一種阿魏內(nèi)酯及其提取純化的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種阿魏內(nèi)酯的提取精制方法。通過研究發(fā)現(xiàn)，提取精制工藝為阿魏根莖粉末置于容器中，采用提取方法得到提取液，抽濾后濃縮濾液，濃縮液依次用石油醚（沸點(diǎn)30-60℃）、乙酸乙酯、正丁醇等倍量分別萃取3次,每層萃取液合并濃縮制成浸膏。將所得的乙酸乙酯層浸膏經(jīng)硅膠柱色譜分離，用石油醚-丙酮溶劑系統(tǒng)進(jìn)行洗脫，體積比為100:11的溶劑系統(tǒng)洗脫得餾分，合并后再經(jīng)硅膠柱色譜分離，氯仿/丙酮系統(tǒng)進(jìn)行梯度洗脫，得到阿魏內(nèi)酯混合物。阿魏內(nèi)酯粗品用適量甲醇溶解，用開口的ODS反相柱以甲醇：水（60:40）洗脫溶液以30ml/h流速洗脫，所得餾分合并揮干后，用甲醇溶解，經(jīng)凝膠柱除色素后，即得阿魏內(nèi)酯。此方法操作簡便，儀器設(shè)備簡單，且所用溶劑污染小、生產(chǎn)成本較低。
【專利說明】
一種阿魏內(nèi)酯及其提取純化的方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001]本發(fā)明屬于醫(yī)藥領(lǐng)域，涉及一種從民族藥阿魏藥材中提取和精制阿魏內(nèi)酯工藝。
【背景技術(shù)】
[0002]阿魏(Ferula)隸屬傘形科(Umbelliferae)又稱大茴香，因其具有難聞的臭味，有“魔鬼的糞便”之稱。世界上約有150種，現(xiàn)主要分布于地中海地區(qū)、非洲北部以及中亞及其鄰近地區(qū)。我國有26種I變種，分布在我國東北、山西、西藏、云南、江蘇和新疆等地，其中，產(chǎn)于新疆的有20種，主要分布在伊寧、阜康、托里、塔城、烏恰等地。該屬有許多藥用種類，有著悠久的使用歷史，早在古波斯就已經(jīng)將阿魏屬植物作為藥用，由新疆傳入中原，并為我國民族所接納融匯，漢、維、哈薩克、藏、蒙、泰等民族醫(yī)中都有應(yīng)用的習(xí)慣與歷史。其樹脂入藥，具有消積，殺蟲，治療瘧疾，痢疾等功效?！吨袊幍洹肥蛰d的是新疆阿魏Ferulasingkiangensis K.M.shen 和阜康阿魏 F.fukangensiaK.M.shen 的樹脂。
[0003]研究表明倍半萜、香豆素是阿魏屬植物的特征化學(xué)成分，已有文獻(xiàn)報(bào)道從該植物中分離鑒定了 12個倍半萜、香豆素類化合物。對阿魏的研究國內(nèi)外有大量的報(bào)道，近年來由于發(fā)現(xiàn)其中具有植物雌激素活性成分和抗癌性物質(zhì)而倍受人們關(guān)注。
[0004]目前提取分離阿魏內(nèi)酯的方法缺乏相關(guān)資料及報(bào)道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明的第一個目的在于提供一種工藝簡單、成本低、效率高、適用于工業(yè)化生產(chǎn)的提取分離阿魏內(nèi)酯的方法。通過從阿魏中提取、柱色譜分離，精致得到阿魏內(nèi)酯。
[0006]本發(fā)明的第一個目的由如下技術(shù)方案實(shí)施:
一種阿魏內(nèi)酯的提取和精制工藝，其包括如下步驟(I)提取工序、(2)分離工序和(3)精制工序，即制得成品，其中:
(I)提取工序:將阿魏根莖粉末置于容器中，采用提取方法得到提取液，抽濾后濃縮濾液，濃縮液依次用石油醚(沸點(diǎn)30-60°C )、乙酸乙酯、正丁醇等倍量分別萃取3次，每層萃取液合并濃縮制成浸膏。
[0007](2)分離工序:將所得的乙酸乙酯層浸膏經(jīng)硅膠柱色譜分離，用石油醚-丙酮溶劑系統(tǒng)進(jìn)行洗脫，體積比為100:11的溶劑系統(tǒng)洗脫得餾分，合并后再經(jīng)硅膠柱色譜分離，氯仿/丙酮系統(tǒng)進(jìn)行梯度洗脫，得到阿魏內(nèi)酯粗品
