專利名稱：11－β－羥基類固醇脫氫酶1型和2型抑制劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種化合物。特別地，本發(fā)明提供能夠抑制11β-羥基類固醇脫氫酶(11β-HSD)的化合物。
背景技術(shù)：
糖皮質(zhì)激素的作用在腎上腺皮質(zhì)中由膽固醇合成糖皮質(zhì)激素。在人體內(nèi)主要的糖皮質(zhì)激素是皮質(zhì)醇，這種激素的合成和分泌以晝夜節(jié)律、間斷的方式響應(yīng)來自腦垂體的促腎上腺皮質(zhì)激素(ACTH)，但是壓力、憂慮和感染也可以刺激這種激素的分泌。皮質(zhì)醇主要和皮質(zhì)激素運載蛋白(皮質(zhì)醇結(jié)合蛋白)或白蛋白結(jié)合進行循環(huán)并且對于生物過程來說只有小部分皮質(zhì)醇是游離的(5-10％)[1]。
皮質(zhì)醇具有廣泛的生理效應(yīng)，包括調(diào)節(jié)碳水化合物、蛋白質(zhì)和脂質(zhì)代謝，調(diào)節(jié)正常的生長和發(fā)育，影響認知功能，耐受壓力和鹽皮質(zhì)激素的活性。和胰島素相比，皮質(zhì)醇以相反的方向起作用即可刺激肝的葡萄糖異生作用，抑制外源葡萄糖的攝取并且增加血糖的濃度。糖皮質(zhì)激素在免疫反應(yīng)調(diào)節(jié)中也是必不可少的。當(dāng)以更高濃度循環(huán)時，糖皮質(zhì)激素是免疫抑制的并且可用作藥理學(xué)的抗炎劑。
象其他類固醇激素一樣，糖皮質(zhì)激素是親脂的并且可自由地透過細胞膜。皮質(zhì)醇主要和細胞內(nèi)的糖皮質(zhì)激素受體(GR)結(jié)合然后作為轉(zhuǎn)錄因子誘導(dǎo)糖皮質(zhì)激素敏感基因的表達，從而誘導(dǎo)蛋白質(zhì)的合成。
11β-HSD酶的作用在20世紀50年代第一次描述了通過11β-HSD皮質(zhì)醇(F)轉(zhuǎn)化為其無活性代謝物腎上腺皮質(zhì)素，但是直到最近才意識到這種轉(zhuǎn)化的生物學(xué)重要性[2]。在1983年，Krozowski等人指出鹽皮質(zhì)激素激素受體(MR)對糖皮質(zhì)激素和鹽皮質(zhì)激素具有同等的親合力[3]。由于皮質(zhì)激素的循環(huán)濃度比醛固酮高100倍并且在壓力或高活性時期甚至更高，還不清楚MR如何保持鹽皮質(zhì)激素特異性而不會持續(xù)被糖皮質(zhì)激素占據(jù)。早先，Ulick等人描述了已知的高血壓病“表觀鹽皮質(zhì)激素過量”(AME)，并且同時觀察到從腎上腺分泌的醛固酮實際上低于外周代謝所破壞的皮質(zhì)激素。這些發(fā)現(xiàn)導(dǎo)致了酶保護作用的啟示。通過在鹽皮質(zhì)激素依賴組織中皮質(zhì)醇轉(zhuǎn)化為腎上腺皮質(zhì)素，11β-HSD酶保護MR不被糖皮質(zhì)激素占據(jù)而是鹽皮質(zhì)激素特異的。由于在C-18位醛基的存在使醛固酮自身受到酶的保護。
在11β-HSD酶中的先天性缺陷會導(dǎo)致MR被皮質(zhì)醇過多占據(jù)和高血壓及在AME中見到的低血鉀癥狀。
11β-HSD的集中表明酶及其活動在MR依賴組織、腎臟和腮腺中高度存在。但是在MR不是鹽皮質(zhì)激素特異的并且通常被糖皮質(zhì)激素占據(jù)的組織中，11β-HSD在這些組織如心臟和海馬組織中不存在[5]。這項研究還表明在這些鹽皮質(zhì)激素依賴組織中11β-HSD的抑制作用導(dǎo)致MR的醛固酮特異性的缺失。
已經(jīng)證明存在兩種11β-HSD同工酶。二者都是在整個個體發(fā)育中廣泛保存的短鏈脂肪醇脫氫酶(SCAD)超家族的成員。作為脫氫酶11β-HSD2型將皮質(zhì)醇C-11位的仲醇基轉(zhuǎn)化為仲酮基，因此產(chǎn)生較低活性的代謝物腎上腺皮質(zhì)素。11β-HSD1型酶被認為在體內(nèi)主要作為還原酶，即其方向和2型相反[6][參見下文]。11β-HSD1型和2型只有30％的氨基酸同源性。
11β-HSD酶活性細胞內(nèi)皮質(zhì)醇的活性取決于糖皮質(zhì)激素的濃度并且能夠被調(diào)節(jié)和獨立的控制，而沒有包括激素的全部的分泌和合成。
11β-HSD 1型酶的作用通常接受的是，在體內(nèi)11β-HSD 1型的反應(yīng)方向和2型的脫氫作用相反。在體內(nèi)具有斷裂的1型基因的純合小鼠不能將腎上腺皮質(zhì)素轉(zhuǎn)化為皮質(zhì)醇，這為該酶的還原活性提供了進一步的證明[7]。11β-HSD 1型在許多主要糖皮質(zhì)激素調(diào)節(jié)的組織象肝臟、腦垂體、性腺、腦、脂肪和腎上腺中表達，但是對該酶在這些組織中的功能了解的還不多[8]。
在體內(nèi)腎上腺皮質(zhì)素的濃度高于皮質(zhì)醇的濃度，腎上腺皮質(zhì)素和結(jié)合球蛋白的結(jié)合也很弱，使得腎上腺皮質(zhì)素比生物可得的皮質(zhì)醇高很多倍。雖然皮質(zhì)醇由腎上腺皮質(zhì)分泌，但是有增長量的證據(jù)表明細胞內(nèi)的E向F的轉(zhuǎn)化在糖皮質(zhì)激素作用調(diào)節(jié)中可能是一個重要的機制[9]。
11β-HSD 1型允許某些組織將腎上腺皮質(zhì)素轉(zhuǎn)化為皮質(zhì)醇可能提高局部糖皮質(zhì)激素的活性并加強適應(yīng)性反應(yīng)和對抗能夠?qū)е禄钚蕴瞧べ|(zhì)激素減少的2型的活性[10]。壓力反應(yīng)的增強在腦中尤其重要并且可在海馬周圍發(fā)現(xiàn)了高水平的11β-HSD 1型，進一步證明了該酶的作用。在肝細胞成熟中11β-HSD 1型似乎也發(fā)揮著重要作用[8]。11β-HSD 1型酶的另一個新作用是在許多非甾體羰基化合物的解毒過程中，減少許多有毒化合物的羰基，這是增加溶解性的通常方法并且因此增加了它們的排泄。最近證明11β-HSD 1型酶在肺部組織是活性的[11]。1型的活性直到出生后才能觀察到，因此在嬰兒能夠代謝解毒這種化合物以前，在懷孕期間吸煙的母親會使她們的孩子受到煙草的有害影響。
11β-HSD 2型的作用正如早先已經(jīng)指出的，11β-HSD 2型將皮質(zhì)醇轉(zhuǎn)化為腎上腺皮質(zhì)素，因此保護了體內(nèi)的許多主要調(diào)節(jié)組織中的MR。使MR免于被糖皮質(zhì)激素占據(jù)的重要性可在患有AME或liquorice intoxification的病人中觀察到。2型酶的缺失或無活性會導(dǎo)致高血壓癥狀并且研究表明具有高血壓癥狀的病人具有增加的皮質(zhì)醇腎上腺皮質(zhì)素的尿排泄比。這連同已報道的放射標記的皮質(zhì)醇半衰期的增加一起表明11β-HSD 2型活性的降低[12]。
11β-HSD抑制劑的理論進展正如早先講到的，皮質(zhì)醇可對抗胰島素的作用即可刺激肝的葡萄糖異生作用，抑制外源葡萄糖的攝取并增加血糖濃度。皮質(zhì)醇的作用在患有葡萄糖耐受不良或糖尿病的病人中看來似乎提高了。11β-HSD1型酶的抑制作用將會增加葡萄糖的攝取并且抑制肝的葡萄糖異生作用，降低循環(huán)系統(tǒng)的葡萄糖水平。因此發(fā)展有效的11β-HSD 1型抑制劑對和提高的血糖水平有關(guān)的病癥有重要的治療潛力。
糖皮質(zhì)激素的過量能夠?qū)е律窠?jīng)功能紊亂并且還會損害認知功能。就阻斷腎上腺皮質(zhì)素向皮質(zhì)醇的轉(zhuǎn)化、減少神經(jīng)細胞功能紊亂和衰老伴隨的認知功能的缺失來說特異的11β-HSD 1型抑制劑可能是相當(dāng)重要的。
糖皮質(zhì)激素在免疫反應(yīng)調(diào)節(jié)部分中也發(fā)揮著重要作用[13]。糖皮質(zhì)激素能夠抑制細胞因子的產(chǎn)生和調(diào)節(jié)受體水平。它們還參與決定輔助性T(Th)淋巴細胞發(fā)育成Th1還是Th2表型。這兩種不同類型的Th細胞分泌不同特征的細胞因子，Th2主要存在于糖皮質(zhì)激素環(huán)境。通過抑制11β-HSD 1型，有助于Th1細胞因子的反應(yīng)。因此通過抑制皮質(zhì)醇的失活還有可能抑制11β-HSD 2型，這可能加強糖皮質(zhì)激素的抗炎效果。
在附加的權(quán)利要求中闡述了本發(fā)明的各方面。

發(fā)明內(nèi)容
在一個方面本發(fā)明提供具有式I的化合物 式I其中R1和R2之一為下式的基團
其中R4選自H和烴基，R5是烴基并且L是任選的連接基團，或R1和R2一起形成由以下基團取代的環(huán) 其中R3是氫或取代基，并且其中X選自S，O，NR6和C(R7)(R8)，其中R6選自氫和烴基，其中R7和R8各自獨立地選自H或烴基。
在一個方面本發(fā)明提供一種藥物組合物，含有(i)具有式I的化合物 式I其中R1和R2之一為下式的基團 其中R4選自H和烴基，R5是烴基并且L是任選的連接基團，或R1和R2
一起形成由以下基團取代的環(huán) 其中R3是氫或取代基，并且其中X選自S，O，NR6和C(R7)(R8)，其中R6選自氫和烴基，其中R7和R8各自獨立地選自H或烴基。
(ii)任選的和藥學(xué)上可接受的載體，稀釋劑，賦形劑或輔料混合。
在一個方面，本發(fā)明提供一種具有式I的化合物在醫(yī)藥的用途 式I其中R1和R2之一為下式的基團 其中R4選自H和烴基，R5是烴基并且L是任選的連接基團，或R1和R2一起形成由以下基團取代的環(huán)
其中R3是氫或取代基，并且其中X選自S，O，NR6和C(R7)(R8)，其中R6選自氫和烴基，其中R7和R8各自獨立地選自H或烴基。
在一個方面本發(fā)明提供一種化合物在制備用于治療和11β-HSD相關(guān)的病癥或疾病的藥物中的用途，其中化合物具有式I 式I其中R1和R2之一為下式的基團 其中R4選自H和烴基，R5是烴基并且L是任選的連接基團，或R1和R2一起形成由以下基團取代的環(huán)
其中R3是氫或取代基，并且其中X選自S，O，NR6和C(R7)(R8)，其中R6選自氫和烴基，其中R7和R8各自獨立地選自H或烴基。
若干優(yōu)點本發(fā)明一個主要的優(yōu)點在于本發(fā)明的化合物能夠作為11β-HSD抑制劑。該化合物可以抑制無活性11-酮類類固醇和其活性羥基等同物的互變。因此本發(fā)明提供可以控制無活性形式向活性形式轉(zhuǎn)變的方法，以及作為這種控制的結(jié)果而獲得的有益治療效果。更特別地但是非限制性地，本發(fā)明涉及人的腎上腺皮質(zhì)激素和皮質(zhì)醇的互變。
本發(fā)明的化合物的另一個優(yōu)點是在體內(nèi)它們是有效的11β-HSD抑制劑。
本發(fā)明的某些化合物也是有利的因為其可以是口服有效的。
本發(fā)明可以提供一種用于(i)調(diào)節(jié)碳水化合物代謝，(ii)調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)代謝，(iii)調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝，(iv)調(diào)節(jié)正常生長和/或發(fā)育，(v)影響認知功能，(vi)耐受壓力和鹽皮質(zhì)激素活性中的一種或多種的藥物。
本發(fā)明的某些化合物對于抑制肝的葡萄糖異生作用也是有益的。本發(fā)明還提供藥物以緩解糖尿病、肥胖(包括向心性肥胖)、神經(jīng)細胞的缺失和/或老年的認知缺損中內(nèi)源性糖皮質(zhì)激素的作用。因此在進一步的方面，本發(fā)明提供11β-HSD抑制劑在制備施用于患者以產(chǎn)生一種或多種治療效果的藥物的用途，所述治療效果選自抑制肝的葡萄糖異生作用、在脂肪組織和肌肉中增加胰島素敏感性，防止或減少由于糖皮質(zhì)激素增強的神經(jīng)毒性或神經(jīng)紊亂或破壞而引起的神經(jīng)細胞缺失/認知缺損。
從一個可選的方面來說，本發(fā)明提供一種治療患有選自下述病癥的人或動物的方法，所述疾病包括肝胰島素耐受、脂肪組織胰島素耐受、肌肉胰島素耐受、由于糖皮質(zhì)激素增強的神經(jīng)毒性而引起的神經(jīng)細胞缺失或紊亂以及上述病癥的任何聯(lián)合。所述方法包括將含有藥理上有效量本發(fā)明化合物施用于上述患者的步驟。
特別地當(dāng)藥物可能需要從早期施用時，本發(fā)明的某些化合物對于癌癥，如乳癌，以及(或是可選的)非惡性疾病，如防止自免疫疾病是有益的。
發(fā)明詳述在一個方面本發(fā)明提供具有式I的化合物 式I其中R1和R2之一為下式的基團 其中R4選自H和烴基，R5是烴基并且L是任選的連接基團，或R1和R2一起形成由以下基團取代的環(huán) 其中R3是氫或取代基，并且其中X選自S，O，NR6和C(R7)(R8)，其中R6選自氫和烴基，其中R7和R8各自獨立地選自H或烴基。
在一個方面本發(fā)明提供一種藥物組合物包括(i)具有上述式I的化合物(ii)任選的和藥學(xué)上可接受的載體，稀釋劑，賦形劑或輔料混合。
在一個方面本發(fā)明提供具有上述式I的化合物的在醫(yī)藥中的用途。
在一個方面本發(fā)明提供具有上述式I的化合物在制備用于治療和11β-HSD相關(guān)的病癥或疾病的藥物中的用途。
在一個方面本發(fā)明提供具有上述式I的化合物在制備用于治療和不利的11β-HSD水平相關(guān)的病癥或疾病的藥物中的用途。
在一個方面本發(fā)明提供具有上述式I的化合物在制備用于抑制11β-HSD活性的藥物中的用途。
在一個方面本發(fā)明提供具有上述式I的化合物制備用于抑制11β-HSD活性的藥物中的用途。
在一個方面本發(fā)明提供一種方法包括(a)使用一種或多種具有上述式I的候選化合物進行11β-HSD試驗；(b)確定上述一種或多種候選化合物能否調(diào)節(jié)11β-HSD的活性；和(c)選擇一種或多種能調(diào)節(jié)11β-HSD活性的上述候選化合物。
在一個方面本發(fā)明提供一種方法包括(a)使用一種或多種候選的具有上述式I的化合物進行11β-HSD試驗；(b)確定上述一種或多種候選化合物能否抑制11β-HSD的活性；和(c)選擇一種或多種能夠抑制11β-HSD活性的上述候選化合物。
在一個方面本發(fā)明提供·使用上述方法鑒別的一種化合物，·上述化合物的在醫(yī)藥中的用途，·一種藥物組合物，含有上述化合物，任選的和藥學(xué)上可接受的載體，稀釋劑，賦形劑或輔料混合，·上述化合物在制備用于治療和11β-HSD相關(guān)的病癥或疾病的藥物中的用途，和·上述化合物在制備用于治療和不利的11β-HSD水平相關(guān)的病癥或疾病的藥物中的用途。
為了便于參考，現(xiàn)在在適當(dāng)?shù)亩温錁祟}下討論本發(fā)明的這些和進一步的方面。但是在每一段落下的教導(dǎo)并不是用來限制每個特定的段落。
優(yōu)選方面在一個優(yōu)選方面本發(fā)明的化合物具有式II
式II在一個優(yōu)選方面L不存在。在這個方面本發(fā)明提供具有式I的化合物。
式I其中R1和R2之一為下式的基團 其中R4選自H和烴基，R5是烴基；或R1和R2一起形成由以下基團取代的環(huán) 其中R3是氫或取代基。
在一個優(yōu)選的方面本發(fā)明化合物的R1和R2一起形成由以下基團取代的環(huán) 在一個優(yōu)選的方面本發(fā)明的化合物的R1和R2一起形成碳環(huán)。
在一個優(yōu)選的方面本發(fā)明的化合物R1和R2一起形成六元環(huán)。
在一個優(yōu)選的方面本發(fā)明的化合物R1和R2一起形成六元碳環(huán)。
在一個優(yōu)選的方面本發(fā)明化合物中的R1和R2一起形成芳環(huán)。
本發(fā)明的優(yōu)選化合物是那些具有下式之一的化合物。
式III 式IV 式V 式VI
式VIa 式VII 式VIIa在本發(fā)明的優(yōu)選方面R3自氫，烴基，-S-烴基，-S-H，鹵素和N(R9)(R10)，其中R9和R10獨立地選自氫和烴基。
在本發(fā)明的優(yōu)選方面R3自氫，羥基，烷基優(yōu)選C1-C10烷基，C1-C6烷基，例如C1-C3烷基，甲基，乙基，正丙基，異丙基，正丁基，仲(sec)-丁基，特丁基，正戊基以及其它戊基異構(gòu)體，正己基以及其它己基異構(gòu)體，烷氧基優(yōu)選C1-C10烷氧基，C1-C6烷氧基，例如C1-C3烷氧基，甲氧基，乙氧基，丙氧基等，烷炔基，例如乙炔基，或鹵素，例如氟取代基。
R3為-S-烴基時，R3優(yōu)選自-S-烷基，-S-羧酸，-S-醚，和-S-酰胺，優(yōu)選-S-C1-10烷基，-S-C1-10羧酸，-S-C1-10醚，和-S-C1-10硫酰胺。
在本發(fā)明的優(yōu)選方面R3是-CH3。
本發(fā)明的進一步的優(yōu)選化合物是那些具有下式之一的化合物。
式Ia 式VIII式IX 式X 式Xa 式XI
式XIa在本發(fā)明進一步優(yōu)選方面中，例如當(dāng)化合物具有式Ia，式VIII，式IX，式X，式Xa，式XI，或式XIa時，R3選自氧，烴基，和N(R9)其中R9選自氫和烴基。更優(yōu)選地R3選自氧，C1-C10烯基，例如C1-C6烯基，以及C1-C3烯基，NH和N-C1-C10烷基，例如N-C1-C6烷基和N-C1-C3烷基。
在本發(fā)明進一步優(yōu)選方面中R4選自氫和C1-C10烷基，例如C1-C6烷基，和C1-C3烷基。優(yōu)選R4是氫。
在本發(fā)明進一步優(yōu)選方面中R4是下式的基團。
在這些方面，上文列出的基團 可以為下式
其中每個R5獨立地選自烴基。每個和其他R5可以相同或不同。在一個方案中這兩個R5基團是相同的。
在本發(fā)明的某些優(yōu)選方面中R5是環(huán)烴基。優(yōu)選R5是包括一個碳氫環(huán)的環(huán)烴基。
R5可以為取代環(huán)或非取代環(huán)。在本發(fā)明的某些優(yōu)選方面中R5是取代環(huán)。
優(yōu)選R5是碳環(huán)。
優(yōu)選R5是六元環(huán)。
優(yōu)選R5是六元碳環(huán)。更優(yōu)選R5是取代的六元碳環(huán)。
在本發(fā)明的某些優(yōu)選方面中R5為芳香環(huán)。更優(yōu)選R5是取代的芳香環(huán)。
在一個高度優(yōu)選的方面中R5是具有下式的基團 其中每個R11，R12，R13，R14和R15獨立地選自氫，鹵素，和烴基。
優(yōu)選每個R11，R12，R13，R14和R15獨立地自氫，鹵素，烷基，例如C1-6烷基，苯基，O-烷基，O-苯基，腈基，鹵烷基，例如CF3，CCl3和CBr3，羧基，-CO2H，CO2烷基，以及NH-乙?；?。
R11，R12，R13，R14和R15的兩個或更多可以連接形成環(huán)。R11，R12，R13，R14和R15的兩個或更多可以相鄰或不相鄰。該環(huán)可以為碳環(huán)或雜環(huán)。任選地該環(huán)可以被上述的R11，R12，R13，R14和R15取代基中的任何一個取代。當(dāng)R11，R12，R13，R14和R15的兩個或更多可以連接形成環(huán)，基團 可以提供萘基，喹啉基，四氫喹啉基，或苯并四氫吡喃基(benzothtrahydropyranyl)，每個基團可以是取代或非取代的。
取代基本發(fā)明的化合物可以具有與本文所說明的那些環(huán)系不同的取代基。進一步地以一般式的形式給出了本文的環(huán)系并且應(yīng)該象這樣解釋。在給定的環(huán)系中沒有任何特定說明的取代基表明該環(huán)元可以用任何部分取代而H僅僅是一個實例。該環(huán)系可以包括一個或多個不飽和度，例如某些方面，環(huán)系中的一個或多個環(huán)是芳香環(huán)。該環(huán)系可以為碳環(huán)或可以包括一個或多個雜原子。
本發(fā)明的化合物，尤其本發(fā)明的環(huán)系化合物可以含有與本文所說明的那些取代基不同的取代基。通過實例，這些不同的取代基可以為一個或多個的一個或多個鹵素基團，一個或多個氧基，一個或多個羥基，一個或多個氨基，一個或多個含硫基團，一個或多個烴基-例如氧烴基。
一般而言，本發(fā)明化合物的環(huán)系可以包括各種非干擾取代基。特別地，該環(huán)系可以包括一個或多個羥基，烷基尤其是低級(C1-C6)烷基，例如甲基，乙基，正丙基，異丙基，正丁基，仲(sec)-丁基，特丁基，正戊基和其它戊基異構(gòu)體，以及正己基和其它己基異構(gòu)體，烷氧基尤其低級(C1-C6)烷氧基，例如甲氧基，乙氧基，丙氧基等。烷炔基，如乙炔基，或鹵素，如氟取代基。
對于本發(fā)明的某些化合物，可以使用烴硫基取代該化合物。術(shù)語“烴硫基”指至少包括烴基(如本文所定義的)和硫基的基團，優(yōu)選-S-烴基，更優(yōu)選-S-碳氫化合物(hydrocarbon)。硫基任選被氧化。
優(yōu)選地，烴硫基是-S-C1-10烷基更優(yōu)選-S-C1-5烷基，更優(yōu)選-S-C1-3烷基，更優(yōu)選-S-CH2CH2CH3，-S-CH2CH3或-SCH3。
進一步的方面對于某些應(yīng)用，優(yōu)選化合物具有可逆作用。
對于某些應(yīng)用，優(yōu)選化合物具有不可逆的作用。
