一種工業(yè)制備色譜純化長(zhǎng)春瑞濱的方法
【專利說(shuō)明】
[0001]
技術(shù)領(lǐng)域
[0002] 本發(fā)明涉及長(zhǎng)春瑞濱的分離純化技術(shù)，特別是涉及一種一種工業(yè)制備色譜純化長(zhǎng) 春瑞濱的方法，屬化學(xué)制藥領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0003] 長(zhǎng)春瑞濱(英文名：vinorelbine)是上世紀(jì)90年代上市的植物類抗腫瘤藥物，至 今仍是美國(guó)國(guó)家綜合癌癥指南推薦的乳腺癌、非小細(xì)胞肺癌等常見惡性腫瘤的一線化療藥 物，并被廣泛用于卵巢癌、淋巴瘤等其他惡性腫瘤。它通過(guò)與微管蛋白結(jié)合，使細(xì)胞在有絲 分裂過(guò)程中微管形成障礙，結(jié)構(gòu)式如下：
長(zhǎng)春瑞濱 國(guó)內(nèi)對(duì)長(zhǎng)春瑞濱工業(yè)級(jí)分離純化方法研究的不多。中國(guó)專利CN10781322A公開了一種 長(zhǎng)春瑞濱粗品的分離純化方法，粗品經(jīng)堿性氧化鋁柱洗脫后，得到初純品，再經(jīng)C18反相填 料柱洗脫，洗脫液經(jīng)二氯甲烷萃取、再用甲醇重結(jié)晶得到長(zhǎng)春瑞濱純品； 中國(guó)專利CN102199165A公開了長(zhǎng)春瑞濱粗品經(jīng)硅膠柱層析、堿性氧化鋁柱層析后得 到高純度產(chǎn)品的工藝，但該工藝步驟繁多，生產(chǎn)成本高，不適宜工業(yè)化生產(chǎn)。
[0004] 中國(guó)專利CN103788117A公開了長(zhǎng)春瑞濱作為中間產(chǎn)品的小試純化工藝，經(jīng)過(guò)硅 膠柱層析，產(chǎn)品純度可達(dá)99%以上，但收率僅為27%左右，該工藝經(jīng)濟(jì)性低，不適宜工業(yè)化生 產(chǎn)。
[0005] 本發(fā)明研究了一種工業(yè)制備色譜制備高純度長(zhǎng)春瑞濱的方法，產(chǎn)品純度高（98% 以上)，且工藝收率穩(wěn)定，適合工業(yè)化大生產(chǎn)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 針對(duì)長(zhǎng)春瑞濱純化效率低、工藝復(fù)雜等難題，本發(fā)明的目的是提供一種高純度、操 作性強(qiáng)、適合工業(yè)化生產(chǎn)的長(zhǎng)春瑞濱的純化方法。
[0007] 為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案： 一種長(zhǎng)春瑞濱的純化方法，包括如下步驟： (1) 采用有機(jī)溶劑A溶脹后的硅膠為色譜柱填料制備色譜柱； (2) 用有機(jī)溶劑A將長(zhǎng)春瑞濱粗品溶解后加入上述色譜柱； (3) 采用梯度淋洗的方法對(duì)色譜柱進(jìn)行洗脫，依次用體積比逐漸減小的有機(jī)溶劑A/有 機(jī)溶劑B混合液作為洗脫液進(jìn)行洗脫，收集主成份流出液，最后用溶劑洗下殘留物； (4) 減壓濃縮回收洗脫劑，得到高純度長(zhǎng)春瑞濱，純度98wt%以上，收率為60~98%。
[0008] 在上述制備方法中： 步驟（1)中，所采用硅膠為100~400目； 步驟（1)中，所述有機(jī)溶劑A為二氯甲烷、正丁醇、甲基異丙酮、乙酸乙酯、氯仿、二氧六 環(huán)中的一種； 步驟（2)中，長(zhǎng)春瑞濱上樣量為1~6 (w/w%)，進(jìn)料量為制備色譜柱體積的1~12% ; 步驟（3 )中，所述有機(jī)溶劑B為丙酮、乙腈、二甲基甲酰胺、甲醇、二甲亞砜中的一種； 步驟（3)中，采用恒壓恒流栗進(jìn)洗脫劑，洗脫劑依次為溶劑A:B=99 :1~75 :1 (v/v)、溶 劑A:B=65 :1~45 :1 (v/v)、溶劑A:B=45 :1~15 :1 (v/v)，洗脫劑用量為柱體積的200~ 500%，洗脫流速為每分鐘洗脫柱體積的1~10% ;制備色譜柱運(yùn)行的壓力為0. 1~0. 7MPa; 步驟（3)中，洗脫液分段收集，收集分兩段，第一段收集溶劑A:B=65:1~45:1 (v/v)餾 分，為含量較低的長(zhǎng)春瑞濱洗脫液；第二段收集溶劑A:B=45:1~15:1 (v/v)餾分，主要為 高濃度長(zhǎng)春瑞濱洗脫液。
[0009] 步驟（3)中，采用溶劑A:B=15 :1~5 :l(v/v)洗脫殘留物。