(3)精制工序:阿魏內(nèi)酯粗品用適量甲醇溶解，用開口的ODS反相柱以甲醇:水(60:40)洗脫溶液以30ml/h流速洗脫，所得餾分合并揮干后，用甲醇溶解，經(jīng)凝膠柱除色素后，即得阿魏內(nèi)酯。
[0008]一種提取純化阿魏內(nèi)酯的方法，所述提取方法可以采用回流提取法、超聲波提取法、熱水提取法、冷浸法或微波采取法的任何一種。
[0009]一種提取純化阿魏內(nèi)酯的方法，所述提取方法采用乙醇回流提取法，S卩加入所述阿魏根莖粉末重量10?30倍量的30?95%濃度乙醇，加熱回流提取I?6次，每次提取所用時間為I?3小時，趁熱抽濾，合并濾液，回收濾液至無醇,水溶液濃縮。
[0010]一種提取純化阿魏內(nèi)酯的方法，所述乙醇回流提取法采用加入所述阿魏根莖粉末重量30倍量的70%乙醇，加熱回流提取3次，每次提取時間為2小時，趁熱過濾，合并濾液，回收濾液至無醇，水溶液濃縮。
[0011]一種提取純化阿魏內(nèi)酯的方法，將濃縮液依次用石油醚(沸點(diǎn)30-60°C)、乙酸乙酯、正丁醇等倍量分別萃取3次，每層萃取液合并濃縮制成浸膏。
[0012]一種提取純化阿魏內(nèi)酯的方法，將乙酸乙酯層浸膏用適量甲醇溶解上樣，選用石油醚-丙酮溶劑系統(tǒng)(體積比為100:11)在硅膠柱進(jìn)行洗脫，合并所得餾分，濃縮得到阿魏內(nèi)酯混合物。
[0013]一種提取純化阿魏內(nèi)酯的方法，將阿魏內(nèi)酯混合物用適量甲醇溶解在ODS反相柱上樣，選用甲醇:水(60:40)洗脫溶液以30ml/h的流速洗脫，合并所得餾分合，采用減壓蒸餾回收甲醇，得阿魏內(nèi)酯粗品。
[0014]一種提取純化阿魏內(nèi)酯的方法，將阿魏內(nèi)酯粗品用適量甲醇溶解在凝膠柱上樣，選用甲醇以5ml/h的流速洗脫，合并所得餾分合，采用減壓蒸餾回收甲醇，得阿魏內(nèi)酯。
[0015]下面將通過動物藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)，說明本發(fā)明涉及的阿魏內(nèi)酯對耐藥金黃色葡萄球菌的治療作用。
[0016](I)藥效學(xué)研究
阿魏內(nèi)酯對耐藥金黃色葡萄球菌致小鼠死亡的保護(hù)作用
取純系昆明種小鼠20只，隨機(jī)分成細(xì)菌感染對照組、阿魏內(nèi)酯組，共2組，每組10只，雌雄各半。用含有5%的胃膜素稀釋耐藥金黃色葡萄球菌為1.0X 109，每只鼠腹腔注射菌液
0.5ml,同時，治療組按442mg/kg的劑量灌胃給藥，12小時后第二次灌胃給藥。觀察并記錄感染后72h小鼠的死亡數(shù)，小鼠感染耐藥金黃色葡萄球菌后，24小時內(nèi)動物9只死亡。給藥組48小時內(nèi)未見有小鼠死亡，超過48小時死亡3只，提示阿魏內(nèi)酯可抑制耐藥金黃色葡萄球菌所致小鼠的死亡，實(shí)驗(yàn)證明阿魏內(nèi)酯在體內(nèi)有抗菌作用。
[0017](2)急性毒性試驗(yàn)結(jié)果
選擇昆明種體重20?22g清潔級小鼠24只，隨機(jī)分為4組，每組6只，雌雄各半。分別為阿魏內(nèi)酯100%、20%和2%3個濃度及對照組。禁食12小時，對各組小鼠按0.5ml/20g(體重)，24小時內(nèi)分多次灌胃給藥。給藥后觀察試驗(yàn)動物中毒表現(xiàn)和死亡情況，連續(xù)觀察14天。無一死亡，存活小鼠解剖未發(fā)現(xiàn)異常情況。
[0018](3)長期毒性試驗(yàn)研究