在一個具體方案中，本發(fā)明的化合物用于治療乳癌。
本發(fā)明的化合物可以是鹽的形式。
本發(fā)明還涉及用于制備本發(fā)明化合物的新中間體。例如，本發(fā)明涉及化合物的新的醇前體。通過進一步的實例，本發(fā)明涉及化合物的雙重保護前體(bis protecetd precursor)。在本文中有這些前體各自的實例。本發(fā)明還包括一種方法，該方法包括將那些前體各自或一起用于合成本發(fā)明的化合物。
類固醇脫氫酶11β類固醇脫氫酶可以縮寫為“11β-HSD”或“HD”。
在本發(fā)明某些方面，11β-HSD優(yōu)選為11β-HSD1型。
在本發(fā)明某些方面，11β-HSD優(yōu)選為11β-HSD2型。
類固醇脫氫酶抑制作用人們相信某些疾病狀況與HD活性有關(guān)是由于無活性腎上腺皮質(zhì)素向活性的皮質(zhì)醇的轉(zhuǎn)化。在與HD有關(guān)的疾病狀況中，希望抑制HD的活性。
這里，術(shù)語“抑制“包括減少和/或消除和/或屏蔽和/或防止HD的有害作用。
HD抑制劑根據(jù)本發(fā)明，本發(fā)明的化合物能夠作為HD抑制劑。
這里，本文使用的關(guān)于本發(fā)明化合物的術(shù)語“抑制劑”指能夠抑制HD活性-例如減少和/或消除和/或屏蔽和/或防止HD的有害作用的化合物。HD抑制劑可以作為拮抗劑。
使用實施例部分提出的適宜的試驗方案評價化合物抑制類固醇脫氫酶活性的能力。
需要指出的是本發(fā)明的化合物可以具有其它有益的特性，這對其抑制HD活性的能力是來說額外的或可選的。
烴基本文使用的術(shù)語“烴基”指至少包括C和H以及可任選地包括一種或多種其它適宜取代基的基團。這樣基團的實例可以包括鹵素、烷氧基、硝基、烷基、環(huán)基等。除取代基可能是環(huán)基外，取代基可結(jié)合形成環(huán)基。如果烴基包括多于一個的碳，那么那些碳原子沒有必要必定相互連接。例如，至少兩個碳通過適宜的單元或基團連接。因此，烴基可以包含雜原子。適宜的雜原子對于那些本領(lǐng)域技術(shù)人員來說是顯而易見的并且包括例如硫、氮和氧。烴基的一個非限制性實例是酰基。
典型的烴基是碳氫化合物基團。這里術(shù)語“碳氫化合物”指烷基、烯基、炔基中的任何一種，這些基團可以是直鏈、支鏈或環(huán)基或芳基。術(shù)語碳氫化合物還包括那些基團但其中那些基團任選被取代。如果碳氫化合物是其上具有取代基的支鏈結(jié)構(gòu)，那么取代基可位于碳氫化合物骨架或支鏈上；可選地，取代基位于碳氫化合物骨架和支鏈上。
在本發(fā)明的某些方面，一個或多個烴基獨立地選自任選地被取代的烷基，任選地被取代的鹵烷基，芳基，烷基芳基，烷基芳基烷基以及烯基。
在本發(fā)明的某些方面，一個或多個烴基獨立地選自C1-C10烷基，例如C1-C6烷基，和C1-C3烷基。典型的烷基包括C1烷基、C2烷基、C3烷基、C4烷基、C5烷基、C7烷基和C8烷基。
在本發(fā)明的某些方面，一個或多個烴基獨立地選自C1-C10鹵烷基、C1-C6鹵烷基、C1-C3鹵烷基、C1-C10溴烷基、C1-C6溴烷基、和C1-C3溴烷基。典型的鹵烷基包括C1鹵烷基、C2鹵烷基、C3鹵烷基、C4鹵烷基、C5鹵烷基、C7鹵烷基和C8鹵烷基。C1溴烷基、C2溴烷基、C3溴烷基、C4溴烷基、C5溴烷基、C7溴烷基和C8溴烷基。
在本發(fā)明的某些方面，一個或多個烴基獨立地選自芳基，烷基芳基，烷基芳基烷基，-(CH2)1-10-芳基，-(CH2)1-10-Ph，(CH2)1-10-Ph-C1-10烷基，-(CH2)1-5-Ph，(CH2)1-5-Ph-C1-5烷基，-(CH2)1-3-Ph，(CH2)1-3-Ph-C1-3烷基，-CH2-Ph和-CH2-Ph-C(CH3)3。芳基可以包含一個雜原子。因此芳基或一個或多個芳基可以是碳環(huán)或雜環(huán)。典型的雜原子包括硫、氮和氧，優(yōu)選氮。
在本發(fā)明的某些方面，一個或多個烴基獨立地選自-(CH2)1-10-環(huán)烷基，-(CH2)1-10-C3-10環(huán)烷基，-(CH2)1-7-C3-7環(huán)烷基，-(CH2)1-5-C3-5環(huán)烷基，-(CH2)1-3-C3-5環(huán)烷基，和-CH2-C3環(huán)烷基。
在本發(fā)明的某些方面，一個或多個烴基獨立地選自烯基。典型地烯基包括C1-C10烯基，C1-C6烯基，C1-C3烯基，例如C1，C2，C3，C4，C5，C6或C7烯基。在一個優(yōu)選的方面烯基包括1，2或3個C＝C鍵。在一個優(yōu)選的方案中烯基包括1個C＝C鍵。在某些優(yōu)選方面至少一個C＝C鍵或僅有C＝C鍵是烯基鏈的末端C，就是雙鍵位于環(huán)系鏈的遠端。
在本發(fā)明的某些方面，一個或多個烴基獨立地選自氧烴基。
氧烴基本文使用的術(shù)語“氧烴基“指至少包括C、H、O并且任選地包括一種或多種其它適宜取代基的基團。這樣取代基的實例可以包括鹵素、烷氧基、硝基、烷基、環(huán)基等。除取代基可能是環(huán)基外，取代基可結(jié)合形成環(huán)基。如果氧烴基包括多于一個碳，那么那些碳原子沒有必要必定相互連接。例如，至少兩個碳通過適宜的單元或基團連接。因此，氧烴基可以包含雜原子。適宜的雜原子對于那些本領(lǐng)域技術(shù)人員來說是顯而易見的并且包括例如硫、氮。
在本發(fā)明的一個具體方案中，氧烴基是含氧碳氫化合物(oxyhydrocarbon)基團。
這里術(shù)語“含氧碳氫化合物”指烷氧基、氧化烯基、氧化炔基中的任何一種，這些基團可以是直鏈、支鏈或環(huán)或氧化芳基。術(shù)語含氧碳氫化合物還包括那些基團但其中那些基團任選被取代。如果含氧碳氫化合物是其上具有取代基的支鏈結(jié)構(gòu)，那么取代基可位于碳氫化合物骨架或支鏈上；可選地，取代基位于碳氫化合物骨架和支鏈上。
典型地含氧碳氫化合物基團是式C1-6O(如C1-3O)。
測定雌激素活性的動物試驗?zāi)Ｐ?方案1)體內(nèi)雌激素的缺失可以使用動物模型，特別是使用切除卵巢的小鼠研究本發(fā)明的化合物。在這個模型中，雌激素類的化合物能夠刺激子宮的生長。
將化合物(10mg/kg/天，5天)口服施用于小鼠，另一組動物緊接受載體(丙二醇)。另外一組以10μg/天的量皮下給予雌激素化合物EMATE，施用5天。在研究結(jié)束時，取得子宮并稱重，以子宮重/整個體重×100表示結(jié)果。
對子宮生長無顯著的作用的化合物不是雌激素。
報道分子(REPORTERS)在本發(fā)明的試驗方法中可以使用不同種類的報道分子(也即篩選(as well as screen))，優(yōu)選的報道分子提供可方便檢測的信號(例如通過光譜學(xué))。通過實例，報道基因可以編碼催化改變光吸收特性的反應(yīng)的酶。
其它的方案包括酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)，放射免疫分析法(RIA)和熒光激活細胞分類術(shù)(FACS)。還可以使用雙位點單克隆基礎(chǔ)上的免疫分析，其使用單克隆抗體的和兩個非干擾抗原表位反應(yīng)。這些以及其它試驗方法在Hampton R等人(1990，SerologicalMethods，ALaboratory Manual，APS Press，St Paul MN)和MaddoxDE等人(1983，J Exp Med 15 8121 1)，以及其它地方中有描述。
報道分子的實例包括但不限于(β-半乳糖苷酶、轉(zhuǎn)化酶、綠色熒光蛋白、螢光素酶、氯霉素、乙酰轉(zhuǎn)移酶，(-葡糖醛酸糖苷酶、外切葡聚糖酶和葡萄糖淀粉酶?？蛇x地，當(dāng)和寡核苷酸探針結(jié)合時，將放射標記或熒光末端標記的核苷酸摻入初始轉(zhuǎn)錄物然后進行鑒別。
通過進一步的實例，有許多公司如PharmaciaBiotech(Piscataway，NJ)，Promega(Madison，WI)，以及USBiochemical公司(Cleveland，OH)供應(yīng)商業(yè)試劑盒和試驗程序方案。適宜的報道分子或標記物包括那些放射性核素、酶、熒光劑、化學(xué)發(fā)光劑、或發(fā)色劑，還包括底物，輔助因子，抑制劑，磁性微粒以及類似的物質(zhì)。教導(dǎo)使用這些標記物的專利包括US-A-3817837；US-A-3850752；US-A-3939350；US-A-3996345；US-A-4277437；US-A-4275149和US-A-4366241。
宿主細胞與本發(fā)明有關(guān)的術(shù)語“宿主細胞”包括任何含有適合于本發(fā)明化合物的靶區(qū)的細胞。
因此，本發(fā)明的一個進一步的具體方案提供用是本發(fā)明靶區(qū)的或表達本發(fā)明靶區(qū)的多核苷酸轉(zhuǎn)化或轉(zhuǎn)染的宿主細胞。優(yōu)選地用載體運送上述用于是靶區(qū)的多核苷酸或表達靶區(qū)的多核苷酸的復(fù)制和表達。應(yīng)選擇和上述載體相容的細胞并且可以例如是原核(例如細菌)、真菌、酵母或植物細胞。
革蘭氏陰性細菌E.Coli是廣泛用于異源基因表達的宿主細胞。但是大量的異源蛋白往往聚集在細胞內(nèi)。隨后從大量的E.Coli細胞內(nèi)蛋白質(zhì)純化希望得到的蛋白質(zhì)有時很困難。
和E.Coli形成對比的是，來自于Bacillus屬的細菌非常適合作為異源宿主，因為它們能夠分泌蛋白質(zhì)到培養(yǎng)基之中。其他適合作為宿主的細菌是那些來自于Streptomyces和Pseudomonas屬的細菌。
根據(jù)本發(fā)明多核苷酸編碼多肽的性質(zhì)，和/或?qū)λ磉_蛋白的進一步的處理要求，優(yōu)選真核宿主例如酵母或其他真菌。一般地，優(yōu)選酵母優(yōu)于真菌，因為它們易于操作。但是某些蛋白從酵母細胞分泌很少或在某些情況蛋白質(zhì)很難被恰當(dāng)處理(例如在酵母中組織糖分過多)。在這些情況中，應(yīng)該選擇不同的真菌宿主生物。
在本發(fā)明的范圍內(nèi)適合的表達宿主的實例是真菌例如Aspergillus種(例如在EP-A-0184438和EP-A-0284603中描述的那些)和Trichoderma種；細菌例如Bacillus種(例如在EP-A-0134048和EP-A-0253455種描述的那些)，Streptomyces種和Pseudomonas種；和酵母例如Kluyveromyces種(例如在EP-A-0096430中EP-A-0301670描述的那些)和Saccharomyces種。通過實例，典型的表達宿主可以選自Aspergillus niger，Aspergillusniger var.tubigenis，Aspergillus niger var.awamori，Aspergillus aculeatis，Aspergillus nidulans，Aspergillusorvzae，Trichoderma reesei，Bacillus subtilis，Bacilluslicheniformis，Bacillus amyloliquefaciens，Kluyveromyceslactis和Saccharomyces cerevisiae。
使用適合的宿主細胞-例如酵母、真菌和植物宿主細胞可以提供翻譯后修飾(例如豆蔻?；⑻腔?、截斷、投石(lapidation)和酪氨酸、絲氨酸或蘇氨酸磷酸化)，同時使用適合的宿主細胞對于本發(fā)明重組表達產(chǎn)物的獲得最佳生物活性是必須的。
生物和本發(fā)明有關(guān)的術(shù)語“生物”包括任何生物，其可以含有本發(fā)明的靶區(qū)和/或由此獲得產(chǎn)物。生物的實例包括真菌、酵母或植物。
和本發(fā)明有關(guān)的術(shù)語“轉(zhuǎn)基因生物”包括任何生物，其含有本發(fā)明的靶區(qū)和/或獲得的產(chǎn)物。
宿主細胞/宿主生物的轉(zhuǎn)化正如早先指出的，宿主生物可以是原核或真核生物。適合的原核生物的實例包括E.coli和Bacillus subtilis，在本領(lǐng)域關(guān)于原核宿主的轉(zhuǎn)化的教導(dǎo)已經(jīng)有眾多記載，例如參見Sambrook等人(Molecular CloningA Laboratory Manual，第二版，1989，ColdSpring Harbor Laboratory Press)和Ausubel等人CurrentProtocols in Molecular Biology，(1995)，John Wiley & Sons，Inc.
如果使用原核宿主，那么在轉(zhuǎn)化前需要對核苷酸的順序進行適當(dāng)?shù)男揎?例如去除內(nèi)含子。
在另一個具體方案中，轉(zhuǎn)基因生物可以是酵母。鑒此，酵母也已廣泛用作異源基因表達的載體。釀酒酵母種有很久的工業(yè)應(yīng)用歷史，包括用于異源基因表達。Goodey等人(1987，Yeast Biotechnology，D R Berry et al，eds，pp 401-429，Allen and Unwin，London)和King等人(1989，Molecular and Cell Biology of Yeasts，E FWaiton and G T Yarronton，eds，pp 107-133，Blackie，Glasgow)已對在釀酒酵母中的異源基因表達進行了綜述。
由于幾種原因，釀酒酵母很適合用于異源基因表達。首先，它對于人類來說是非致病的并且不能產(chǎn)生某些內(nèi)毒素。其次，經(jīng)過數(shù)個世紀出于不同目的的商業(yè)開發(fā)后，它具有了長久的安全使用歷史。這使其可被公眾廣泛接受。第三，對于這種生物的廣泛的商業(yè)應(yīng)用和研究是人們對其遺傳學(xué)和生理學(xué)以及大規(guī)模發(fā)酵特點有了充分的了解。
有關(guān)釀酒酵母中異源基因表達和基因產(chǎn)物分泌的原理的綜述，見EHinchcliffe E Kenny對在Saccharomyce cerevisiae中進行了綜述(1993，“Yeast as a vehicle for the expression of heterologousgenes”，Yeasts，Vol 5，Anthony H Rose and J Stuart Harrison，eds，2nd edition，Academic Press Ltd.)。
可以得到幾種類型的酵母載體，包括一體化載體，為了維持其需要和宿主的基因組重組，同時自主地復(fù)制質(zhì)粒載體。
為制備轉(zhuǎn)基因的釀酒酵母，通過將核苷酸序列插入設(shè)計用于在酵母中表達的構(gòu)建體中來制備表達構(gòu)建體。開發(fā)了幾種類型的用于異源表達的構(gòu)建體。構(gòu)建體含有在酵母中的活性啟動子，該啟動子和該核苷酸序列融合，通常使用酵母來源的啟動子，例如GAL1啟動子。通常使用酵母來源的信號序列，例如編碼SUC2信號肽的序列。在酵母中活性終止子終止表達系統(tǒng)。
為了轉(zhuǎn)化酵母，開發(fā)了幾種轉(zhuǎn)化方案。例如可通過Hinnen等人(1978，Proceedings of the National Academy of Sciences of theUSA 75，1929)；Beggs，J D(1978，Nature，London，275，104)；andIto，H等人(1983，J Bacteriology 153，163-168)的教導(dǎo)制備本發(fā)明的轉(zhuǎn)基因釀酒酵母。
使用不同選擇性的標記物選擇轉(zhuǎn)化的酵母細胞。用于轉(zhuǎn)化的標記物中是一些營養(yǎng)缺陷型的標記物例如LEU2、HIS4和TRP1，和顯性的抗生素耐受標記物如氨基葡糖苷抗生素標記物，如G418。
另外的宿主生物是植物。構(gòu)建經(jīng)基因修飾的植物的基本原則是在植物基因組中插入遺傳信息以獲得插入遺傳物質(zhì)的穩(wěn)定維持。存在幾種插入遺傳信息的技術(shù)，兩個主要的原理是直接引入遺傳信息和通過使用載體系統(tǒng)引入遺傳信息。這類技術(shù)的綜述可見Potrykus(AnnuRev Plant Physiol Plant Mol Biol 42205-225)和Christou(Agro-Food-Industry Hi-Tech March/April 1994 17-27)的論文。關(guān)于植物轉(zhuǎn)化的進一步教導(dǎo)可參見EP-A-0449375。
因此，本發(fā)明還提供了用是靶區(qū)或表達靶區(qū)的核苷酸序列轉(zhuǎn)化宿主細胞的方法。用核苷酸序列轉(zhuǎn)化的宿主細胞可在適于編碼蛋白質(zhì)表達的條件下培養(yǎng)。由重組細胞產(chǎn)生蛋白質(zhì)可以顯示在細胞表面。如果希望，同時也可被那些本領(lǐng)域技術(shù)人員了解，含編碼序列的表達載體可以用通過特定的原核或真核細胞膜直接分泌的信號序列進行設(shè)計。其他重組構(gòu)建體可以將該編碼序列和編碼多肽區(qū)域的核苷酸序列連接，這有利于純化可溶性蛋白質(zhì)(Kroll DJ等人(1993)DNA Cell Biol12441-53)。
變體/同源物/衍生物除了本文提到的特定氨基酸序列和核苷酸序列外，本發(fā)明還包括使用變體、同源物及其衍生物。這里，術(shù)語“同源性”等同于“同一性”。
在本發(fā)明的上下文中，所采用的同源序列包括可以至少是75、85或90％相同的氨基酸序列，優(yōu)選至少是95或98％相同的氨基酸序列。雖然同源性還可以被認為就是相似性(例如具有相似的化學(xué)特性/功能的氨基酸殘基)，但是在本發(fā)明的上下文中優(yōu)選使用序列同一性表達同源性。
可通過肉眼，或更通常的使用易得的序列比較程序進行同源性比較。這些商業(yè)可得的計算機程序能夠計算兩條或更多條序列間的同源百分數(shù)。
同源％可在緊鄰的序列上進行計算，例如將一個序列和其他序列平行排列，并且將在一個序列上的每個氨基酸直接和另一個序列上對應(yīng)的氨基酸進行比較，一次一個殘基。這被稱為“無縫”排列。這種無縫排列對僅在相對較少數(shù)量的殘基上進行。
盡管這是一種非常簡單和一致的方法，但是它無法考慮，例如，本來應(yīng)該相同的序列對，由于一個插入或缺失，將會導(dǎo)致隨后的氨基酸殘基不能恰當(dāng)比對，因此，在進行總體排列時，很有可能導(dǎo)致同源百分數(shù)的顯著降低。因此，多數(shù)序列比較方法的設(shè)計是為了產(chǎn)生最佳的排列，其中考慮到了可能的插入和缺失，不會不適當(dāng)?shù)赜绊懣傮w同源性評分。通過在序列排列中插入“縫隙”以試圖將局部同源性最大化，可以達到此目的。
但是，這些更復(fù)雜的方法給在此排列中發(fā)生的各縫隙分配了“縫隙罰分”，致使對于相同氨基酸的相同數(shù)目，具有盡可能少的縫隙的序列排列(在兩個對比序列之間反應(yīng)了較高的相關(guān)性)將比具有很多縫隙的獲得更高的評分。一般使用“類源縫隙成本”，即對于存在縫隙賦予相對高的成本，而對于該縫隙中的各序列殘基賦予較小的罰分。這是最常用的縫隙評分系統(tǒng)。高的縫隙罰分當(dāng)然產(chǎn)生具有較少縫隙的最佳排列。大多數(shù)排列程序允許修改縫隙罰分。但是，當(dāng)用這樣的軟件進行序列比較時，優(yōu)選使用缺省值。例如，當(dāng)使用GCG WisconsinBestfit軟件包(見下文)，對于氨基酸序列缺省縫隙罰分是每個縫隙為-12，而每個擴展為-4。
因此，最大同源性％的計算首先需要產(chǎn)生最佳排列，考慮縫隙罰分。進行此排列的計算機程序為GCG Wisconsin Bestfit軟件包(University of Wisconsin，U.S.A.；Devereux等，1984，NucleicAcids Research 12387)?？梢赃M行序列比較的其它軟件包括但不限于BLAST軟件包(見Ausubel等，1999，出處同上，第18章)、FASTA(Atschul等，1990，J.Mol.Biol.，403-410)和比較工具GENEWORKS軟件套裝。BLAST和FASTA都提供了離線和聯(lián)網(wǎng)檢索(見Ausubel等，1999，出處同上，第7-58頁至7-60頁)。但是，優(yōu)選使用GCG Bestfit程序。
其它可利用的參考資料見FEMS Microbiol Lett，1999年5月15日；174(2)247-50(及在FEMS Microbiol Lett，1999年8月1日；177(1)187-8刊發(fā)的勘誤表)。
盡管能夠以同一性形式測量最終同源性百分數(shù)，所述排列過程本身典型地不基于全或無的成對比較。相反，通常使用一種成比例的相似性評分矩陣，它能根據(jù)化學(xué)相似性或進化距離為每一種成對的比較確定得分。通常使用的這種矩陣的例子是BLOSUM62矩陣-用于BLAST程序組的缺省矩陣。如果已經(jīng)提供，GCG Wisconsin程序通常使用公共缺省值或客戶符號比較表(更多的細節(jié)參見用戶手冊)。對于GCG軟件包來說，優(yōu)選使用公共缺省值?；?qū)τ谄渌浖碚f，使用諸如BLOSUM62的缺省矩陣。
