，Na2SO4干燥，濃縮。剩余物經(jīng)快速柱色譜純化(梯度洗脫20→40％EtOAc的己烷)，得到反-6-甲基-2S-(4-氟芐基)-庚-4-烯酸(2R-羥基-1R-甲基-2-苯基乙基)-甲基酰胺(6.33g，94％)為粘稠的油Rf＝0.38(40％EtOAc于己烷)；IR(cm-1)3378，1614；1H NMR(CDCl3，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體的混合物)δ0.85-0.95(m)，0.96(d，J＝6.8)，2.10-2.32(m)，2.34-2.46(m)，2.58(s)，2.67-2.79(m)，2.82-2.94(m)，3.00-3.18(m)，3.94(br)，4.37-4.52(m)，5.24-5.42(m)，5.44-5.56(m)，6.89-7.01(m)，7.08-7.14(m)，7.19-7.38(m)；Anal.(C25H32FNO2)C，H，N.
中間體5S-(1R-溴-2-甲基丙基)-3R-(4-氟芐基)二氫呋喃-2-酮的制備在0℃用10分鐘將N-溴琥珀酰亞胺(2.93g，16.5mmol，1.05當量)分成數(shù)小批加到反-6-甲基-2S-(4-氟芐基)-庚-4-烯酸(2R-羥基-1R-甲基-2-苯基乙基)-甲基酰胺(6.24g，15.7mmol，1當量)和冰醋酸(4.49ml，78.4mmol，5當量)的THF和H2O的4∶1混合物(165ml)的溶液中。將所得黃色溶液在0℃攪拌15分鐘，然后升溫至23℃，接著在回流溫度加熱45分鐘。冷卻到23℃后將反應混合物在半飽和NaHCO3(200ml)與EtOAc和己烷(2×200ml，100ml)的1∶1混合物之間分配。合并有機相，Na2SO4干燥，濃縮。剩余物經(jīng)快速色譜純化(梯度洗脫4→10％EtOAc的己烷)，得到5S-(1R-溴-2-甲基丙基)-3R-(4-氟芐基)二氫呋喃-2-酮(4.14g，80％)為淺黃色油(1H NMR測定其中含有約5-10％不確定的雜質(zhì))Rf＝0.56(25％EtOAc于己烷)；IR(cm-1)1772；1H NMR(CDCl3，主要異構(gòu)體)δ0.94(d，3H，J＝6.5)，1.00(d，3H，J＝6.8)，2.05-2.35(m，3H)，2.83(dd，1H，J＝13.6，8.4)，2.92-3.03(m，1H)，3.11(dd，1H，J＝13.6，4.7)，3.90(dd，1H，J＝9.0，3.7)，4.33-4.40(m，1H)，6.98-7.06(m，2H)，7.14-7.20(m，2H)；Anal.(C15H18BrFO2)C，H.
中間體5S-(1S-疊氮基-2-甲基丙基)-3R-(4-氟芐基)二氫呋喃-2-酮的制備將疊氮化鈉(1.90g，29.2mmol，2.5當量)和5S-(1R-溴-2-甲基丙基)-3R-(4-氟芐基)二氫呋喃-2-酮(3.85g，11.7mmol，1當量)的N，N-二甲基甲酰胺(40ml)懸浮液在50℃加熱67小時。將反應混合物冷卻到23℃，并在半飽和NaCl(200ml)和EtOAc/己烷/丙酮(1∶1∶1，2×200ml，100ml)混合物之間分配。合并有機相，Na2SO4干燥，濃縮。剩余物經(jīng)快速色譜純化(梯度洗脫9→17％EtOAc的己烷)，得到5S-(1S-疊氮基-2-甲基丙基)-3R-(4-氟芐基)二氫呋喃-2-酮(2.10g，62％)為白色固體(1H NMR測定其中含有約5-10％不確定的雜質(zhì))mp 91-96℃；Rf＝0.44(25％EtOAc于己烷)；IR(cm-1)2097，1772；1H NMR(CDCl3，主要異構(gòu)體)δ0.99(d，3H，J＝6.5)，1.02(d，3H，J＝6.8)，1.95-2.20(m，3H)，2.78-2.88(m，1H)，2.94(dd，1H，J＝7.0，4.2)，3.03-3.17(m，2H)，4.37-4.43(m，1H)，6.97-7.09(m，2H)，7.14-7.21(m，2H).
中間體{2-甲基-1S-[4R-(4-氟芐基)-5-氧四氫呋喃-2S-基]丙基}-氨基甲酸叔丁酯的制備將5S-(1S-疊氮基-2-甲基丙基)-3R-(4-氟芐基)二氫呋喃-2-酮(2.02g，6.93mmol，1當量)，二碳酸二叔丁酯(2.12g，9.71mmol，1.4當量)和Pd/C(10％，0.20g)的CH3OH(100ml)懸浮液在氫氣罐中攪拌16小時。用Whatman#3濾紙抽真空過濾反應混合物，然后濃縮。剩余物經(jīng)快速色譜純化(15％EtOAc的己烷)，得到{2-甲基-1S-[4R-(4-氟芐基)-5-氧四氫呋喃-2S-基]丙基}-氨基甲酸叔丁酯(1.58g，62％)為白色泡沫Rf＝0.80(5％MeOH的CH2Cl2)；IR(cm-1)3331，1766，1702；1H NMR(CDCl3)δ0.93(d，3H，J＝6.8)，0.95(d，3H，J＝6.5)，1.41(s，9H)，1.71-1.83(m，1H)，1.95-2.06(m，1H)，2.16-2.27(m，1H)，2.80(dd，1H，J＝13.5，8.6)，2.88-2.99(m，1H)，3.09(dd，1H，J＝13.5，4.4)，3.32-3.40(m，1H)，4.42-4.48(m，2H)，6.95-7.03(m，2H)，7.11-7.18(m，2H)；Anal.(C20H28FNO4)C，H，N.
中間體3-{Boc-L-ValΨ(COCH2)-L-(4-F-Phe)-L-(Tr-Gln)}-E-丙烯酸乙酯的制備在23℃將氫氧化鋰(9.62ml 1M水溶液，9.62mmol，5當量)加到{2-甲基-1S-[4R-(4-氟芐基)-5-氧四氫呋喃-2S-基]丙基}-氨基甲酸叔丁酯(0.703g，1.92mmol，1當量)的DME(25ml)溶液中。將所得懸浮液在23℃攪拌30分鐘，然后在10％KHSO4(50ml)和CH2Cl2(3×100ml)之間分配。合并有機相，Na2SO4干燥，濃縮，剩余物溶解于CH2Cl2(30ml)。依次加入粉狀4埃分子篩(0.70g)，4-甲基嗎啉N-氧化物(0.451g，3.85mmol，2當量)和四丙基過釕酸銨(0.068g，0.19mmol，0.10當量)。將所得深色反應混合物在23℃攪拌1.33小時，先后用Whatman#3和Whatman#5濾紙抽真空過濾。減壓濃縮濾液，將所得深色剩余物溶解于CH2Cl2(30ml)。依次加入粗3-(H2N-L-(Tr-Gln))-E-丙烯酸乙酯·HCl[2.30mmol，1.2當量，用上面實施例2所述制備3-{(5’-甲基異噁唑-3’-羰基)-L-Leu-L-Phe-L-Gln}-E-丙烯酸乙酯的方法制備]，4-甲基嗎啉(0.846ml，7.69mmol，4當量)，HOBt(0.390g，2.89mmol，1.5當量)和EDC(0.553g，2.88mmol，1.5當量)，并將反應混合物在23℃攪拌19小時，然后在鹽水(100ml)和CH2Cl2(3×100ml)之間分配。合并有機相，Na2SO4干燥，濃縮，剩余物經(jīng)快速色譜純化(梯度洗脫35→40％EtOAc的己烷)，得到3-{Boc-L-ValΨ(COCH2)-L-(4-F-Phe)-L-(Tr-Gln)}-E-丙烯酸乙酯(0.820g，53％)為醬色泡沫Rf＝0.50(50％EtOAc于己烷)；IR(cm-1)3307，1708，1666；1H NMR(CDCl3)δ0.67(d，3H，J＝6.8)，0.92(d，3H，J＝6.8)，1.28(t，3H，J＝7.2)，1.40(s，9H)，1.53-1.67(m，1H)，1.91-2.04(m，2H)，2.32-2.41(m，2H)，2.46-2.55(m，1H)，2.63(dd，1H，J＝12.1，5.9)，2.69-2.80(m，1H)，2.83(dd，1H，J＝12.1，8.2)，3.03(dd，1H，J＝17.7，10.0)，4.05-4.11(m，1H)，4.17(q，2H，J＝7.2)，4.40-4.50(m，1H)，4.84(d，1H，J＝8.4)，5.38(d，1H，J＝15.7)，6.01(d，1H，J＝8.4)，6.60(dd，1H，J＝15.7，5.0)，6.92-6.99(m，2H)，7.03-7.12(m，3H)，7.17-7.30(m，15H)；Anal.(C48H56FN3O7)C，H，N.
產(chǎn)物3-{(5’-甲基異噁唑-3’-羰基)-L-ValΨ(COCH2)-L-(4-F-Phe)-L-Gln}-E-丙烯酸乙酯的制備用類似上述將3-{Boc-L-Leu-L-Phe-L-(Tr-Gln)}-E-丙烯酸乙酯轉(zhuǎn)化成3-{(5’-甲基異噁唑-3’-羰基)-L-Leu-L-Phe-L-Gln}-E-丙烯酸乙酯的方法(實施例2)，將3-{Boc-L-ValΨ(COCH2)-L-(4-F-Phe)-L-(Tr-Gln)}-E-丙烯酸乙酯轉(zhuǎn)化成3-{(5’-甲基異噁唑-3’-羰基)-L-ValΨ(COCH2)-L-(4-F-Phe)-L-Gln}-E-丙烯酸乙酯mp＝220℃(分解)，Rf＝0.35(10％CH3OH的CH2Cl2)；IR(cm-1)3277，1715，1643；1H NMR(DMSO-d6)δ0.81(d，3H，J＝6.2)，0.87(d，3H，J＝6.9)，1.21(t，3H，J＝6.5)，1.59-1.67(m，2H)，2.03(s，br，2H)，2.21-2.24(m，1H)，2.46(s，3H)，2.57-2.68(m，3H)，2.80-2.95(m，2H)，4.09(q，2H，J＝6.5)，4.30-4.34(m，2H)，5.41(d，1H，J＝15.5)，6.55(s，1H)，6.61(dd，1H，J＝15.5，5.5)，6.73(s，1H)，6.99-7.16(m，5H)，8.01(d，1H，J＝7.8)，8.69(d，1H，J＝8.7)；Anal.(C29H37FN4O7)C，H，N.
實施例113-{(5’-甲基異噁唑-3’-羰基)-L-Leu-NCH3-L-Phe-L-Gln}-E-丙烯酸乙酯(化合物A-10)的制備 中間體Boc-L-Leu-NCH3-L-Phe-OCH3的制備將NCH3-L-Phe-OCH3·HCl(1.4g)溶解于CH2Cl2(50ml)，然后將其倒入1N NaOH水溶液(7ml)和NaHCO3飽和水溶液(25ml)的混合物?；旌虾蠓蛛x有機相，水相用CH2Cl2(3×50ml)。合并有機相，Na2SO4干燥并蒸發(fā)，得到游離胺為清澈無色油(1.14g，5.90mmol)。將此胺和(iPr)2NEt(1.13ml，6.49mmol)的DMF(10ml)溶液滴加到Boc-L-Leu-OH(1.50g，6.49mmol)和HOBt(0.877g，6.49mmol)的DMF(10ml)溶液中。加入DCC(1.47g，7.12mmol)。將反應混合物在0℃攪拌1小時，然后在23℃攪拌48小時。過濾混合物，除去沉淀(ppt)并蒸發(fā)濾液。剩余物溶解于CH2Cl2(200ml)，用飽和NaHCO3水溶液(40ml)洗滌，Na2SO4干燥并蒸發(fā)。剩余物經(jīng)快速色譜純化(25％EtOAc的己烷)，得到Boc-L-Leu-NCH3-L-Phe-OCH3(2.04g，85％)為白色固體mp＝126-127℃；IR(cm-1)3401，3319，1743，1708，1649；1H NMR(CDCl3)(主要異構(gòu)體)δ0.92(d，3H，J＝6.8)，0.95(d，3H，J＝6.5)，1.32-1.48(m，2H)，1.41(s，9H)，1.61-1.77(m，1H)，2.90(s，3H)，3.04(dd，1H，J＝14.5，10.5)，3.37(dd，1H，J＝14.5，5.5)，3.72(s，3H)，4.48-4.57(m，1H)，4.98-5.04(m，1H)，5.20(dd，1H，J＝10.5，5.5)，7.16-7.32(m 5H)；Anal.(C22H34N2O5)C，H，N.
中間體Boc-L-Leu-NCH3-L-Phe-OH的制備將Boc-L-Leu-NCH3-L-Phe-OCH3(0.625g，1.54mmol)溶解于CH3OH(20ml)，并冷卻到0℃。滴加NaOH(6.15ml 2N水溶液，12.3mmol)。將反應混合物在23℃攪拌3小時，然后倒入KHSO4(150ml)中。用CH2Cl2萃取混合物(3×100ml)，合并的有機相用Na2SO4干燥并蒸發(fā)，得到Boc-L-Leu-NCH3-L-Phe-OH(0.617g，定量)為白色泡沫，無需純化即可使用。
中間體3-{Boc-L-Leu-NCH3-L-Phe-L-(Tr-Gln)}-E-丙烯酸乙酯的制備用類似上述制備3-{Boc-L-Leu-L-Phe-L-(Tr-Gln)}-E-丙烯酸乙酯的方法(實施例2)由Boc-L-Leu-NCH3-L-Phe-OH和3-{H2N-L-(Tr-Gln)}-E-丙烯酸乙酯·HCl(如實施例2所述制備)制備本中間體IR(cm-1)3295，1713，1672，1649；1H NMR(CDCl3)(異構(gòu)體的混合物)δ0.65(d，J＝6.2)，0.66(d，J＝6.5)，0.84(d，J＝6.5)，0.88(d，J＝6.5)，1.02-1.22(m)，1.23-1.38(m)，1.33(s)，1.41(s)，1.55-1.82(m)，1.89-2.07(m)，2.23-2.30(m)，2.90(s)，2.94(s)，3.01(dd，J＝14.6，10.9)，3.03-3.13(m)，3.26-3.37(m)，3.27(dd，J＝14.6，3.4)，3.42-3.54(m)，4.00-4.22(m)，4.37-4.73(m)，4.82-4.89(m)，5.63-5.70(m)，5.95(dd，J＝15.9，1.2)，6.23-6.28(m)，6.66-6.75(m)，6.79-6.89(m)，7.09-7.34(m)，8.14(d，J＝8.7)；Anal.(C49H60N4O7)C，H，N.