挑選大鼠80只，雌雄各半，長期毒性試驗(yàn)分高，中，低三個劑量組和空白對照組(Iml蒸餾水)灌胃，每天給藥一次，連續(xù)給藥90天，給藥期間注意觀察大鼠的活動、毛色、進(jìn)食、體重情況，給藥90天后停藥，進(jìn)行病理檢驗(yàn)，給藥高、中、低劑量組與空白對照組比較未發(fā)現(xiàn)顯著性差異，30天后，重復(fù)上述檢查，亦未發(fā)現(xiàn)毒副作用，表明阿魏內(nèi)酯毒性較小。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種阿魏內(nèi)酯的提取和精制工藝，其包括如下步驟(I)提取工序、(2)分離工序和(3)精制工序，即制得成品，其中: (1)提取工序:將阿魏根莖粉末置于容器中，采用提取方法得到提取液，抽濾后濃縮濾液，濃縮液依次用石油醚(沸點(diǎn)30-60°C )、乙酸乙酯、正丁醇等倍量分別萃取3次，每層萃取液合并濃縮制成浸膏； (2)分離工序:將所得的乙酸乙酯層浸膏經(jīng)硅膠柱色譜分離，用石油醚-丙酮溶劑系統(tǒng)進(jìn)行洗脫，體積比為100:11的溶劑系統(tǒng)洗脫得餾分，合并后再經(jīng)硅膠柱色譜分離，氯仿/丙酮系統(tǒng)進(jìn)行梯度洗脫，得到阿魏內(nèi)酯混合物； (3)精制工序:阿魏內(nèi)酯粗品用適量甲醇溶解，用開口的ODS反相柱以甲醇:水(60:40)洗脫溶液以30ml/h流速洗脫，所得餾分合并揮干后，用甲醇溶解，經(jīng)凝膠柱除色素后，即得阿魏內(nèi)酯。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的提取純化阿魏內(nèi)酯的方法，其特征在于:所述提取方法可以采用回流提取法、超聲波提取法、熱水提取法、冷浸法或微波采取法的任何一種。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的提取純化阿魏內(nèi)酯的方法，其特征在于:所述提取方法采用乙醇回流提取法，即加入所述阿魏根莖粉末重量10?30倍量的30?95%濃度乙醇，加熱回流提取I?6次，每次提取所用時間為I?3小時，趁熱抽濾，合并濾液，回收濾液至無醇，水溶液濃縮。4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種提取純化阿魏內(nèi)酯的方法，其特征在于:所述乙醇回流提取法采用加入所述阿魏根莖粉末重量30倍量的70%乙醇，加熱回流提取3次，每次提取時間為2小時，趁熱過濾，合并濾液，回收濾液至無醇,水溶液濃縮。5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的提取純化阿魏內(nèi)酯的方法，其特征在于:將濃縮液依次用石油醚(沸點(diǎn)30-60°C)、乙酸乙酯、正丁醇等倍量分別萃取3次，每層萃取液合并濃縮制成浸膏。6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的提取純化阿魏內(nèi)酯的方法，其特征在于:將乙酸乙酯層浸膏用適量甲醇溶解上樣，選用石油醚-丙酮溶劑系統(tǒng)(體積比為100:11)在硅膠柱進(jìn)行洗脫，合并所得餾分，濃縮得到阿魏內(nèi)酯混合物。7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的提取純化阿魏內(nèi)酯的方法，其特征在于:將阿魏內(nèi)酯混合物用適量甲醇溶解在ODS反相柱上樣，選用甲醇:水(60:40)洗脫溶液以30ml/h的流速洗脫，合并所得餾分合，采用減壓蒸餾回收甲醇，得阿魏內(nèi)酯粗品。8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的提取純化阿魏內(nèi)酯的方法，其特征在于:將阿魏內(nèi)酯粗品用適量甲醇溶解在凝膠柱上樣，選用甲醇以5ml/h的流速洗脫，合并所得餾分合，采用減壓蒸餾回收甲醇，得阿魏內(nèi)酯。9.根據(jù)權(quán)利要求1?8所述的任一種提取純化阿魏內(nèi)酯的方法制備阿魏內(nèi)酯。
【文檔編號】C07D311/16GK105820146SQ201510007764
【公開日】2016年8月3日
【申請日】2015年1月8日
【發(fā)明人】于航, 胡躍, 施法
【申請人】遼寧醫(yī)聯(lián)新藥研究所