一旦所述軟件產(chǎn)生了最優(yōu)派了，就可以計算同源性％，優(yōu)選序列同一性％。所述軟件通常是將其作為序列比較的一部分而進行的，并且產(chǎn)生了數(shù)字結(jié)果。
序列還可以具有氨基酸殘基的缺失、插入或取代，這會產(chǎn)生同義變化(silent change)并且產(chǎn)生功能等價物。特意(deliberate)的氨基酸取代可以基于殘基的極性、電荷、溶解性、疏水性、水溶性，和/或兩親性的相似性進行，只要該物質(zhì)的的次級結(jié)合活性能夠保持。例如負電荷氨基酸包括天門冬氨酸和谷氨酸；正電荷氨基酸包括賴氨酸和精氨酸；和具有相似親水值的不帶電荷的極性首基的氨基酸包括白氨酸，異白氨酸，纈氨酸，甘氨酸，丙氨酸，天(門)冬酰胺，谷酰胺，絲氨酸，蘇氨酸，苯丙氨酸和酪氨酸。
例如，可以根據(jù)下表進行保守的取代。在第二欄同一組的氨基酸優(yōu)選和在第三欄的同一行的氨基酸相互取代。
表1

表達載體作為靶區(qū)使用的核苷酸序列或用于表達靶區(qū)的核苷酸序列可被摻入重組復(fù)制載體。該載體可以用來復(fù)制和表達相容性宿主細胞中和/或來自該宿主細胞的該核苷酸序列。通過使用包括啟動子/增強子和其它表達調(diào)節(jié)信號的控制序列控制表達?？梢允褂迷藛幼雍驮谠思毎芯哂泄δ艿膯幼??？墒褂媒M織特異或刺激特異的啟動子。還可以使用嵌合體啟動子，其包括來源于上文描述的兩種或多種不同啟動子的序列單元。
通過核苷酸序列的表達由宿主重組細胞產(chǎn)生的蛋白質(zhì)可以被分泌或者包含在細胞內(nèi)，這取決于使用的序列和/或載體?？梢杂眯盘栃蛄性O(shè)計編碼序列，其通過特定的原核或真核細胞膜直接分泌編碼序列的物質(zhì)。
融合蛋白靶區(qū)氨基酸序列可以以融合蛋白的形式產(chǎn)生，例如為幫助提取或純化。融合蛋白配體的例子包括谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶(GST)、6xHis、GAL4(DNA結(jié)合和/或反轉(zhuǎn)錄活性區(qū)域)和(-半乳糖苷酶。在融合蛋白配體和相關(guān)的蛋白序列之間還可以適當(dāng)?shù)陌ǖ鞍姿夥至盐稽c，以允許融合蛋白序列的去除。優(yōu)選融合蛋白不會妨礙靶區(qū)的活性。
融合蛋白可以與含有本發(fā)明物質(zhì)融合的抗原或抗原決定子。在這個具體方案中融合蛋白可以是非天然產(chǎn)生融合蛋白，其含有可作為佐劑，給免疫系統(tǒng)提供全身性刺激的物質(zhì)?？乖蚩乖瓫Q定子可以結(jié)合于該物質(zhì)的氨基酸或羧基末端。
在本發(fā)明的另一個具體方案中，該氨基酸序列可以和異源序列連接以編碼融合蛋白。例如為從多肽庫篩選能夠影響該物質(zhì)活性的試劑，編碼表達異源抗原表位的嵌合體物質(zhì)可能是有利的，該異源抗原表位可被商業(yè)可得的抗體識別。
治療本發(fā)明的化合物可以用作治療劑-例如在治療中應(yīng)用。
術(shù)語“治療”包括治療效果、緩解效果和預(yù)防效果。
治療可以是在人類或動物上，優(yōu)選雌性動物。
藥物組合物在一個方面，本發(fā)明提供一種藥物組合物，其含有本發(fā)明的一種化合物和任選地藥學(xué)上可接受的載體、稀釋劑或輔料(包括其組合)。
藥物組合物可以是在人類醫(yī)學(xué)或獸醫(yī)學(xué)上給人或動物使用，并且典型的包括任何一種或多種藥學(xué)上可接受的稀釋劑、載體或輔料。用于治療使用的可接受的載體或稀釋劑在藥物學(xué)領(lǐng)域是熟知的并且例如在Remington′s Pharmaceutical Sciences，Mack Publishing Co.(A.R.Gennaro編輯.1985)中有描述。藥物載體、輔料或稀釋劑的選擇要考慮預(yù)期的給藥途徑和標準的藥物實踐。作為載體、賦形劑或稀釋劑，或除此以外，藥物組合物可以含有任何適宜的粘合劑、潤滑劑、助旋劑、包衣材料、增溶劑。
在藥物組合物中可以使用防腐劑、穩(wěn)定劑、染料以及芳香劑。防腐劑的實例包括苯甲酸鈉、硼酸和對羥基苯甲酸酯。還可以使用抗氧劑和助旋劑，根據(jù)不同的給藥系統(tǒng)，需要有不同的組合物/劑型。通過實例，本發(fā)明的藥物組合物可以被配制成使用微型泵或通過粘膜途徑輸送，例如鼻噴霧劑或可吸入的氣霧劑或可吞咽的溶液，或?qū)⒔M合物配制成通過注射的形式腸胃外輸送，例如靜脈內(nèi)、肌內(nèi)或皮下途徑輸送。可選的，將劑型配制成通過兩種途徑輸送。
在通過胃腸道粘膜粘膜輸送該制劑的情況，其在胃腸道運送過程中應(yīng)該能夠保持穩(wěn)定；例如它應(yīng)該能夠耐受蛋白水解的降解，在酸性pH穩(wěn)定并且可耐受膽汁的去污降解作用。
如果適當(dāng)，藥物組合物可以通過吸入給藥，以栓劑或陰道栓的形式給藥，以洗液、溶液、乳膏、軟膏劑或撲粉的形式局部給藥，通過使用皮膚貼劑給藥，以含有輔料如淀粉或乳糖的片劑的形式給藥，或以膠囊或膠丸的形式單獨或與賦形劑混合給藥，或者以含有芳香劑或著色劑的酏劑、溶液或混懸液的形式給藥，或者能夠腸胃外注射給藥，例如靜脈內(nèi)、肌內(nèi)或皮下注射給藥。對于腸胃外給藥，最好以無菌水溶液形式使用組合物，該無菌溶液可以含有其他物質(zhì)例如使溶液和血液等滲的足夠的鹽或單糖。對于口腔或舌下給藥，以片劑形式或錠劑施用組合物，該片劑或錠劑可以通過常規(guī)的方法制備。
聯(lián)合藥物本發(fā)明的化合物可以和一種或多種其它活性成分如一種或多種其他藥學(xué)活性成分聯(lián)合使用。
通過實例，本發(fā)明的化合物可以和其它11β-HSD抑制劑和/或其它活性成分如芳香酶抑制劑(例如4羥雄甾烯二酮(4-OHA))，和/或類固醇硫酸酯酶抑制劑如EMATE和/或類固醇-如天然存在的硫酸脫氫表雄酮(DHEAS)和硫酸孕烯醇酮(PS)和/或其它結(jié)構(gòu)相似的有機化合物聯(lián)合使用。
另外，或者可選地，本發(fā)明的化合物可以和生物反應(yīng)修飾劑聯(lián)合使用。
術(shù)語生物反應(yīng)修飾劑(“BRM”)包括細胞因子、免疫調(diào)節(jié)劑、生長因子、血細胞生成調(diào)節(jié)因子、集落刺激因素、趨化性劑、溶血和血栓溶解因子、細胞表面受體、配體、白細胞粘附分子、單克隆抗體、預(yù)防和治療疫苗、激素、細胞外基質(zhì)成分、纖維結(jié)合蛋白等。對于某些應(yīng)用，優(yōu)選地生物反應(yīng)修飾劑是細胞因子。細胞因子的實例包括白介素(IL)-如IL-1，IL-2，IL-3，IL-4，IL-5，IL-6，IL-7，IL-8，IL-9，IL-10，IL-11，IL-12，IL-19；腫瘤壞死因子(TNF)如TNF-α；干擾素α、β和γ；TGF-β。對于某些應(yīng)用，優(yōu)選地細胞因子是腫瘤壞死因子(TNF)。對于某些應(yīng)用，TNF可以是任何類型的TNF如TNF-α、TNF-β，包括其衍生物或其混合物。更為優(yōu)選地，細胞因子是TNF-α。在本領(lǐng)域可以發(fā)現(xiàn)。
給藥典型的，醫(yī)師可以決定最適合個體患者的實際劑量，并且隨特定患者的年齡、體重和反應(yīng)而變化。下面的劑量是一般情況的示例。當(dāng)然對于個例應(yīng)該有較高或較低的劑量范圍。
本發(fā)明的組合物可以通過直接注射給藥。本發(fā)明的組合物可以被配制成用于腸胃外給藥、粘膜給藥、肌內(nèi)給藥、靜脈內(nèi)給藥、皮下給藥、眼內(nèi)給藥或經(jīng)皮給藥。根據(jù)需要，組合物可以以0.01至30mg/kg體重的劑量給藥，如0.1至10mg/kg，更優(yōu)選0.1至1mg/kg體重。
通過進一步的實例，本發(fā)明的組合物可以以每天1至4次的用藥法給藥，優(yōu)選每天一至兩次。對于任何特定病人而言具體的劑量水平和給藥次數(shù)是可以變化的并且取決于多種因素包括使用的特定的化合物的活性、代謝穩(wěn)定性和化合物的作用時間長短，年齡、體重、健康狀況、性別、飲食、給藥方式和時間、排泄率、藥物聯(lián)合、特定病癥的嚴重程度以及宿主所接受的治療。
除了典型的輸送方式外-上文所指出的-術(shù)語“給藥“還包括通過技術(shù)如脂質(zhì)介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染、脂質(zhì)體、免疫脂質(zhì)體、脂轉(zhuǎn)染(lipofectin)、陽離子表面兩性分子(cationic facialamphiphiles(CFAs))及其聯(lián)合形式進行輸送。這種輸送機制的途徑包括但不限于粘膜、鼻腔、口服、腸胃外、胃腸道、局部或舌下途徑。
術(shù)語“給藥“包括但不限于通過粘膜途徑輸送，例如鼻腔噴霧劑或可吸入的氣霧劑或可吸收溶液；通過可注射形式腸胃外輸送，例如靜脈內(nèi)、肌內(nèi)或皮下注射途徑。
因此，對于藥物給藥，本發(fā)明的化合物可以使用常規(guī)藥物配制技術(shù)和以任何適宜的方式和藥學(xué)載體、輔料、賦形劑、稀釋劑等進行配制。并且通常用于腸胃外給藥。大約的有效劑量率在范圍1至1000mg/天的范圍，例如10至900mg/天或100至800mg/天，這取決于被討論的化合物的個體活性和病人的平均體重(70Kg)。對于優(yōu)選的并且更為有效的化合物的更為通常的劑量在200至800mg/天的范圍，更優(yōu)選為200至500mg/天，最優(yōu)選200至250mg/天。它們可以單一劑量單元、均分劑量單元和/或多劑量單元持續(xù)幾天給藥。對于口服給藥，它們可以被配制成每單位劑量含有100至500mg化合物的片劑、膠囊、溶液或混懸液。任選地并且優(yōu)選地，在適于腸胃外給藥的載體中配制化合物用于腸胃外給藥，并且提供的單日劑量在200至800mg的范圍，優(yōu)選200至500，更優(yōu)選200至250mg。但是，有效日常劑量應(yīng)根據(jù)根據(jù)活性成分的固有活性和病人的體重而變化，此變化是本領(lǐng)域技術(shù)人員的一般知識并可以由醫(yī)生判斷。
細胞周期本發(fā)明的化合物可以用于治療細胞周期紊亂的方法中。
正如在Molecular Cell Biology″第三版Lodish等人177-181頁中所討論的，不同的真核細胞以不同的速度生長和分裂。例如，酵母細胞每120分鐘分裂一次。而在海膽和昆蟲的胚胎細胞中受精卵的第一次分裂僅花費1530分鐘，這是因為一個大的原始細胞被再分裂。但是大多數(shù)生長中的植物和動物細胞要花費10-20小時使其數(shù)目倍增，并且某些復(fù)制以更慢的多的速度進行。在成人中，許多細胞例如神經(jīng)細胞和橫紋肌細胞根本不分裂，其它細胞例如幫助傷口愈合的成纖維細胞在需要時生長在別的時候處于靜止。
再者，每個分裂的真核細胞必須準備將相同的遺傳物質(zhì)賦予兩個子細胞。在真核細胞中DNA合成不是發(fā)生于整個細胞分裂周期而在細胞分裂前限于其一部分中。
已在都能夠生長和分裂的哺乳動物細胞的培養(yǎng)物中，徹底分析了真核細胞DNA合成和細胞分裂之間的聯(lián)系。和細菌形成對照的是，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)真核細胞在DNA合成中僅花費了它們的部分時間，并且在細胞分裂前數(shù)小時完成(有絲分裂)。因此在DNA合成后和細胞分裂前存在時間間期，在分裂后和下一輪DNA合成之前發(fā)現(xiàn)其他時間間期，這種分析產(chǎn)生了如下結(jié)論即真核細胞周期包括M(有絲分裂)期、G1期(第一個時間間期)、S(DNA合成)期、G2期(第二個時間間期)，然后回到M期。在有絲分裂(G1、S和G2)之間的時期是已知的分裂間期。
在組織中許多非分裂細胞(例如全部靜止的成纖維細胞)在有絲分裂之后和并恰在DNA合成之前終止細胞周期，據(jù)說，這種“靜止”的細胞脫離了細胞周期并且處于G0期。
當(dāng)細胞處于細胞周期的三個間期時是有可能鑒別細胞，通過使用熒光激活細胞分類器(FACS)測定它們相對DNA含量處于G1期(DNA合成以前)的細胞具有確定X量的DNA；在S(DNA復(fù)制)期間，細胞DNA含量在X和2X之間，而在G2期(或M)細胞具有2X的DNA。
在動物細胞中的有絲分裂和胞質(zhì)分裂的階段如下(a)分裂間期。分裂間期的G2階段立即處于有絲分裂開始之前。在S期間染色體的DNA進行復(fù)制并且結(jié)合于蛋白，但還看不到染色體的清楚的結(jié)構(gòu)。核仁只是核亞結(jié)構(gòu)，其在光學(xué)顯微鏡下是可見的。在DNA復(fù)制以前，在二倍體細胞中每種類型存在兩種形態(tài)的染色體，并且這樣的細胞被叫做2n。在G2期中，在DNA復(fù)制之后，細胞是4n。每個染色體DNA有四個復(fù)制品。由于姐妹染色體還沒有彼此分離，它們稱為姊妹染色單體。
(b)早前期。中心粒，每個具有一個新近形成的子中心粒，開始向細胞相反的極移動；可以看到染色體呈長絲狀。細胞膜開始分解成小囊泡。
(c)中前期和晚前期。完成染色體的縮合；每條可見的染色體結(jié)構(gòu)由兩個染色單體在其著絲?；ハ嘟Y(jié)合構(gòu)成。每個染色單體含有兩個新近復(fù)制的子代DNA分子之一。微管紡錘體開始從臨近中心粒的區(qū)域向外輻射，中心粒移動靠近它們的兩極。有些紡錘體纖維從一個極到達另一個極；大部分趨向染色單體并到達著絲點。
(d)中期。染色體向細胞赤道移動，它們排列在赤道板上。姊妹染色單體還沒有分離。
(e)后期。兩個姊妹染色單體分裂成為獨立的染色體。每個含有一個著絲粒，該著絲粒通過紡錘纖維和一個極相連，并向該極移動。因此各染色體的一個復(fù)制品貢獻給每一個子細胞。同時，細胞伸長。正如極與極紡錘體所為，胞質(zhì)分裂開始，同時開始形成卵裂溝。
(f)末期。在子細胞核周圍形成新的細胞膜；染色體展開并且變得不清楚，細胞核又變得可見，并且在每個子核周圍形成核膜。胞質(zhì)分裂將近完成，隨著微管及其它紡錘絲的解聚紡錘體消失。在整個有絲分裂中，每個極上子的中心粒生長至其完整長度。在末期完成了每個原始中心粒的復(fù)制，而在下一個分裂間期產(chǎn)生新的中心粒。
(g)分裂間期。在胞質(zhì)分裂完成后，細胞進入細胞周期的G1期并且準備進行再一輪的周期。
由此應(yīng)認識到細胞周期是極端重要的細胞過程。偏離了正常的細胞周期會導(dǎo)致很多醫(yī)學(xué)疾病。增加的和/或無限制性的細胞周期可以導(dǎo)致癌癥。減少的細胞周期可能導(dǎo)致變應(yīng)性疾病。使用本發(fā)明的化合物可以提供治療這樣疾病和病癥的方法。
因此本發(fā)明的化合物可以適合用于治療細胞周期紊亂例如癌癥包括激素依賴型和激素非依賴型癌癥。
另外本發(fā)明的化合物可以適合于治療癌癥例如乳癌、卵巢癌、子宮內(nèi)膜癌、肉瘤、黑素瘤、前列腺癌、胰腺癌等及其它固體腫瘤。
對于某些應(yīng)用，需要抑制和/或防止和/或阻止細胞周期，其中優(yōu)選防止和/或阻止細胞周期。在一個方面可在G2/M期抑制和/或防止和/或阻止細胞周期。在一個方面不可逆的抑制和/或防止和/或阻止細胞周期，其中優(yōu)選不可逆的防止和/或阻止細胞周期。
使用術(shù)語“不可逆的抑制和/或防止和/或阻止”指在施用本發(fā)明化合物之后，即使去除化合物，化合物的效果即防止和/或抑制和/或阻止細胞周期，仍然可觀察到。更特別的，術(shù)語“不可逆的抑制和/或防止和/或阻止”指當(dāng)依據(jù)本文提供的細胞周期試驗方案進行試驗時，在試驗方案I的階段2后，用相關(guān)化合物處理的細胞比對照細胞表現(xiàn)出更少的生長。在下文提供了關(guān)于這個方案的詳細內(nèi)容。
因此，本發(fā)明提供化合物通過防止和/或抑制和/或阻止細胞周期，能抑制體內(nèi)雌二醇受體陽性(ER+)和ER陰性(ER-)的乳癌細胞的生長；和/或在完整動物(例如非卵巢切除的)中引起亞硝基-甲基脲誘導(dǎo)的乳房腫瘤的退化，和/或防止和/或抑制和/或阻止在癌細胞中的細胞周期；和/或在體內(nèi)通過防止和/或抑制和/或阻止細胞周期在體內(nèi)起作用和/或作為細胞周期激動劑。
細胞周期試驗(方案2)方法階段1將MCF-7乳癌細胞以105個細胞/孔的密度接種于多孔培養(yǎng)板。當(dāng)將其作如下處理時，讓細胞吸附并生長到約有30％融合對照-未處理相關(guān)化合物(COI)20μM在含有COI的生長培養(yǎng)基中，細胞生長6天，每三天替換培養(yǎng)基/COI。在這個階段的結(jié)束時，使用Coulter細胞計數(shù)器進行細胞計數(shù)。
階段2在使用COI處理細胞六天后，將細胞以104細胞/孔的濃度重新接種。沒有施加進一步的處理。在生長培養(yǎng)基中使細胞繼續(xù)生長六天。在這階段的結(jié)束時，重新進行細胞計數(shù)。
癌癥正如所指出的，本發(fā)明化合物可以用于治療細胞周期紊亂。一種特別的細胞周期紊亂是癌癥。
癌癥在大多數(shù)西方國家仍然是死亡的一個主要原因。到目前為止癌癥治療的發(fā)展包括阻斷激素的作用或合成，以抑制激素依賴性腫瘤的生長。但是，為了治療非激素依賴性腫瘤，常采用攻擊性更強的化療。
因此，對激素依賴性和/或非激素依賴性腫瘤進行治療又沒有與化療有關(guān)的一些和全部副作用的抗癌藥物的研發(fā)，將會代表主要的治療進展。
我們相信本發(fā)明的化合物提供了治療癌癥尤其是乳癌的方法。
另外的或可選的，本發(fā)明的化合物可用于阻斷癌癥包括白血病和固體瘤例如乳瘤、子宮內(nèi)膜瘤、前列腺瘤、卵巢瘤和胰瘤的生長。
其他治療還應(yīng)該理解本發(fā)明的化合物/組合物可以具有其他重要的醫(yī)藥用途。
例如本發(fā)明的化合物或組合物可以用于治療WO-A-99/52890所列舉的疾病即另外的或可選的，本發(fā)明的化合物或組合物可用于治療WO-A-98/05635所列舉的疾病。為了便于參考，為了便于參考，現(xiàn)提供其中列出的部分疾病癌癥，炎癥或炎性疾病、皮膚病、發(fā)燒、心血管病、溶血病、凝血病和急相反應(yīng)、惡病質(zhì)、厭食、急性感染、HIV感染、休克、移植物抗宿主反應(yīng)、自身免疫性疾病、再灌注損傷、腦膜炎、偏頭痛和阿司匹林依賴性抗血栓形成；腫瘤生長、侵入和擴散，血管生成，腫瘤轉(zhuǎn)移，惡性腫瘤，腹水和惡性胸膜滲漏；腦局部缺血，局部缺血性心臟病，骨關(guān)節(jié)炎，類風(fēng)濕先關(guān)節(jié)炎，骨質(zhì)疏松，哮喘，多發(fā)性硬化，神經(jīng)變應(yīng)性疾病，早老性癡呆，動脈硬化，中風(fēng)，結(jié)節(jié)性脈管炎，節(jié)段性回腸炎和潰瘍性結(jié)腸炎；牙周炎，齒齦炎；牛皮癬，特應(yīng)性皮炎，慢性潰瘍，表皮松解大皰；角膜潰瘍，視網(wǎng)膜病和外科傷口愈合；鼻炎，變應(yīng)性結(jié)膜炎，濕疹，過敏反應(yīng)；再狹窄，充血性心力衰竭，子宮內(nèi)膜異位，動脈粥樣硬化或內(nèi)硬化(endosclerosis)。
另外的或可選的，本發(fā)明的化合物或組合物可用于治療WO-A-98/07859所列舉的疾病。為了便于參考，現(xiàn)提供其中所列出的一部分細胞因子和細胞增殖/分化活性；免疫抑制或免疫刺激活性(如，用于治療免疫缺陷，包括人類免疫缺陷病毒感染；調(diào)節(jié)淋巴細胞生長；治療癌癥和很多自身免疫性疾病，并用來防止移植物排斥反應(yīng)或誘發(fā)腫瘤免疫性)；調(diào)節(jié)造血，如治療骨髓或淋巴樣疾病；促進骨、軟骨、腱和神經(jīng)組織的生長，如用于愈合傷口，治療燒傷、潰瘍和牙周病以及神經(jīng)變應(yīng)性疾病；抑制和活化卵泡刺激激素(調(diào)節(jié)生育力)；趨化性/化學(xué)促活活性(如用于調(diào)動特異細胞類型到損傷活感染的部位)；止血和溶栓活性(如用于治血友病和中風(fēng))；抗炎活性(用于治療如膿毒性休克和節(jié)段性回腸炎)；在人或獸醫(yī)藥中作為抗菌劑；調(diào)節(jié)劑如代謝或行為調(diào)節(jié)劑；作為止痛劑；治療特異性缺陷疾?。恢委熍Ｆぐ_。