產(chǎn)物3-{(5’-甲基異噁唑-3’-羰基)-L-Leu-NCH3-L-Phe-L-Gln}-E-丙烯酸乙酯的制備用類似上述將3-{Boc-L-Leu-L-Phe-L-(Tr-Gln)}-E-丙烯酸乙酯轉(zhuǎn)化成3-{(5’-甲基異噁唑-3’-羰基)-L-Leu-L-Phe-L-Gln}-E-丙烯酸乙酯的方法(實施例2)，將3-{Boc-L-Leu-NCH3-L-Phe-L-(Tr-Gln)}-E-丙烯酸乙酯轉(zhuǎn)化成3-{(5’-甲基異噁唑-3’-羰基)-L-Leu-NCH3-L-Phe-L-Gln}-E-丙烯酸乙酯Rf＝0.23(5％CH3OH的CH2Cl2)；IR(cm-1)3295，1713，1666，1637；1H NMR(CDCl3)(異構(gòu)體的混合物)δ0.65(d，J＝6.5)，0.71(d，J＝6.5)，0.93(d，J＝6.5)，0.94(d，J＝6.5)，1.30(t，J＝7.2)，1.24-1.73(m)，1.81-2.22(m)，2.45(s)，2.48(s)，2.86-2.93(m)，2.96(s)，2.97(s)，3.03-3.14(m)，3.21-3.31(m)，3.48(dd，J＝14.0，5.9)，4.19(q，J＝7.2)，4.20(q，J＝7.2)，4.38-4.45(m)，4.52-4.70(m)，4.74-4.81(m)，5.62-5.67(m)，5.73-5.79(m)，5.81(dd，J＝15.6，1.6)，5.99(dd，J＝15.6，1.6)，6.03-6.09(m)，6.35(s)，6.39(s)，6.40-6.45(m)，6.77-6.94(m)，7.42(d，J＝7.2)，8.13(d，J＝7.8).
實施例12
3-{(5’-甲基異噁唑-3’-羰基)-L-Val-O-L-(4-F-Phe)-L-Gln}-E-丙烯酸乙酯(化合物C-1)的制備 中間體(S)-1-羥基-3-(4-氟苯基)丙酸烯丙酯的制備在一個裝有溫度計和回流冷凝器的燒瓶中將(S)-1-羥基-3-(4-氟苯基)丙酸烯甲酯(用Hoffman等人所述方法制備，《四面體》(Tetrahedron)，483007(1992))(0.99g，5.0mmol)溶解于烯丙醇(50ml)。加入四異丙醇鈦(1.53ml，5.0mmol)，并將反應物在90℃加熱3.5小時。將反應物冷卻至室溫，倒在250ml EtOAc/飽和NH4Cl溶液的1∶1混合物中。分離有機相，用水(100ml)和鹽水(100ml)洗滌，MgSO4干燥，除去溶劑。剩余物經(jīng)快速色譜純化，5-10％EtOAc/己烷梯度洗脫，得到(S)-1-羥基-3-(4-氟苯基)丙酸烯丙酯(0.77g，68％)為清澈液體Rf＝0.21(15％EtOAc/己烷)；IR(凈)3470(寬峰)，1734，1510，1221cm-1；1H NMR(DMSO-d6)δ1.24-1.27(m，1H)，2.92-2.99(m，1H)，3.09-3.15(m，1H)，4.43-4.47(m，1H)，4.65(d，2H，J＝5.9)，5.28-5.37(m，2H)，5.86-5.95(m，1H)，6.95-7.01(m，2H)，7.16-7.21(m，2H).
中間體Boc-L-Val-O-L-(4-F-Phe)-OCH2CH＝CH2的制備將(S)-1-羥基-3-(4-氟苯基)丙酸烯丙酯(0.070g，0.31mmol)溶解于CH2Cl2(20ml)。先后加入Boc-L-Val-OH(0.068g，0.31mmol)，DMAP(0.004g，0.03mmol)和DCC(0.067g，0.33mmol)。將反應物在室溫攪拌過夜，然后真空除去溶劑。剩余物經(jīng)快速色譜純化，3-5％EtOAc/己烷梯度洗脫，得到Boc-L-Val-O-L-(4-F-Phe)-OCH2CH＝CH2(0.12g，90％)為清澈油Rf＝0.18(10％EtOAc/己烷)；IR(凈)1752，1717 1510cm-1；1H NMR(DMSO-d6)δ0.80-0.85(m，6H)，1.36(s，9H)，1.97-2.04(m，1H)，3.07-3.15(m，2H)，3.89-3.94(m，1H)，4.51-4.55(m，2H)，5.17-5.30(m，3H)，5.75-5.84(m，1H)，7.06-7.17(m，3H)，7.27-7.32(m，2H)；Anal.(C22H30NO6F)C，H，N.
中間體3-{Boc-L-Val-O-L-(4-F-Phe)-L-(Tr-Gln)}-E-丙烯酸乙酯的制備將Boc-L-Val-O-L-(4-F-Phe)-OCH2CH＝CH2(0.65g，1.52mmol)溶解于THF(15ml)。加入四(三苯膦)鈀(O)(0.035g，0.03mmol)，然后在23℃攪拌5分鐘。滴加嗎啉(0.16ml，1.83mmol)，然后在室溫攪拌2小時。真空除去溶劑，將剩余物溶于50ml己烷/Et2O的4∶1混合物。用飽和NaHCO3溶液(50ml)萃取，然后倒掉有機相。水相用固體KHSO4酸化至pH＝1-2，然后再用EtOAc(50ml)萃取。有機相用鹽水(50ml)洗滌，MgSO4干燥及濃縮，得到0.50g(86％)游離酸為清澈油。將所得油溶解于DMF(6ml)，先后加入二異丙基乙胺(0.43ml，2.50mmol)和3-{H2N-L-(Tr-Gln)}-E-丙烯酸乙酯·HCl(如上面實施例2所述制備，0.55g，1.25mmol)。將反應物冷卻到0℃，加入HATU(0.48g，1.25mmol)，允許反應升至室溫。真空除去DMF，剩余物溶解于EtOAc(30ml)。依次用10％HCl溶液(25ml)，飽和NaHCO3溶液(25ml)，H2O(25ml)和鹽水(25ml)洗滌有機相，MgSO4干燥，過濾并濃縮。剩余物經(jīng)快速柱色譜純化(梯度洗脫0→0.1％MeOH/CH2Cl2)，得到0.40g(39％)3-{Boc-L-Val-O-L-(4-F-Phe)-L-(Tr-Gln)}-E-丙烯酸乙酯為白色非晶狀固體Rf＝0.25(3％MeOH/CHCl3)；IR(KBr)1691，1512，1159cm-1；1H NMR(DMSO-d6)δ0.78-0.83(m，6H)，1.20(t，3H，J＝7.0)，1.35(s，9H)，1.58-1.66(m，2H)，1.96-2.02(m，1H)，2.19-2.33(m，2H)，2.99-3.02(m，2H)，3.82-3.87(m，1H)，4.09(q，2H，J＝7.0)，4.33-4.37(m，1H)，5.03-5.08(m，1H)，5.60(d，1H，J＝15.8)，6.67(dd，1H，J＝15.8，5.5)，7.02-7.08(m，2H)，7.14-7.28(m，18H)，8.12(d，1H，J＝8.1)，8.59(s，1H)；Anal.(C47H54N3O8F)C，H，N.
產(chǎn)物3-{(5’-甲基異噁唑-3’-羰基)-L-Val-O-L-(4-F-Phe)-L-Gln}-E-丙烯酸乙酯的制備用類似上述將3-{Boc-L-Leu-L-Phe-L-(Tr-Gln)}-E-丙烯酸乙酯轉(zhuǎn)化成3-{(5’-甲基異噁唑-3’-羰基)-L-Leu-L-Phe-L-Gln}-E-丙烯酸乙酯的方法(實施例2)，將3-{Boc-L-Val-O-L-(4-F-Phe)-L-(Tr-Gln)}-E-丙烯酸乙酯轉(zhuǎn)化成3-{(5’-甲基異噁唑-3’-羰基)-L-Val-O-L-(4-F-Phe)-L-Gln}-E-丙烯酸乙酯Rf＝0.05(3％MeOH/CHCl3)；IR(KBr)1746，1719，1661，1549cm-1；1H NMR(DMSO-d6)δ0.87(d，3H，J＝6.6)，0.92(d，3H，J＝6.6)，1.20(t，3H，J＝7.0)，1.61-1.74(m，2H)，1.96-2.01(m，2H)，2.15-2.22(m，1H)，2.46(s，3H)，3.00-3.03(m，2H)，4.10(q，2H，J＝7.0)，4.27-4.32(m，1H)，4.33-4.38(m，1H)，5.06-5.11(m，1H)，5.63(d，1H，J＝15.6)，6.54(s，1H)，6.68(dd，1H，J＝15.6，5.5)，6.78(s，br，1H)，6.95-7.00(m，2H)，7.20-7.24(m，3H)，8.06(d，1H，J＝8.1)，8.87(d，1H，J＝7.7)；Anal.(C28H35N4O8F)C，H，N.
實施例133-{(5’-甲基異噁唑-3’-羰基)-L-(2-萘)-NCH3-L-(4-F-Phe)-L-Gln}-E-丙烯酸乙酯(化合物A-11)的制備 中間體3-{Boc-NCH3-L-(4-F-Phe)-L-(Tr-Gln)}-E-丙烯酸乙酯的制備將Boc-(4-F-Phe)-OH(4.46g，15.75mmol，1當量)和CH3I(7.84ml，126mmol，8當量)溶解于THF(100ml)并冷卻到0℃。在溶液中加入NaH(1.89g，47.25mmol，3當量)，同時劇烈攪拌。在23℃攪拌24小時后小心地在混合物中加入EtOAc(3ml)和H2O(3ml)，然后將所得懸浮液蒸發(fā)至干。將其溶解于H2O(100ml)，用Et2O洗滌(2×100ml)。水相用10％檸檬酸溶液酸化至pH＝3，然后用EtOAc萃取(2×100ml)。合并的有機萃取液依次用半飽和NaHCO3(150ml)，5％Na2S2O3(150ml)和H2O(150ml)洗滌，Na2SO4干燥并濃縮后得到Boc-NCH3-(4-F-Phe)-OH(4.37g，80％)，為淺黃色泡沫，無需進一步純化即可使用。1HNMR(CDCl3，異構(gòu)體的混合物)δ1.35(s)，1.40(s)，2.69(s)，2.75(s)，2.96-3.13(m)，3.23-3.33(m)，4.54-4.58(m)，4.76-4.81(m)，6.96-7.01(m)，7.15-7.17(m).
在23℃將HCl的1，4-二噁烷溶液(4.0M，15ml)加到3-{Boc-L-(Tr-Gln)}-E-丙烯酸乙酯(如上面實施例2所述制備，3.57g，6.73mmol，1當量)的相同溶劑的溶液(15ml)中。2小時后減壓除去揮發(fā)性物質(zhì)。剩余物溶解于CH2Cl2(50ml)，然后依次加入上步制備的Boc-NCH3-(4-F-Phe)-OH(2.0g，6.73mmol，1.0當量)，HOBt(1.23g，9.09mmol，1.5當量)，4-甲基嗎啉(2.0ml，18.19mmol，3當量)和EDC(1.74g，9.09mmol，1.5當量)。將反應混合物在23℃攪拌過夜，然后在水(100ml)和CH2Cl2(2×100ml)之間分配。合并的有機相用Na2SO4干燥，濃縮，剩余物經(jīng)快速柱色譜純化(30％EtOAc的己烷)，得到3-{Boc-NCH3-L-(4-F-Phe)-L-(Tr-Gln)}-E-丙烯酸乙酯(4.07g，84％)為白色泡沫IR(cm-1)1666，1510，1167；1H NMR(CDCl3，異構(gòu)體的混合物)δ1.29(t，J＝7.2)，1.37(s)，1.65-1.75(m)，1.95-2.06(m)，2.29-2.33(m)，2.66(s)，2.91-2.99(m)，3.22-3.29(m)，4.18(q，J＝7.2)，4.52-4.58(m)，5.68(d，J＝15.9)，6.45(d，J＝8.4)，6.74(dd，J＝15.6，5.4)，6.91-6.99(m)，7.11-7.33(m)；Anal.(C43H48FN3O6)C，H，N.
中間體3-{Boc-L-(2-萘)-NCH3-L-(4-F-Phe)-L-(Tr-Gln)}-E-丙烯酸乙酯的制備在23℃將HCl的1，4-二噁烷溶液(4.0M，3ml)加到3-{Boc-NCH3-L-(4-F-Phe)-L-(Tr-Gln)}-E-丙烯酸乙酯(0.388g，0.54mmol，1當量)的相同溶劑的溶液(3ml)中。2小時后減壓除去揮發(fā)性物質(zhì)。剩余物溶解于DMF(10ml)，冷卻到0℃。然后依次加入DIEA(0.188ml，1.08mmol，2當量)，Boc-L-(2-萘)-OH(0.170g，0.54mmol，1.0當量)和HATU(0.205g，0.54mmol，1當量)。將反應混合物在23℃攪拌1小時。減壓除去揮發(fā)性物質(zhì)，剩余物溶解于EtOAc(50ml)，并先后用0.5N Hcl(50ml)，飽和NaHCO3(50ml)和鹽水(50ml)洗滌。有機相用Na2SO4干燥，濃縮，剩余物經(jīng)快速柱色譜純化(40％EtOAc的己烷)，得到3-{Boc-L-(2-萘)-NCH3-L-(4-F-Phe)-L-(Tr-Gln)}-E-丙烯酸乙酯(0.437g，88％)為白色泡沫IR(cm-1)1656，1509，1162；1H NMR(CDCl3，異構(gòu)體的混合物)δ0.88(t，J＝7.2)，1.27(s)，1.30(s)，1.48-1.58(m)，1.64-1.67(m)，1.97-2.11(m)，2.23-2.28(m)，2.42-2.50(m)，2.62-2.69(m)，2.80(s)，2.90(s)，3.00-3.07(m)，3.15-3.20(m)，3.25-3.32(m)，4.18(q，J＝7.2)，4.42-4.46(m)，4.53-4.56(m)，4.61-4.66(m)，4.72-4.82(m)，5.94-5.00(m)，5.63(d，J＝15.6)，6.12(d，J＝15.6)，6.60(dd，J＝15.6，5.4)，6.75-6.89(m)，6.70-7.08(m)，7.19-7.30(m)，7.41-7.50(m)，7.70-7.82(m)，8.80(d，J＝8.4)；Anal.(C56H59FN4O7)C，H，N.
