專利名稱：澳洲茄胺鹽酸鹽的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及用于制造抗癌、平喘、抗炎、提高免疫力的中藥一類新藥的新藥源澳洲茄胺鹽酸鹽的制備方法。
背景技術(shù)：
國(guó)內(nèi)外已有龍葵、澳洲茄和黃果茄的化學(xué)成分，澳洲茄胺的檢測(cè)方法和具有抗S180、抗炎、升高血糖等作用的報(bào)導(dǎo)。中國(guó)發(fā)明專利00129122.X“澳洲茄胺鹽酸鹽及其生產(chǎn)方法和在醫(yī)藥上的應(yīng)用”給出了一種澳洲茄胺鹽酸鹽的生產(chǎn)方法，但該方法尚存在工藝復(fù)雜繁瑣，生產(chǎn)成本高，設(shè)備投資大，生產(chǎn)安全性差，生產(chǎn)周期長(zhǎng)，產(chǎn)品質(zhì)量、療效差等不足。

發(fā)明內(nèi)容
澳洲茄胺鹽酸鹽的分子結(jié)構(gòu) 分子式為C27H44ClNO2，分子量450.10理化性質(zhì)澳洲茄胺鹽酸鹽為白色針狀晶體，微溶于水，難溶于氯仿、丙酮、乙醚、乙醇，溶于甲醇。
本發(fā)明的目的是針對(duì)上述不足提供一種制備方法簡(jiǎn)便，產(chǎn)品純度高，抗癌、平喘、抗炎、提高免疫力藥效活性強(qiáng)，性質(zhì)穩(wěn)定的澳洲茄胺鹽酸鹽的制備方法。
本發(fā)明的澳洲茄胺鹽酸鹽的制備是以茄科植物龍葵(Solanum Nigrum L)、澳洲茄(Solanum aviculare parst)和黃果茄(Solanum xanthocar pum Schrad，etwendl)的生果或其全草為原料，其制備方法如下(1)原料處理及總生物堿的提取將龍葵、澳洲茄或黃果茄的生果或其全草經(jīng)篩選后，粉碎壓汁固液分離得果汁、果渣，用2～6％的醋酸水溶液浸取果渣，浸取2～3次，固液分離得浸液，合并果汁和浸液，放置沉降得上清液I；取上清液I加熱至沸除上浮物，過濾冷卻，將濾液放置沉降得上清液II；取上清液II加熱至80～90℃時(shí)加濃氨水或堿的水溶液至PH8～9，冷卻沉降除上清液，將下濁液離心固液分離，得膏狀粗提物，本發(fā)明將上述工藝稱酸浸取堿沉淀提取法。
將膏狀粗提物再用2～6％的醋酸水溶液浸取，浸取2～3次，固液分離得浸液，放置沉降得上清液；取上清液加熱至沸除上浮物，過濾冷卻，將濾液放置沉降得上清液；取上清液加熱至80～90℃時(shí)加濃氨水或堿的水溶液至PH8～9，冷卻沉降除上清液，將下濁液離心固液分離，干燥后得龍葵、澳洲茄或黃果茄中的總生物堿，其主要成分為α、β、γ-澳洲茄堿、邊緣茄堿四種生物堿的混合物。
(2)澳洲茄胺鹽酸鹽的制備用含2～10％鹽酸的乙醇溶液或2-10％鹽酸水溶液溶解總生物堿，固液重量比為1∶30～40，水解加熱回流2～3小時(shí)，冷卻過濾，再用乙醇、水洗至中性后干燥，得粗澳洲茄胺鹽酸鹽；用含2～10％堿的乙醇溶液溶解粗澳洲茄胺鹽酸鹽，加熱回流1～2小時(shí)，熱過濾，冷卻吸濾水洗至中性，干燥結(jié)晶后將其溶于95％乙醇中加熱至沸，固液重量比1∶20-40，在60-80℃攪拌下向溶液中緩緩加入鹽酸水溶液，至結(jié)晶析出，冷卻結(jié)晶吸濾，用乙醇、水洗至中性，干燥后得澳洲茄胺鹽酸鹽，本發(fā)明將上述工藝稱堿性醇溶解酸性醇結(jié)晶法。
