專利名稱：白果內(nèi)酯配位色譜分離純化方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種植物活性成分的分離純化方法，確切地說是白果內(nèi)酯配位色譜分離純化方法。
背景技術：
白果內(nèi)酯是銀杏葉藥用活性成分的重要組份之一。也是保護腦細胞、神經(jīng)元細胞免遭缺血、缺氧性損傷作用的關鍵成分之一。實現(xiàn)白果內(nèi)酯的高效分離純化具有現(xiàn)實意義。
銀杏葉粗提物(含白果內(nèi)酯15％左右，又稱白果內(nèi)酯初提物)中白果內(nèi)酯通常與其他銀杏內(nèi)酯、銀杏黃酮以及糖類、膠體等混為一體呈粘膏狀，分離、純化白果內(nèi)酯極為困難。
色譜是一種廣為使用的現(xiàn)代分離技術。但傳統(tǒng)的色譜柱用于分離純化白果內(nèi)酯或達不到預期的分離純化效果，或分離柱成本過高(如使用反相色譜填料)。

發(fā)明內(nèi)容
色譜分離又稱柱層析。其包括目標物和雜質(zhì)的原料在流動相(洗脫液)的作用下流經(jīng)固定相(色譜填料)以及流份收集、濃縮和干燥。本發(fā)明所稱的配位色譜分離就是在上述色譜分離介質(zhì)中引入配位劑，利用配位結(jié)合的高選擇性，即配位劑與白果內(nèi)酯或其他雜質(zhì)的非共價鍵合形成配合物，擴大白果內(nèi)酯與其他雜質(zhì)的物性差異，這種差異可以是空間結(jié)構的、可以是溶解性的、可以是電特性的、也可以是與分離介質(zhì)間的結(jié)合力的，如此等等，最終表現(xiàn)為擴大了白果內(nèi)酯與雜質(zhì)之間在色譜分離特性上的差異。從而提高色譜分離的效果和產(chǎn)品的純度。
所稱的引入配位劑有以下兩種方法。
一是柱前配位衍生化法。就是將配位劑與白果內(nèi)酯初提物(目標物)的乙醇溶液混合均勻發(fā)生配位反應，經(jīng)真空脫溶至干上色譜柱。初提物中含多酚類化合物和有機酸，先用弱堿性的鹽，如醋酸鈉、硼酸鈉等中和至弱酸性或中性，然后再加入配位劑進行配位反應。
二是固定相添加法。就是將配位劑與柱填料混合均勻后再裝柱，形成配位色譜柱。配位劑含量2～15％。當銀杏葉提取物在流動相作用下通過該配位色譜柱時，在配位劑的作用下，白果內(nèi)酯與其他產(chǎn)生較大的選擇性差異，從而提高分離效率。所述的柱填料可以硅膠、氧化鋁、葡聚糖凝膠、聚酰亞胺等常規(guī)色譜填料。
本發(fā)明所稱的配位劑可以是能形成配離子的無機物或者包合物或者是其混合配位劑。
所述的無機物如硝酸銀、硼酸、硼酸鈉、醋酸鈉、硫酸銅、氯化鋅、氯化鐵、氯化錳等中的一種或兩種以上混合配位劑。
所述的包合物如杯芳烴、環(huán)糊精等中的一種或兩種以上混合配位劑或者其與無機物的混合配位劑。
本方法得到的白果內(nèi)酯純度95％以上，回收率超過70％，比普通色譜法分別提高20％和15％以上。而且工藝簡單，經(jīng)濟適用，對環(huán)境友好。
具體實施例方式
1、將15％白果內(nèi)酯初提物用70％乙醇水溶解成溶液，依其多酚類化合物和有機酸的含量，加入NaAc的飽和水溶液，混合均勻使溶液成中性，反應完全后按摩爾比1∶1～3加入H3BO3的飽和水溶液，室溫放置過夜；將過夜溶液真空減壓濃縮至干，上硅膠柱，采用石油醚——乙酸乙酯的混合溶液梯度洗脫，混合溶劑中石油醚從100％變化到0％的同時，乙酸乙酯從0％變化到100％。分段收集含較純白果內(nèi)酯的流份，濃縮、結(jié)晶、干燥，可得95％以上純度白果內(nèi)酯，分離效率提高15％。