產(chǎn)物3-{(5’-甲基異噁唑-3’-羰基)-L-(2-萘)-NCH3-L-(4-F-Phe)-L-Gln}-E-丙烯酸乙酯的制備用類似上述將3-{Boc-L-Leu-L-Phe-L-(Tr-Gln)}-E-丙烯酸乙酯轉(zhuǎn)化成3-{(5’-甲基異噁唑-3’-羰基)-L-Leu-L-Phe-L-Gln}-E-丙烯酸乙酯的方法(實施例2)，將3-{Boc-L-(2-萘)-NCH3-L-(4-F-Phe)-L-(Tr-Gln)}-E-丙烯酸乙酯轉(zhuǎn)化成3-{(5’-甲基異噁唑-3’-羰基)-L-(2-萘)-NCH3-L-(4-F-Phe)-L-Gln}-E-丙烯酸乙酯IR(cm-1)3296，1654，1510；1H NMR(DMSO-d6，異構(gòu)體的混合物)δ1.17-1.24(m)，1.62-1.78(m)，2.04-2.15(m)，2.38(s)，2.42(s)，2.71-2.79(m)，2.84(s)，2.87-2.92(m)，3.03(s)，3.15(d，J＝7.5)，3.98-4.06(m)，4.08-4.12(m)，4.38-4.42(m)，4.94(m)，5.03-5.07(m)，5.09-5.18(m)，5.66-5.82(m)，6.42(s)，6.43(s)，6.66-6.81(m)，6.88-6.94(m)，7.01-7.06(m)，7.13-7.17(m)，7.24-7.34(m)，7.43-7.46(m)，7.56(s)，7.76-7.84(m)，8.08(d，J＝7.8)，8.60(d，J＝8.4)，9.01(d，J＝7.2)；Anal.(C37H40FN5O7·0.75H2O)C，H，N.
實施例143-{(5’-甲基異噁唑-3’-羰基)-L-His-NCH3-L-(4-F-Phe)-L-Gln}-E-丙烯酸乙酯(化合物A-9)的制備 用類似上述制備3-{(5’-甲基異噁唑-3’-羰基)-L-(2-萘)-NCH3-L-(4-F-Phe)-L-Gln}-E-丙烯酸乙酯的方法(實施例13)(用Boc-L-(Tr-His)-OH代替Boc-L-(2-萘)-OH)，將3-{Boc-NCH3-L-(4-F-Phe)-L-(Tr-Gln)}-E-丙烯酸乙酯(按上述實施例13制備)轉(zhuǎn)化成3-{(5’-甲基異噁唑-3’-羰基)-L-His-NCH3-L-(4-F-Phe)-L-Gln}-E-丙烯酸乙酯
IR(cm-1)3302，1665，1202；1H NMR(DMSO-d6，異構(gòu)體的混合物)δ1.21(t，J＝7.2)，1.70-1.78(m)，2.05-2.09(m)，2.41(s)，2.44(s)，2.69-3.26(m)，4.11(q，J＝7.2)，4.38-4.53(m)，5.07-5.19(m)，6.51-5.84(m)，6.44(s)，6.48(s)，6.63-6.86(m)，6.89-7.01(m)，7.09-7.19(m)，7.23-7.42(m)，8.02(d，J＝8.7)，8.15(d，J＝8.1)，8.59(d，J＝8.7)，8.94(s)，9.04(s)，9.14(d，J＝6.9)；Anal.(C30H36FN7O7·TFA·H2O)C，H，N.
實施例153-{(5’-甲基異噁唑-3’-羰基)-L-Leu-NCH3-L-(4-F-Phe)-L-Gln}-E-丙烯酸乙酯(化合物A-12)的制備 用類似上述制備3-{(5’-甲基異噁唑-3’-羰基)-L-(2-萘)-NCH3-L-(4-F-Phe)-L-Gln}-E-丙烯酸乙酯的方法(實施例13)(用Boc-L-Leu-OH代替Boc-L-(2-萘)-OH)，將3-{Boc-NCH3-L-(4-F-Phe)-L-(Tr-Gln)}-E-丙烯酸乙酯(按上述實施例13制備)轉(zhuǎn)化成3-{(5’-甲基異噁唑-3’-羰基)-L-Leu-NCH3-L-(4-F-Phe)-L-Gln}-E-丙烯酸乙酯IR(cm-1)3325，1663，1171；1H NMR(DMSO-d6，異構(gòu)體的混合物)δ0.64-0.67(m)，0.86-0.88(m)，1.17-1.23(m)，1.32-1.40(m)，1.59-1.75(m)，1.98-2.07(m)，2.42(s)，2.45(s)，2.08(s)，2.86-2.93(m)，2.99(s)，3.12-3.20(m)，4.05-4.15(m)，4.41-4.50(m)，4.82-5.07(m)，5.62(d，J＝15.9)，5.86(d，J＝15.9)，6.51(s)，6.53(s)，6.68-6.73(m)，6.93-6.99(m)，7.09-7.21(m)，7.26-7.31(m)，8.03(d，J＝7.8)，8.08(d，J＝7.8)，8.41(d，J＝8.1)，8.94(d，J＝7.2)；Anal.(C30H40FN5O7·1.25CH2Cl2)C，H，N.
實施例163-{(5’-甲基異噁唑-3’-羰基)-L-(1-萘)-NCH3-L-(4-F-Phe)-L-Gln}-E-丙烯酸乙酯(化合物A-13)的制備 用類似上述制備3-{(5’-甲基異噁唑-3’-羰基)-L-(2-萘)-NCH3-L-(4-F-Phe)-L-Gln}-E-丙烯酸乙酯的方法(實施例13)(用Boc-L-(1-萘)-OH代替Boc-L-(2-萘)-OH)，將3-{Boc-NCH3-L-(4-F-Phe)-L-(Tr-Gln)}-E-丙烯酸乙酯(按上述實施例13制備)轉(zhuǎn)化成3-{(5’-甲基異噁唑-3’-羰基)-L-(1-萘)-NCH3-L-(4-F-Phe)-L-Gln}-E-丙烯酸乙酯IR(cm-1)3308，1659，1169；1H NMR(DMSO-d6，異構(gòu)體的混合物)δ1.16-1.23(m)，1.61-1.78(m)，1.98-2.02(m)，2.07-2.12(m)，2.41(s)，2.43(s)，2.77(s)，2.78(s)，2.84-2.87(m)，2.93-3.03(m)，3.08-3.14(m)，3.31-3.38(m)，4.00-4.15(m)，4.27-4.32(m)，4.40-4.46(m)，4.58-4.64(m)，5.07-5.17(m)，5.57-5.73(m)，6.45(s)，6.57-6.61(m)，6.71-6.88(m)，6.89-6.91(m)，7.11-7.19(m)，7.31-7.38(m)，7.50-7.58(m)，7.73-7.78(m)，7.83-7.94(m)，8.08(d，J＝8.1)，8.13(d，J＝8.7)，8.62(d，J＝8.1)，9.14(d，J＝8.1)；Anal.(C37H40FN5O7)C，H，N.
實施例173-{(5’-甲基異噁唑-3’-羰基)-L-ValΨ(COCH2)-L-(4-F-Phe)-L-((S)-Pyrrol-Ala)}-E-丙烯酸乙酯(化合物B-2)的制備 中間體3-{(5’-甲基異噁唑-3’-羰基)-L-ValΨ(COCH2)-L-(4-F-Phe)-L-((N-2，4-二甲氧基芐基)-(S)-Pyrrol-Ala)}-E-丙烯酸乙酯的制備用類似上述制備3-{Boc-L-(4-Me-Phe)-L-(Tr-Gln)}-E-丙烯酸乙酯的方法(實施例4)，由{2-甲基-1S-[4R-(4-氟芐基)-5-氧四氫呋喃-2S-基]丙基}-氨基甲酸叔丁酯(按實施例10所述制備)和3-{Boc-L-Val-L-(4-F-Phe)-L-[(N-2，4-二甲氧基芐基)-(S)-Pyrrol-Ala]}-E-丙烯酸乙酯(按實施例6所述制備)制備本中間體Rf＝0.24(60％EtOAc于己烷)；IR(cm-1)3293，1717，1668；1H NMR(CDCl3)δ0.82(d，3H，J＝6.8)，1.01(d，3H，J＝6.8)，1.30(t，3H，J＝7.2)，1.51-1.65(m，2H)，1.84-1.96(m，1H)，2.16-2.37(m，2H)，2.47(s，3H)，2.49-2.55(m，3H)，2.85-3.01(m，2H)，3.12-3.25(m，3H)，3.77(s，3H)，3.78(s，3H)，4.18(q，2H，J＝7.2)，4.31-4.49(m，3H)，4.65-4.70(m，1H)，5.53(dd，1H，J＝15.7，1.4)，6.39-6.44(m，3H)，6.63(dd，1H，J＝15.7，5.4)，6.93-7.01(m，2H)，7.05-7.10(m，1H)，7.12-7.18(m，2H)，7.24(d，1H，J＝8.7)，7.47(d，1H，J＝6.5)；Anal.(C40H49FN4O9·0.5H2O)C，H，N.
產(chǎn)物3-{(5’-甲基異噁唑-3’-羰基)-L-ValΨ(COCH2)-L-(4-F-Phe)-L-((S)-Pyrrol-Ala)}-E-丙烯酸乙酯的制備用類似上述將3-{Boc-L-Val-L-(4-F-Phe)-L-[(N-2，4-二甲氧基芐基)-(S)-Pyrrol-Ala]}-E-丙烯酸乙酯轉(zhuǎn)化成3-{Boc-L-Val-L-(4-F-Phe)-L-((S)-Pyrrol-Ala)}-E-丙烯酸乙酯的方法(實施例6)，將3-{(5’-甲基異噁唑-3’-羰基)-L-ValΨ(COCH2)-L-(4-F-Phe)-L-((N-2，4-二甲氧基芐基)-(S)-Pyrrol-Ala)}-E-丙烯酸乙酯轉(zhuǎn)化成3-{(5’-甲基異噁唑-3’-羰基)-L-ValΨ(COCH2)-L-(4-F-Phe)-L-((S)-Pyrrol-Ala)}-E-丙烯酸乙酯mp＝178-181℃；Rf＝0.49(10％CH3OH in CHCl3)；IR(cm-1)3295，1678br；1H NMR(CDCl3)δ0.85(d，3H，J＝6.8)，1.03(d，3H，J＝6.5)，1.30(t，3H，J＝7.2)，1.51-1.62(m，1H)，1.71-1.93(m，2H)，2.27-2.40(m，2H)，2.47(s，3H)，2.51-2.75(m，3H)，2.82-2.98(m，2H)，3.11-3.24(m，1H)，3.26-3.42(m，2H)，4.18(q，2H，J＝7.2)，4.41-4.53(m，1H)，4.63-4.72(m，1H)，5.50(d，1H，J＝15.4)，5.88(s，1H)，6.39(s，1H)，6.63(dd，1H，J＝15.4，5.3)，6.92-7.03(m，2H)，7.08-7.31(m，4H)；Anal.(C31H39FN4O7)C，H，N.
實施例183-{(5’-甲基異噁唑-3’-羰基)-L-Val-O-L-(4-F-Phe)-L-((S)-Pyrrol-Ala)}-E-丙烯酸乙酯(化合物C-2)的制備 中間體(5’-甲基異噁唑-3’-羰基)-L-Val-O-L-(4-F-Phe)-OCH2CH＝CH2的制備將Boc-L-Val-O-L-(4-F-Phe)-OCH2CH＝CH2(按上述實施例12制備，0.91g，2.15mmol)溶解于1，4-二噁烷(28ml)，然后加入HCl的1，4-二噁烷溶液(4.0M，14ml)。將反應物在室溫攪拌14小時。蒸除溶劑，將剩余物溶于EtOAc(50ml)。有機相先后用飽和NaHCO3溶液(50ml)和鹽水(50ml)洗滌，MgSO4干燥并除去溶劑，得到0.66g(定量)清澈油。
將該油溶解于CH2Cl2(20ml)，加入吡啶(0.17ml，2.08mmol)，然后將反應物冷卻到0℃。加入5-甲基異噁唑-3-酰氯(0.33g，2.27mmol)的CH2Cl2(2ml)溶液，然后將反應物升至室溫1小時。真空除去溶劑，剩余物經(jīng)快速色譜純化，5→10％EtOAc/己烷梯度洗脫，得到(5’-甲基異噁唑-3’-羰基)-L-Val-O-L-(4-F-Phe)-OCH2CH＝CH2(0.70g，82％)為白色晶狀固體Rf＝0.20(30％EtOAc/己烷)；IR(KBr)1745，1661，1553，1186cm-1；1H NMR(DMSO-d6)δ0.85-0.92(m，6H)，2.14-2.21(m，1H)，2.46(s，3H)，3.05-3.19(m，2H)，4.32-4.37(m，1H)，4.53-4.60(m，2H)，5.16-5.28(m，3H)，5.74-5.85(m，1H)，6.56(s，1H)，7.01-7.07(m，2H)，7.26-7.29(m，2H)，8.76(d，1H，J＝8.1)；Anal.(C22H25N2O6F)C，H，N.
中間體3-{(5’-甲基異噁唑-3’-羰基)-L-Val-O-L-(4-F-Phe)-L-((N-2，4-二甲氧基芐基)-(S)-Pyrrol-Ala)}-E-丙烯酸乙酯的制備將(5’-甲基異噁唑-3’-羰基)-L-Val-O-L-(4-F-Phe)-OCH2CH＝CH2(0.67g，1.55mmol)溶解于THF(15ml)。加入四(三苯膦)鈀(O)(0.036g，0.03mmol)，然后將反應混合物攪拌5分鐘。滴加嗎啉(0.16ml，1.86mmol)，并在室溫攪拌6小時。真空除去溶劑，剩余物溶于50ml Et2O。用飽和NaHCO3溶液(50ml)萃取兩次，然后倒掉有機相。水相用10％HCl酸化至pH＝1-2，然后再用EtOAc(40ml)萃取兩次。有機相用鹽水(50ml)洗滌，MgSO4干燥及濃縮，得到0.57g(95％)油，放置后變成晶體。
將一部分產(chǎn)物(0.19g，0.50mmol)溶解于DMF(3ml)。先后加入二異丙基乙胺(0.34ml，1.0mmol)和3-{H2N-L-((N-2，4-二甲氧基芐基)-(S)-Pyrrol-Ala)}-E-丙烯酸乙酯·HCl(如上面實施例4和6所述制備，0.19g，0.50mmol)。將反應物冷卻到0℃，加入HATU(0.19g，0.50mmol)，允許反應升至室溫。真空除去DMF，剩余物溶解于EtOAc(30ml)。依次用10％HCl溶液(25ml)，飽和NaHCO3溶液(25ml)，H2O(25ml)和鹽水(25ml)洗滌有機相，MgSO4干燥溶劑，過濾。剩余物經(jīng)快速柱色譜純化(梯度洗脫0→1.0％MeOH/CH2Cl2)，得到3-{(5’-甲基異噁唑-3’-羰基)-L-Val-O-L-(4-F-Phe)-L-((N-2，4-二甲氧基芐基)-(S)-Pyrrol-Ala)}-E-丙烯酸乙酯(0.27g，72％)為白色非晶狀固體Rf＝0.18(3％MeOH/CHCl3)；IR(KBr)1671，1547，1510，1209cm-1；1H NMR(DMSO-d6)δ0.88(d，3H，J＝7.0)，0.93(d，3H，J＝7.0)，1.20(t，3H，J＝7.0)，1.41-1.58(m，2H)，1.79-1.98(m，2H)，2.07-2.24(m，2H)，2.44(s，3H)，3.01-3.13(m，4H)，3.73(s，3H)，3.76(s，3H)，4.09(q，2H，J＝7.0)，4.24(s，2H)，4.30(t，1H，J＝7.4)，4.45-4.48(m，1H)，5.12(t，1H，J＝6.3)，5.59(d，1H，J＝15.8)，6.45(dd，1H，J＝8.5，2.2)，6.54-6.56(m，2H)，6.73(dd，1H，J＝15.5，4.8)，6.89-6.95(m，3H)，7.20(d，1H，J＝8.5)，7.22(d，1H，J＝8.5)，8.08(d，1H，J＝8.8)，8.89(d，1H，J＝7.4).