本發(fā)明制備方法(1)中，也可將上清液II用已有技術(shù)離子交換層析法提純分離，洗脫，濃縮后得總生物堿。
用本發(fā)明制備方法所得澳洲茄胺鹽酸鹽為白色針狀晶體，澳洲茄胺鹽酸鹽純度＞99.2％。經(jīng)吉林省腫瘤研究所2002年12月10日的澳洲茄胺鹽酸鹽抗腫瘤藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)，北華大學(xué)中藥研究組2003年6月20日的澳洲茄胺鹽酸鹽及其制劑AD-1注射劑的小鼠移植性腫瘤抑制實(shí)驗(yàn)、免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)、抗癌機(jī)制實(shí)驗(yàn)、抗炎、平喘藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)等證明，本發(fā)明所得的澳洲茄胺鹽酸鹽是一種具有顯著抗癌、平喘、抗炎、提高免疫作用的中藥一類新藥的新藥源，具有如下藥效作用(1)抗癌作用藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明，澳洲茄胺鹽酸鹽20～60mg/kg腹腔注射給藥對(duì)小鼠移植性實(shí)體型腫瘤抑制率為60～86％；灌胃給藥對(duì)小鼠移植性實(shí)體型腫瘤抑制率為50～68％；澳洲茄胺鹽酸鹽5～20μg/ml對(duì)人體肝癌SMMC7701、人體肺癌NCI446、人體胃癌SGC7901、人體HeLa干細(xì)胞抑制率為100％；10～20μg/ml時(shí)，對(duì)人體白血病HL60干細(xì)胞抑制率為60～80％?？拱C(jī)制實(shí)驗(yàn)證明，澳洲茄胺鹽酸鹽的抗癌作用機(jī)理是，能顯著下調(diào)癌細(xì)胞C-myc基因和H-ras基因表達(dá)，抑制細(xì)胞增殖誘導(dǎo)細(xì)胞分化；能顯著下調(diào)癌細(xì)胞hTRT基因的表達(dá)，抑制端粒酶活性，抑制癌細(xì)胞生長(zhǎng)；能阻斷其DNA從G1期向S期轉(zhuǎn)化，抑制DNA合成從而起抗癌作用的。
(2)平喘作用藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明，澳洲茄胺鹽酸鹽腹腔注射10～30mg/kg，灌胃給藥50～100mg/kg能明顯對(duì)抗組織胺誘發(fā)的豚鼠哮喘P＜0.05，能顯著對(duì)抗卵清蛋白引起豚鼠支氣管痙攣P＜0.01；1×10-6mol/ml能顯著擴(kuò)張豚鼠支氣管平滑肌P＜0.01；(3)抗炎作用藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明，澳洲茄胺鹽酸鹽注射給藥10～30mg/kg，灌胃給藥60～200mg/kg能顯著對(duì)抗角叉菜膠引起小鼠足腫脹P＜0.01；能顯著對(duì)抗大鼠棉球肉芽腫P＜0.001。
(4)免疫作用免疫實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明，澳洲茄胺鹽酸鹽腹腔注射給藥10～30mg/kg、灌胃給藥60～200mg/kg能顯著提高小鼠的體液免疫水平P＜0.01；能顯著提高小鼠巨噬細(xì)胞吞噬能力P＜0.001。