另外的或可選的，本發(fā)明組合物可用于治療WO-A-98/09985所列舉的疾病。為了便于參考，現(xiàn)提供其中所列出的一部分巨噬細胞抑制和/或T細胞抑制活性，并因此具有抗炎活性；抗免疫活性，即對細胞和/或體液免疫反應(yīng)的抑制活性，包括與炎癥無關(guān)的反應(yīng)；抑制巨噬細胞和T細胞粘附細胞外基質(zhì)組分和纖連蛋白的能力，以及上調(diào)fas受體在T細胞中的表達；抑制不需要的免疫反應(yīng)和炎癥，包括關(guān)節(jié)炎，包括類風(fēng)濕先關(guān)節(jié)炎，與過敏性有關(guān)的炎癥，過敏反應(yīng)，哮喘，系統(tǒng)性紅斑狼瘡，膠原性疾病及其它自身免疫性疾病，與動脈粥樣硬化有關(guān)的炎癥、動脈硬化、動脈粥樣硬化性心臟病、再灌注損傷、心動停止、心肌梗塞、脈管炎、呼吸窘迫綜合癥或其它心肺疾病，與消化性潰瘍有關(guān)的炎癥、潰瘍性結(jié)腸炎及其它胃腸道疾病、肝纖維化、肝壞死或其它肝病、甲狀腺炎或其它腺體疾病、腎小球性腎炎或其它腎和泌尿系統(tǒng)疾病、耳炎或其它耳鼻喉科疾病、皮炎或其它皮膚病、牙周病或其它牙科疾病、睪丸炎或附睪炎、不育癥、睪丸外傷或其它免疫相關(guān)性睪丸病、胎盤機能障礙、胎盤機能不全、習(xí)慣性流產(chǎn)、驚厥、驚厥前期和其它免疫和/或與炎癥有關(guān)的婦科疾病、后色素層炎、中色素層炎、前眼色素層炎、結(jié)膜炎、脈絡(luò)膜視網(wǎng)膜炎、色素層視網(wǎng)膜炎、眼神經(jīng)炎、眼內(nèi)炎癥如視網(wǎng)膜炎或囊性斑水腫、交感神經(jīng)眼炎、鞏膜炎、視網(wǎng)膜炎性色素沉著、變應(yīng)性蛋白乳酪酥樣疾病(degenerativefondus disease)的免疫和炎癥部分、眼外傷的炎癥部分、感染引起的眼炎、增殖性玻璃體-視網(wǎng)膜病、急性局部缺血性視神經(jīng)病、疤痕形成過度如在青光眼濾光手術(shù)后、對眼移植的免疫和/或炎癥反應(yīng)以及其它免疫和炎癥相關(guān)性眼病、與自身免疫性疾病有關(guān)的炎癥、或者在中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)或在任何其它器官中存在的且會得益于免疫和/或炎癥反應(yīng)抑制的病癥或疾病、帕金森氏病、治療帕金森氏病產(chǎn)生的并發(fā)癥和/或副作用、AIDS有關(guān)的癡呆綜合征、HIV相關(guān)性腦病、德維克氏病、舞蹈病、早老性癡呆及其它變應(yīng)性疾病、CNS的病癥或紊亂、中風(fēng)的炎癥反應(yīng)部分、脊髓灰質(zhì)炎后綜合征、神經(jīng)病的免疫和炎癥部分、脊髓炎、腦炎、亞急性硬化盤腦炎、腦脊髓炎、急性神經(jīng)病、亞急性神經(jīng)病、慢性神經(jīng)病、格巴二氏綜合征、Sydenham舞蹈病、重癥肌無力、假腦瘤(pseudo-tumour cerebri)、Down氏綜合征、Huntington氏舞蹈病、肌萎縮性側(cè)索、CNS壓迫或CNS外傷的炎癥部分或者CNS感染、肌萎縮和營養(yǎng)不良的炎癥部分、及免疫和炎性相關(guān)性疾病、腦和外周神經(jīng)系統(tǒng)的病癥或紊亂、外傷后炎癥、膿毒性休克、傳染病、手術(shù)的炎癥并發(fā)癥或不良反應(yīng)、骨髓移植或其它移植并發(fā)癥和/或不良反應(yīng)、基因療法的炎性和/或免疫性并發(fā)癥和不良反應(yīng)，如由于受病毒載體感染、或者與AIDS有關(guān)的炎癥；抑制體液和/或細胞免疫反應(yīng)，治療或減輕單核細胞或白細胞增殖性疾病如白血病，通過降低單核細胞或淋巴細胞的量來預(yù)防和/或治療天然和人造細胞、組織和器官移植情況中的移植排斥反應(yīng)，如角膜、骨髓、器官、晶狀體、起搏器、天然或人造皮膚組織。
正如以前提及的，在一個方面本發(fā)明提供本文描述的化合物在制備用于治療和11β-HSD相關(guān)病癥或疾病的藥物中的用途。
在Walker，E.A，；Stewart，P.M.；Trends in Endocrinologyand Metabolism，2003，14(7)，334-339.中對和11β-HSD相關(guān)的病癥或疾病進行了綜述。
在一個優(yōu)選的方面，病癥或疾病選自·代謝疾病例如糖尿病和肥胖癥·心血管疾病例如高血壓·青光眼·炎性疾病例如關(guān)節(jié)炎或哮喘·免疫疾病·骨疾病例如骨質(zhì)疏松癥·癌癥·子宮內(nèi)發(fā)育遲緩·表觀鹽皮質(zhì)激素過度綜合癥(AMEZ)·多囊性卵巢綜合征(PCOS)·多毛癥·粉刺·羊水過少或閉經(jīng)
·腎上腺皮質(zhì)腺瘤和癌·柯興(氏)綜合征·腦垂體瘤·浸潤性癌·乳癌和·子宮內(nèi)膜癌小結(jié)總而言之，本發(fā)明提供用作類固醇脫氫酶抑制劑的化合物和藥物組合物。
附圖的簡短描述僅參照附加的通過實例進一步詳細描述本發(fā)明。


圖1中的曲線圖1表示每μL鼠肝臟和腎臟的蛋白質(zhì)量圖2中的曲線圖2表示鼠肝臟中酶濃度和時間依賴過程，E向F，11β-HSD 1型活性。
圖3中的曲線圖3表示鼠肝臟中酶濃度和時間依賴過程，F(xiàn)向E，11β-HSD 2型活性。
圖4的曲線圖表示使用四種提取方法獲得的提取效率。
圖5的曲線圖表示在鼠和人肝微粒體中11β-HSD1的活性比較。
圖6的一系列曲線圖表示溫育時間對人類微粒體11β-HSD1活性的影響。
圖7的一系列曲線圖表示微粒體蛋白濃度對人微粒體的11β-HSD1活性影響。
圖8的曲線圖表示人類微粒體11β-HSD1的底物(腎上腺皮質(zhì)素)飽和曲線。
圖9是人類微粒體11β-HSD1的底物飽和數(shù)據(jù)的Lineweaver-Burke曲線。
圖10的曲線圖表示甘草次酸的IC50的測定值。
圖11的曲線圖表示甘珀酸的IC50的測定值。
圖12(A)、12(B)、12(C)的曲線圖是表示通過免疫分析測定的11β-HSD1的活性。圖12(A)表示蛋白的影響，圖12(B)表示腎上腺皮質(zhì)素的影響，圖12(C)表示吐溫80的影響。
圖13的曲線圖表示Assay Designs Cortisol Immunoassy的評定。
圖14的曲線圖表示通過Assay Designs Immunoassy檢測的增加微粒體蛋白對11β-HSD1的活性測定的影響。
圖15的曲線圖表示通過使用Immunotech抗皮質(zhì)醇抗體的RIA測定的11β-HSD1的活性。
圖16的曲線圖表示降低Immunotech抗體濃度對信噪比的影響(微粒體組和GA空白組相比)。
圖17的曲線圖表示通過RIA測定11β-HSD1活性的Immunotech抗體飽和曲線。
圖18的曲線圖表示通過RIA的測定人類肝微粒體11β-HSD1活性的線性。
圖19的曲線圖表示吐溫80對通過RIA測定人類肝微粒體11β-HSD1的活性的影響。
圖20的曲線圖表示緩沖系統(tǒng)對通過RIA測定人類肝微粒體11β-HSD1的活性的影響。
圖21的曲線圖表示通過RIA測定的人類肝微粒體11β-HSD1活性和溫育時間的線性。
圖22的曲線圖表示通過RIA測定人類肝微粒體11β-HSD1活性的底物飽和曲線。
圖23是通過RIA測定人類肝微粒體11β-HSD1活性的底物飽和數(shù)據(jù)的Lineweaver-Burke曲線。
圖24的曲線圖表示人類肝微粒體11β-HSD1活性的DMSO耐受性圖25是使用甘草次酸抑制人類肝微粒體11β-HSD1活性的IC50的曲線。
實施例現(xiàn)在僅通過實施例描述本發(fā)明。
材料和方法酶-從正常的Wistar大鼠(Harlan Olac，Bicester，Oxon.UK)獲得鼠肝臟和鼠腎臟。使用Ultra-turrax在PBS-蔗糖緩沖液(1g/10ml)中在冰上勻化肝臟和腎臟。在將肝臟和腎臟勻化后，將勻化物以4000rpm離心5分鐘，移走得到的上清液，然后在-20℃儲存于玻璃小管中。使用Bradford方法測定每微升鼠肝臟和腎臟胞質(zhì)溶膠的蛋白量[14]。
儀器·保溫箱機械振蕩水浴，SW 20，德國·蒸發(fā)器Techne Driblock DB 3A，UK·TLC鋁板20×20cm硅膠60F254，Merck，德國·閃爍管20ml具塞聚丙烯小管，STRSTEDT，德國·閃爍計數(shù)器Beckman LS 6000 SC，Beckman Instruments Inc.，USA美國溶液·分析介質(zhì)PBS-蔗糖緩沖液，Dulbecco′s磷酸鹽緩沖鹽水，1片/100ml具有0.25M蔗糖，pH7.4，BDH Laboratory，UK提供。
·閃爍液Ecoscint A(National Diagnostics，USA).
·放射性化合物溶液[1，2，6，7-3H]-皮質(zhì)醇(Sp.Ac.84 Ci/mmol)NEN Germany，[4-14C]-皮質(zhì)醇(Sp.Ac.53 mCi/mmol)NEN Germany。
·CrO3和醋酸(Sigma Chemical Co.，UK).
·萃取液二乙醚Fischer Chemicals，UK·Bradford試劑溶液(Bradford Reagent solution)考馬斯亮藍(Coomassie Brilliant Blue)G-250，在95％乙醇和100ml磷酸(85％w/v)中有100mg，稀釋至1L。
化合物·根據(jù)下文的合成路線合成化合物·輔助因子NADPH和NADP，Sigma Chemical Co.，UK方法放射標記的腎上腺皮質(zhì)素的合成為了合成相應(yīng)標記的腎上腺皮質(zhì)素(3H-E和14C-E)，用CrO3在C-11位將標記的皮質(zhì)醇(F)(3H-F和14C-F)氧化。
對于這個反應(yīng)，用溶解在50％醋酸/蒸餾水(v/v)溶液中的0.25％CrO3氧化F。然后將標記的F加到1mlCrO3溶液，渦旋混合然后在37℃放入保溫箱中20分鐘。用4ml乙二醚萃取含水反應(yīng)混合物2次，然后蒸發(fā)乙二醚然后將殘留物轉(zhuǎn)移到TLC板，用如下的系統(tǒng)，氯仿∶甲醇9∶1(v/v)展開。也在TLC板上展開未標記的腎上腺皮質(zhì)素(E)以確定標記的類固醇的位置。在確定標記類固醇的斑點后，將該區(qū)域從TLC板上切除，用0.5ml洗脫。
每微升鼠肝臟和鼠腎臟蛋白質(zhì)的量需要測定鼠肝臟和腎臟中蛋白質(zhì)的量，根據(jù)Bradford方法進行這個試驗。采用了以下的方法首先制備BSA(蛋白質(zhì))溶液(1mg/ml)吸取含有10-100微克蛋白質(zhì)的蛋白質(zhì)溶液至試管然后用蒸餾水調(diào)節(jié)體積，然后將5ml蛋白質(zhì)試劑加到試管中并渦旋混合。在15分鐘后和1小時前，在3m l試管中對照空白試劑于595nm測定吸光度。對照相應(yīng)的吸收度作圖表示蛋白質(zhì)的重量，得到用于測定鼠肝臟和鼠腎臟胞質(zhì)溶膠中的蛋白質(zhì)濃度的標準曲線。
試驗確證(Assay validation)-酶濃度和11β-HSD活性的時間依賴性在進行11β-HSD試驗以研究E向F和F向E的轉(zhuǎn)化和不同抑制劑對這些轉(zhuǎn)化的影響之前，需要測定鼠肝臟勻漿和鼠腎臟勻漿的量及其溫育時間(incubation time)。
11β-HSD1型是負責(zé)E向F轉(zhuǎn)化的酶并且這種酶在鼠肝臟中存在。在本試驗中使用的底物溶液含有在PBS-蔗糖中的70,000cpm/ml3H-E和0.5μM未標記的E和輔助因子NADPH(9mg/10ml底物溶液)。將1ml底物溶液和不同數(shù)量的鼠肝臟勻漿加到所有試管中。
通過在具有機械振蕩試管的水浴中于37℃溫育25、50、100和150μL的底物溶液30、60、90和120分鐘測定試驗需要的鼠肝臟勻漿的量。在溫育后加入的50μL校正溶液(recovery solution)以校正在下面兩個步驟中的損失，該溶液含有用于使TLC板上斑點顯影的約8,000cpm/50μL的14C-F和50μg未標記的F。使用4ml乙二醚從水相萃取F(每輪2×30，渦旋混合)。然后使用干冰冷凍水相并且輕輕倒出有機層然后倒入更小的試管中然后蒸發(fā)。然后向小試管中加入6滴醚重新溶解殘留物，將其轉(zhuǎn)移到鋁薄層色譜板(TLC板)。在飽和的條件下在TLC箱中展開TLC板。使用的溶劑系統(tǒng)是氯仿∶甲醇9∶1(v/v)。在紫外燈下使在TLC板上的F斑點顯影然后從TLC板切除(Rf＝0.45)。然后將從TLC板上得到的斑點放入閃爍管并向所有管加入0.5ml甲醇淋洗來自TLC板的放射性5分鐘。將10mlEcosint加到閃爍管中然后將它們放入閃爍計數(shù)器計數(shù)形成的產(chǎn)物的量。
對于11β-HSD2型活性試驗、F向E的轉(zhuǎn)化，采用同樣的操作以測定使用的鼠腎臟的量和溫育時間。這次除了底物溶液含有3H-F和未標記的F、校正溶液含有14C-E和未標記的E外，腎上腺皮質(zhì)素在TLC板上的Rf值為0.65。
試驗方法(Assay procedure)-11β-HSD抑制劑在這些試驗中評估了在還原(1型)和氧化(2型)方向中不同抑制劑對11β-HSD活性的影響。在還原方向E是底物而F是產(chǎn)物在氧化的情況則相反。在這里描述的方法施用于氧化方向。
底物溶液含有在PBS-蔗糖中的約50,000cpm/ml3H-F和0.5μM F。將1ml底物溶液加到每個試管中，還以10μM濃度向每個試管除了“對照”和“空白”試管加入抑制劑。向所有試管除了空白試管加入150μL，用于校正自發(fā)形成的3H-F的量。在37℃在機械振蕩水浴中溫育試管60分鐘。由酶和時間依賴性試驗得到使用的腎臟肝臟勻漿的量和溫育時間。在溫育后，加入50μL校正溶液以校正在隨后的步驟中所造成的損失，校正溶液含有5,000cpm/50μL14C-E和50μg/50μL未標記的E(用于在TLC上使斑點顯影)。然后使用4ml醚萃取含水混合物(每輪2×30，渦旋混合)。在冷凍水相后，將醚(上部)層緩緩倒入更小的試管中然后在45℃蒸發(fā)直至完全變干。用6滴醚重新溶解殘留物然后轉(zhuǎn)移到TLC板。使用氯仿∶甲醇9∶1(v/v)溶劑系統(tǒng)展開TLC板，TLC板展開約90分鐘直到溶劑前沿移動約18cm。在紫外燈下使產(chǎn)物E的位置顯影然后從TLC板上切除放入閃爍管中。用0.5ml甲醇淋洗放射性5分鐘。在閃爍計數(shù)器中進行計數(shù)以前，加入0.5ml PBS-蔗糖和10ml Ecosint然后渦旋混合。在計數(shù)樣品前，制備兩種完全活性管(total activityvials)。其含有0.5ml底物溶液、50μL校正溶液、0.5ml甲醇和10ml Ecoscint。在計算開始時需要這兩種完全活性管以確定加入14C-E和3H-F的量。
對于還原方向、E向F，使用同樣的方法。和在氧化方向中使用的方法的不同之處僅在于底物溶液含有3H-E和未標記的E，而校正溶液含有14C-F和未標記的F。
在以10μM濃度測定所有抑制劑后，對最有效的11β-HSD1型和2型抑制劑進行了劑量反應(yīng)試驗。為觀察抑制作用百分數(shù)，使用四種不同濃度1、5、10和20μM。對于鼠肝臟、1型還原，鼠腎臟、2型氧化而言整個試驗從頭到尾方法相同。
結(jié)果每μL鼠肝臟和鼠腎臟的蛋白的量進行了初步試驗以測定加到每個試管的鼠肝臟胞質(zhì)溶膠和鼠腎臟胞質(zhì)溶膠中的蛋白質(zhì)的量。在圖1中的曲線1表示標準曲線，根據(jù)該標準曲線計算在兩種試驗中使用的蛋白質(zhì)的量。在鼠肝臟試驗中加到每個試管中的蛋白的量是75.5μg(每25μL)。在鼠腎臟試驗中加到每個試管中的蛋白的量是135.6μg(每150μL)。
酶濃度和11β-HSD型活性的時間依賴性在這個試驗中，測定了加到每個試管鼠肝臟勻漿和鼠腎臟勻漿的量和溫育時間。圖2中的曲線圖2表示酶濃度與鼠肝臟試驗E向F、11β-HSD 1型活性的時間依賴性。圖3中的曲線圖3表示酶濃度與F向E、11β-HSD2型活性的時間依賴性。在繪制上述曲線后，選擇鼠肝臟胞質(zhì)溶膠和鼠腎臟胞質(zhì)溶膠的最佳量和它們溫育時間的最佳值。當(dāng)選擇這兩種變量時，選擇鼠肝臟和鼠腎臟的量及溫育時間的一個重要原則是在曲線的線性部分進行。這樣作是為了避免酶活性的波動。選擇的鼠肝臟胞質(zhì)溶膠的量是25μL和溫育時間是90分鐘，選擇的鼠腎臟胞質(zhì)溶膠的量是150μL和溫育時間是60分鐘。
11β-HSD抑制劑在這個試驗中，測定了不同抑制劑對E向F和F向E轉(zhuǎn)化的影響。研究了為什么在兩個方向都有抑制的原因，該研究是在抑制劑和它們能夠更多抑制哪種類型的11β-HSD之間進行比較。根據(jù)化合物抑制11β-HSD1型(E向F)和11β-HSD2型(F向E)的能力篩選化合物。對所有抑制劑在10μM濃度進行初步測定。與對照物活性相比(試管中沒有抑制劑)，根據(jù)在形成的產(chǎn)物的放射標記3H-E和3H-F中減少的百分數(shù)計算抑制作用百分數(shù)，。所有計算結(jié)果是平均值，n＝2。
表2抑制效果




使用人11β-羥基類固醇脫氫酶1型的生物試驗改進11β-羥基類固醇脫氫酶1型皮質(zhì)醇放射免疫分析的標準操作方法11βHSD1皮質(zhì)醇RIA試劑腎上腺皮質(zhì)素，皮質(zhì)醇(氫化可的松)，NADPH，葡萄糖-6-磷酸酯，甘草次酸(GA)，葡聚糖包衣的木炭(C6197)和DMSO從SigmaAldrich獲得，甘珀酸從ICN Biomedical獲得，Product 215493001，3H-腎上腺皮質(zhì)素從American Radiolabelled Componds公司獲得，Product ART-743，3H-皮質(zhì)醇從NEN獲得，Product NET 396，14C-皮質(zhì)醇從NEN獲得，Product NEC 163，人類肝微粒體從Xeno Tech獲得，Product H0610/Lot 0210078，鼠肝微粒體從Xeno Tech獲得，SPA beads從Amersham獲得，Product RPNQ0017，免疫分析試劑盒從Assay Designs獲得，Product 900-071，免疫直接抗皮質(zhì)醇抗體是Product OBT 0646，Sigma抗皮質(zhì)醇抗體是Product C8409，由Beckman提供Immunotech抗體，Product IMBULK3 6D6。
緩沖溶液緩沖溶液1，根據(jù)Barf[15]30mM Tris-HCL，pH7.2，含有1mMEDTA緩沖溶液2，根據(jù)Sterix方法PBS(pH7.4)含有0.25M蔗糖緩沖溶液3，根據(jù)Sigma RIA方法50mM Tris-HCL，pH8，含有0.1MnaCL和0.1％明膠停止液，根據(jù)Barf[15]在100％DMSO中有1mM甘草次酸在181μM NADPH，1mM葡萄糖-6-磷酸酯和每次試驗指定的腎上腺皮質(zhì)素的濃度下進行酶試驗。
酶試驗緩沖溶液30mM Tris-HCL，pH7.2，含有1mMEDTA抗體結(jié)合緩沖溶液50mM Tris-HCL，pH8，含有0.1M NaCI和0.1％明膠化合物制備以所需試驗濃度的100倍制備在100％DMSO中的10mM儲備液。用試驗緩沖液以1比25稀釋，還用試驗緩沖液以1比25稀釋純DMSO作為對照。
底物制備以所需試驗濃度(175nM)的600倍制備腎上腺皮質(zhì)素乙醇溶液。用試驗緩沖液以1比50稀釋。
用試驗緩沖液制備NADPH 1.8mg/ml的溶液用試驗緩沖液制備G-6-P 3.65mg/ml的溶液以1∶1∶1混合這三種溶液以使溶液的體積足夠向每個樣品中加入25μl。每25μl加入0.5μCi的氚化的腎上腺皮質(zhì)素然后充分混合溶液。
微粒體制備用試驗緩沖液以1比100稀釋20mg/ml儲備溶液。
抗體制備用抗體結(jié)合緩沖液稀釋抗體儲備液至17μg/ml。
葡聚糖包衣的木炭制備用抗體結(jié)合緩沖液制備20mg/ml溶液然后在冰上冷凍。
酶試驗向u形底部的聚丙烯96孔板加入
25μl化合物稀釋液或稀釋的DMSO對照，NSB′s和空白向空白加入在DMSO中的10μl 1mM GA(酶停止液)向所有樣品加入25μl底物混合物向所有樣品加入50μl稀釋的微粒體在37℃溫育平板30分鐘，振蕩向所有孔除了空白加入10μl酶停止溶液向所有孔除了NSB’s加入100μl抗體溶液，向這些板中加入抗體結(jié)合緩沖液在37℃溫育1小時在冰上冷凍平板15分鐘加入木炭溶液50μl/孔然后用8通道的移液管混合(吹吸4-5次)在冰上冷凍平板在4℃，2000×g離心15分鐘將100μl上清液轉(zhuǎn)移到Optiplate，向2個空孔加入25μl底物混合物以表示計數(shù)效率向所有孔中加入200μl Microscint-40并在Topcount上計數(shù)放射免疫分析根據(jù)上文描述的標準操作放大在u形底部的聚丙烯96孔板中或適用于每次試驗的1.5ml Eppendorf試管中進行11βHSD1酶試驗。隨后終止酶反應(yīng)，除非另外指明，將使用緩沖液3制備的100μl抗體加到測試樣品然后將100μl緩沖液3加到NSB樣品。將樣品在37℃溫育1小時然后在冰上冷凍15分鐘。加入用緩沖液3以指定濃度制備的葡聚糖包衣木炭(50μl/樣品)然后混合樣品(渦旋試管然后用8通道的移液管吹吸96孔板5次)然后進一步冷凍10分鐘。在4℃以2000×g離心樣品15分鐘使木炭成球狀。將上清液等量(100μl)轉(zhuǎn)移到Optiplate然后在150-200μl Microscint-40中用Topcount計數(shù)。在某些試驗中，將上清液等量轉(zhuǎn)移到閃爍管然后在5ml Ultima Goldscintillant中用Tricarb LSC計數(shù)。
11βHSD1試驗改進
11βHSD1 TLC形成試驗(TLC format assay)腎上腺皮質(zhì)素和皮質(zhì)醇的分離在進行酶試驗之前，研究了在文獻中報道的用于從皮質(zhì)醇分離腎上腺皮質(zhì)素的溶劑系統(tǒng)[16，17]。用甲醇以10mg/ml制備腎上腺皮質(zhì)素和皮質(zhì)醇的溶液，將其等量點于硅膠TLC板。使用CH2Cl2∶IMS 92∶8 V/V展開該板。然后將該板在空氣中干燥然后用在甲醇中的0.1％若丹明B(Rhodamine B)噴霧以使斑點顯影。下表描述了獲得的分離。
表3通過TLC從皮質(zhì)醇分離腎上腺皮質(zhì)素

該分離被認為足夠用于酶試驗。