產(chǎn)物3-{(5’-甲基異噁唑-3’-羰基)-L-Val-O-L-(4-F-Phe)-L-((S)-Pyrrol-Ala)}-E-丙烯酸乙酯的制備將3-{(5’-甲基異噁唑-3’-羰基)-L-Val-O-L-(4-F-Phe)-L-((N-2，4-二甲氧基芐基)-(S)-Pyrrol-Ala)}-E-丙烯酸乙酯(0.25g，0.33mmol)溶解于CHCl3(6ml)。加兩滴水，然后加入DDQ(0.10g，0.43mmol)。將反應物在50-55℃加熱8小時。冷卻的同時將反應混合物倒入EtOAc(30ml)。有機相先后用30ml NaHCO3/1N NaOH(2∶1)溶液和鹽水(30ml)洗滌，MgSO4干燥，濃縮。剩余物經(jīng)快速柱色譜純化(梯度洗脫0→2％MeOH/CH2Cl2)，得到3-{(5’-甲基異噁唑-3’-羰基)-L-Val-O-L-(4-F-Phe)-L-((S)-Pyrrol-Ala)}-E-丙烯酸乙酯(0.18g，90％)為白色非晶狀固體Rf＝0.09(3％MeOH/CHCl3)；IR(KBr)1680，1549cm-1；1H NMR(DMSO-d6)δ0.91(d，3H，J＝6.6)，0.95(d，3H，J＝6.6)，1.20(t，3H，J＝7.0)，1.36-1.44(m，1H)，1.56-1.61(m，1H)，1.74-1.82(m，1H)，1.94-1.99(m，2H)，2.18-2.25(m，1H)，2.45(s，3H)，2.98-3.18(m，4H)，4.09(q，2H，J＝7.0)，4.28-4.32(m，1H)，4.43-4.46(m，1H)，5.12(m，1H)，5.58(d，1H，J＝15.8)，6.56(s，1H)，6.72(dd，1H，J＝15.8，4.8)，6.91-6.97(m，2H)，7.21(d，1H，J＝5.9)，7.23(d，1H，J＝5.9)，7.59(s，1H)，8.06(d，1H，J＝8.8)，8.92(d，1H，J＝7.4)；Anal.(C30H37N4O8F)C，H，N.
實施例192-{(5’-甲基異噁唑-3’-羰基)-L-ValΨ(COCH2)-L-(4-F-Phe)-L-((S)-Pyrrol-Ala)}-E-(α-乙烯基-γ-丁內(nèi)酯)(化合物B-3)的制備 中間體Boc-L-{(N-2，4-二甲氧基芐基)-(S)-Pyrrol-Ala}-E-(α-乙烯基-γ-丁內(nèi)酯)的制備用上面實施例6所述制備3-{Boc-L-[(N-2，4-二甲氧基芐基)-(S)-Pyrrol-Ala]}-E-丙烯酸乙酯的方法將(1S，3’S)-{2-(1’-(2”，4”-二甲氧基芐基)-2’-氧-吡咯烷-3’-基)-1-羥甲基乙基}-氨基甲酸叔丁酯(0.360g，0.881mmol，1當量)氧化成相應的醛。將該醛與3-(三苯基-λ5-phoshanylidene)-二氫呋喃-2-酮(用類似Baldwin等人所述方法制備，《有機化學雜志》(J.Org.Chem.)，361441(1971))在乙二醇乙醚(10ml)和DMF(2ml)的混合物中混合。將反應混合物在100℃油浴中加熱1.5小時，然后冷卻到23℃過夜。用MTBE(200ml)稀釋，用水(20ml)和鹽水(20ml)洗滌，Na2SO4干燥并蒸發(fā)。剩余物經(jīng)快速柱色譜純化(先用2.5％CH3OH/CH2Cl2，再用67％EtOAc/CH2Cl2洗脫)，得到Boc-L-{(N-2，4-二甲氧基芐基)-(S)-Pyrrol-Ala}-E-(α-乙烯基-γ-丁內(nèi)酯)(0.250g，60％)為油Rf＝0.50(67％EtOAc的CH2Cl2)；IR(cm-1)3307，1754，1678；1H NMR(CDCl3)δ1.42(s，9H)，1.46-1.68(m，2H)，2.02-2.13(m，1H)，2.18-2.30(m，1H)，2.44-2.56(m，1H)，2.91-3.04(m，1H)，3.15-3.27(m，3H)，3.80(s，6H)，4.34-4.43(m，5H)，5.63-5.69(m，1H)，6.42-6.47(m，2H)，6.48-6.53(m，1H)，7.09-7.13(m，1H).
產(chǎn)物2-{(5’-甲基異噁唑-3’-羰基)-L-ValΨ(COCH2)-L-(4-F-Phe)-L-((S)-Pyrrol-Ala)}-E-(α-乙烯基-γ-丁內(nèi)酯)的制備用類似上述制備3-{(5’-甲基異噁唑-3’-羰基)-L-ValΨ(COCH2)-L-(4-F-Phe)-L-((S)-Pyrrol-Ala)}-E-丙烯酸乙酯的方法(實施例17)將Boc-L-{(N-2，4-二甲氧基芐基)-(S)-Pyrrol-Ala}-E-(α-乙烯基-γ-丁內(nèi)酯)轉(zhuǎn)化成2-{(5’-甲基異噁唑-3’-羰基)-L-ValΨ(COCH2)-L-(4-F-Phe)-L-((S)-Pyrrol-Ala)}-E-(α-乙烯基-γ-丁內(nèi)酯)Rf＝0.28(5％CH3OH的CH2Cl2)；IR(cm-1)3378br，1749，1678br；1H NMR(CDCl3)δ0.84(d，3H，J＝6.8)，1.03(d，3H，J＝6.8)，1.45-1.55(m，1H)，1.75-2.00(m，2H)，2.25-2.43(m，2H)，2.46-2.59(m，2H)，2.48(s，3H)，2.63-2.72(m，1H)，2.77-2.90(m，3H)，3.06-3.26(m，2H)，3.29-3.44(m，2H)，4.32-4.46(m，3H)，4.65-4.71(m，1H)，5.72(s，1H)，6.14-6.20(m，1H)，6.40(s，1H)，6.94-7.02(m，2H)，7.03-7.11(m，2H)，7.24(d，1H，J＝9.0)，7.60(d，1H，J＝6.2)；Anal.(C31H37FN4O7)C，H，N.
實施例203-{(5’-甲基異噁唑-3’-羰基)-L-ValΨ(COCH2)-L-(4-F-Phe)-L-((S)-Piper-Ala)}-E-丙烯酸乙酯(化合物B-4)的制備 用類似上述制備3-{(5’-甲基異噁唑-3’-羰基)-L-Val-L-(4-F-Phe)-L-((S)-Piper-Ala)}-E-丙烯酸乙酯(實施例9)和3-{(5’-甲基異噁唑-3’-羰基)-L-ValΨ(COCH2)-L-(4-F-Phe)-L-Gln}-E-丙烯酸乙酯的方法(實施例10)制備標題化合物mp＝161-162℃；Rf＝0.30(5％CH3OH的CH2Cl2)；IR(cm-1)3295，1713，1649；1H NMR(CDCl3)δ0.84(d，3H，J＝6.8)，1.03(d，3H，J＝6.8)，1.30(t，3H，J＝7.2)，1.43-1.55(m，2H)，1.77-1.90(m，2H)，1.95-2.12(m，2H)，2.27-2.38(m，1H)，2.44-2.58(m，2H)，2.48(s，3H)，2.66-2.76(m，1H)，2.80-2.93(m，2H)，3.12-3.42(m，3H)，4.18(q，2H，J＝7.2)，4.39-4.49(m，1H)，4.65-4.72(m，1H)，5.50(dd，1H，J＝15.9，1.6)，5.80(s，1H)，6.38-6.41(m，1H)，6.62(dd，1H，J＝15.9，5.3)，6.94-7.02(m，2H)，7.08-7.28(m，4H).
實施例21至30用類似上述制備式I-A的合成方法分別在實施例21-30中制備下列化合物(A-14)至(A-23)

實施例313-(Cbz-L-Leu-L-Phe-L-Gln)-E-丙烯酸乙酯(對比化合物#2)的制備 (對比化合物#2)中間體[Boc-L-(Tr-Gln)]-N(OMe)Me的制備在0℃將氯甲酸異丁酯(4.77ml，36.8mmol，1.0當量)加到N-α-Boc-γ-三苯甲基-L-谷氨酸鹽(18.7g，36.7mmol，1當量)和4-甲基嗎啉(8.08ml，73.5mmol，2.0當量)的CH2Cl2(250ml)溶液中。將反應混合物在0℃攪拌20分鐘，然后加入N，O-二甲基羥胺鹽酸鹽(3.60g，36.7mmol，1.0當量)。將所得溶液在0℃攪拌20分鐘，在23℃攪拌2小時，然后在水(150ml)和CH2Cl2(2×150ml)之間分配。合并的有機相用Na2SO4干燥并濃縮。剩余物經(jīng)快速柱色譜純化(梯度洗脫40→20％己烷的EtOAc)，得到[Boc-L-(Tr-Gln)]-N(OMe)Me(16.1g，82％)為白色泡沫IR(cm-1)3411，3329，3062，1701，1659；1H NMR(CDCl3)δ1.42(s，9H)，1.63-1.77(m，1H)，2.06-2.17(m，1H)，2.29-2.43(m，2H)，3.17(s，3H)，3.64(s，3H)，4.73(s，br，1H)，5.38-5.41(m，1H)，7.20-7.31(m，15H)；Anal.(C31H37N3O5)C，H，N.
中間體{Boc-L-(Tr-Gln)}-H的制備在-78℃將二異丁基氫化鋁(50.5ml 1.5M甲苯溶液，75.8mmol，2.5當量)加到{Boc-L-(Tr-Gln)}-N(OMe)Me(16.1g，30.3mmol，1當量)的THF溶液中，并將反應混合物在-78℃攪拌4小時。相繼加入甲醇(4ml)和1.0M HCl(10ml)，將混合物升至23℃。所得懸浮液用Et2O(150ml)小時，依次用1.0M HCl(3×100ml)，半飽和NaHCO3(100ml)和水(100ml)洗滌。有機相用MgSO4干燥，過濾，濃縮后得到粗{Boc-L-(Tr-Gln)}-H(13.8g，97％)為白色固體mp＝114-116℃；IR(cm-1)3313，1697，1494；1H NMR(CDCl3)δ1.44(s，9H)，1.65-1.75(m，1H)，2.17-2.23(m，1H)，2.31-2.54(m，2H)，4.11(s，br，1H)，5.38-5.40(m，1H)，7.11(s，1H)，7.16-7.36(m，15H)，9.45(s，1H).
中間體3-{Boc-L-(Tr-Gln)}-E-丙烯酸乙酯的制備在-78℃將雙(三甲基甲硅烷基)氨基化鈉(22.9ml 1.0M的THF溶液，22.9mmol，1.0當量)加到膦酰基乙酸三乙酯(5.59g，22.9mmol，1.0當量)的THF(200ml)溶液中，并將反應混合物在此溫度攪拌2小時。經(jīng)插管加入粗{Boc-L-(Tr-Gln)}-H(10.8g，22.9mmol，1當量)的THF(50ml)溶液。將反應混合物在-78℃攪拌2小時，升至0℃10分鐘后在0.5M HCl(150ml)和EtOAc/己烷(1∶1)混合物(2×150ml)之間分配。合并的有機相用Na2SO4干燥并濃縮。剩余物經(jīng)快速柱色譜純化(40％EtOAc的己烷)，得到3-{Boc-L-(Tr-Gln)}-E-丙烯酸乙酯(10.9g，88％)為白色泡沫IR(cm-1)3321，1710；1H NMR(CDCl3)δ1.27(t，3H，J＝7.2)，1.42(s，9H)，1.70-1.78(m，1H)，1.80-1.96(m，1H)，2.35(t，2H，J＝7.0)，4.18(q，2H，J＝7.2)，4.29(s，br，1H)，4.82-4.84(m，1H)，5.88(dd，1H，J＝15.7，1.6)，6.79(dd，1H，J＝15.7，5.3)，6.92(s，1H)，7.19-7.34(m，15H)；Anal.(C33H38N2O5)C，H，N.
中間體3-{Cbz-L-Leu-L-Phe-L-(Tr-Gln)}-E-丙烯酸乙酯的制備在23℃將HCl的1，4-二噁烷溶液(4.0M，20ml)加到3-{Boc-L-(Tr-Gln)}-E-丙烯酸乙酯(1.00g，1.84mmol，1當量)的相同溶劑(20ml)的溶液中。3小時后減壓蒸發(fā)掉揮發(fā)性物質(zhì)。將剩余物溶解于CH2Cl2(50ml)，然后依次加入Cbz-L-Leu-L-Phe-OH(0.759g，1.84mmol，1.0當量)，HOBt(0.373g，2.76mmol，1.5當量)，4-甲基嗎啉(0.809ml，7.36mmol，4.0當量)和EDC(0.529g，2.76mmol，1.5當量)。將反應混合物在23℃攪拌18小時，然后在水(150ml)和EtOAc(2×150ml)之間分配。合并的有機相用Na2SO4干燥并濃縮。剩余物經(jīng)快速柱色譜純化(5％CH3OH的CH2Cl2)，得到3-{Cbz-L-Leu-L-Phe-L-(Tr-Gln)}-E-丙烯酸乙酯(1.25g，83％)為白色固體mp＝192-194℃；IR(cm-1)3295，1696，1678，1655，1519；1H NMR(CDCl3)δ0.84(d，3H，J＝6.5)，0.86(d，3H，J＝6.5)，1.24-1.32(m，1H)，1.28(t，3H，J＝7.2)，1.43-1.75(m，3H)，1.91-2.06(m，1H)，2.20-2.38(m，2H)，2.93-3.02(m，1H)，3.07-3.18(m，1H)，3.95-4.02(m，1H)，4.17(q，2H，J＝7.2)，4.43-4.55(m，2H)，4.82-4.95(m，2H)，5.69(d，1H，J＝15.7)，6.46(d，1H，J＝7.5)，6.60(d，1H，J＝8.1)，6.69(dd，1H，J＝15.7，5.1)，7.09-7.38(m，27H)；Anal.(C51H56N4O7)C，H，N.