本發(fā)明具有原料來源豐富廉價(jià)，制備方法采用醋酸作提取溶劑成本低，無毒、無污染，制備工藝及設(shè)備簡(jiǎn)便，生產(chǎn)周期短，產(chǎn)品純度高、藥效活性強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)。


附圖是本發(fā)明澳洲茄胺鹽酸鹽的制備方法的工藝流程圖。
具體實(shí)施例方式
下面結(jié)合附圖和實(shí)施例、試驗(yàn)例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步描述，但本發(fā)明并不限于實(shí)施例，本專業(yè)的普通技術(shù)人員作某些修改，均在本發(fā)明保護(hù)范圍內(nèi)。
實(shí)施例1以龍葵為原料制備澳洲茄胺鹽酸鹽參照附圖，用龍葵生果制備澳洲茄胺鹽酸鹽，其制備方法如下(1)稱取500kg10月中旬至10月下旬采收的龍葵未成熟果去雜物，用磨漿機(jī)粉碎固液分離得果汁、果渣，將龍葵果渣用3％醋酸水溶液浸取2次，固液重量比為1∶1，固液分離得浸液，合并果汁和浸液，放置沉降得上清液I。取上清液I加熱至沸，除上浮綠色膠體物，過濾冷卻，將濾液放置沉降得上清液II。取上清液II加熱至85℃時(shí)加濃氨水至PH8，冷卻沉降除去上清液得下濁液，將下濁液離心固液分離得膏狀粗提物。
用3％的醋酸水溶液溶解膏狀粗提物，固液重量比1∶30，加熱至沸，除上浮綠色膠體物，過濾冷卻沉降，取上清液加熱至80℃時(shí)，加濃氨水至PH8，冷卻沉降，除上清液，將下濁液沉淀物離心固液分離干燥得龍葵總生物堿。
(2)將龍葵總生物堿溶于含5％鹽酸的95％乙醇溶液中，固液重量比為1∶40，加熱至全溶吸濾，濾液水浴加熱至沸，水解2小時(shí)，冷卻吸濾，水洗至中性，用80％乙醇洗滌3次后干燥，得粗澳洲茄胺鹽酸鹽。
將粗澳洲茄胺鹽酸鹽加熱溶于含3％NaOH的95％乙醇溶液，加熱至沸回流1小時(shí)，熱過濾，其濾液冷卻結(jié)晶，吸濾，水洗至中性，干燥得片狀結(jié)晶。將片狀結(jié)晶溶于95％乙醇，固液重量比1∶30，加熱至沸攪拌下緩緩加濃鹽酸至結(jié)晶沉淀完全，充分冷卻吸濾，用乙醇洗3次后，再用水洗至中性，干燥后得澳洲茄胺鹽酸鹽216g，經(jīng)高效液相色譜法測(cè)定純度99.86％。
實(shí)施例2以黃果茄為原料制備澳洲茄胺鹽酸鹽參照附圖，用黃果茄生果制備澳洲茄胺鹽酸鹽，其制備方法如下(1)取500kg黃果茄生果，粉碎后固液分離得果汁、果渣，果渣用3％醋酸浸取2次，固液重量比1∶1，每次浸取30分鐘，固液分離得浸液，合并果汁和浸液，放置沉降得上清液I。取上清液I加熱至沸，除上浮綠色雜質(zhì)，過濾冷卻，放置沉降得上清液II。取上清液II加熱至80℃時(shí)加NaOH溶液至PH8，冷卻沉降除上清液，對(duì)下濁液離心固液分離得膏狀粗提物。
用3％醋酸水溶液溶解膏狀粗提物，固液比1∶30，加熱到沸，除上浮綠色膠體雜質(zhì)，熱過濾冷卻沉降，取上清液加熱至80℃時(shí)加NaOH水溶液至PH8，冷卻沉降除上清液，將下濁液離心固液分離干燥得黃果茄總生物堿。