文獻詳細描述了幾種從含水溶液提取皮質(zhì)醇的方法[16，17]。為了選擇一種使用方法，從NEN獲得[14C]標記皮質(zhì)醇。加入含有4000DPM的磷酸鹽緩沖鹽水作載體(PBS)制備50μl具有冷凍皮質(zhì)醇(1μg)的儲備液。最終乙醇濃度是0.4％。將溶液等量加到玻璃試管(100μl)然后進行萃取1.1ml CH2Cl2，渦旋然后通過相分離濾紙(Whatman，IPS)；2.1ml乙酸乙酯，渦旋然后通過相分離濾紙；3.1mlCH2Cl2和200μl 0.05％CaCl2，渦旋(5000g，5分鐘)然后移去上層水相；4.1ml乙酸乙脂和200μl 0.05％CaCl2，渦旋(5000g，5分鐘)然后收集上層有機相。將有機相揮干然后用100μl IMS吸收殘留物。將其等量點于TLC板上然后如前述展開TLC板。隨后用若丹明B(Rhodamine B)使斑點顯影，將斑點刮入閃爍管然后在5ml Ultimagold scintillant中用液體閃爍計數(shù)器(Packard TriCarb)計數(shù)。計算萃取效率并且在圖4中列出。
根據(jù)這些結(jié)果，顯示通過相分離過濾損失了90％的皮質(zhì)醇。似乎用乙酸乙脂提取皮質(zhì)醇比用CH2Cl2更為有效，這可能因為有機相更易于收集。似乎乙酸乙脂是合適的提取方法。
人和鼠肝微粒體11βHSD1活性評估鼠和人類肝微粒體中11βHSD1的活性，以確定用于酶活性測定所需的最小微粒體蛋白濃度。根據(jù)Bradford方法[14]進行試驗。用緩沖液2進行試驗并且所使用的腎上腺皮質(zhì)素濃度是2μM，每個培養(yǎng)(per incubation)含有0.5μCi[3H]-腎上腺皮質(zhì)素。在玻璃試管中以100μl的最終培養(yǎng)體積在每個培養(yǎng)(per incubation)50μg-400μg蛋白質(zhì)的濃度范圍測定微粒體。將樣品在振蕩水浴中37℃溫育1小時然后通過加入1ml乙酸乙酯終止試驗。為校正回收率，向樣品中加入50μl[14C]-皮質(zhì)醇隨后加入200μl 0.05％CaCl2。如上文所述，將樣品渦旋混合然后離心。移去上層有機相然后全部揮干，將殘留物溶于100甲醇，然后將50μl等量點于TLC板，如上文所述進行展開。使用雙標記程序在TriCarb液體閃爍計數(shù)器上對樣品進行計數(shù)。根據(jù)在50μl[14C]-皮質(zhì)醇溶液中獲得的DPM測定回收率，該溶液和樣品一起計數(shù)。結(jié)果見圖5。
在鼠和人微粒體中11βHSD1的活性相似，對鼠和人微粒體分別為0.7pmol/mg/min和0.5pmol/mg/min。明顯地在人微粒體中的活性和微粒體濃度無關(guān)，這可能暗示測定的蛋白質(zhì)濃度范圍太高。
評估了降低的人微粒體蛋白濃度每個樣品3.7μg-100μg。在37℃還從0-60分鐘測定了活性的時間過程。萃取條件如上所述。這些試驗的結(jié)果見圖6和圖7。
在圖6和7中顯示的結(jié)果解釋了在測定的所有微粒體蛋白濃度在溫育時間一直到30分鐘時酶活性呈線性，并且微粒體蛋白濃度在每個樣品30μg以下時酶的活性是線性的。
研究了底物濃度對活性的影響。將[3H]-腎上腺皮質(zhì)素濃度在0.5μCi/樣品保持恒定，而未標記的腎上腺皮質(zhì)素在44nM到2μM之間變化。使用每個樣品10μg微粒體蛋白和在37℃溫育30分鐘進行試驗。結(jié)果見圖8。這些數(shù)據(jù)的雙倒數(shù)曲線(Lineweaver-Burke)對660nM腎上腺皮素提供了表觀Km值，圖9。
作為確證過程的一部分，在這個試驗系統(tǒng)中對標準化合物甘草次酸和甘珀酸進行了研究。如Barf所述[15]，使用175nM腎上腺皮質(zhì)素底物、10μg微粒體蛋白、在37℃溫育30分鐘進行試驗。雖然上文在圖8和9中的數(shù)據(jù)暗示這些試驗條件下底物濃度在是不飽和的。以0.012μM至3μM的濃度對甘草次酸和甘珀酸進行測定，在所有樣品中DMSO濃度是1％。結(jié)果見圖10和11。
甘草次酸和甘珀酸的IC50分別是40nM和119nM。由Barf等人報道的使用SPA format和重組11βHSD的甘珀酸IC50是330nM[15]，有效性約是3倍少一些。兩個試驗系統(tǒng)在效能上的差異可能是由于不同的分析條件，SPA和tlc終點比較，而且還有酶的來源，天然肝酶和重組酶比較。
上文描述的試驗條件證明了良好的酶活性，但其應(yīng)該是可轉(zhuǎn)移到96孔板的形式(format)。
高流通量11βHSD1試驗的改進在閃爍迫近分析法(SPA)中使用的由Barf[15]提供的抗體被證明是有問題的。測定抗體的一個樣品批次(來自Immunotech)以確定適用性然后第二次定購更大量的樣品。使用可商購得到的Immunotech抗體開發(fā)了一種使用放射免疫測定(RIA)形式(format)的優(yōu)良(robust)的96孔板試驗，對此將在下文描述。
免疫測定形式(Immunoassy format)作為可能的試驗形式(format)評估了試驗設(shè)計酶免疫分析系統(tǒng)(Assay Designs enzyme immunoassay system)。試驗的基礎(chǔ)是在由11βHSD1產(chǎn)生的皮質(zhì)醇樣品和標記的皮質(zhì)醇之間的抗體結(jié)合競爭。以試劑盒提供的抗皮質(zhì)醇檢測抗體是鼠單克隆，據(jù)報道和腎上腺皮質(zhì)素的雜交反應(yīng)少于0.1％。該試劑盒被設(shè)計用于分析唾液、尿、血清和血液和組織培養(yǎng)基中的皮質(zhì)醇水平，而不是用于測定酶活性。
使用Barf[15]所描述的11βHSD1酶試驗條件；在緩沖液1中人微粒體酶蛋白濃度25μg-200μg，腎上腺皮質(zhì)素濃度44nM-700nM在37度溫育60分鐘。還研究了0.9％吐溫80的影響，據(jù)報道作為清潔劑，其可提高類固醇代謝有關(guān)酶的活性。結(jié)果見圖12。
圖12(A)顯示了蛋白質(zhì)的影響。在有吐溫80的情況下從檢測的700μM的腎上腺皮質(zhì)素組獲得的數(shù)據(jù)。
圖12(B)顯示了腎上腺皮質(zhì)素的影響。在有吐溫80的情況下從檢測的25μg微粒體蛋白組獲得的數(shù)據(jù)。
圖12(C)顯示了吐溫80的影響。在有700μM腎上腺皮質(zhì)素情況下從檢測的25μg微粒體蛋白組獲得的數(shù)據(jù)。
使用標準曲線(313pg/ml至10,000pg/ml)檢測皮質(zhì)醇的試驗和期望的一樣，但是從酶試驗樣品獲得的信號隨微粒體蛋白濃度的增加降低，表明微粒體蛋白可能干擾免疫分析，圖12(A)。加入外源性的皮質(zhì)醇對在酶試驗樣品中檢測的皮質(zhì)醇的水平?jīng)]有影響，表明抗體不和腎上腺皮質(zhì)素發(fā)生雜交反應(yīng)，圖12(B)。在酶分析緩沖液中包含清潔劑幾乎沒有影響，圖12(C)。
試驗條件是可變的以確定使用免疫測定系統(tǒng)測定11βHSD1活性是否可行。在緩沖溶液2中每樣品24μg微粒體蛋白和2μM腎上腺皮質(zhì)素底物。如果在樣品中存在，在加入類固醇置換試劑；從皮質(zhì)醇結(jié)合蛋白釋放皮質(zhì)醇的試劑盒成分后，測定樣品中酶的活性。使用標準曲線(313pg/ml到10,000pg/ml)檢測皮質(zhì)醇的試驗。圖13顯示不同組在405nm獲得的吸光度在圖13中包括皮質(zhì)醇標準的最低和最高濃度313pg/ml和1000pg/ml和NSB吸收度，表示在試驗中獲得的動態(tài)范圍。
在有從和微粒體蛋白(“酶”)一起培養(yǎng)的樣品得到的反應(yīng)混合物存在的情況下，獲得的吸光度低于那些在有不含微粒體蛋白(“沒有酶”)的反應(yīng)混合物存在的情況下獲得的吸光度，這說明皮質(zhì)醇的水平增加了。
在有試劑盒類固醇置換試劑(“DR”)存在的情況下，這兩種反應(yīng)混合物顯示了相同的模式但是信號是降低的。
在有皮質(zhì)醇標準的最高濃度存在的情況下，甘草次酸(GA)對試劑盒測定皮質(zhì)醇濃度的能力沒有影響。
雖然對于試驗而言信噪比2.5相當(dāng)弱，但是這些數(shù)據(jù)證明了抗體能夠結(jié)合皮質(zhì)醇AP共軛然后被皮質(zhì)醇置換。進行試驗以研究增加微粒體蛋白的影響，嘗試提高獲得的信噪比。
使用在緩沖液2中的2μM腎上腺皮質(zhì)素從100μg/培養(yǎng)(incubation)至5μg/培養(yǎng)(incubation)測試微粒體蛋白。所有其它條件和上文描述相同。結(jié)果見圖14。
從10μg/培養(yǎng)(incubation)至5μg/培養(yǎng)(incubation)降低微粒體蛋白會導(dǎo)致酶活性的相應(yīng)降低。在10μg/培養(yǎng)(incubation)以上增加微粒蛋白會導(dǎo)致信號猝滅，這可能是由于微粒體的顏色。因此通過增加微粒體蛋白的濃度不能提高該試驗的動態(tài)范圍。
使用Immunotech抗體的RIA改進使用10μg/孔人肝微粒體蛋白進行11βHSD1試驗。在RIA中以6.25μg/孔到至25μg/孔的濃度使用Immunotech抗體，結(jié)果見圖15。
在試驗中Immunotech抗體運轉(zhuǎn)良好并且在所有測定濃度產(chǎn)生良好的信噪比。每孔12.5μg抗體的信噪吡和每孔6.1μg抗體的信噪比是相似的，暗示有可能減少抗體的濃度。
在0.67μg/孔至6.7μg/孔的濃度測定抗體滴度。在20μg/孔使用人微粒體蛋白進行11βHSD1試驗，以產(chǎn)生最佳的信噪比。對照“不含酶”的空白(緩沖液替代微粒體)、“GA”空白(在微粒體以前加入10μl停止液)和對照組測試每個抗體濃度。結(jié)果見圖16和17。
飽和曲線顯示在1.68μg/孔以上酶活性測定沒有差異。具有這個濃度的信噪比良好的，(6倍)。因此在將來的試驗中以1.7μg/孔使用抗體。
使用RIA檢測研究了酶活性和人肝微粒體蛋白濃度的線性。使用微粒體蛋白以1μg/孔至40μg/孔的濃度進行11βHSD1試驗。蛋白一直到20μg/孔的濃度時11βHSD1活性呈線性。圖18，證實了使用經(jīng)典酶試驗(圖7)獲得的結(jié)果。
在試驗中使用的人微粒體蛋白的最佳濃度似乎是10μg/孔。
還研究了在酶試驗中包括吐溫80的影響。除了酶試驗緩沖液(緩沖液2)含有0.05％吐溫80外在相同的條件下與上文試驗平行進行這項試驗。在四個濃度測試了微粒體蛋白。發(fā)現(xiàn)吐溫80可增加空白CPM，減少試驗的信噪比。從測試10μg/孔微粒體蛋白的組獲得的代表性數(shù)據(jù)見圖19。對于研究的所有微粒體蛋白濃度獲得了相似的結(jié)果，因此在將來的研究中不使用吐溫。
為了簡化方案以致于使用相同的緩沖液進行酶試驗和RIA步驟(stage)，使用酶試驗緩沖液(緩沖液2)或緩沖液3(RIA緩沖液)進行這兩個步驟。使用的微粒體蛋白濃度是10μg/孔而腎上腺皮質(zhì)素濃度是175nM。使用緩沖液3進行酶試驗和RIA似乎可稍微改善數(shù)據(jù)，圖20。
研究了酶活性和溫育時間的線性。使用10μg/孔的微粒體蛋白和175nM的腎上腺皮質(zhì)素進行酶試驗，并且在不同的時間點終止反應(yīng)，結(jié)果見圖21。
使用10μg/孔濃度的微粒體蛋白和175nM的底物，反應(yīng)在一直到30分鐘的時間點是線性的。這些結(jié)果表明底物175nM的濃度太低。在經(jīng)典11βHSD1試驗中觀察到的表觀Km是660nM(圖8和9)，雖然這些試驗是終點測定，但因此在具有30分鐘溫育時間的低底物組測定的初始速率是不確定的。然而在人肝微粒體11βHSD1試驗中公布的Km值在微克分子的范圍[18，19]。雖然175nM的底物明顯低于表觀Km，但是由于兩個原因不可能顯著提高濃度(i)如果化合物和腎上腺皮質(zhì)素競爭，如果將底物濃度增加到參考文獻1中使用的濃度以上，測定的抑制作用將會下降。
(ii)增加底物的濃度將會減少標記的比活度，降低試驗的靈敏度。這可通過加入更高濃度的[3H]-腎上腺皮質(zhì)素而克服，但是該方案使用0.5μci/孔并且如果使用更高的放射性水平測存在costimplication。
研究了飽和溶液。嚴格根據(jù)方法部分的描述，如所指出的，在具有10μg/孔微粒體蛋白和[冷凍腎上腺皮質(zhì)素]的緩沖液3中([coldcortisone])進行酶試驗。[3H]-腎上腺皮質(zhì)素始終是0.5μci/樣品。在30分鐘后通過加入10μl停止液終止反應(yīng)。嚴格按照方法部分所指出的，進行RIA。結(jié)果見圖22和23。
從圖23顯示的這些數(shù)據(jù)的Linweaver-Burke曲線的表觀Km(700nM)和在tic形式(format)11βHSD1試驗中測定的表觀Km的非常相似(圖9，表觀Km～660nM)。數(shù)據(jù)暗示在10μg微粒體蛋白，在175nM腎上腺皮質(zhì)素，溫育時間在30分鐘以上，酶是不飽和的。
降低微粒體蛋白濃度或溫度時間以在線性范圍內(nèi)產(chǎn)生反應(yīng)(reaction)將會部分克服這個問題。但是這些調(diào)整的任何一個均會降低試驗的靈敏度，并降低抑制劑的表觀效能。因此使用175nM的腎上腺皮質(zhì)素進行初步試驗。
11βHSD1試驗確證在測試化合物前，測定了酶試驗對DMSO的耐受性。在酶試驗中包括1％的DMSO不會影響總值或空白值，但是會稍微增加酶活性和信噪比(表4)。在0.3至10％的DMSO濃度范圍重復(fù)試驗，圖24。
表4在甘草次酸IC50試驗中獲得的對照和空白的CPM，表明1％DMSO和獲得的信噪比的影響。

在有0.3％和1％DMSO存在的情況下，酶的活性有稍微的增加。在DMSO濃度在1％以上時，酶的活性有線性減少。據(jù)報道DMSO可以增加和減少微粒體酶活性，這取決于濃度，據(jù)推測是由于對微粒體膜的影響。基于這些數(shù)據(jù)，目的是在有1％DMSO存在的情況下篩選化合物。
根據(jù)標準抑制劑甘草次酸產(chǎn)生的IC50值，使用終濃度1％的DMSO在0.012μM和3μM之間的濃度測試化合物，圖25。
甘草次酸給出了濃度相關(guān)的酶抑制作用(concentration-related inhibition of the enzyme)，其具有41nM的IC50，具有良好的曲線適合值(fit value)(r2＝0.962)和Hillsope。這和使用tlc形式(format)試驗產(chǎn)生40nM的值相似(參見圖10)。據(jù)報道使用脫氫地塞米松為底物，甘草次酸抑制人肝微粒體11βHSD1的IC50是30nM[19]。但是這些數(shù)值低于Barf等報道的數(shù)值。
表5抑制數(shù)據(jù)












磺酰胺的合成方法A向溶解在吡啶(3當(dāng)量)中的胺(1當(dāng)量)加相應(yīng)的磺酰氯(1.2當(dāng)量)中，然后在N2下在RT整夜攪拌反應(yīng)混合物。將所得到的混合物倒入HCl溶液然后用乙酸乙酯萃取有機層，干燥(MgSO4)，過濾并在減壓下濃縮以提供希望的磺酰胺晶體固體或濃漿。然后通過快速色譜法使用乙酸乙酯/己烷(3∶2)或CH2Cl2/EtoAc(4∶1)做洗脫液純化粗制化合物以提供固體晶體。
方法B向溶解在Et3N(5當(dāng)量)中的胺(1當(dāng)量)加相應(yīng)的磺酰氯(1.2當(dāng)量)然后在N2下在RT整夜攪拌混合物。將所得到的混合物倒入水中，然后用乙酸乙酯萃取有機層，干燥(MgSO4)，過濾并在減壓下濃縮以提供希望的磺酰胺晶體固體或濃漿。然后通過快速色譜法使用乙酸乙酯/己烷(3∶2)或/EtoAc(4∶1)做洗脫液純化粗制化合物以提供固體晶體。
注不溶性胺和磺酰氯溶解在最小量的CH2Cl2，THF或DMF中。
方法C向在DCM中的芳基磺酰氯溶液(1.1當(dāng)量)加吡啶和催化量的DMAP，在氮氣下室溫攪拌溶液10分鐘。然后加入胺(1當(dāng)量)然后在氮氣下室溫攪拌反應(yīng)混合物4-16小時。在DCM和5％碳酸氫鈉之間分配所得混合物。用鹽水洗滌有機層，用MgSO4干燥，然后濃縮以提供固體或濃漿。然后通過快速色譜法純化粗制化合物以提供希望的芳基磺酰胺的固體晶體。
DGS03020A(STX412)由方法A合成。DGS03020A灰白色晶體(186mg；55％).mp 189-190℃；TLC Rf0.68乙酸乙酯/己烷(3∶2)；1H NMR(CDCl3)δ2.80(s，3H，CH3)，7.13(s，1H，N-H，和D2O交換)，7.212(dd，1H，Ar-H，J＝2.34Hz和8.59Hz)，7.27(dd，1H，Ar-H，J＝1.95Hz和8.59Hz)，7.51(d，1H，Ar-H，J＝1.95Hz)，7.65(d，1H，Ar-H，J＝1.95Hz)，7.69(d，1H，Ar-H，J＝8.59Hz)，7.91(d，1H，Ar-，J＝8.59Hz)；MS(FAB+)372.9[100，(M+H)+]；HRMS m/z(FAB+)372.9627，C14H1035CI2N2O2S2要求372.9639，376.9574，C14H1037Cl2N2O2S2要求376.9580；HPLC tr3.65min(92∶08＝MeOH∶H2O)。
DGS03022A(STX413)由方法A合成。DGS 03022A灰白色晶體(233mg；72％).mp178℃；TLC Rf0.71乙酸乙酯/己烷(3∶2)；1H NMR(CDCl3)δ2.75(s，3H，CH3)，2.80(s，3H，CH3)，6.75(s，1H，N-H，和D2O交換)，7.11(dd，1H，Ar-H，J＝1.95Hz和8.59Hz)，7.17-7.21(m，1H，Ar-H)，7.53(d，1H，Ar-H，J＝1.17Hz)，7.55(d，1H，Ar-H，J＝1.95Hz)，7.68(d，1H，Ar-H，J＝8.20Hz)，7.92(dd，1H，Ar-H，J＝1.17Hz and 7.81Hz)；MS(FAB+)164.1[35，(5-氨基-2-甲基苯并噻唑)+]，353.0[100，(M+H)+]；HRMS m/z(FAB+)353.0176，C15H1435CLN2O2S2要求353.0185，355.0155，C15H1437ClN2O2S2要求355.0156；HPLC tr3.78min(92∶08＝MeOH∶H2O)。
DGS03024A(STX421)由方法A合成。DGS03024A白色晶體(240mg；76％)。mp 133-134℃；TLC Rf0.7乙酸乙酯/己烷(3∶2)；1H NMR(CDCl3)δ0.90(t，3H，CH3CH2CH2，J＝7.42Hz)，1.56-1.66(m，2H，CH3CH2CH2)，2.59(t，2H，CH3CH2CH2.J＝7.42Hz)，2.80(s，3H，CH3)，6.71(s，1H，N-H，和D2O交換)，7.17(d 1H，Ar-H，J＝2.34Hz和8.59Hz)，7.201-7.214(m，1H，Ar-H)，7.218-7.223(m，1H，Ar-H)，7.57(d，1H，Ar-H，J-2.34Hz)，7.76-7.69(m.3H，Ar-H)；MS(FAB+)347.1[100，(M+H)+]；HRMS m/z (FAB+)347.0881，C17H19N2O2S2要求347.0887；HPLC tr3.69min(92∶08＝MeOH∶H2O)。
DGS03034A(STX424)由方法A合成。DGS03034A白色晶體(262mg；86％).mp 152℃；TLCRf0.48乙酸乙酯/己烷(3∶2)；1H NMR(CDCl3)δ10.31(s，1H，NH，和D2O交換)，7.85(d，1H，Ar-H，J＝8.59Hz)，7.66-7.69(m，2H，Ar-H)，7.57(d，1H，Ar-H，J＝1.95Hz)，7.11(dd，1H，Ar-H，J＝2.34Hz和8.59Hz)，7.02-7.05(m，2H，Ar-H)，3.76(s，3H，OCH3)，2.73(s，3H，CH3)；MS(FAB+)164.0[25(SM*胺)]，335.0[100，(M+H)4]；HRMS m/z(FAB+)335.0519，C15H15N2O3S2要求335.0524；HPLC tr1.94min(80∶20＝MeOH∶H2O)。
DGS03036A(STX425)由方法A合成。DGS03036A白色晶體(136mg；42％)。mp 295-296℃；TLC Rf0.56乙酸乙酯/己烷(3∶2)；1H NMR(DMSO-d6)δ10.66(s，1H，NH，和D2O交換)，7.87(d，1H，Ar-H，J＝8.59Hz)，7.52(d，1H，Ar-H，J＝1.95Hz)，7.32-7.44(m，3H，Ar-H)，7.12(dd，1H，Ar-H，J＝2.3Hz和8.59Hz)，2.73(s，3H，CH3)，2.64(s，3H，CH3)；MS(FAB+)164.0[40，(初始胺)+]，353.0[100，(M+H)+]；HRMSm/z(FAB+)353.0187，C15H1435ClN2O2S2要求353.0185，355.0165，C15H1437CLN2O2S2要求355.0155；HPLCtr1.94min(80∶20＝MeOH∶H2O)。
DGS03058A(STX519)