產(chǎn)物3-{Cbz-L-Leu-L-Phe-L-Gln}-E-丙烯酸乙酯的制備在23℃將三氟乙酸(20ml)加到3-{Cbz-L-Leu-L-Phe-L-(Tr-Gln)}-E-丙烯酸乙酯(1.25g，1.49mmol，1當量)和三異丙基甲硅烷(1.53ml，7.47mmol，5.0當量)的CH2Cl2(20ml)溶液中，得到亮黃色溶液。將反應混合物在23℃攪拌20分鐘，在此期間溶液變成無色。加入四氯化碳(20ml)，減壓蒸除揮發(fā)性物質(zhì)。剩余物用Et2O(20ml)研磨，真空過濾收集所得白色固體，用Et2O(3×50ml)洗滌，風干后得到3-{Cbz-L-Leu-L-Phe-L-Gln}-E-丙烯酸乙酯(0.717g，81％)mp＝219-221℃；IR(cm-1)3300，1672，1535；1H NMR(DMSO-d6)δ0.78(d，3H，J＝6.8)，0.82(d，3H，J＝6.5)，1.21(t，3H，J＝7.0)，1.25-1.37(m，2H)，1.42-1.54(m，1H)，1.58-1.80(m，2H)，2.02-2.09(m，2H)，2.84(dd，1H，J＝13.2，8.9)，2.97(dd，1H，J＝13.2，5.8)，3.93-4.01(m，1H)，4.11(q，2H，J＝7.0)，4.33-4.52(m，2H)，4.97(d，1H，J＝12.3)，5.04(d，1H，J＝12.3)，5.64(d，1H，J＝15.9)，6.69(dd，1H，J＝15.9，5.4)，6.76(s，1H)，7.13-7.37(m，11H)，7.43(d，1H，J＝7.8)，7.99(d，1H，J＝8.1)，8.04(d，1H，J＝8.1)；Anal.(C32H42N4O7)C，H，N.
實施例32
3-(Cbz-L-Val-L-Phe-L-Gln)-E-丙烯酸乙酯(對比化合物#3)的制備 (對比化合物#3)中間體3-{Cbz-L-Phe-L-(Tr-Gln)}-E-丙烯酸乙酯的制備在23℃將HCl的1，4-二噁烷溶液(4.0M，10ml)加到3-{Boc-L-(Tr-Gln)}-E-丙烯酸乙酯(按實施例31所述方法制備，3.05g，5.62mmol，1當量)的相同溶劑(20ml)的溶液中。3小時后減壓除去揮發(fā)性物質(zhì)。將剩余物溶解于CH2Cl2(50ml)，然后依次加入Boc-L-Phe-OH(1.49g，5.62mmol，1.0當量)，HOBt(0.911g，6.74mmol，1.2當量)，4-甲基嗎啉(1.85ml，16.8mmol，3.0當量)和EDC(1.29g，6.73mmol，1.2當量)。將反應混合物在23℃攪拌18小時，然后在水(150ml)和EtOAc(2×150ml)之間分配。合并的有機相用Na2SO4干燥并濃縮。剩余物經(jīng)快速柱色譜純化(梯度洗脫40→50％EtOAc的己烷)，得到3-{Boc-L-Phe-L-(Tr-Gln)}-E-丙烯酸乙酯(2.77g，71％)為白色泡沫IR(cm-1)3306，1706，1661；1H NMR(CDCl3)δ1.29(t，3H，J＝7.2)，1.38(s，9H)，1.65-1.76(m，1H)，1.87-1.99(m，1H)，2.25-2.27(m，2H)，2.94-3.01(m，2H)，4.14-4.26(m，3H)，4.48-4.53(m，1H)，4.95(s，br，1H)，5.64(d，1H，J＝15.8)，6.29(d，1H，J＝8.1)，6.64(dd，1H，J＝15.8，5.4)，6.80(s，br，1H)，7.14-7.32(m，20H)；Anal.(C42H47N3O6)C，H，N.
中間體3-{Cbz-L-Val-L-Phe-L-(Tr-Gln)}-E-丙烯酸乙酯的制備在23℃將HCl的1，4-二噁烷溶液(4.0M，8ml)加到3-{Boc-L-Phe-L-(Tr-Gln)}-E-丙烯酸乙酯(0.296g，0.429mmol，1當量)的相同溶劑(10ml)的溶液中。3小時后減壓除去揮發(fā)性物質(zhì)。將剩余物溶解于CH2Cl2(10ml)，然后依次加入Cbz-L-Val-OH(0.108g，0.430mmol，1.0當量)，HOBt(0.070g，0.518mmol，1.2當量)，4-甲基嗎啉(0.142ml，1.29mmol，3.0當量)和EDC(0.099g，0.518mmol，1.2當量)。將反應混合物在23℃攪拌4小時，然后在水(100ml)和EtOAc(2×100ml)之間分配。合并的有機相用Na2SO4干燥并濃縮。剩余物經(jīng)快速柱色譜純化(3％CH3OH的CH2Cl2)，得到3-{Cbz-L-Val-L-Phe-L-(Tr-Gln)}-E-丙烯酸乙酯(0.220g，62％)為白色固體mp＝195-198℃；IR(cm-1)3284，1689，1646；1H NMR(CDCl3)δ0.69(d，3H，J＝6.9)，0.82(d，3H，J＝6.5)，1.28(t，3H，J＝7.2)，1.63-1.74(m，1H)，1.96-2.02(m，2H)，2.22-2.35(m，2H)，2.93(dd，1H，J＝14.0，7.6)，3.10(dd，1H，J＝14.0，6.7)，3.81-3.85(m，1H)，4.17(q，2H，J＝7.2)，4.48-4.58(m，2H)，4.87(d，1H，J＝12.0)，4.94(d，1H，J＝12.0)，5.06(d，1H，J＝6.9)，5.67(d，1H，J＝15.6)，6.43(d，1H，J＝7.5)，6.63-6.72(m，2H)，7.10-7.40(m，26H)；Anal.(C50H54N4O7)C，H，N.
產(chǎn)物3-{Cbz-L-Val-L-Phe-L-Gln}-E-丙烯酸乙酯的制備在23℃將三氟乙酸(5ml)加到3-{Cbz-L-Val-L-Phe--L-(Tr-Gln)}-E-丙烯酸乙酯(0.188g，0.229mmol，1當量)和三異丙基甲硅烷(300ml，1.46mmol，6.4當量)的CH2Cl2(10ml)溶液中，得到亮黃色溶液。將反應混合物在23℃攪拌20分鐘，在此期間溶液變成無色。加入四氯化碳(10ml)，減壓蒸除揮發(fā)性物質(zhì)。剩余物用Et2O(20ml)研磨，真空過濾收集所得白色固體，用Et2O(3×50ml)洗滌，風干后得到3-{Cbz-L-Val-L-Phe-L-Gln}-E-丙烯酸乙酯(0.094g，71％)mp＝240℃(分解)；IR(cm-1)3263，1686，1640；1H NMR(DMSO-d6)δ0.73(d，6H，J＝6.9)，1.21(t，3H，J＝7.2)，1.60-1.75(m，2H)，1.83-1.90(m，1H)，2.03-2.08(m，2H)，2.83(dd，1H，J＝13.6，8.6)，2.96(dd，1H，J＝13.6，6.2)，3.79-3.84(m，1H)，4.10(q，2H，J＝7.2)，4.37-4.49(m，1H)，4.51-4.56(m，1H)，4.99(d，1H，J＝12.5)，5.06(d，1H，J＝12.5)，5.61(d，1H，J＝15.5)，6.67(dd，1H，J＝15.5，5.5)，6.76(s，1H)，7.13-7.36(m，12H)，8.06(d，2H，J＝8.1)；Anal.(C31H40N4O7)C，H，N.
實施例333-{Cbz-L-Leu-L-Phe-L-((S)-Pyrrol-Ala)}-E-丙烯酸乙酯(化合物A-24)的制備
中間體3-{Cbz-L-Leu-L-Phe-L-((N-2，4-二甲氧基芐基)-(S)-Pyrrol-Ala)}-E-丙烯酸乙酯的制備將HCl的1，4-二噁烷溶液(4.0M，4ml)加到3-{Boc-L-((N-2，4-二甲氧基芐基)-(S)-Pyrrol-Ala)}-E-丙烯酸乙酯(按實施例6所述方法制備，0.139g，0.292mmol，1當量)的1，4-二噁烷溶液(4ml)溶液中。攪拌1.5小時后蒸發(fā)掉揮發(fā)性物質(zhì)，得到粗胺鹽，無需純化即可使用。
將胺鹽溶解于CH2Cl2(7ml)，然后依次加入Cbz-L-Leu-L-Phe-OH(0.156g，0.378mmol，1.3當量)，4-甲基嗎啉(0.128ml，1.16mmol，4當量)，HOBt(0.067g，0.50mmol，1.7當量)和EDC(0.095g，0.50mmol，1.7當量)。攪拌20小時后將反應混合物倒入鹽水(15ml)，然后用10％CH3OH的CH2Cl2萃取(3×25ml)。合并的有機相用Na2SO4干燥并蒸發(fā)。剩余物經(jīng)快速柱色譜純化(60％EtOAc的己烷)，得到3-{Cbz-L-Leu-L-Phe-L-((N-2，4-二甲氧基芐基)-(S)-Pyrrol-Ala)}-E-丙烯酸乙酯(0.158g，70％)為泡沫1H NMR(CDCl3)δ0.87-0.92(m，6H)，1.28(t，3H，J＝7.2)，1.46-1.68(m，5H)，1.74-1.86(m，1H)，1.97-2.19(m，2H)，3.02(dd，1H，J＝13.7，5.6)，3.11-3.24(m，3H)，3.78(s，3H)，3.79(s，3H)，4.17(q，2H，J＝7.2)，4.20-4.30(m，2H)，4.35-4.45(m，2H)，4.82-4.90(m，1H)，5.07(d，1H，J＝12.3)，5.13(d，1H，J＝12.3)，5.36(d，1H，J＝7.8)，5.82(dd，1H，J＝15.6，1.2)，6.42-6.46(m，2H)，6.72(dd，1H，J＝15.6，5.3)，6.88(d，1H，J＝8.7)，7.09(d，1H，J＝9.0)，7.13-7.20(m，5H)，7.29-7.37(m，5H)，8.09(d，1H，J＝6.5).
產(chǎn)物3-{Cbz-L-Leu-L-Phe-L-((S)-Pyrrol-Ala)}-E-丙烯酸乙酯的制備將3-{Cbz-L-Leu-L-Phe-L-((N-2，4-二甲氧基芐基)-(S)-Pyrrol-Ala)}-E-丙烯酸乙酯(0.156g，0.202mmol，1當量)和硝酸銫(IV)銨(0.277g，0.505mmol，2.5當量)在THF/H2O(2∶1，3ml)混合物中混合并攪拌2小時。將反應混合物倒入鹽水(15ml)，然后用10％CH3OH的CH2Cl2萃取(3×25ml)。合并的有機相用Na2SO4干燥并蒸發(fā)。剩余物經(jīng)快速柱色譜純化(梯度洗脫2→5％CH3OH的CH2Cl2)，得到3-{Cbz-L-Leu-L-Phe-L-((S)-Pyrrol-Ala)}-E-丙烯酸乙酯(0.059g，47％)為米白色固體1H NMR(CDCl3)δ0.85-0.92(m，6H)，1.28(t，3H，J＝7.2)，1.39-1.65(m，4H)，1.68-1.93(m，2H)，2.08-2.20(m，1H)，2.27-2.38(m，1H)，3.02-3.13(m，2H)，3.24-3.32(m，2H)，4.11-4.20(m，1H)，4.18(q，2H，J＝7.2)，4.47-4.58(m，1H)，4.81-4.89(m，1H)，5.05(d，1H，J＝12.1)，5.12(d，1H，J＝12.1)，5.26(d，1H，J＝8.1)，5.78(dd，1H，J＝15.7，1.2)，6.23(s，1H)，6.72(dd，1H，J＝15.7，5.3)，7.13-7.25(m，6H)，7.30-7.37(m，5H)，7.54(d，1H，J＝7.2).
實施例343-{Cbz-L-Val-L-Phe-L-((S)-Pyrrol-Ala)}-E-丙烯酸乙酯(化合物A-25)的制備 中間體3-{Cbz-L-Val-L-Phe-L-((N-2，4-二甲氧基芐基)-(S)-Pyrrol-Ala)}-E-丙烯酸乙酯的制備用類似上述將3-{Boc-L-(Tr-Gln)}-E-丙烯酸乙酯轉(zhuǎn)化成3-{Cbz-L-Leu-L-Phe-L-(Tr-Gln)}-E-丙烯酸乙酯的方法(實施例31)將{Boc-L-[(N-2，4-二甲氧基芐基)-(S)-Pyrrol-Ala]}-E-丙烯酸乙酯(按實施例33所述制備)與Cbz-L-Val-L-Phe-L-OH偶合，得到3-{Cbz-L-Val-L-Phe-L-((N-2，4-二甲氧基芐基)-(S)-Pyrrol-Ala)}-E-丙烯酸乙酯IR(cm-1)3288，1699，1652；1HNMR(CDCl3)δ0.87(d，3H，J＝6.8)，0.95(d，3H，J＝6.5)，1.28(t，3H，J＝7.2)，1.48-1.60(m，2H)，1.70-1.84(m，1H)，1.95-2.20(m，3H)，3.01(dd，1H，J＝13.4，5.6)，3.09-3.25(m，3H)，3.78(s，3H)，3.80(s，3H)，4.03-4.10(m，1H)，4.17(q，2H，J＝7.2)，4.24(d，1H，J＝14.2)，4.33-4.44(m，1H)，4.38(d，1H，J＝14.2)，4.85-4.94(m，1H)，5.08(d，1H，J＝12.1)，5.14(d，1H，J＝12.1)，5.39(d，1H，J＝8.1)，5.80(dd，1H，J＝15.6，1.2)，6.42-6.47(m，2H)，6.70(dd，1H，J＝15.6，5.3)，6.81(d，1H，J＝9.0)，7.11-7.20(m，6H)，7.31-7.39(m，5H)，8.11(d，1H，J＝6.2)；Anal.(C42H52N4O9)C，H，N.