(2)將黃果茄總生物堿用4％鹽酸水溶液溶解，固液比1∶40，加熱至沸2小時(shí)，冷卻吸濾，乙醇洗后水洗至中性，得粗澳洲茄胺鹽酸鹽。將粗澳洲茄胺鹽酸鹽用與實(shí)施例1(2)中相同的3％堿性醇溶解酸性醇結(jié)晶法提純得澳洲茄胺鹽酸鹽254g，經(jīng)高效液相色譜法測(cè)定純度99.60％。
實(shí)驗(yàn)例3以澳洲茄為原料制備澳洲茄胺鹽酸鹽參照附圖，用澳洲茄生果制備澳洲茄胺鹽酸鹽，其制備方法如下(1)取500kg澳洲茄生果，按實(shí)施例1(1)中制備方法得上清液II。將上清液II流經(jīng)苯乙烯磺酸型陽離子交換樹脂柱，控制流速至流出液不含生物堿為原則，當(dāng)樹脂交換生物堿達(dá)到飽和時(shí)，即流出液開始出現(xiàn)與SbCl2乙醇溶液呈紅紫色反應(yīng)為止，停止加液，用蒸餾水洗滌樹脂柱除去雜質(zhì)，至流出液無色透明為止，取出樹脂，在50℃以下干燥，用濃氨水濕潤(rùn)后，再裝入柱中，用95％乙醇洗脫，濃縮洗脫液至膏狀，干燥得澳洲茄總生物堿。
(2)將澳洲茄總生物堿按實(shí)施例1(2)制備方法得澳洲茄胺鹽酸鹽103g，經(jīng)高效液相色譜檢測(cè)樣品純度99.4％。
試驗(yàn)例1澳洲茄胺鹽酸鹽的化學(xué)結(jié)構(gòu)測(cè)試分析實(shí)施例所得澳洲茄胺鹽酸鹽送中國(guó)科學(xué)院長(zhǎng)春分院分析測(cè)試中心應(yīng)化所測(cè)試部作對(duì)照品(澳洲茄胺)和檢測(cè)樣品(澳洲茄胺鹽酸鹽)比較實(shí)驗(yàn)、澳洲茄胺鹽酸鹽化學(xué)結(jié)構(gòu)表征、檢測(cè)樣品化合物純度分析測(cè)試，2001年7月30日作出20131號(hào)“分析測(cè)試報(bào)告”。經(jīng)對(duì)測(cè)試所得澳洲茄胺鹽酸鹽的紫外吸收光譜圖、DSC圖、紅外光譜圖、質(zhì)子核磁共振譜圖、重水交換質(zhì)子核磁共振譜圖、二維1H-1H質(zhì)子相關(guān)核磁共振譜圖、反轉(zhuǎn)門控去偶13C核磁共振譜圖、13CDEPT核磁共振譜圖、二維13C-1H異核相關(guān)核磁共振譜圖、LCQ正、負(fù)離子電噴霧質(zhì)譜圖、X-射線衍射圖等譜圖解析、全結(jié)構(gòu)歸屬證明實(shí)施例所得化合物分子結(jié)構(gòu)為澳洲茄胺鹽酸鹽，分子式為C27H44ClNO2，分子量450.10；1H、13CNMR定量實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，化合物純度大于99.2％。
試驗(yàn)例2本發(fā)明制備方法與00129122.X號(hào)發(fā)明專利生產(chǎn)方法比較試驗(yàn)以制備生產(chǎn)1000克澳洲茄胺鹽酸鹽為例，比較兩方法的差異，其結(jié)果見下表。

經(jīng)比較證明，已有發(fā)明專利是用2-8倍量的易燃易爆價(jià)格高的有機(jī)溶劑乙醇或甲醇對(duì)原料和中間提取物進(jìn)行5次浸取處理，然后又對(duì)乙醇或甲醇提取液進(jìn)行5次減壓濃縮，經(jīng)多次提純工藝處理才得到澳洲茄胺鹽酸鹽產(chǎn)品，其生產(chǎn)成本高，工藝復(fù)雜繁瑣，設(shè)備投資大，生產(chǎn)安全性差，生產(chǎn)周期長(zhǎng)。而本發(fā)明制備方法采取與已有專利不同的提取工藝，提取時(shí)用3％醋酸水溶液和PH8-9氨水做為提取溶劑得到總生物堿，再經(jīng)3步工藝處理就可得到澳洲茄胺鹽酸鹽純品，其工藝簡(jiǎn)化，設(shè)備通用，成本低，生產(chǎn)周期短，生產(chǎn)安全性好，產(chǎn)品純度高。