由方法A合成。DGS03058A白色晶體(199mg；57％)。mp 172℃；TLCRf0.56乙酸乙酯/己烷(3∶2)；1H NMR(DMSO-d6)δ10.53(s，1H，NH，和D2O交換)，7.88(d，1H，Ar-H，J＝8.59Hz)，7.74-7.77(m，2H，Ar-H)，7.64-7.68(m，2H，Ar-H)，7.58(d，1H，Ar-H，J＝1.95Hz)，7.11(dd，1H，Ar-H，J＝1.95Hz和8.59Hz)，2.74(s，3H，CH3)；MS(FAB+)384.9[100，(M+H)+]；HRMS m/z(FAB+)384.9494，C14H1281BrN2O2S2要求384.9503，382.9501，C14H1279BrN2O2S2要求382.9523；HPLC tr2.64min(90∶10＝MeOH∶H2O)。
DGS03062B(STX469)向在無水DMF(5ml)和NaH(7mg，0.16mmol，1.1當(dāng)量)中的DGS03022A(50mg，0.14mmol，1當(dāng)量)攪拌溶液加入Mel(3ml，0.21mmol，1.5當(dāng)量)然后攪拌混合物1小時。漿所得混合物倒入水中，然后用乙酸乙酯萃取有機層，干燥(MgSO4)，過濾并在減壓下濃縮以提供黃色的懸浮液。然后通過快速色譜法使用乙酸乙酯/己烷(3∶2)做洗脫液純化粗制化合物(70mg)以提供DGS03062A白色固體晶體(36mg；69％)。mp 97-98℃；TLC Rf0.61乙酸乙酯/己烷(3∶2)；1H NMR(CDCI3)δ7.73(dd，1H，Ar-H，J＝1.17Hz和7.81Hz)，7.37(d，1H，Ar-H，J＝8.59Hz)，7.59(d，1H，Ar-H，J＝1.95Hz)，7.49(dd，1H，Ar-H，J＝1.17Hz and 8.2Hz)，7.24(dd，1H，Ar-H，J＝2.34Hz和8.59Hz)，7.11-7.15(m，1H，Ar-H)，3.24(s，3H，CH3)，2.76(s，3H，CH3)，2.35(s，3H，CH3)；MS(FAB+)366.9[100，(M+H)4]；HRMS m/z 10(FAB+)366.0262，C16H1536ClN2O2S2要求366.0262，368.0300，C16H1537CIN2O2S2要求368.0234；HPLCtr1.93min(96∶04＝MeOH∶H2O)。
DGS03072A(STX470)向在無水DMF(5ml)和NaH(10mg，0.16mmol，1.1當(dāng)量)中的DGS03022A(50mg，0.14mmol，1當(dāng)量)攪拌溶液加入Etl(23mg，0.21mmol，1.5當(dāng)量)然后攪拌混合物1小時。將所得的混合物倒入水中然后用乙酸乙酯萃取有機層，干燥(MgSO4)，過濾并在減壓下濃縮以提供黃色懸浮液。然后通過快速色譜法使用(3∶2)做洗脫液純化粗制化合物(75mg)提供DGS03072A淡黃色濃漿(16mg；30％)。
TLC Rf0.71乙酸乙酯/己烷(3∶2)；1HNMR(CDCI3)δ7.76-7.78(m，2H，Ar-H)，7.66(m，1H，Ar-H)，7.53-7.55(m，1H，Ar-H)，7.27-7.28(m，1H，Ar-H)，7.14-7.18(m，1H，Ar-H)，7.11-7.18m，1H，Ar-H)，5.30(s，1H，NH，和D2O交換)，3.74(q，2H，Ar-H，J＝7.42Hz和7.03Hz)，2.83(s，3H，CH3)，2.53(s，3H，CH3)，1.12(t，3H，CH3，J＝7.03Hz)，MS(FAB+)381.1[100，(M+H)+]；HRMS25 m/z(FAB+)381.1062，C17H1735ClN2O2S2要求381.1058，385.0952，C17H1737ClN2O2S2Requires385.0949。
DGS03082A(STX521)由方法A合成。DGS03082A白色晶體(230mg；67％).mp 85-86℃；TLC Rf0.64乙酸乙酯/己烷(3∶2)；1H NMR(CDCI3)δ10.54(s，1H，NH，和D2O交換)，7.87(d，1H，Ar-H，J＝8.59Hz)，7.84(寬s，4H，Ar-H)，7.67-7.69(m，2H，Ar-H)，7.62(d，1H，Ar-H，J＝1.95Hz)，7.39-7.49(m，3H，Ar-H)，7.17(dd，1H，Ar-H，J＝1.95Hz和8.59Hz)，2.73(s，3H，CH3)；MS(FAB+)381.2[100，(M+H)+]；HRMS m/z(FAB+)381.0730，C20H17N2O2S2要求381.0731；HPLC 11.36min(96∶04＝MeOH∶H2O)。
DGS03084A(STX522)由方法A合成。DGS03084A黃色晶體(46mg；10％).mp 253-254℃；TLC Rf0.74乙酸乙酯/己烷(3∶2)；1H NMR(DMSO-d6)δ11.09(s，1H，NH，和D2O交換)，7.91(d，1H，Ar-H，J＝8.59Hz)，7.86(s，2H，Ar-H)，7.59(d，1H，Ar-H，J＝2.34Hz)，7.15(dd，1H，Ar-H，J-1.95Hz和8.59Hz)，2.74(s，3H，CH3)；MS(FAB+)409.1[100，(M+H)+]；MS(FAB-)407.0[100，(M-H)4]；HRMS m/z(FAB+)406.9176，C14H1935Cl3N2O2S2要求406.9167，408.9136，C14Hig37Cl3N2O2S2要求408.9140。
DGS03086A(STX523)由方法A合成。DGS03086A淡黃色晶體(101mg；57％).mp 219℃；TLC Rf0.71乙酸乙酯/己烷(3∶2)；1H NMR(DMSO-d6)δ10.68(s，1H，NH，和D2O交換)，7.87(d，1H，Ar-H，J＝8.59Hz)，7.79(d，1H，Ar-H，J＝8.59Hz)，7.64(d，1H，Ar-H，J＝1.95Hz)，7.54-7.57(m，2H，Ar-H)，7.11(dd，1H，Ar-H，J-2.34Hz和8.59Hz)，152.73(s，3H，CH3)，2.59(s，3H，CH3)；MS(FAB+)399.0[100，(M+H)+]，164.1[50，(初始胺)]；HRMS m/z(FAB+)398.9663，C15H1381BrN2O2S2要求398.9569，396.9684，C15H1379BrN2O2S2要求396.9680；HPLCtr1.39min(96∶04＝MeOH∶H2O)。
DGS03064在N2下將2，4-二氯苯甲酸(10g，0.0523mol，1當(dāng)量)和過量的氯磺酸(10.5mL，0.1571mol，3當(dāng)量)加熱至115℃18小時。冷卻所得到的混合物然后將其自覺地倒入冰水中。過濾所得到的白色沉淀物，用充足的水洗滌并且在真空干燥過夜。將粗制的DGS03064(11.5g76％)用于隨后的反應(yīng)而沒有進一步純化。mp 173-174℃；TLC Rf；0.48(4∶1，CH2CI2/EtOAc)；1H NMR(CDCI3)δ8.28(1H，s，Ar-H)，7.65(1H，s，Ar-H)；MS m/z(FAB+)286.9[100，(M+H)+]；HRMS m/z(FAB+)287.8798，C7H335Cl3O4S要求287.8818，291.8755，C7H337Cl3O4S要求291.8759。
DGS03088A(STX524)由方法合成B。分離兩種化合物-DGS03088A和DGS03088A。DGS03088A白色晶體(48mg；13％)。mp 153-155℃；TLC Rf0.79乙酸乙酯/己烷(3∶2)；1H NMR(CDCl3)δ8.31(s，1H，NH，和D2O交換)，8.07(s，1H，NH，和D2O交換)，8.07(s，1H，Ar-H)，7.71-7.79(m，4H Ar-H)，7.67(d，1H，Ar-H，J＝1.95Hz)，7.58(s，1H，Ar-H)，7.27(dd，1H，Ar-H，J＝2.72Hz和8.59Hz)，2.83(s，3H，CH3)，2.79(s，3H，CH3)；MS(FAB+)562.9[100，(M+H)+]；HRMS m/z(FAB+)562.9825，C23H1735CI2N4O3S3要求562.9839，566.9778，C23H1737Cl2N4O3S3要求566.9781；HPLC tr1.33min(96∶04＝MeOH∶H2O)。
DGS03088-1(STX575)
DGS03088-1白色晶體(31mg；12％).mp 147-148℃；TLC Rf0.45乙酸乙酯/己烷(3∶2)；1H NMR(CDCI3)δ8.45(s，1H，NH，和D2O交換)，8.17(d，1H，Ar-H，J＝8.09Hz)，8.04(s，1H，Ar-H)，7.77(s，1H，Ar-H)，7.50(d，1H，Ar-H，J＝1.83Hz)，7.35(dd，1H，Ar-H，J＝1.83Hz和8.05Hz)，2.85(s，3H，CH3)；LC-MS 418.1[100，(M+)]；HPLCtr1.97min(96∶04＝MeOH∶H2O)。
DGS03100A(STX552)由方法B合成。DGS03100A白色晶體(224mg；69％).mp 222-223℃；TLC Rf0.56 CH2CI2/EtOAc(4∶1)；1H NMR(DMSO-d6)δ10.27(s，1H，NH，和15 D2O)，9.16-9.17(m，1H，Ar-H)，8.48-8.51(m，2H，Ar-H)，8.36-8.38(m，2H，Ar-H)，8.23-8.25(m，1H，Ar-H)，7.67-7.34(m，3H，Ar-H)，7.51-7.12(m，1H，Ar-H)，7.09-7.12(m，1H，Ar-H)，2.67(s，3H，CH3)；LC-MS 355.7[(M)+]；MS(FAB+)356.0[100，(M+H)+]；HRMS m/z(FAB+)356.0531，C17H14N3O2S2要求356.0527；HPLC tr1.86min(96∶04＝MeOH∶H2O)。
DGS03102A(STX553)由方法B合成。DGS03102A淡黃色晶體(170mg；52％).mp 89-90℃；TLC Rf0.55 CH2CI2/EtOAc(4∶1)；1H NMR(DMSO-d6)δ10.87(s，1H，NH，和D2O交換)，8.28-8.24(m，1H，Ar-H)，8.06-8.22(m，2H，Ar-H)，8.05(d，1H，Ar-H，J＝8.20Hz)，7.60-7.77(m，2H，Ar-H)，7.47(d，1H，Ar-H，J＝1.95Hz)，7.04(dd，1H，Ar-H，J＝1.95Hz和8.59Hz)，2.69(s，3H，CH3)；MS(FAB+)355.0[100，(M+H)+]；HRMS m/z(FAB+)355.0576，C18H15N2O2S2要求355.0575；HPLC tr1.93min(96∶04＝MeOH∶H2O)。
DGS03104A(STX554)由方法B合成.DGS03104A黃色晶體(230mg；63％).mp 85-86℃；TLC Rf0.65 CH2CI2/EtOAc(4∶1)；1H NMR(DMSO-d6)δ10.84(s，1H，NH，Ex.With D2O)，8.40-8.42(m，2H，Ar-H)，8.22-8.23(m，1H，Ar-H)，7.76-7.78(m，1H，Ar-H)，7.58-7.65(m，2H，Ar-H)，7.51-7.56(m，1H，Ar-H)，7.23-7.25(m，1H，Ar-H)，7.05-7.07(m，1H，Ar-H)，2.79(s，6H，2xCH3)，2.69(s，3H，CH3)；MS(FAB+)398.1[100，(M+H)+]；HRMS m/z(FAB+)398.0978，C2oH20N3O2S2要求398，0997；HPLC tr2.01min(96∶04＝MeOH∶H2O)。
DGS03116A(STX580)由方法B合成。DGS03116A淡黃色晶體(151mg；44％).mp 153℃；TLC Rf0.55 CH2CI2/EtOAc(4∶1)；1H NMR(DMSO-d6)δ10.96(s，1H，NH，和D2O交換)，8.00(d，1H，Ar-H，J＝2.34Hz)，7.90(d，1H，Ar-H，J＝8.59Hz)，7.66-7.73(m，2H，A r-H)，7.58(d，1H，Ar-H，J＝2.34Hz)，7.17(dd，1H，Ar-H，J＝2.34Hz和8.59Hz)，2.74(s，3H，CH3)；MS(FAB+)372.8[100，(M+H)*]；HRMS m/z(FAB+)375.9599，C14H1137Cl2N2O2S2要求375.9502，372.9606，C14H1135Cl2N2O2S2要求372.9639；HPLC tr2.98min(90∶10＝MeOH∶H2O)。
DGS03118A(STX581)由方法B合成。DGS03118A白色晶體(416mg；42％).mp 88-89℃；TLC Rf0.49 CH2CI2/EtOAc(4∶1)；1H NMR(DMSO-d6)δ10.47(s，1H，NH，交換D2O)，7.74(d，1H，Ar-H，J＝8.59Hz)，7.58-7.61(m，2H，Ar-H)，7.35-7.38(m，1H，Ar-H)，7.13-7.17(m，1H，Ar-H)，4.76-4.78(m，2H，CH2)，3.75-3.79(m，2H，CH2)，2.90-2.93(m，2H，CH2)，2.73(s，3H，CH3)；MS(FAB+)456.0[100，(M+H)+]；HRMS m/z(FAB+)456.0663，C19H17F3N3O3S2要求456.0663；HPLC t 1.63min(96∶04＝MeOH∶H2O)。
DGS03120A(STX582)由方法B合成。DGS03120A淡黃色晶體(185mg；55％).mp 91-92℃；TLC Rf0.51 CH2CI2/Et0Ac(4∶1)；1H NMR(DMSO-d6)δ10.35(s，1H，NH，和交換25D2O)，7.85(d，1H，Ar-H，J＝8.98Hz)，7.69(d，1H，Ar-H，J＝2.34Hz)，7.61(dd，1H，Ar-H，J＝2.73Hz和8.98Hz)，7.55(d，1H，Ar-H，J＝2.73Hz)，7.20(d，1H，Ar-H，J＝8.98Hz)，7.15(dd，1H，Ar-H，J＝2.3Hz and 8.59Hz)，3.89(s，3H，OCH3)，2.73(s，3H，CH3)；MS(FAB+)369.0[100，(M+H)+]；HRMS m/z(FAB+)371.0114，C15H1437CIN2O3S2要求371.0105，369.0135，C15H1435ClN2O3S2要求369.0134；HPLC tr1.68min(96∶04＝MeOH∶H2O)。
DGS03122A(STX731)由方法B合成。分離兩種化合物-DGS03122A和DGS03122B。DGS03122A黃色晶體(67mg；22％).mp 272-273℃；TLC Rf0.59CH2CI2/EtOAc(4∶1)；1H NMR(DMSO-d6)δ8.15(m，5H，，Ar-H)，8.02-8.09(m，4H，Ar-H)，7.74(d，1H，Ar-H，J＝2.3Hz)，7.14(dd，1H，Ar-H，J＝1.95Hz和8.59Hz)，2.84(s，3H，CH3)；MS(FAB+)495.0[100，(M+H)+]；HPLC 11.79min(90∶10＝MeOH∶H2O)。
DGS03122B(STX583)DGS03122B黃色晶體(47mg；16％)。mp 204-206℃；TLC Rf0.48CH2CI2/EtOAc(4∶1)；1H NMR(DMSO-d6)δ10.95(s，1H，NH，和D2O交換)，8.03-8.07(m，2H，Ar-H)，7.86-7.91(m，2H，Ar-H)，7.77-7.81(m，1H，Ar-H)，7.55(d，1H，Ar-H，J＝1.95Hz)，7.12(dd，1H，Ar-H，J＝2.34Hz和8.59Hz)，2.74(s，3H，CH3)；MS(FAB+)330.0[100，(M+H)+]；HRMS m/z(FAB+)330.0370，C15H12N3O2S2要求330.0371；HPLC tr1.84min(90∶10＝MeOH∶H2O)。
DGS03124A(STX584)由方法B合成。DGS03124A淡黃色晶體(125mg；55％).mp188-189℃；TLC Rf0.37CH2CI2/EtOAc(4∶1)；1H NMR(DMSO-d6)δ10.09(s，1H，NH，和D2O交換)，7.81(d，1H，Ar-H，J＝8.59Hz)，7.63(d，1H，Ar-H，J＝8.20Hz)，7.56(d，1H，Ar-H，J＝1.95Hz)，7.14(dd，1H，Ar-H，J＝1.95Hz和8.59Hz)，6.96(s，1H，Ar-H)，6.81(d，1H，Ar-H，J＝8.59Hz)，3.87(s，3H，OCH3)，2.72(s，3H，CH3)，2.28(s，3H，CH3)；MS(FAB+)219.1[20，(磺酰氯-H)+]，349.0[100，(M+H)+]；HRMS m/z(FAB+)349.0678，C16H17N2O3S2要求349.0681；HPLC tr11.80min(96∶04＝MeOH∶H2O)。
DGS03126A(STX585)由方法B合成。DGS03126A淡黃色晶體(145mg；40％).mp 84-86℃；TLC Rf0.71 CH2CI2/EtOAc(4∶1)；1H NMR(DMSO-d6)δ10.42(s，1H，NH，和D2O交換)，7.88(d，1H，Ar-H，J＝8.59Hz)，7.73-7.77(m，2H，Ar-H)，7.59(d，1H，Ar-H，J＝1.95Hz)，7.41-7.46(m，2H，Ar-H)，7.22-7.26(m，2H，Ar-H)，7.13(dd，1H，Ar-H，J＝8.59Hz和2.34Hz)，7.02-7.10(m，4H，Ar-H)，2.75(s，3H，CH3)；MS(FAB+)397.0[100，(M+H)4]；HRMS m/z(FAB+)397.0671，C20H17N2O3S2要求397.0681；HPLC tr1.93min(96∶04＝MeOH∶H2O)。
DGS03130A(STX730)由方法B合成。分離兩種化合物-DGS03130A和DGS03130B。由方法B合成。DGS03130A淡黃色晶體(105mg；33％)。mp 125-126℃；TLC Rf0.55 CH2CI2/EtOAc(4∶1)；1H NMR(DMSO-d6)δ8.21-8.24(m，4H，Ar-H)，8.13(d，1H，Ar-H，J＝8.59Hz)，7.99-8.03(m，4H，Ar-H)，7.57(d，1H，Ar-H，J＝1.95Hz)，7.03(dd，1H，Ar-H，J＝8.59Hz和1.95Hz)，2.82(s，3H，CH3)；2.69(s，6H，2xCH3)；MS(FAB+)529.0[100，(M+H)+]；MS(FAB-)527.1[70，(M-H)+]，345.0[100，(M-2-乙?；酋Ｂ?+]；HPLC tr1.81min(96∶04＝MeOH∶H2O)。
DGS03130B(STX701)DGS03130A淡黃色晶體(45mg；14％)。mp 169℃；TLC R，0.42CH2CI2/Et0Ac(4∶1)；1H NMR(DMSO-d6)δ10.63(s，1H，NH，和D2O交換)，8.04-8.07(m，2H，Ar-H)，7.86-7.89(m，3H，Ar-H)，7.59(d，1H，Ar-H，J＝1.95Hz)，7.13(dd，1H，Ar-H，J＝8.9Hz和2.3Hz)，3.73(s，3H，CH3)；2.56(s，3H，CH3)；MS(FAB+)347.0[100，(M+H)+]，219.1[10，(磺酰氯+H)+]；HRMS m/z(FAB+)347.0522，C16H15N2O3S2要求347.0524；HPLC tr1.77min(96∶04＝MeOH∶H2O)。
DGS03134A(STX703)由方法B合成。DGS03134A淡黃色晶體(91mg；23％)。mp 206-207℃；TLC Rf0.81 CH2CI2/EtOAc(4∶1)；1H NMR(DMSO-d6)δ10.37(s，1H，NH，和D2O交換)，7.87(d，1H，Ar-H，J＝8.59Hz)，7.46(d，1H，Ar-H，J＝1.95Hz)，7.19(s，2H，Ar-H)，7.07(dd，1H，Ar-H，J＝8.59Hz和1.95Hz)，4.13-4.20(m，2H，2x(CH3)2H)，2.83-2.89(m，1H，(CH3)2H)，2.72(s，3H，CH3)，1.15(d，12H，4x(CH3)2，J＝7.03Hz)，1.11(d，9H，2x(CH3)2，J＝6.64Hz)；LC-MS 429.72(M)+；HPLC tr2.84min(90∶10＝MeOH∶H2O)。