產(chǎn)物3-{Cbz-L-Val-L-Phe-L-((S)-Pyrrol-Ala)}-E-丙烯酸乙酯的制備將3-{Cbz-L-Val-L-Phe-L-((N-2，4-二甲氧基芐基)-(S)-Pyrrol-Ala)}-E-丙烯酸乙酯(0.215g，0.284mmol，1當量)，DDQ(0.071g，0.31mmol，1.1當量)和水(3滴)的CHCl3(4ml)懸浮液在23℃攪拌1小時，然后加熱回流6小時。冷卻過夜后再加入DDQ(0.019g，0.084mmol，0.3當量)，將混合物在67℃加熱1小時，然后蒸發(fā)。剩余物經(jīng)快速柱色譜純化(梯度洗脫2→5％CH3OH的CH2Cl2)，得到有些許雜質(zhì)的產(chǎn)物。將其溶解于CH2Cl2(70ml)，用飽和NaHCO3(2×30ml)和鹽水(30ml)洗滌，Na2SO4干燥并蒸發(fā)。剩余物在Et2O(10ml)中攪拌20分鐘，過濾收集固體，真空干燥，得到3-{Cbz-L-Val-L-Phe-L-((S)-Pyrrol-Ala)}-E-丙烯酸乙酯(0.060g，35％)為米白色固體mp＝215-217C；IR(cm-1)3413，3295，1696，1649；1HNMR(CDCl3)δ0.83(d，3H，J＝6.5)，0.91(d，3H，J＝6.8)，1.28(t，3H，J＝7.2)，1.50-1.59(m；1H)，1.70-1.91(m，2H)，2.03-2.17(m，2H)，2.26-2.38(m，1H)，3.03(dd，1H，J＝13.5，6.4)，3.12(dd，1H，J＝13.5，6.4)，3.21-3.34(m，2H)，3.96(dd，1H，J＝8.3，6.4)，4.17(q，2H，J＝7.2)，4.45-4.56(m，1H)，4.83-4.92(m，1H)，5.07(d，1H，J＝12.1)，5.13(d，1H，J＝12.1)，5.29(d，1H，J＝8.3)，5.77(dd，1H，J＝15.8，1.2)，5.94(s，1H)，6.71(dd，1H，J＝15.8，5.3)，6.95(d，1H，J＝9.0)，7.14-7.27(m，5H)，7.31-7.38(m，5H)，7.57(d，1H，J＝7.2)；Anal.(C33H42N4O7)C，H，N.
實施例353-{Cbz-L-Leu-L-Phe-L-((S)-Piper-Ala)}-E-丙烯酸乙酯(化合物A-26)的制備 產(chǎn)物3-{Cbz-L-Leu-L-Phe-L-((S)-Piper-Ala)}-E-丙烯酸乙酯的制備用類似實施例34所述將(1S，3’S)-{2-(1’-(2”，4”-二甲氧基芐基)-2’-氧-吡啶烷-3’-基)-1-羥甲基乙基}-氨基甲酸叔丁酯轉(zhuǎn)化成3-{Cbz-L-Leu-L-Phe-L-((S)-Pyrrol-Ala)}-E-丙烯酸乙酯的方法，將(1S，3’S)-{2-(1’-(2”，4”-二甲氧基芐基)-2’-氧-哌啶-3’-基)-1-羥甲基乙基}-氨基甲酸叔丁酯(按實施例8所述制備)轉(zhuǎn)化成3-{Cbz-L-Leu-L-Phe-L-((S)-Piper-Ala)}-E-丙烯酸乙酯IR(cm-1)3422，3307，1713，1649；1H NMR(CDCl3)δ0.86-0.92(m，6H)，1.28(t，3H，J＝7.2)，1.38-1.75(m，6H)，1.77-1.89(m，1H)，1.96-2.11(m，2H)，3.07(d，2H，J＝6.2)，3.20-3.27(m，2H)，4.13-4.24(m，1H)，4.18(q，2H，J＝7.2)，4.41-4.53(m，1H)，4.76-4.85(m，1H)，5.06(d，1H，J＝12.1)，5.12(d，1H，J＝12.1)，5.34(d，1H，J＝7.8)，5.78(dd，1H，J＝15.6，5.4)，6.17(s，1H)，6.70(dd，1H，J＝15.6，5.4)，7.00(d，1H，J＝8.4)，7.13-7.27(m，6H)，7.30-7.37(m，5H)，7.83(d，1H，J＝6.8)；Anal.(C35H46N4O7·0.5H2O)C，H，N.
實施例363-{Cbz-L-Leu-L-Phe-L-((R)-Pyrrol-Ala)}-E-丙烯酸乙酯(化合物A-27)的制備 中間體(4S，4”R)-4-{3’-4”-芐基-2”-氧-噁唑烷-3”-基)-3’-氧丙基}-2，2-二甲基噁唑烷-3-羧酸叔丁酯的制備在0℃將三乙胺(6.43ml，46.1mmol，3.0當量)和新戊酰氯(1.89ml，15.3mmol，1.0當量)依次加到(4S)-4-(2’-羧乙基)-2，2-二甲基噁唑烷-3-羧酸叔丁酯(4.20g，15.3mmol，1當量)的THF(300ml)溶液中。將渾濁的反應混合物在0℃攪拌3.5小時，然后依次加入氯化鋰(0.716g，16.9mmol，1.1當量)和(R)-(+)-4-芐基-2-噁唑烷酮(2.59g，14.6mmol，0.95當量)。升溫至23℃并攪拌19小時后將反應混合物在0.5M HCl(150ml)和EtOAc(2×150ml)之間分配。合并的有機相用半飽和Na2CO3(150ml)洗滌，MgSO4干燥，然后重力過濾。減壓濃縮濾液，剩余物經(jīng)快速柱色譜純化(30％EtOAc于己烷)，得到(4S，4”R)-4-{3’-(4”-芐基-2”-氧-噁唑烷-3”-基)-3’-氧丙基}-2，2-二甲基噁唑烷-3-羧酸叔丁酯(6.15g，產(chǎn)率97％)為無色油IR(cm-1)2978，1783，1694；1H NMR(CDCl3，異構(gòu)體的混合物)δ1.46(s)，1.58(s)，1.63(s)，2.01-2.05(m)，2.72-3.13(m)，3.29-3.33(m)，3.74-3.79(m)，3.82-4.09(m)，4.11-4.25(m)，4.67-4.70(m)，7.20-7.37(m)；Anal.(C23H32N2O6)C，H，N.
中間體(2’R，4S，4”R)-4-{2’-(4”-芐基-2”-氧-噁唑烷-3”-羰基)-戊-4’-烯基}-2，2-二甲基噁唑烷-3-羧酸叔丁酯的制備在-78℃將(4S，4”R)-4-{3’-(4”-芐基-2”-氧-噁唑烷-3”-基)-3’-氧丙基}-2，2-二甲基噁唑烷-3-羧酸叔丁酯(6.15g，14.2mmol，1當量)的THF(25ml)溶液加到在相同溶劑(50ml)中的雙(三甲基甲硅烷基)氨基化鈉(14.2ml 1.0M的THF溶液，14.2mmol，1.0當量)溶液中。將反應混合物在-78℃攪拌15分鐘，然后加入烯丙基碘(3.90ml，42.6mmol，3.0當量)。在-78℃又攪拌2小時后將反應混合物保持在-45℃2小時，然后在半飽和NH4Cl/5％Na2S2O3(2∶1)混合物(200ml)和EtOAc/己烷(1∶1)混合物(2×150ml)之間分配。合并的有機相用H2O(100ml)洗滌，MgSO4干燥，然后重力過濾。減壓濃縮濾液，剩余物經(jīng)快速柱色譜純化(15％EtOAc于己烷)，得到(2’R，4S，4”R)-4-{2’-(4”-芐基-2”-氧-噁唑烷-3”-羰基)-戊-4’-烯基}-2，2-二甲基噁唑烷-3-羧酸叔丁酯(3.12g，產(chǎn)率46％)為粘稠泡沫IR(cm-1)2978，1782，1685；1H NMR(CDCl3，異構(gòu)體的混合物)δ1.42(s)，1.45(s)，1.49(s)，1.52(s)，1.62-1.78(m)，1.80-2.01(m)，2.23-2.49(m)，2.51-2.56(m)，2.76(dd，J＝13.3，9.7)，3.26(dd，J＝13.3，3.6)，3.58-3.64(m)，3.67(d，J＝8.7)，3.90-3.98(m)，4.02-4.15(m)，4.16-4.30(m)，4.75-4.82(m)，5.06-5.11(m)，5.74-5.88(m)，7.22-7.36(m)；Anal.(C26H36N2O6)C，H，N.
中間體(1S，3’R)-{2-(1’-(2”，4”-二甲氧基芐基)-2’-氧-吡咯烷-3’-基)-1-羥甲基乙基}-氨基甲酸叔丁酯的制備在-78℃將臭氧鼓入(2’R，4S，4”R)-4-{2’-(4”-芐基-2”-氧-噁唑烷-3”-基)-戊-4’-烯基}-2，2-二甲基噁唑烷-3-羧酸叔丁酯(3.1g，6.60mmol，1當量)的CH2Cl2(200ml)和CH3OH(0.535ml，13.2mmol，2.0當量)溶液直到藍色不再變化。用氬氣凈化反應混合物直到它變得無色。加入二甲硫醚(4.85ml，66.0mmol，10當量)，將混合物在-78℃攪拌3.5小時，然后在0℃保持1小時。將反應混合物在H2O(150ml)和EtOAc/己烷(1∶1)混合物(2×150ml)之間分配后用MgSO4干燥合并的有機相，然后重力過濾。減壓濃縮濾液，剩余物無需進一步純化即可使用。
在23℃將上述剩余物溶解于THF/EtOH(2∶1)混合物(240ml)，依次加入EtOH(180ml)，2，4-二甲氧基芐胺鹽酸鹽(5.38g，26.4mmol，4.0當量)，乙酸鈉(2.17g，26.4mmol，4.0當量)和氰基硼氫化鈉(0.829g，13.2mmol，2.0當量)。將所得懸浮液在23℃攪拌19小時，然后在0.5M HCl(150ml)和EtOAc(2×100ml)之間分配。用半飽和NaHCO3溶液(100ml)洗滌合并的有機相，Na2SO4干燥，然后減壓濃縮。剩余物經(jīng)過短硅膠柱(用50％EtOAc的己烷洗脫)，得到(3’R，4S)-{1’-(2”，4”-二甲氧基芐基)-2’-氧-吡咯烷-3’-基甲基}-2，2-二甲基-噁唑烷-3-羧酸叔丁酯及雜質(zhì)(R)-(+)-4-芐基-2-噁唑烷酮。
將產(chǎn)物溶解于CH3OH(80ml)，加入TsOH·H2O(0.251g，1.32mmol，0.20當量)。將反應混合物加熱到50℃并保持在此溫度4小時。冷卻到23℃后減壓濃縮反應混合物至約20ml，然后在半飽和NaHCO3(150ml)和CH2Cl2/CH3OH(9∶1)混合物(2×150ml)之間分配。合并的有機相用Na2SO4干燥，然后減壓濃縮。剩余物經(jīng)快速柱色譜純化(3％CH3OH于CH2Cl2)，得到(1S，3’R)-{2-(1’-(2”，4”-二甲氧基芐基)-2’-氧-吡咯烷-3’-基)-1-羥甲基乙基}-氨基甲酸叔丁酯(0.92g，34％)為泡沫IR(cm-1)3347(br)，2937，1669；1H NMR(CDCl3)δ1.44(s，9H)，1.62-1.77(m，2H)，1.94-2.04(m，1H)，2.15-2.26(m，1H)，2.40-2.50(m，1H)，3.13-3.24(m，2H)，3.56-3.77(m，3H)，3.80(s，6H)，3.82-4.16(m，1H)，4.37(d，1H，J＝14.3)，4.45(d，1H，J＝14.3)，5.49(d，1H，J＝7.8)，6.42-6.45(m，2H)，7.08-7.11(m，1H)；Anal.(C21H32N2O6·0.25H2O)C，H，N.
中間體3-{Boc-L-[(N-2，4-二甲氧基芐基)-(R)-Pyrrol-Ala]}-E-丙烯酸乙酯的制備用類似實施例33所述將(1S，3’S)-{2-(1’-(2”，4”-二甲氧基芐基)-2’-氧-吡咯烷-3’-基)-1-羥甲基乙基}-氨基甲酸叔丁酯轉(zhuǎn)化成3-{Boc-L-[(N-2，4-二甲氧基芐基)-(s)-Pyrrol-Ala]}-E-丙烯酸乙酯的方法將(1S，3’R)-{2-(1’-(2”，4”-二甲氧基芐基)-2’-氧-吡咯烷-3’-基)-1-羥甲基乙基}-氨基甲酸叔丁酯轉(zhuǎn)化成3-{Boc-L-[(N-2，4-二甲氧基芐基)-(R)-Pyrrol-Ala]}-E-丙烯酸乙酯IR(cm-1)3307，1713，1674；1H NMR(CDCl3)δ1.28(t，3H，J＝7.2)，1.45(s，9H)，1.57-1.82(m，2H)，2.02-2.19(m，2H)，2.42-2.55(m，1H)，3.11-3.25(m，2H)，3.79(s，3H)，3.80(s，3H)，4.19(q，2H，J＝7.2)，4.32-4.50(m，3H)，5.97(dd，1H，J＝15.7，1.4)，6.38(d，1H，J＝7.8)，6.42-6.47(m，2H)，6.86(dd，1H，J＝15.7，5.1)，7.08-7.13(m，1H)；Anal.(C25H36N2O7)C，H，N.