權(quán)利要求
1.一種澳洲茄胺鹽酸鹽的制備方法，以茄科植物龍葵、澳洲茄和黃果茄的生果或其全草為原料，其特征在于制備方法如下(1)原料處理及總生物堿的提取將龍葵、澳洲茄或黃果茄的生果或其全草經(jīng)篩選后，粉碎壓汁固液分離得果汁、果渣，用2～6％的醋酸水溶液浸取果渣，浸取2～3次，固液分離得浸液，合并果汁和浸液，放置沉降得上清液I；取上清液I加熱至沸除上浮物，過濾冷卻，將濾液放置沉降得上清液II；取上清液II加熱至80～90℃時(shí)加濃氨水或堿的水溶液至PH8～9，冷卻沉降除上清液，將下濁液離心固液分離，得膏狀粗提物；將膏狀粗提物再用2～6％的醋酸水溶液浸取，浸取2～3次，固液分離得浸液，放置沉降得上清液；取上清液加熱至沸除上浮物，過濾冷卻，將濾液放置沉降得上清液；取上清液加熱至80～90℃時(shí)加濃氨水或堿的水溶液至PH8～0，冷卻沉降除上清液，將下濁液離心固液分離，干燥后得總生物堿；(2)澳洲茄胺鹽酸鹽的制備用含2～10％鹽酸的乙醇溶液或2-10％鹽酸水溶液溶解總生物堿，固液重量比為1∶3040，水解加熱回流2～3小時(shí)，冷卻過濾，再用乙醇、水洗至中性后干燥，得粗澳洲茄胺鹽酸鹽；用含2～10％堿的乙醇溶液溶解粗澳洲茄胺鹽酸鹽，加熱回流1～2小時(shí)，熱過濾，冷卻吸濾水洗至中性，干燥結(jié)晶后將其溶于95％乙醇中加熱至沸，固液重量比1∶20-40，在60-80℃攪拌下向溶液中緩緩加入鹽酸水溶液，至結(jié)晶析出，冷卻結(jié)晶吸濾，用乙醇、水洗至中性，干燥后得澳洲茄胺鹽酸鹽。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的制備方法，其特征在于制備方法(1)中，可將上清液II用離子交換層析法提純分離，洗脫，濃縮后得總生物堿。
全文摘要
本發(fā)明涉及用于制造抗癌、平喘、抗炎、提高免疫力的中藥一類新藥的新藥源澳洲茄胺鹽酸鹽的制備方法。本發(fā)明的澳洲茄胺鹽酸鹽的制備是以茄科植物龍葵(Solanum Nigrum L)、澳洲茄(Solanum aviculare parst)和黃果茄(Solanum xanthocar pum Schrad，et wendl)的生果或其全草為原料，采用獨(dú)特的酸浸取堿沉淀提取法、堿性醇溶解酸性醇結(jié)晶法提取澳洲茄胺鹽酸鹽，所得澳洲茄胺鹽酸鹽為白色針狀晶體，澳洲茄胺鹽酸鹽純度＞99.2％。本發(fā)明具有原料來源豐富廉價(jià)，制備方法采用醋酸作提取溶劑成本低，無毒、無污染，制備工藝及設(shè)備簡(jiǎn)便，生產(chǎn)周期短，產(chǎn)品純度高、藥效活性強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)。
文檔編號(hào)C07J71/00GK1629182SQ20041001118
公開日2005年6月22日 申請(qǐng)日期2004年10月29日 優(yōu)先權(quán)日2004年10月29日
發(fā)明者劉良, 劉芯辰, 崔淑華 申請(qǐng)人:劉良