2、將15％白果內(nèi)酯初提物用70％乙醇水溶解成溶液，依其多酚類化合物和有機酸的含量，加入Na2B4O7的飽和水溶液，混合均勻使溶液呈中性，反應結(jié)束后按摩爾比1∶1～3加入H3BO3飽和水溶液，室溫放置過夜；將過夜溶液真空減壓濃縮至干，上硅膠柱，采用石油醚——甲酸乙酯的混合溶液梯度洗脫，混合溶劑中石油醚從100％變化到0％的同時，甲酸乙酯從0％變化到100％。分段收集含較純白果內(nèi)酯的流份，濃縮、結(jié)晶、干燥，可得95％以上純度白果內(nèi)酯，分離效率提高15％。
3、將200～400目硅膠與氯化鋅混合，氯化鋅含量2％，制成配位色譜柱，用石油醚-甲酸乙酯作流動相，梯度洗脫，分離白果內(nèi)酯，濃縮、結(jié)晶、干燥，得到95％以上純度白果內(nèi)酯，分離效率提高10％。
4、將200～400目硅膠與氯化鐵混合，氯化鐵含量5％，制成配位色譜柱，用石油醚-乙酸乙酯作流動相，梯度洗脫，分離白果內(nèi)酯，濃縮、結(jié)晶、干燥，得到95％以上純度白果內(nèi)酯，分離效率提高15％。
5、將氧化鋁與氯化錳混合，氯化錳含量15％，制成配位色譜柱，用石油醚——甲酸乙酯流動相，梯度洗脫，分離白果內(nèi)酯，濃縮、結(jié)晶、干燥，得到95％以上純度白果內(nèi)酯，分離效率提高10％。
6、將氧化鋁與硫酸銅混合均勻，使硫酸銅含量10％，制成配位色譜柱，用石油醚——乙酸乙酯梯度洗脫，分離白果內(nèi)酯，濃縮、結(jié)晶、干燥，得到95％以上純度白果內(nèi)酯，分離效率提高15％。
權利要求
1.一種白果內(nèi)酯配位色譜分離純化方法，包括含白果內(nèi)酯初提取物在流動相作用下流經(jīng)固定相以及流份收集、濃縮和干燥，其特征在于在含白果內(nèi)酯初提取物中或者柱填料中添加配位劑。
2.根據(jù)權利要求1所述的分離純化方法，其特征在于所述的白果內(nèi)酯初提物中添加配位劑的方法是先用醋酸鈉或硼酸鈉中和白果內(nèi)酯初提物乙醇溶液至弱酸性或中性，再加入配位劑，配位反應完成后脫溶濃縮至干。
3.根據(jù)權利要求1所述的分離純化方法，其特征在于所述的柱填料中添加配位劑的方法是在常規(guī)色譜填料中添加2～15％的氯化鋅和/或氯化鐵和/或氯化錳和/或硫酸銅。
4.根據(jù)權利要求1或2或3所述的分離純化方法，其特征在于所述的配位劑為能形成配離子的無機物或者包合物或者其混合配位劑。
5.根據(jù)權利要求4所述的分離純化方法，其特征在于所述的無機物為硝酸銀、硼酸、硼酸鈉、醋酸鈉、硫酸銅、氯化鋅、氯化鐵、氯化錳。
6.根據(jù)權利要求4所述的分離純化方法，其特征在于所述的是包合物，如環(huán)糊精。
全文摘要
一種白果內(nèi)酯配位色譜分離純化方法，包括白果內(nèi)酯初提物在流動相作用下流經(jīng)固定相以及流份收集、濃縮和干燥，其特征在于在含白果內(nèi)酯初提物中或柱填料添加配位劑。所述的配位劑為能形成配離子的無機物或者包合物等，如硝酸銀、硼酸、硼鈉、醋酸鈉、硫酸鈉、氯化鋅、氯化鐵、氯化錳、杯芳烴、環(huán)糊精等。本方法得到的白果內(nèi)酯純度95％以上，回收率超過70％，而且工藝簡單，經(jīng)濟適用，對環(huán)境友好。
文檔編號C07D493/22GK1569858SQ200410014878
公開日2005年1月26日 申請日期2004年5月10日 優(yōu)先權日2004年5月10日
發(fā)明者潘見 申請人:潘見