中間體3-{Cbz-L-Leu-L-Phe-L-[(N-2，4-二甲氧基芐基)-(R)-Pyrrol-Ala]}-E-丙烯酸乙酯的制備將HCl的1，4-二噁烷溶液(4.0M，6ml)加到3-{Boc-L-((N-2，4-二甲氧基芐基)-(R)-Pyrrol-Ala)}-E-丙烯酸乙酯(0.233g，0.489mmol，1當量)的1，4-二噁烷溶液(6ml)溶液中。攪拌1.5小時后蒸發(fā)掉揮發(fā)性物質(zhì)，得到粗胺鹽，無需純化即可使用。
將胺鹽溶解于DMF(4ml)，然后冷卻到0℃。依次加入Cbz-L-Leu-L-Phe-OH(0.202g，0.490mmol，1當量)，DIEA(0.255ml，1.46mmol，3當量)和HATU(0.186g，0.489mmol，1當量)。攪拌1.5小時后用MTBE(100ml)稀釋反應混合物，用5％KHSO4，飽和NaHCO3和鹽水(各10ml)洗滌，MgSO4干燥并蒸發(fā)。剩余物經(jīng)快速柱色譜純化(梯度洗脫60→75％EtOAc的己烷)，得到3-{Cbz-L-Leu-L-Phe-L-((N-2，4-二甲氧基芐基)-(R)-Pyrrol-Ala)}-E-丙烯酸乙酯(0.208g，55％)為白色固體mp＝174-176℃；IR(cm-1)3287，1713，1649；1H NMR(CDCl3)δ0.84-0.91(m，6H)，1.29(t，3H，J＝7.2)，1.42-1.66(m，4H)，1.67-1.77(m，1H)，1.84-1.95(m，1H)，2.20-2.12(m，1H)，2.33-2.45(m，1H)，3.04-3.23(m，4H)，3.78(s，3H)，3.79(s，3H)，4.15.-4.29(m，1H)，4.17(q，2H，J＝7.2)，4.31(d，1H，J＝14.5)，4.40(d，1H，J＝14.5)，4.67-4.84(m，2H)，5.05(d，1H，J＝12.1)，5.11(d，1H，J＝12.1)，5.35(d，1H，J＝8.1)，5.76(dd，1H，J＝15.6，1.6)，6.42-6.46(m，2H)，6.74-6.81(m，1H)，6.75(dd，1H，J＝15.6，5.0)，7.06-7.10(m，1H)，7.15-7.24(m，5H)，7.29-7.36(m，5H)，8.79(d，1H，J＝5.9)；Anal.(C43H54N4O9)C，H，N.
產(chǎn)物3-{Cbz-L-Leu-L-Phe-L-((R)-Pyrrol-Ala)}-E-丙烯酸乙酯的制備用類似實施例34所述將3-{Cbz-L-Leu-L-Phe-L-((N-2，4-二甲氧基芐基)-(S)-Pyrrol-Ala)}-E-丙烯酸乙酯轉(zhuǎn)化成3-{Cbz-L-Leu-L-Phe-L-((S)-Pyrrol-Ala)}-E-丙烯酸乙酯的方法將3-{Cbz-L-Leu-L-Phe-L-((N-2，4-二甲氧基芐基)-(R)-Pyrrol-Ala)}-E-丙烯酸乙酯轉(zhuǎn)化成3-{Cbz-L-Leu-L-Phe-L-((R)-Pyrrol-Ala)}-E-丙烯酸乙酯IR(cm-1)3290，1702，1642；1HNMR(CDCl3)δ0.85-0.92(m，6H)，1.30(t，3H，J＝7.2)，1.35-1.49(m，1H)，1.52-1.71(m，3H)，1.73-1.94(m，2H)，2.15-2.26(m，1H)，2.32-2.43(m，1H)，3.02-3.18(m，2H)，3.19-3.29(m，2H)，4.15-4.27(m，1H)，4.18(q，2H，J＝7.2)，4.65-4.74(m，1H)，4.76-4.85(m，1H)，5.07(d，1H，J＝12.3)，5.12(d，1H，J＝12.3)，5.18-5.25(m，1H)，5.76-5.84(m，2H)，6.64-6.78(m，2H)，7.15-7.40(m，10H)，7.91-7.98(m，1H)；Anal.(C34H44N4O7)C，H，N.
實施例373-{Cbz-L-Leu-L-Phe-L-(2-咪唑啉酮)Ala}-E-丙烯酸乙酯(化合物A-28)的制備 中間體3-{Cbz-L-Leu-L-Phe-L-Boc-氨基Ala}-E-丙烯酸乙酯的制備將(乙氧羰基亞甲基)三苯基正膦(PH-5)(1.20g，3.28mmol，1.2當量)加到Cbz-L-Leu-L-Phe-L-N-Boc-氨基丙氨酸(按Webber等人所述方法制備，《醫(yī)藥化學雜志》(J.Med.Chem.)，412786(1998))(1.60g，2.73mmol，1當量)的THF(55ml)溶液中，然后將反應物在室溫攪拌過夜。真空除去揮發(fā)性物質(zhì)，剩余物經(jīng)快速柱色譜純化(梯度洗脫0-1.5％CH3OH的CH2Cl2)，得到3-{Cbz-L-Leu-L-Phe-L-N-氨基Ala}-E-丙烯酸乙酯(0.968g，含有三苯膦氧化物雜質(zhì))，無需純化即可使用。
中間體3-{Cbz-L-Leu-L-Phe-L-(2-Boc-2-氨基乙基)氨基Ala}-E-丙烯酸乙酯的制備在23℃將HCl的1，4-二噁烷溶液(4.0M，10ml)加到3-{Cbz-L-Leu-L-Phe-L-N-氨基Ala}-E-丙烯酸乙酯(0.95g，1.46mmol，1當量)的相同溶劑(20ml)的溶液中。將反應混合物在此溫度攪拌1.5小時后再加入HCl的1，4-二噁烷溶液(4.0M，10ml)。攪拌過夜后真空除去揮發(fā)性物質(zhì)，剩余物與Et2O(20ml)一起研磨。濾出所得固體并用Et2O(3×10ml)洗滌，得到粗胺鹽(0.63g，73％)為白色固體。
將胺鹽溶解于CH3OH(10ml)，然后先后加入N-Boc-2-氨基乙醛(按Bischofberger等人所述方法制備，《有機化學雜志》(J.Org.Chem.)，533457(1988))(0.19g，1.16mmol，1.1當量)和NaHB3CN(0.069g，1.05mmol，1.0當量)。將反應混合物在23℃攪拌過夜，然后減壓除去揮發(fā)性物質(zhì)。將剩余物溶解于EtOAc(25ml)，有機相分別用水(25ml)和鹽水(25ml)，MgSO4干燥并蒸發(fā)。剩余物經(jīng)快速柱色譜純化(梯度洗脫0→3％CH3OH的CH2Cl2)，得到3-{Cbz-L-Leu-L-Phe-L-(2-Boc-2-氨基乙基)氨基Ala}-E-丙烯酸乙酯(0.32g，44％)為白色非晶狀固體Rf＝0.20(5％CH3OH的CHCl3)；IR(cm-1)1712，1649，1537，1252，1175；1H NMR(DMSO-d6)δ0.79(d，3H，J＝6.6)，0.82(d，3H，J＝6.6)，1.21(t，3H，J＝7.0)，1.26-1.37(m，13H)，1.46-1.54(m，1H)，2.56-2.60(m，2H)，2.82-2.97(m，4H)，3.98-4.04(m，1H)，4.10(q，2H，J＝7.0)，4.42-4.49(m，2H)，4.98(d，1H，J＝12.5)，5.04(d，1H，J＝12.9)，5.59(d，1H，J＝15.8)，6.73-6.75(m，1H)，6.77(dd，1H，J＝15.8，4.8)，7.20-7.34(m，10H)，7.41(d，1H，J＝8.1)，7.97(d，1H，J＝7.0)，8.07(d，1H，J＝7.0)；Anal.(C37H53N5O8·0.50H2O)C，H，N產(chǎn)物3-{Cbz-L-Leu-L-Phe-L-(2-咪唑啉酮)Ala}-E-丙烯酸乙酯的制備將TFA(0.8ml)加到3-{Cbz-L-Leu-L-Phe-L-(2-Boc-2-氨基乙基)氨基Ala}-E-丙烯酸乙酯(0.29g，0.42mmol，1當量)的CH2Cl2(8ml)溶液中，并將反應混合物在23℃攪拌2小時。真空除去揮發(fā)性物質(zhì)，剩余物溶解于EtOAc(25ml)，并依次用飽和NaHCO3溶液(25ml)，水(25ml)和鹽水(25ml)洗滌。有機相經(jīng)MgSO4干燥，然后濃縮，得到粗二胺(0.23g，92％，0.39mmol)為醬色非晶狀固體。
將此胺溶解于THF(4ml)，然后加入羰基二咪唑(0.06g，0.36mmol，0.92當量)，并將反應混合物在23℃攪拌3.5小時。真空除去溶劑，剩余物經(jīng)快速柱色譜純化(梯度洗脫0→2％CH3OH的CH2Cl2)，得到3-{Cbz-L-Leu-L-Phe-L-(2-咪唑啉酮)Ala}-E-丙烯酸乙酯(0.12g，54％)為白色非晶狀固體mp＝161-164℃；Rf＝0.21(5％CH3OH的CHCl3)；IR(cm-1)1701，1647，1535，1277；1H NMR(DMSO-d6)δ0.79(d，3H，J＝6.6)，0.82(d，3H，J＝6.6)，1.21(t，3H，J＝7.0)，1.27-1.35(m，2H)，1.48-1.52(m，1H)，2.79-2.86(m，1H)，2.92-3.05(m，3H)，3.14-3.19(m，2H)，3.25-3.30(m，2H)，3.98-4.03(m，1H)，4.10(q，2H，J＝7.0)，4.47-4.49(m，1H)，4.59-4.63(m，1H)，4.97-5.02(m，2H)，5.72(d，1H，J＝15.8)，6.37(s，1H)，6.71(dd，1H，J＝15.8，5.5)，7.15-7.39(m，10H)，7.42(d，1H，J＝8.1)，8.00(d，1H，J＝8.1)，8.18(d，1H，J＝8.1)；Anal.(C33H43N5O7)C，H，N.
實施例38中間體Q1，Q2和Q3的合成 中間體1-乙酰基-3-(三苯基膦亞基)-吡咯烷-2-酮的制備將2，4-二溴丁酰胺(butyride)(根據(jù)Ikuta等人所述方法制備，《醫(yī)藥化學雜志》(J.Med.Chem.)，301995(1987))(46.1g，188.2mmol)的THF(1L)冷卻到0℃，并用雙(三甲基甲硅烷基)氨基化鋰(40.9g，244.6mmol)的THF(200ml)溶液處理。將溶液保持在0℃2.5小時，然后倒入鹽水(800ml)中，用乙酸乙酯(2L)萃取，MgSO4干燥。蒸發(fā)得到25.5g 3-溴-吡咯烷-2-酮，為棕色油。用Ac2O(76ml)處理，回流5小時。蒸發(fā)之后進行純化(硅膠過濾，EtOAc洗脫)，得到28g 1-乙?；?3-溴-吡咯烷-2-酮為深色油。加入THF(272ml)和三苯膦(42.8g，163.3mmol)，并將所得溶液回流8小時。冷卻到23℃后過冷收集形成的1-乙酰基-3-(三苯膦基)-吡咯烷-2-酮溴化物沉淀。濃縮母液，然后冷卻到0℃，得到6.6g剩余物。將其在CH2Cl2(1L)中混合，先后用1N NaOH(100ml)和鹽水(2×100ml)洗滌。蒸發(fā)有機相，得到26.9g(總產(chǎn)率37％)1-乙?；?3-(三苯基膦亞基)-吡咯烷-2-酮為醬色油。1H NMR(CDCl3)δ7.76-7.32(15H，m)，3.90-3.85(2H，m)，2.50(3H，s)，2.56-2.30(2H，m).
中間體2-叔丁氧羰基-3-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)-丙酸甲酯的制備先后用咪唑(18.6g，273.7mmol)和TBSCl(13.0g，86.7mmol)處理Boc-D-絲氨酸甲酯(20.0g，91.2mmol)的DMF(300ml)。將溶液在室溫保持8小時，然后用飽和氯化銨水溶液(300ml)洗滌，乙酸乙酯(800ml)萃取。有機相用鹽水(300ml)洗滌，MgSO4干燥，得到30.2g(100％)2-叔丁氧羰基-3-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)-丙酸甲酯為無色油。1H NMR(CDCl3)δ5.32(1H，d，J＝8.3)，4.33(1H，dt，J＝8.8，2.7)，4.02(1H，dd，J＝10.1，2.6)，3.80(1H，dd，J＝9.8，3.1)，3.72(3H，s)，1.43(9H，s)，0.85(9H，s)，0.0(6H，s).
中間體{1-(1-乙酰基-2-氧-吡咯烷-3-亞基甲基)-2(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)-乙基}-氨基甲酸叔丁酯的制備將2-叔丁氧羰基-3-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)-丙酸甲酯(12.7g，38.0mmol)的甲苯(190ml)冷卻到-78℃，并用二異丁基氫化鋁(15.6ml，87.4mmol)的甲苯(175ml)溶液處理。將內(nèi)部溫度保持在-70℃以下。將溶液在-78℃再保持90分鐘，然后加入甲醇(7.7ml，190mmol)。在-78℃加入1-乙酰基-3-(三苯基膦亞基)-吡咯烷-2-酮(11.1g，28.6mmol)的CH2Cl2(50ml)，允許將所得溶液升至室溫并保持30分鐘。加入酒石酸鉀鈉(150g)的水溶液(600ml)，劇烈攪拌30分鐘。用乙酸乙酯萃取混合物(4×250ml)，干燥(MgSO4)并蒸發(fā)。經(jīng)硅膠色譜純化，得到7.04g(60％){1-(1-乙?；?2-氧-吡咯烷-3-亞基甲基)-2(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)-乙基}-氨基甲酸叔丁酯為無色油。
1H NMR(CDCl3)δ6.59(1H，dt，J＝8.7，2.9)，4.98(1H，d，J＝6.8)，4.37-4.25(1H，m)，3.77(2H，t，J＝7.3)，3.70-3.58(2H，m)，2.90-2.80(1H，m)，2.75-2.60(1H，m)，5.53(3H，s)，1.41(9H，s)，0.87(9H，s)，0.04(6H，s).
中間體{2-羥基-1-(2-氧-吡咯烷-3-亞基甲基)-乙基}-氨基甲酸叔丁酯的制備將{1-(1-乙?；?2-氧-吡咯烷-3-亞基甲基)-2(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)-乙基}-氨基甲酸叔丁酯(9.18g，22.2mmol)的THF(150ml)在0℃用TBAF(22.2ml 1M THF溶液，22.2mmol)處理，并保持1小時。加入飽和氯化銨水溶液并攪拌10分鐘，然后用乙酸乙酯萃取(2×200ml)。有機相用MgSO4干燥后蒸發(fā)。經(jīng)硅膠色譜純化，得到4.82g(73％)的無色油。將該油溶于甲醇(160ml)，用碳酸鉀(223mg，1.62mmol)處理，在室溫保持1小時。用固體檸檬酸(311mg，1.62mmol)處理反應混合物，加入乙酸乙酯(800ml)。溶液經(jīng)硅膠過濾，蒸發(fā)后得到4.30g(總產(chǎn)率73％){2-羥基-1-(2-氧-吡咯烷-3-亞基甲基)-乙基}-氨基甲酸叔丁酯為無色油。
1H NMR(CDCl3)δ7.03(1H，br s)，6.35(1H，dt，J＝8.6，2.6)，5.37(1H，d，J＝6.5)，4.40-4.20(1H，m)，3.66(br s，3H)，3.4(2H，t，J＝6.7)，3.10-2.80(1H，m)，2.80-2.70(1H，m)，1.41(9H，s).