[0010] 本發(fā)明以長(zhǎng)春瑞濱粗品為起始原料，通過(guò)硅膠工業(yè)制備色譜純化分離，實(shí)現(xiàn)高純 度長(zhǎng)春瑞濱的制備。本發(fā)明具有如下優(yōu)點(diǎn)： 1、 產(chǎn)品純度高，該方法可使長(zhǎng)春瑞濱的純度達(dá)到98%以上，收率為60~98%。固定相穩(wěn) 定，可重復(fù)使用； 2、 本發(fā)明使用的洗脫劑易回收，可反復(fù)使用，生產(chǎn)成本低； 3、 工藝過(guò)程簡(jiǎn)單，設(shè)備一次性投入小，能耗低，可操作性強(qiáng)，適合工業(yè)化生產(chǎn)。
【附圖說(shuō)明】
[0011] 圖1是本發(fā)明實(shí)施例1采用的長(zhǎng)春瑞濱粗品原料的液相色譜分析圖譜。
[0012] 圖2是本發(fā)明實(shí)施例1得到的長(zhǎng)春瑞濱產(chǎn)品的液相色譜分析圖譜。
【具體實(shí)施方式】
[0013] 實(shí)施例1 1) 稱取5. 96kg300目硅膠，添加氯仿并攪拌，排出硅膠中氣泡，然后將硅膠均勻地裝 到制備色譜中，柱尺寸為? 20cmX52cm，固定相硅膠壓實(shí)后，用洗脫劑沖洗2h，得到裝好的 制備色譜柱； 2) 將270g長(zhǎng)春瑞濱粗品（純度為67. 00%)用氯仿溶解，進(jìn)料，進(jìn)料量為300ml; 3) 采用恒壓恒流栗進(jìn)洗脫劑，先用氯仿：甲醇=90 :1溶劑洗脫2個(gè)床層，換用氯仿：甲 醇=40:1溶劑洗脫3個(gè)床層并收集洗脫液a，再換用氯仿：甲醇=30:1溶劑洗脫4個(gè)床層并 收集洗脫液b，最后換用氯仿：甲醇=15 :1的洗脫液洗脫制備色譜柱中殘留物； 4) 減壓回收洗脫液b，得到長(zhǎng)春瑞濱116g，液相色譜檢測(cè)純度為99. 72%，收率為 63. 94%〇
[0014]長(zhǎng)春瑞濱粗品原料的液相色譜分析圖譜如圖1所示，長(zhǎng)春瑞濱產(chǎn)品的液相色譜分 析圖譜如圖2所示。
[0015] 實(shí)施例2 1) 稱取6. 05kg400目硅膠，添加氯仿并攪拌，排出硅膠中氣泡，然后將硅膠均勻地裝 到制備色譜中，柱尺寸為? 20cmX52cm，固定相硅膠壓實(shí)后，用洗脫劑沖洗2h，得到裝好的 制備色譜柱； 2) 將268g長(zhǎng)春瑞濱粗品（純度為67%)用氯仿溶解，進(jìn)料，進(jìn)料量為280ml; 3) 采用恒壓恒流栗進(jìn)洗脫劑，先用氯仿：甲醇=95 :1溶劑洗脫2個(gè)床層，換用氯仿：甲 醇=45:1溶劑洗脫3個(gè)床層并收集洗脫液a，再換用氯仿：甲醇=35:1溶劑洗脫4個(gè)床層并 收集洗脫液b，最后換用氯仿：甲醇=15 :1的洗脫液洗脫制備色譜柱中殘留物； 4) 減壓回收洗脫液b，得到長(zhǎng)春瑞濱178g，液相色譜檢測(cè)純度為99. 1%，收率為98. 24%。
[0016] 實(shí)施例3 1) 稱取5. 98kg200目硅膠，添加氯仿并攪拌，排出硅膠中氣泡，然后將硅膠均勻地裝 到制備色譜中，柱尺寸為? 20cmX52cm，固定相硅膠壓實(shí)后，用洗脫劑沖洗2h，得到裝好的 制備色譜柱； 2) 將290g長(zhǎng)春瑞濱粗品（純度為79. 21%)用氯仿溶解，進(jìn)料，進(jìn)料量為320ml; 3) 采用恒壓恒流栗進(jìn)洗脫劑，先用氯仿：甲醇=90 :1溶劑洗脫3個(gè)床層，換用氯仿：甲 醇=40:1溶劑洗脫3個(gè)床層并收集洗脫液a，再換用氯仿：甲醇=30:1溶劑洗脫4個(gè)床層并 收集洗脫液b，最后換用氯仿：甲醇=10 :1的洗脫液洗脫制備色譜柱中殘留物； 4) 減壓回收洗脫液b，得到長(zhǎng)春瑞濱187g，液相色譜檢測(cè)純度為98. 31%，收率為 80. 03%〇
[0017] 實(shí)施例4 1) 稱取5. 96kg300目硅膠，添加二氯甲烷并攪拌，排出硅膠中氣泡，然后將硅膠均勻 地裝到制備色譜中，柱尺寸為? 20cmX52cm，固定相硅膠壓實(shí)后，用洗脫劑沖洗2h，得到裝 好的制備色譜柱； 2) 將290g長(zhǎng)春瑞濱粗品（純度為79. 21%)用二氯甲烷溶解，進(jìn)料，進(jìn)料量為320ml; 3) 采用恒壓恒流栗進(jìn)洗脫劑，先用二氯甲烷：乙腈=80 :1溶劑洗脫2個(gè)床層，換用二氯 甲烷：乙腈=35 :1溶劑洗脫3個(gè)床層并收集洗脫液a，再換用二氯甲烷：乙腈=25 :1溶劑洗 脫4個(gè)床層并收集洗脫液b，最后換用二氯甲烷：乙腈=5 :1的洗脫液洗脫制備色譜柱中殘 留物； 4) 減壓回收洗脫液b，得到長(zhǎng)春瑞濱212g，液相色譜檢測(cè)純度為98. 18%，收率為 90. 62%〇
[0018] 實(shí)施例5 1) 稱取5. 97kg400目硅膠，添加二氯甲烷并攪拌，排出硅膠中氣泡，然后將硅膠均勻 地裝到制備色譜中，柱尺寸為?