DGS03136A(STX704)由方法B合成。DGS03136A淡黃色晶體(225mg；71％)。mp 54-55℃；TLC Rf0.50 CH2CI2/EtOAc(4∶1)；1H NMR(CDCI3)δ7.65(m，3H，Ar-H)，7.58(d，1H，Ar-H，J＝2.34Hz)，7.18(dd，1H，Ar-H，J＝8.6Hz和1.95Hz)，6.84-6.85(m，2H，Ar-H)，6.82(s，1H，NH，和D2O交換)，4.51-4.60(m，1H，(CH3)2H)，2.80(s，3H，CH3)，1.31(s，6H，(CH3)2)；LC-MS 347.6(M)+；HRMS m/z(FAB+)347.0847，C17H19N2O2S2要求347.0837；HPLC tr2.39min(90∶10＝MeOH∶H2O)。
DGS03138B(STX705)由方法B合成。DGS03138B淡黃色晶體(24mg；7％).mp 248℃；TLC Rf0.52 CH2CI2/EtOAc(4∶1)；1H NMR(CDCI3)δ8.18(d，1H，Ar-H，J＝8.59Hz)，8.15(d，1H，Ar-H，J＝1.95Hz)，7.89-8.04(m，4H，Ar-H)，7.51(dd，1H，Ar-H，J＝8.20Hz和1.95Hz)，7.27(s，1H，NH，和D2O交換)，2.89(s，3H，CH3)，1.59(s，3H，CH3)；LC-MS 372.90(M+CH3CN)+；HRMS m/z(FAB+)371.2281，C16H15N2O4S2要求371.2278；HPLC tr2.22min(90∶10＝MeOH∶H2O)。
DGS03140A{STX711)由方法B合成。DGS03140A褐色晶體(85mg；26％).mp 73-75℃；TLC Rf0.59 CH2CI2/EtOAc(4∶1)；1H NMR(CDCI3)δ7.85(d，1H，Ar-H，J＝8.59Hz)，7.80(d，1H，Ar-H，J＝8.59Hz)，7.68(s，1H，NH，和D2O交換)，7.57(d，1H，Ar-H，J＝1.95Hz)，7.54(s，1H，NH，和D2O交換)，7.24(d，1H，Ar-H，J＝2.34Hz)，7.18(dd，1H，Ar-H，J＝8.20Hz和1.95Hz)，7.03(dd，1H，Ar-H，J＝8.59Hz和2.34Hz)，6.77(dd，1H，Ar-H，J＝8.59Hz和2.34Hz)，2.78(s，3H，CH3)，2.24(s，3H，CH3)；LC-MS 362.32(M)+；HRMSm/z(FAB+)361.0587，C16H16N3O3S2要求361.0636；HPLC tr2.09min(90∶10＝MeOH∶H2O)。
DGS03142A(STX706)由方法B合成。DGS03142A淡黃色晶體(79mg；24％).mp 89-91℃；TLC Rf0.65 CH2CI2/EtOAc(4∶1)；1H NMR(CDCI3)δ7.78(d，1H，Ar-H，J＝8.20Hz)，7.61(d，1H，Ar-H，J＝1.56Hz)，6.98(dd，1H，Ar-H，J＝1.95Hz和8.20Hz)，6.93(s，1H，Ar-H)，6.92(s，1H，NH，和D2O交換)，3.99(s，6H，2xCH3)，3.93(s，6H，2xCH3)，2.85(s，3H，CH3)；LC-MS 361.48(M)+；HRMS m/z(FAB+)361.1605，C18H21N2O2S2要求361.1606；HPLC tr2.26min(90∶10＝MeOH∶H2O)。
DGS03144A(STX707)由方法B合成。DGS03144A淡黃色晶體(79mg；24％)。mp 89-91℃；TLC Rf0.69 CH2CI2/EtOAc(4∶1)；1H NMR(CDCI3)δ7.70(d，1H，Ar-H，J＝8.59Hz)，7.58(d，1H，Ar-H，J＝2.34Hz)，7.39(dd，1H，Ar-H，J＝2.34Hz和8.59Hz)，7.19(d，1H，Ar-H，J＝1.95Hz)，7.17(t，1H，Ar-H，J＝1.95Hz)，6.83(d，1H，Ar-H，J＝8.59Hz)，6.59(s，1H，NH，和D2O交換)，3.89(s，3H，OCH3)，3.76(s，3H，OCH3)，2.81(s，3H，CH3)；LC-MS 363.02(M)+；HRMSm/z(FAB+)365.0642，C16H17N2O4S2要求365.0585；HPLC tr2.15min(90∶10＝MeOH∶H2O)。
DGS03146A(STX708)由方法B合成。DGS03146A淡黃色晶體(181mg；51％)。mp 17530℃；TLC Rf0.57 CH2CI2/EtOAc(4∶1)；1H NMR(CDCI3)δ7.71(dd，1H，Ar-H，J＝2.3Hz和8.98Hz)，7.59(d，1H，Ar-H，J＝1.95Hz)，7.43(d，1H，Ar-H，J＝8.98Hz)，7.21(dd，1H，Ar-H，J＝1.95Hz和8.59Hz)，6.67(s，1H，NH，和D2O交換)，2.81(s，3H，OCH3)，1.59(s，6H，2xCH3)，1.29(s，6H，2xCH3)；LC-MS 377.01(M)+；HRMS m/z(FAB+)377.0988，C18H21N2O3S2要求377.0994；HPLC12.53min(90∶10＝MeOH∶H2O)。
DGS03148A(STX709)由方法B合成。DGS03148A灰白色晶體(102mg；31％)。mp214-215℃；TLC Rf0.62 CH2CI2/EtOAc(4∶1)；1H NMR(CDCI3)δ7.71-7.73(m，2H，Ar-H)，57.60-7.61(m，1H，Ar-H)，7.44-7.46(m，2H，A r-H)，7.21-7.24(m，2H，Ar-H)，6.61(s，1H，NH，和D2O交換)，2.83(s，3H，CH3)，1.31(s，9H，(CH3)3)；LC-MS 360.12(M)+；HRMS m/z(FAB+)361.1057，C18H21N2O3S2要求361.1044；HPLC tr2.67min(90∶10＝MeOH∶H2O)。
DGS03150A(STX710)由方法B合成。DGS03150A淡黃色晶體(101mg；30％)。mp 200-201℃；TLC Rf0.50 CH2CI2/EtOAc(4∶1)；1H NMR(CDCI3)δ7.65(d，1H，Ar-H，J＝8.59Hz)，7.44(d，1H，Ar-H，J＝1.95Hz)，7.09(dd，1H，Ar-H，J＝1.95Hz和8.59Hz)，6.75(s，1H，NH，和D2O交換)，2.79(s，3H，CH3)，2.57(s，6H，2xCH3)，2.24(s，3H，CH3)，152.19(s，6H，2xCH3)；LC-MS 374.10(M)+；HRMS m/z(FAB+)375.1195，C19H23N2O2S2要求375.1201；HPLC tr3.15min(80∶20＝MeOH∶H2O)。
DGS03152A(STX712)
由方法B合成。DGS03152A淡黃色晶體(120mg；33％)。mp 181-182℃；TLC Rf0.65 CH2CI2/EtOAc(4∶1)；1H NMR(CDCI3)δ7.63(d，1H，Ar-H，J＝8.59Hz)，7.59(d，1H，Ar-H，J＝2.3Hz)，7.22(dd，1H，Ar-H，J＝2.3Hz和8.59Hz)，4.91(s，1H，NH，和D2O交換)，3.82(s，3H，CH3)；LC-MS 392.96(M)+；HRMS m/z(FAB+)394.9941，C14H8F5N2O2S2要求394.9947；HPLC tr2.49min(90∶10＝MeOH∶H2O)。
DGS03158A(STX713)由方法B合成。DGS03158A黃色晶體(158mg；40％)。mp 334-335℃；TLC Rf0.47 CH2CI2/EtOAc(4∶1)；1H NMR(CDCI3)δ7.65(d，1H，Ar-H，J＝8.59Hz)，7.47(d，1H，Ar-H，J＝2.3Hz)，7.10(dd，1H，Ar-H，J＝2.3Hz和8.59Hz)，6.69(s，1H，NH，和D2O交換)，2.79(s，3H，CH3)，2.61(t，2H，CH2，J＝6.64Hz)，2.55(s，3H，CH3)，302.51(s，3H，CH3)，2.08(s，3H，CH3)，1.79(t，2H，CH2，J＝7.03Hz)，1.29(s，6H，2xCH3)；LC-MS 431.11(M)+；HPLC tr3.24min(90∶10＝MeOH∶H2O)。
苯并噻唑芳基磺酰胺衍生物的合成 a)RX，NaH，THF r.t.b)ArSO3CI，DCM，吡啶或ArSO3Cl，DCM，吡啶/DMAPc)二乙胺，DCM，AICl3d)RX，K2CO3，丙酮，回流
a)HNO3，H2SO4-5-0℃ b)H2，5％Pd/C，C2H5OH，c)ArSO3Cl，DCM，吡啶或ArSO3Cl，DCM，吡啶/DMAP d)胺，THF，回流
a)N-氯代琥珀酰亞胺，IPA b)ArSO3Cl，DCM，吡啶或ArSO3Cl，DCM，吡啶/DMAPc)N-溴代琥珀酰亞胺，CCl4，過氧化苯甲酰 d)3-氯-2甲基苯磺酰胺，K2CO3，CH3CN
STX751，XDS01141 STX752，XDS01142 STX754，XDS01144 STX755，XDS01145A STX763，XDS01145B STX767，XDS01151A STX768，XDS01151B STX834，XDS01168
STX833，XDS01167STX835，XDS01176 STX836，XDS01177 STX878，XDS01164STX989，XDS02038 STX1021，XDS02069 STX996，XDS02047STX997，XDS02048A STX998，XDS02048B STX999，XDS02049STX992，XDS02042B STX991，XDS02042A STX993，XDS02043B STX995，XDS02044A STX994，XDS02044B STX1017，XDS02055B STX1029，XDS02070ASTX1030，XDS02070B
N-苯并噻唑苯磺酰胺衍生物制備的通常方法向在DCM(5-10ml)中的芳基磺酰氯(1.1當(dāng)量)溶液加入吡啶(2.2當(dāng)量)和催化量的DMAP。在氮氣下室溫攪拌溶液10分鐘。然后加入胺(1當(dāng)量)然后在氮氣下室溫攪拌反應(yīng)混合物4-6小時。所得到的混合物在DCM和5％碳酸氫鈉之間分配。使用鹽水洗滌有機層，用MgSO4干燥，然后濃縮以提供黃色殘留物。然后通過快速色譜法純化粗制化合物以提供希望的苯基磺酰胺晶體固體(產(chǎn)率40-90％)。
2-烷硫基-苯并噻唑-6-基-胺的合成向在無水THF(10ml)中的6-氨基-2-巰基苯并噻唑(273mg，1.5mmol)溶液加入NaH(60％混懸液，1.5mmol)，隨后加入鹵代烷(1.5mmol)。在室溫攪拌混合物24小時，在乙酸乙脂和5％碳酸氫鈉之間分配。使用鹽水洗滌有機層，用硫酸鈉上干燥，然后真空濃縮以提供黃色固體，使用快速色譜法或重結(jié)晶提純(產(chǎn)率60-90％)。
以下的胺使用上文描述的方法合成2-乙基硫基苯并噻唑-6-基胺黃色晶體固體。mp 77-78℃(lit.77℃).TLC單斑Rf0.78(8％甲醇/DCM)；1H NMR(270MHz，DMSO)δ7.50(1H，d，J＝8.5Hz，4-H)，6.98(1H，d，J＝2.2Hz，7-H)，6.69(1H，dd，J＝8.5，2.2Hz，5-H)，5.33(2H，寬，NH2)，3.23(2H，q，J＝7.3Hz，SCH2)，1.35(3H，t，J ＝7.3Hz，CH3)。
(Francolor，S.A.；US 2500093；1945)2-(2-甲氧乙基硫基)-苯并噻唑-6-基胺黃色濃漿。TLC單斑Rf0.65(30％乙酸乙脂/DCM)；1H NMR(270MHz，DMSO)δ7.49(1H，d，J＝8.8Hz，4-H)，6.97(1H，d，J＝2.2Hz，7-H)，6.69(1H，dd，J＝8.8，2.2Hz，5-H)，5.34(2H，寬，NH2)，3.63(2H，t，J＝6.3Hz，CH2)，3.43(2H，t，J＝6.3Hz，CH2)，3.26(3H，s，CH3)。
(6-氨基苯并噻唑-2-基巰基)-乙酸乙酯灰白色固體，mp 87-89℃(lit.92℃，[20])；TLC單斑Rf0.72(8％甲醇/DCM)；1H NMR(270MHz，DMSO)δ7.48(1H，d，J＝8.7Hz，4-H)，7.01(1H，5d，J＝1.8Hz，7-H)，6.71(1H，dd，J＝8.7，1.8Hz，5-H)，5.58(2H，寬，NH2)，4.17(2H，s，SCH2)，4.12(2H，t，J＝7.3Hz，CH2)，1.19(3H，t，J＝7.3Hz，CH3)。
以下化合物使用N-苯并噻唑苯磺酰胺的通常方法合成3-氯-N-(2-乙基硫苯并噻唑-6-基)-2-甲基苯磺酰胺(STX751，XDS01141)灰白色固體(220mg；55％)。TLC單斑Rf0.83(17％EtOAc/DCM)；HPLC純度96％(在甲醇中tR1.9min)；1HNMR(400MHz，DMSO-d6)510.8(1H，s，NH)，7.89(1H，dd，J＝8.0，1.0Hz，苯的6′-H)，7.71(1H，d，J＝8Hz，苯并噻唑的4-H)，7.70(1H，d，J＝2Hz，苯并噻唑的7-H)，7.70(1H，dd，J＝8.0，1.0Hz，苯的4′-H)，7.36(1H，t，J＝8Hz，苯的5′-H)，7.15(1H，dd，J＝8.0，2.0Hz，苯并噻唑的5-H)，3.30(2H，q，J＝7.0Hz，SCH2)，2.66(3H，s，CH3)，1.38(3H，t，J＝7.0Hz，CH3)；APCI-MS 397.99(M)+；C16H16ClN2O2S3(MH+)的FAB-HRMS計算值399.0062，測定值399.0048。
-乙酸乙酯(STX752，XDS01142)白色固體(210mg；46％).TLC信號點Rf0.69(17％EtOAc/DCM)；HPLC純℃99％(在10％水-甲醇中tR2.9min)；1HNMR(400MHz，DMSO-d6)δ10.8(1H，s，SO2NH)，7.88(1H，dd，J＝8.0，1.0Hz，苯的6′-H)，7.72(1H，d，J＝2.0Hz，苯并噻唑的7-H)，7.69(1H，dd，J＝8.0，1.0Hz，苯的4′-H 7.68(1H，d，J＝8.0Hz，苯并噻唑的4-H)，7.36(1H，t，J＝8.0Hz，苯的5′-H)，7.15(1H，dd，J＝8.0，2.0Hz，苯并噻唑的5-H)，4.25(2H，s，2-SCH2-)，4.13(2H，q，J＝7.1Hz，COOCH2)，2.64(3H，s，CH3)，1.17(3H，t，J＝7.1Hz，2-COOCH2CH_3)；APCI-MS 456.0(M)+；C18H18ClN2O4S3(MH+)的FAB-HRMS計算值457.0117，測定值457.0109。
3-氯-N-[2-(2-甲氧乙基硫基)-苯并噻唑-6-基]-2-甲基苯磺酰胺(STX754，XDS01144)灰白色固體(150mg；77％).TLC單斑Rf0.60(17％EtOAc/DCM)；HPLC純℃94％(在10％水-甲醇中tR3.1min)；1HNMR(400MHz，DMSO-d6)δ10.8(1H，s，SO2NH)，7.88(1H，dd，J＝8，1Hz，苯的6′-H)，7.71(1H，d，J＝8Hz，苯并噻唑的4-H)，7.70(1H，dd，J＝8，1Hz，苯的4′-H)，7.69(1H，d，J＝2Hz，苯并噻唑的7-H)，7.36(1H，t，J＝8Hz，苯的5′-H)，7.15(1H，dd，J＝8，2Hz，苯并噻唑的5-H)，3.64(2H，t，J＝6Hz，CH2)，3.50(2H，t，J＝6Hz，SCH2)，3.27(3H，s，5CH3)，2.65(3H，s，CH3)；APCI-MS428.0(M)+；C17H18ClN2O3S3(MH+)的FAB-HRMS計算值429.0168，測定值429.0159。
2-[6-(3-氯-2-甲基苯基磺酰氨基)-苯并噻唑-2-基硫基]-N，N-二乙基乙酰胺(STX755，XDS01145)和2-[6-(3-氯-2-甲基-苯磺酰胺)-苯并噻唑-2-基]-N，N-二乙基乙酰胺(STX763，XDS01145B)向在DCM(5ml)中的AlCl3(50mg)混懸液中加入二乙胺(0.4ml)。在氮氣下室溫攪拌溶液10分鐘。加入[6-(3-氯-2-甲基-苯基磺酰暗疾)-苯并噻唑-2-基硫基]-乙酸乙酯(STX752，100mg)并在室溫維持攪拌混合物30分鐘。用水使反應(yīng)淬滅，在DCM和5％NaHCO3之間分配。用水洗滌有機層，用MgSO4上干燥然后真空蒸發(fā)以提供黃色殘留物，將其用快速柱色譜法以20-30％乙酸乙酯-DCM做洗脫溶劑進行純化。得到STX755(50mg，47％)白色固體。TLC單斑Rf0.60(25％EtOAc/DCM)；HPLC純度89％(在10％水-甲醇中tR2.7min)；1HNMR(270MHz，DMSO-d6)δ10.7(1H，s，SO2NH)，7.86(1H，d，J＝8Hz，苯的6′-H)，7.64-7.68(3H，m，苯的4′-H和苯并噻唑的4，7-H)，7.34(1H，t，J＝8Hz，苯的5′-H)，7.12(1H，dd，J＝8，2Hz，苯并噻唑的5-H)，4.42(2H，s，2-SCH2-)，3.26-3.38(4H，m，-N(CH2)2-)，2.50(3H，s，1′-CH3)，1.17(3H，t，J＝7Hz，-NCHsCHg)，1.00(3H，t，J＝7Hz，-NCH2CH3)；APCI-MS 484.0(M)+；C20H23ClN3O3S3(MH+)的FAB-HRMS計算值484.0590，測定值484.0584。得到STX763(25mg，25％)白色固體。TLC單斑0.39(25％EtOAc/DCM)；LCMS純度98％(在10％水-CH3CN中tR6.9min in)；1HNMR(400MHz，DMSO-d6)δ10.8(1H，s，SO2NH)，7.88(1H，dd，J＝8.1，1.2Hz，苯的6′-H)，7.7930(1H，d，J＝8.6Hz，4-H)，7.72(1H，d，J＝2.0Hz，7-H)，7.68(1H，dd，J＝8.1，1.2Hz，苯的4′-H)，7.35(1H，t，J＝8.1Hz，苯的5′-H)，7.17(1H，dd，J＝8.6，2Hz，苯并噻唑的5-H)，4.2(2H，s，2-SCH2-)，3.26-3.38(4H，m，-N(CH2)2-)，2.65(3H，s，CH3)，1.10(3H，t，J＝7Hz，-NCHsCHs)，1.02(3H，t，J＝7Hz，-NCH2CH3)；APCI-MS 451.0(M)+；C20H23ClN3O3S2(MH+)的FAB-HRMS計算值452.0869，測定值452.0870。
3-氯-N-苯并噻唑-6-基-2-甲基苯磺酰胺(STX750，XDS01139)淡粉紅色針狀(260mg；77％).TLC單斑Rf0.46(17％EtOAc/DCM)；HPLC純度99％(在10％水-甲醇中tR2.5min)；1HNMR(400MHz，DMSO-d6)δ10.9(1H，s，SO2NH)，9.25(1H，s，苯并噻唑的2-H)，7.95(1H，d，J＝9Hz，苯并噻唑的4-H)，7.92(1H，dd，J＝8.0，1.0Hz，苯的6′-H)，7.84(1H，d，J＝2Hz，苯并噻唑的7-H)，7.70(1H，dd，J＝8.0，1.0Hz，苯的4′-H)，7.37(1H，t，J＝8Hz，苯的5′-H)，7.25(1H，dd，J＝9.0，2.0Hz，苯并噻唑的5-H)，2.66(3H，s，CH3)；APCI-MS 337.9(M)+；C20H23ClN3O3S2(MH+)的FAB-HRMS計算值452.0869，測定值452.0870。
3-氯-N-(2-甲基苯并噻唑-6-基)-2-甲基苯磺酰胺(STX886，XDS01187B)灰白色固體。TLC單斑Rf0.65(10％甲醇/DCM)；HPLC純度＞99％(在10％水-甲醇中tR2.4min)；1HNMR(270MHz，DMSO-d6)δ10.7(1H，s，NH)，7.87(1H，dd，J＝7.8，1.9Hz，ArH)，7.75(1H，d，J＝8.8Hz，ArH)，7.69(1H，6，J＝2.215Hz，ArH)，7.68(1H，dd，J＝7.8，1.9Hz，ArH)，7.34(1H，t，J＝7.8Hz，ArH)，7.15(1H，dd，J＝8.8，2.2Hz，ArH)，2.71(3H，s，CH3)，2.63(3H，s，CH3)；APCI-MS 351(M-H)+；C15H14ClN2O2S2(MH+)的FAB-HRMS計算值353.0185，測定值353.0197。
N-(2-甲基苯并噻唑-6-基)-N-(3-氯-2-甲基苯磺酰)-3-氯-2-甲基苯基磺酰胺(STX887，XDS01187A)灰白色粉末。TLC單斑Rf0.89(10％甲醇/DCM)；HPLC純度91％(在10％水-甲醇中tR3.1min)；1HNMR(270MHz，DMSO-d6)δ8.09(1H，d，J＝2.2Hz，ArH)，7.92(1H，d，J＝8.6Hz，ArH)，7.85-7.90(4H，m，ArH)，7.46(2H，t，J＝8.0Hz，ArH)，7.35(1H，dd，J＝8.8，2.2Hz，ArH)，2.81(3H，s，CH3)，2.33(6H，s，2xCH3)；APCI-25 MS 539(M-H)+；C22H19Cl2N2O4S3(MH+)的FAB-HRMS計算值540.9884，測定值540.9897。