中間體{2-羥基-1-(2-氧基-吡咯烷-3-基甲基)-乙基}-氨基甲酸叔丁酯(非對映體混合物，Q1)的制備用5％鈀炭(1.78g)處理{2-羥基-1-(2-氧基-吡咯烷-3-亞基甲基)-乙基}-氨基甲酸叔丁酯(4.30g，16.8mmol)的乙酸乙酯(168ml)，并在大氣壓下氫化1小時。過濾混合物，蒸發(fā)后得到3.92g(91％){2-羥基-1-(2-氧-吡咯烷-3-基甲基)-乙基}-氨基甲酸叔丁酯為無色油(1.5∶1的非對映體混合物)。1H NMR(CDCl3)δ6.99(1H，s)，5.49(1H，d，J＝8.4)，3.70-3.50(3H，m)，3.38-3.20(2H，m)，2.60-2.20(2H，rn)，2.00-1.70(2H，m)，1.65-1.45(1H，m)，1.37(9H，s).
中間體{2-羥基-1-(R-2-氧基-吡咯烷-3-基甲基)-乙基}-氨基甲酸叔丁酯(Q2)的制備用(R)-BINAP-RuCl(19mg，0.02mmol)處理{2-羥基-1-(2-氧基-吡咯烷-3-亞基甲基)-乙基}-氨基甲酸叔丁酯(98mg，0.39mmol)的甲醇(5ml)，然后置于氫氣下(1200psi，50℃)48小時。蒸發(fā)溶液，硅膠過濾(10％MeOH-EtOAc洗脫)。蒸發(fā)后得到75mg(75％){2-羥基-1-(R-2-氧-吡咯烷-3-基甲基)-乙基}-氨基甲酸叔丁酯為無色油(9∶1的非對映體混合物)。
1H NMR(CDCl3)δ6.32(1H，brs)，5.40(1H，d，J＝7.5)，3.82(1H，br s)，3.71-3.63(2H，m)，3.34-3.31(2H，m)，2.45-2.30(2H，m)，2.09-1.86(2H，m)，1.70-1.63(1H，m)，1.42(9H，s).
中間體{2-羥基-1-(S-2-氧基-吡咯烷-3-基甲基)-乙基}-氨基甲酸叔丁酯(Q3)的制備用(S)-BINAP-RuCl(19mg，0.02mmol)處理{2-羥基-1-(2-氧基-吡咯烷-3-亞基甲基)-乙基}-氨基甲酸叔丁酯(0.10g，0.39mmol)的甲醇(5ml)，然后置于氫氣下(1200psi，50℃)48小時。蒸發(fā)溶液，硅膠過濾(10％MeOH-EtOAc洗脫)。蒸發(fā)后得到74mg(74％){2-羥基-1-(S-2-氧-吡咯烷-3-基甲基)-乙基}-氨基甲酸叔丁酯為無色油(9∶1的非對映體混合物)。
1H NMR(CDCl3)δ6.66(1H，brs)，5.51(1H，d，J＝8.2)，3.72-3.57(3H，m)，3.34-3.31(2H，m)，2.52-2.33(2H，m)，2.20-1.86(1H，m)，1.86-1.70(1H，m)，1.62-1.50(1H，m)，1.40(9H，s).
用多種本發(fā)明化合物進行的生化和生物試驗結(jié)果如下所述。
生化和生物學評價鼻病毒3C蛋白酶的抑制制備各種化合物的原種(50mM，在DMSO中)；用相同溶劑稀釋。用下列標準色譜法從血清型14，16和2制備重組鼻病毒3C蛋白酶(見Birch等人的“在大腸桿菌中表達的重組人鼻病毒14 3C蛋白酶的純化”，《蛋白質(zhì)表達純化》(Protein Expr.Pur.)，6(5)609-618(1995))(1)用得自Pharmacia的Q Sepharose Fast Flow進行離子交換；(2)用得自Biorad的Affi-Gel Blue進行親和色譜；及(3)用得自Pharmacia的Sephadex G-100進行分級。每個測定樣品含有2％DMSO，50mM Tris pH 7.6，1mM EDTA，指定濃度的試驗化合物，約1μM的底物和50-100nM蛋白酶。通過添加酶而非底物使反應開始，得到kobs/I值。用熒光共振能量轉(zhuǎn)移測定法測量RVP的活性。底物是(N-末端)DABCYL-(Gly-Arg-Ala-Val-Phe-Gln-Gly-Pro-Val-Gly)-EDANS。在未切割的肽中，EDANS熒光被鄰近的DABCYL部分熄滅。當切割肽時，熄滅現(xiàn)象被減弱，以熒光信號的增強測量活性。數(shù)據(jù)用標準非線性擬合程序(Enzfit)分析，結(jié)果示于下面表1和2中。在表1中，所有數(shù)據(jù)都是針對得自HRV血清型-14的鼻病毒3C蛋白酶的(由Robert Rueckert博士(威斯康星大學，Madison，Wisconsin)構(gòu)建的感染性cDNA克隆制成)。表2展示了本化合物對幾種得自非HRV血清型-14血清型的鼻病毒的蛋白酶的蛋白酶抑制活性。標示為kobs/[I]欄中的數(shù)據(jù)是從酶起始實驗進展曲線上測得的。
抗鼻病毒H1-HeLa細胞培養(yǎng)測定法在此細胞保護測定法中，本發(fā)明化合物保護細胞不受HRV感染的能力用XTT染色還原法測量，該方法詳見Weislow等人，J.Natl.Cancer Inst.，81577-586(1989)。
H1-HeLa細胞以0.13(病毒顆粒/細胞)的感染復數(shù)(m.o.i.)被HRV-14感染，或僅被培養(yǎng)基模擬感染。將感染或模擬感染的細胞以8×105細胞/ml的濃度重新懸浮，并與適當濃度的待試驗化合物一起溫育。兩天后，在試驗板中加入XTT/PMS，產(chǎn)生的甲產(chǎn)物的量用分光光度儀在450/650nm進行定量分析。計算EC50值，表示為化合物處理過的病毒感染細胞產(chǎn)生的甲臘產(chǎn)物與無化合物的模擬感染細胞產(chǎn)生的甲臘產(chǎn)物相比增加50％的化合物濃度。計算50％細胞毒性劑量(CC50)，表示為化合物處理過的模擬感染細胞產(chǎn)生的甲產(chǎn)物與無化合物的模擬感染細胞產(chǎn)生的甲臘產(chǎn)物相比降低50％的化合物濃度。治療指數(shù)(TI)的計算方法是用EC50除以CC50值。
除HRV血清型-14(由Robert Ruekert博士(分子病毒學研究所，威斯康星大學，Madison，Wisconsin)構(gòu)建的感染性cDNA克隆制成)外，所有用于本測定的人鼻病毒(RHV)菌株都購自美國典型培養(yǎng)物保藏中心(ATCC)。繁殖HRV原種，病毒測定用H1-HeLa細胞(ATCC)進行。細胞在含有10％胎牛血清(購自Life Technologies，Gaithersburg，MD)的最小基本培養(yǎng)基中進行培養(yǎng)。
本發(fā)明化合物的試驗與對照化合物WIN 51711，WIN 52084和WIN54954(得自Sterling-Winthrop Pharmaceuticals)，Pirodayir(得自Janssen Pharmaceuticals)和Pleconaril(根據(jù)Diana等人所述方法制備，《醫(yī)藥化學雜志》(J.Med.Chem.)，381355(1995))的試驗對比著進行。從試驗化合物測得的抗病毒數(shù)據(jù)示于表1和3中，其中所有數(shù)據(jù)是用HRV血清型-14試驗獲得的，除非用括號另外注明。符號“ND”表示未測定該化合物的值。

抗柯薩奇病毒細胞培養(yǎng)測定法從美國典型培養(yǎng)物保藏中心(ATCC，Rockville，MD)購得A-21(CAV-21)和B3(CVB-3)型柯薩奇病毒。CAV-21或CVB-3細胞在含有10％胎牛血清(購自Life Technologies，Gaithersburg，MD)的最小基本培養(yǎng)基中生長。
本發(fā)明化合物保護細胞不受CAV-21或CVB-3感染的能力用XTT染色還原法測量。該方法詳見Weislow等人，J.Natl.Cancer Inst.，81577-586(1989)。H1-HeLa細胞分別以0.025或0.075的感染復數(shù)(m.o.i.)被CAV-21或CVB-3感染，或僅被培養(yǎng)基模擬感染。將H1-HeLa細胞以每孔4×104細胞的濃度植入96孔滴定板中，并與適當濃度的試驗化合物一起溫育。一天(CVB-3)或兩天(CAV-21)后，在試驗板中加入XTT/PMS，產(chǎn)生的甲臘產(chǎn)物的量用分光光度儀在450/650nm進行定量分析。計算EC50值，表示為化合物處理過的病毒感染細胞產(chǎn)生的甲產(chǎn)物與無化合物的未感染細胞產(chǎn)生的甲臘產(chǎn)物相比增加50％的化合物濃度。計算50％細胞毒性劑量(CC50)，表示為化合物處理過的未感染細胞產(chǎn)生的甲臘產(chǎn)物與無化合物的未感染細胞產(chǎn)生的甲臘產(chǎn)物相比降低50％的化合物濃度。治療指數(shù)(TI)的計算方法是用EC50除以CC50。
本發(fā)明化合物的試驗與對照化合物WIN 54954(得自Sterling-Winthrop Pharmaceuticals)，Pirodavir(得自JanssenPharmaceuticals)和Pleconaril(根據(jù)Diana等人所述方法制備，《醫(yī)藥化學雜志》(J.Med.Chem.)，381355(1995))的試驗對比著進行。從針對CAV-21和CVB-3的試驗化合物測得的抗病毒數(shù)據(jù)示于表4中。
抗艾柯病毒和腸病毒細胞培養(yǎng)測定法從ATCC(Rockville，MD)購得11型艾柯病毒(EV11)和70型腸病毒(EV70)。繁殖病毒原種，用MRC-5細胞(ATCC)進行抗病毒測定。細胞在含有10％胎牛血清(購自Life Technologies，Gaithersburg，MD)的最小基本培養(yǎng)基中生長。
本發(fā)明化合物保護細胞不受EV 11或EV 70感染的能力用XTT染色還原法(Weislow等人，J.Natl.Cancer Inst.，81577-586(1989)測量。MRC-5細胞分別以0.003或0.004的感染復數(shù)(m.o.i.)被EV11或EV70感染，或僅被培養(yǎng)基模擬感染。將感染或未感染的細胞以每孔1×104細胞的濃度植入試驗板中，并與適當濃度的試驗化合物一起溫育。四天后，在試驗板中加入XTT/PMS，產(chǎn)生的甲臘產(chǎn)物的量用分光光度儀在450/650nm進行定量分析。計算EC50值，表示為化合物處理過的病毒感染細胞產(chǎn)生的甲臘產(chǎn)物與無化合物的未感染細胞產(chǎn)生的甲臘產(chǎn)物相比增加50％的化合物濃度。計算50％細胞毒性劑量(CC50)，表示為化合物處理過的未感染細胞產(chǎn)生的甲產(chǎn)物與無化合物的未感染細胞產(chǎn)生的甲產(chǎn)物相比降低50％的化合物濃度。治療指數(shù)(TI)的計算方法是用EC50除以CC50。
本發(fā)明化合物的試驗與對照化合物Pirodavir(得自JanssenPharmaceuticals)和Pleconaril(根據(jù)Diana等人所述方法制備，《醫(yī)藥化學雜志》(J.Med.Chem.)，381355(1995))的試驗對比著進行。從針對菌株EV 11和EV 70的試驗化合物測得的抗病毒數(shù)據(jù)示于表5中。
到此為止，本說明書已經(jīng)描述了優(yōu)選實施方案和具體實施例。本領域技術(shù)人員都會理解，不背離本發(fā)明精神和范圍的各種改變和改進都是允許的。因此，應該理解，本發(fā)明不受上述詳細描述的限制，但是要受到所附權(quán)利要求及其等價物的限定。
權(quán)利要求
1.下式化合物或其可藥用鹽， 其中p是整數(shù)0-5；A11是CH或N，A12和各A13分別選自C(R61)(R61)，N(R61)，S，S(O)，S(O)2和O，A14是NH或NR61，其中各R61分別是H，烷基，?；蚍蓟瑮l件是在上述A11，A12，(A13)n，A14和C＝O構(gòu)成的式II中的環(huán)中不能有兩個以上雜原子連續(xù)出現(xiàn)；各R141分別是H或低級烷基；R51是H，烷基，酰基或芳基；R52，R53和R54分別選自H，羥基，烷基，?；头蓟?；或R52，R53和R54其中任意兩個一起構(gòu)成＝O或＝C(R57)(R58)，其中R57和R58各自分別選自H，烷基，CO2(C1-C6)烷基，C(O)N(C1-C6)烷基和CO2(芳基)；及R55和R56各自分別是H或氮的適當保護基。
2.下式化合物或其可藥用鹽， 其中p是整數(shù)0-5；R51是H，烷基，?；蚍蓟?；R52，R53和R54分別選自H，羥基，烷基，酰基和芳基；或R52，R53和R54其中任意兩個一起構(gòu)成＝O或＝C(R57)(R58)，其中R57和R58各自分別選自H，烷基，CO2(C1-C6)烷基，C(O)N(C1-C6)烷基和CO2(芳基)；及R55和R56各自分別是H或氮的適當保護基。
3.根據(jù)權(quán)利要求2的化合物或其可藥用鹽，其中n是1或2。
4.根據(jù)權(quán)利要求3的化合物或其可藥用鹽，其中R52，R53和R54分別獨立地選自H，烷氧基，羥基和羰基。
5.根據(jù)權(quán)利要求2的化合物或其可藥用鹽，選自 其中PN是氮的適當保護基，及q是1或2。
6.根據(jù)權(quán)利要求2的化合物或其可藥用鹽，選自 和 其中Boc是叔丁氧羰基。
全文摘要
式(I)的肽和肽模擬化合物，結(jié)構(gòu)式中的各變量在說明書中定義，這些化合物有效地抑制或阻斷小RNA病毒3C蛋白酶的生物活性。這些化合物以及含有這些化合物的藥物組合物被用于治療被一種或多種小RNA病毒如RVP感染的患者或宿主。本發(fā)明還提供了制備這些化合物的中間體和合成方法。
文檔編號C07DGK1821226SQ20041004463
公開日2006年8月23日 申請日期1999年1月5日 優(yōu)先權(quán)日1998年4月30日
發(fā)明者P·S·德拉格維奇, J·T·馬拉科維茨, T·J·普林斯, J·G·提克, S·E·韋伯, 周茹, T·O·約翰遜 申請人:阿格羅尼制藥公司