2，5-二氯-N-(2-甲基苯并噻唑-6-基)-苯磺酰胺(STX888，XDS01188B)白色晶體固體。TLC單斑Rf0.68(10％甲醇/DCM)；HPLC純度＞99％(在10％水-甲醇中tR2.3min)；1HNMR(270MHz，DMSO-d6)δ10.9(1H，s，NH)，7.98(1H，d，J＝2.3Hz，ArH)，7.76(1H，d，J＝8.9Hz，ArH)，7.74(1H，d，J＝2.3Hz，ArH)，7.69(1H，dd，J＝8.6，2.3Hz，ArH)，7.66(1H，d，J＝8.6Hz，ArH)，7.18(1H，dd，J＝8.9，2.3Hz，ArH)，2.71(3H，s，CH3)；APCI-MS 371(M-H)+；C14H11Cl2N2O2S2(MH+)372.9639，測定值372.9651。
N-(2-甲基苯并噻唑-6-基)-N-(2，5-二氯苯磺?；?-2，5-二氯-苯磺酰胺(STX889，XDS01188A)黃色固體。TLC單斑R，0.72(10％甲醇/DCM)；HPLC純度94％(在10％水-甲醇中tR2.95min)；1HNMR(270MHz，DMSO-d6)δ8.13(1H，d，J＝2.2Hz，ArH)，，7.99(2H，d，J＝2.4Hz，ArH)，7.90-7.94(3H，m，ArH)，7.77(2H，d，J＝8.4Hz，ArH)，7.29(1H，dd，J＝8.6，2.2Hz，ArH)，2.86(3H，s，CH3)；APCI-MS 581(M)+；C20H13Cl4N2O4S3(MH+)的FAB-HRMS計算值580.8792，測定值580.8777。
N-(2-甲基苯并噻唑-6-基)-4-丙基苯磺酰胺(STX890，XDS01189)
灰白色固體。TLC單斑Rf0.72(10％甲醇/DCM)；HPLC純度99％(在10％水-甲醇中tR2.3min)；1HNMR(270MHz，DMSO-d6)δ10.3(1H，s，NH)，7.67(1H，d，J＝8.7Hz，ArH)7.64(1H，d，J＝1.5Hz，ArH)，7.59(2H，d，J＝7.7Hz，ArH)，7.27(2H，d，J＝7.7Hz，ArH)，7.09(1H，dd，J＝8.7，1.5Hz，ArH)，2.65(3H，s，CH3)，2.49 15(2H，t，J＝7.9Hz，CH2)，1.47(2H，六重峰，J＝7.9Hz，CH2)，0.58(3H，t，J＝7.9Hz，CH3)；APCI-MS 345(M-H)+；C17H19N2O2S2(MH+)347.0888，347.0904。
3-氯-2-甲基-N-(2-氧基-2，3-二氫-苯并噻唑-6-基)-苯磺酰胺(STX753，XDS01143)白色晶體固體(160mg；45％)。TLC單斑Rf0.42(17％EtOAc/DCM)；HPLC純度98％(在10％水-甲醇中tR2.3min)；1HNMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.8(1H，s，3-NH)，10.5(1H，s，SO2NH)，7.81(1H，dd，J＝8，1Hz，苯的6′-H)，7.71(1H，dd，J＝8，1Hz，苯的4′-H)，7.36(1H，t，J＝8Hz，苯的5′-H)，7.28 25(1H，d，J＝2Hz，苯并噻唑的7-H)，6.93-6.98(2H，m，苯并噻唑的4，5-H)，2.63(3H，s，CH3)；APCI-MS 353.7(M)+；C14H12ClN2O3S2(MH+)的FAB-HRMS計算值354.9978，測定值354.9980。
3-氯-N-甲基-N-(3-甲基-2-氧基-2，3-二氫-苯并噻唑-6-基)-2-甲基苯磺酰胺(STX831，XDS01163)向在丙酮(3mL)中的STX753(66mg，0.19mmol)溶液中加入碳酸鉀，隨后加入碘代甲烷(66mg).在室溫攪拌混合物2小時，萃取入DCM中并用鹽水洗滌。用硫酸鈉干燥后，真空除去溶劑以提供油狀殘留物，使用快速色譜法進行純化。得到灰白色固體(59mg，80％)。TLC單斑Rf0.37(100％DCM)；HPLC純度99％(在10％水-甲醇中tR2.0min)；1HNMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.73-7.80(2H，m，ArH)，7.61(1H，d，J＝2.1Hz，ArH)，7.42(1H，t，J＝8.0Hz，ArH)，7.29(1H，d，J＝8.8Hz，ArH)，7.21(1H，dd，J＝8.1，2.1Hz，ArH)，3.38(3H，s，CH3)，3.32(3H，s，CH3)，2.33(3H，s，CH3)；APCI-MS383(MH)+；C16H16ClN2O3S2(MH+)的FAB-HRMS計算值383.0291，測定值383.0273。
-乙酸乙酯(STX764，XDS01149)向在丙酮中的(3mL)STX753(20mg，0.056mmol)溶液加入碳酸鉀(20mg)，隨后加入甲基2-溴代乙酸乙酯(50μl)。室溫攪拌混合物4小時，萃取入乙酸乙酯然后用鹽水洗滌。在用硫酸鈉干燥后，真空除去溶劑以提供油狀殘留物，使用快速色譜法進行純化。得到白色晶體固體(20mg，68％)。TLC單斑Rf0.51(30％乙酸乙酯/己烷)；HPLC純度98％(在10％水-甲醇中tR2.6min)；1HNMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.75-7.78(2H，m，ArH)，7.70(1H，d，J＝2.3Hz，ArH)，7.37(1H，t，J＝8.2Hz，ArH)，7.30(1H，d，J＝8.6Hz，ArH)，7.24(1H，dd，J＝8.6，2.3Hz，ArH)，4.81(2H，s，CH2)，4.56(2H，s，CH2)，4.14(2H，q，J＝7.0Hz，CH2)，4.06(2H，q，J＝7.0Hz，CH2)，2.44(3H，s，CH3)，1.19(3H，t，J＝7.0Hz，CH3)，1.13(3H，t，J＝7.0Hz，CH3)；FAB-MS 527(MH)+；FAB-HRMS calcdfor C22H24ClN2O7S2(MH+)的FAB-HRMS計算值527.0713，測定值527.0694。
2-氯苯并噻唑-6-基-胺和2-氯-苯并噻唑-5-基-胺的合成在0℃20分鐘向在濃縮硫酸(60mL)中的2-氯苯并噻唑溶液(12.0g，70.7mmol)滴入HNO3(69％溶液，6mL)。在5℃攪拌混合物3小時，倒入冰-水中(150mL)。收集沉淀物然后用5％碳酸氫鈉和水洗滌，真空干燥。1H NMR分析標明混合物含有78％ 6-硝基-2-氯苯并噻唑和8％ 5-硝基-2-氯苯并噻唑。從乙醇重結(jié)晶得到6-硝基-2-氯苯并噻唑白色晶體固體(11g，72％)。將3.5g固體溶解在回流的乙醇-乙酸中(150∶15mL)，加入一部分鐵粉?；亓骰旌衔?.5小時，過濾。真空濃縮濾液至一半體積然后用10％NaOH中和至pH7.5，用乙酸乙酯萃取。有機相用鹽水洗滌，用硫酸鎂干燥然后蒸發(fā)得到殘留物，從乙醇進行重結(jié)晶。得到淡紫色晶體(2.5g，83％)。Mp 160-164℃；TLC單斑Rf0.27(30％ EtOAc/hexane)；1HNMR(270MHz，DMSO-d6)δ7.58(1H，d，J＝9.0Hz，4-H)，7.03(1H，d，J＝2.0Hz，7-H)，6.77(1H，dd，J＝9.0，2.0Hz，5-H)，5.55(2H，s，NH2)。
蒸發(fā)硝化產(chǎn)物重結(jié)晶的母液然后經(jīng)過如上文所述的鐵粉還原。使用快速色譜法(乙酸乙酯-DCM梯度洗脫)純化粗產(chǎn)物得到2-氯-苯并噻唑-5-基-胺的黃色固體。Mp 146-149℃；TLC單斑Rf0.52(10％EtOAc/DCM)；1HNMR(270MHz，DMSO-d6)57.63(1H，d，J＝8.6Hz，7-H)，7.05(1H，d，J＝2.3Hz，4-H)，6.78(1H，dd，J＝8.6，2.3Hz，6-H)，5.40(2H，s，NH2)。
使用N-苯并噻唑苯磺酰胺的通常方法合成以下化合物N-(2-氯苯并噻唑-6-基)-N-(3-氯-2-甲基苯磺?；?-3-氯-2-甲基苯磺酰胺(STX767，XDS01151A)白色晶體固體。TLC單斑Rf0.78(33％ EtOAc/DCM)；HPLC純度95％(在10％水-甲醇中tR6.4min)；1HNMR(270MHz，DMSO-d6)58.21(1H，d，J＝1.3Hz，ArH)，8，00(1H，d，J＝8.8Hz，ArH)，7.83-7.90(4H，m，ArH)，7.46(2H，t，J＝8.0Hz，ArH)，7.37(1H，dd，J＝8.8，1.8Hz，ArH)，2.33(6H，s，2xCH3)；APCI-MS560(M)+；C21H16Cl3N2O4S3(MH+)的FAB-HRMS計算值560.9338，測定值560.9344。
3-氯-N-(2-氯苯并噻唑-6-基)-2-甲基苯磺酰胺(STX768，XDS01151B)灰白色晶體固體。TLC單斑Rf0.68(33％ EtOAc/DCM)；HPLC純度99％(在甲醇中tR1.7min)；1HNMR(270MHz，DMSO-d6)δ10.9(1H，s，NH)，7.91(1H，d，J＝8.1Hz，ArH)，7.82(1H，d，J＝8.8Hz，ArH)，7.80(1H，d，J＝3.1Hz，ArH)，7.70(1H，d，J＝8.1Hz，ArH)，7.36(1H，t，J＝8.1Hz，ArH)，7.23(1H，dd，J＝8.8，3.0Hz，ArH)，2.63(3H，s，CH3)；APCI-MS 372(M)+；FAB-HRMS calcdfor C14H11Cl2N2O2S2(MH+)的FAB-HRMS計算值372.9639，測定值372.9651。
3-氯-N-(2-氯苯并噻唑-5-基)-2-甲基苯磺酰胺(STX834，XDS01168)白色晶體固體。TLC單斑Rf0.52(30％ EtOAc/hexane)；HPLC純度99％(在甲醇中tR1.7min)；1HNMR(270MHz，DMSO-d6)δ10.9(1H，s，NH)，7.91-7.96(2H，m，ArH)，7.71(1H，d，J＝8.1Hz，ArH)，7.58(1H，d，J＝2.2Hz，ArH)，7.39(1H，35d，J＝8.1Hz，ArH)，7.22(1H，dd，J＝8.1，2.2Hz，ArH)，2.64(3H，s，CH3)；APCI-MS 371(M-H)+；C14H11Cl2N2O2S2(MH+)的FAB-HRMS計算值372.9639，測定值372.9656。
3-氯-2-甲基-N-(2-甲基氨基苯并噻唑-6-基)-苯磺酰胺(STX833，XDS01167)在密封的試管中82℃攪拌在CH3NH-THF(2M，3mL)中的3-氯-N-(2-氯苯并噻唑-6-基)-2-甲基苯磺酰胺(STX768，150mg，0.40mmol)的溶液24h，用乙酸乙酯萃取。用鹽水洗滌有機相，用硫酸鈉干燥并且真空濃縮得到殘留物，用快速色譜法純化殘留物(乙酸乙脂/DCM梯度洗脫)。得到白色晶體(100mg，68％)。TLC單斑R，0.27(30％EtOAc/DCM)；HPLC純度99％(在4％水-甲醇中tR1.8min)；1HNMR(270MHz，DMSO-d6)δ10.2(1H，s，NH)，7.82(1H，q，J＝4.8Hz，NH)，7.72(1H，d，J＝7.7Hz，ArH)，7.61(1H，d，J＝7.7Hz，ArH)，7.29(1H，d，J＝2.2Hz，ArH)，7.26(1H，t，J＝8.0Hz，ArH)，7.15(1H，d，J＝8.7Hz，ArH)，6.79(1H，dd，J＝8.7，2.2Hz，ArH)，2.80(3H，d，J＝4.8Hz，NCH3)，2.54(3H，s，CH3)；APCI-MS 366(M-H)+；C15H15ClN3O2S2(MH+)的FAB-HRMS計算值368.0294，測定值368.0292。
3-氯-2-甲基-N-(2-甲基氨基苯并噻唑-5-基)-苯基磺酰胺(STX835，XDS01176)如上文對STX833的描述，使用3-氯-N-(2-氯苯并噻唑-5-基)-2-甲基苯磺酰胺(STX834，80mg，0.21mmol)作為起始材料制備該化合物。得到白色晶體(60mg，78％)。TLC單斑Rf0.25(30％ EtOAc/DCM)；HPLC純度99％(在10％水-甲醇中tR2.3min)；1HNMR(270MHz，DMSO-d6)δ10.5(1H，s，NH)，7.96(1H，q，J＝4.7Hz，NH)，7.86(1H，d，J＝8.1Hz，ArH)，7.69(1H，d，J＝8.1Hz，ArH)，7.47(1H，d，J＝8.0Hz，ArH)，7.37(1H，t，J＝8.1Hz，ArH)，7.05(1H，d，J＝1.9Hz，ArH)，6.73(1H，dd，J＝8.0，1.9Hz，ArH)，2.88(3H，d，J＝4.7Hz，NCH3)，2.64(3H，s，CH3)；APCI-MS 368(MH)+；C15H15ClN3O2S2(MH+)的FAB-HRMS計算值368.0294，測定值368.0292。
3-氯-N-(2-二乙基氨基苯并噻唑-5-基)-2-甲基苯基磺酰胺(STX836，XDS01177)如上文對STX833的描述，使用3-氯-N-(2-氯苯并噻唑-5-基)-2-甲基苯磺酰胺(STX834，70mg，0.18mmol)和二乙基胺-四氫呋喃(3mL)作起始材料制備該化合物。得到白色晶體(50mg，68％)。TLC單斑Rf0.60(30％ EtOAc/DCM)；HPLC純度97％(在10％水-甲醇中tR3.0min)；1HNMR(270MHz，DMSO-d6)δ10.5(1H，s，NH)，7.85(1H，d，J＝7.9Hz，ArH)，7.68(1H，d，J＝8.0Hz，ArH)，7.52(1H，d，J＝8.4Hz，ArH)，7.36(1H，t，J＝8.0Hz，ArH)，7.06(1H，6，J＝2.2Hz，ArH)，6.75(1H，dd，J＝8.3，2.2Hz，ArH)，3.45(4H，q，J＝7.0Hz，N(CH2)2)，2.63(3H，s，CH3)，1.15(6H，t，J＝7.0Hz，2xCH3)；APC I-MS 410(MH)+；C18H21ClN3O2S2(MH+)的FAB-HRMS計算值410.0764，測定值410.0753。
3-氯-N-(2-二乙氨基苯并噻唑-6-基)-2-甲基苯磺酰胺(STX878，XDS01164)如上文對STX833的描述，使用3-氯-N-(2-氯苯并噻唑-6-基)-2-甲基苯磺酰胺(STX768，240mg，0.64mmol)和二乙胺-異丙醇(3mL)作起始材料制備化合物。得到灰白色晶體固體(128mg，49％)。TLC單斑Rf0.33(30％ EtOAc/己烷)；HPLC純度96％(在4％水-甲醇中tR2.2min)；1HNMR(270MHz，DMSO-d6)δ7.56-7.62(3H，m，ArH)，7.18-7.27(2H，m，ArH)，7.00(1H，dd，J＝8.5，1.7Hz，ArH)，5.52(1H，s，NH)，3.54(4H，q，J＝7.0Hz，N(CH2)2)，2.25(3H，s，CH3)，1.22(6H，t，J＝7.0Hz，2xCH3)；APCI-MS 409(M)+；C18H21ClN3O2S2(MH+)的FAB-HRMS計算值410.0764，測定值410.0698。
2，6-二甲基苯并噻唑7-基胺的合成在0℃向在濃縮H2SO4(4mL)中的2，6-二甲基苯并噻唑(350mg，2.15mmol)的溶液加入硝酸(69％，0.3mmol)。在0℃攪拌0.5小時后，將混合物倒到冰水上。收集沉淀物然后用5％碳酸氫鈉和水洗滌，從乙醇重結(jié)晶得到7-硝基-2，6-二甲基苯并噻唑黃色固體(160mg)。在大氣壓在乙醇-四氫呋喃(10∶2mL)中在5％Pd/C上氫化該產(chǎn)物(150mg)得到2，6-二甲基苯并噻唑7-基胺黃色固體(120mg)。TLC單斑Rf0.55(10％EtOAc/DCM)；1H NMR(270MHz，DMSO)δ7.07(2H，s，ArH)，5.23(2H，s，NH2)，2.73(3H，s，CH3)，2.20(3H，s，CH3)。
6-甲氧基-2-甲基苯并噻唑-7-基胺的合成如上文所述，從6-甲氧基-2-甲基苯并噻唑起始制備該化合物。得到黃色固體，mp 117-119℃(lit.121-122℃)；TLC單斑Rf0.55(40％EtOAc/DCM)；1H NMR(270MHz，DMSO)δ7.14(1H，d，J＝8.7Hz，ArH)，7.05(1H，d，J＝8.7Hz，ArH)，5.10(2H，寬，NH2)，3.83(3H，s，OCH3)，2.71(3H，s，CH3)。
(Friedman，S.G.J Gen Chem USSR31，1961，3162-3167)2，5-二甲基苯并噻唑-4-基胺和2，5-二甲基苯并噻唑-6-基胺的合成在-5℃向在濃縮硫酸(12mL)中的2，5-二甲基苯并噻唑(1.63g，10mmol)溶液加入HNO3(69％，1mmol)。在-5-0℃攪拌2小時后，將混合物傾倒在冰-水(150mL)上。收集沉淀物并用5％碳酸氫鈉、水和70％乙醇洗滌。使用NMR判斷產(chǎn)物是(1.98g)4-硝基-2，5-二甲基苯并噻唑和6-硝基-2，5-二甲基苯并噻唑的1∶1比例的混合物。在在大氣壓在乙醇-四氫呋喃(50∶20mL)中在5％Pd/C(600mg)上氫化該產(chǎn)物(998mg)得到黃色固體(880mg)。使用快速色譜法(EtOAc/DCM梯度洗脫)分離產(chǎn)生2，5-二甲基苯并噻唑-4-基胺黃色晶體(400mg)。TLC單斑Rf0.60(15％ EtOAc/DCM)；1H NMR(270MHz，DMSO)δ7.05(1H，d，J＝8.0Hz，ArH)，6.99(1H，d，J＝8.0Hz，ArH)，5.26(2H，s，NH2)，2.74(3H，s，CH3)，2.18(3H，s，CH3)；APCI-MS177(M-H)+。
得到2，5-二甲基苯并噻唑-6-基胺黃色固體。TLC單斑Rf0.55(15％ EtOAc/DCM)；1H NMR(270MHz，DMSO)δ7.47(1H，s，ArH)，7.05(1H，s，ArH)，5.05(2H，s，NH2)，2.65(3H，s，CH3)，2.16(3H，s，CH3)；APCI-MS 177(M-H)+。
4-氯-2-甲基苯并噻唑-5-基胺和4，6-二氯-2-甲基苯并噻唑-5-基胺的合成向在異丙醇(12mL)中的5-氨基-2-甲基苯并噻唑(818mg，4.99mmol)溶液加N-氯代琥珀酰亞胺(732mg，5.48mmol)。在60℃攪拌混合物15分鐘，在DCM和5％碳酸氫鈉之間分配。用鹽水洗滌有機相，用硫酸鈉干燥然后真空濃縮得到殘留物，殘留物用快速色譜法純化(EtOAc/DCM梯度洗脫)。得到4-氯-2-甲基苯并噻唑-5-基胺灰白色晶體固體(510mg，51％).mp 121-122℃(lit.124℃)；TLC單斑Rf0.51(20％ EtOAc/DCM)；1H NMR(270MHz，DMSO)δ7.61(1H，d，J＝8.6Hz，ArH)，6.91(1H，d，J＝8.6Hz，ArH)，5.49(2H，s，NH2)，2.75(3H，s，CH3)；APCI-MS 199(MH)+。
得到4，6-二氯-2-甲基苯并噻唑-5-基胺黃色固體(60mg，5％)。TLC單斑Rf0.57(20％ EtOAc/DCM)；1H NMR(270MHz，DMSO)δ7.89(1H，s，ArH)，5.26(2H，s，NH2)，2.77(3H，s，CH3)；APCI-MS233(MH)+。
使用N-苯并噻唑苯磺酰胺的通常方法合成以下化合物3-氯-N-(6-甲氧基-2-甲基苯并噻唑-7-基)-2-甲基苯磺酰胺(STX989，XDS02038)白色晶體固體。TLC單斑Rf0.71(30％ EtOAc/DCM)；HPLC純度99％(在10％水-甲醇中tR2.3min)；1H NMR(270MHz，DMSO-d6)δ10.1(1H，s，NH)，7.76(1H，d，J＝8.9Hz，ArH)，7.72(1H，d，J＝8.2Hz，ArH)，7.53(1H，d，J＝8.2Hz，10 ArH)，7.23(1H，t，J＝8.2Hz，ArH)，7.05(1H，d，J＝8.9Hz，ArH)，3.29(3H，s，OCH3)，2.74(3H，s，CH3)，2.70(3H，s，CH3)；APCI-MS 381(M-H)+；C16H16ClN2O3S2(MH+)的FAB-HRMS計算值383.0291，測定值383.0284。
3-氯-N-(2，6-二甲基-苯并噻唑-7-基)-2-甲基-苯磺酰胺(STX1021.XDS02069)灰白色晶體固體。TLC單斑Rf0.49(10％ EtOAc/DCM)；HPLC純度98％(在20％水-甲醇中tR2.0min)；1H NMR(270MHz，DMSO-d6)δ10.3(1H，s，NH)，7.78(1H，d，J＝7.9Hz，ArH)，7.74(1H，d，J＝8.4Hz，ArH)，7.64(1H，d，J＝7.9Hz，ArH)，7.34(1H，t，J＝7.9Hz，ArH)，7.30(1H，d，J＝7.9Hz，ArH)，2.68(3H，s，CH3)，2.61 20(3H，s，CH3)，2.03(3H，s，CH3)；FAB-MS 367(MH)+；C16H16ClN2O2S2(MH+)的FAB-HRMS計算值367.0342，測定值367.0347。
3-氯-N-(2，5-二甲基-苯并噻唑-4-基)-2-甲基-苯磺酰胺(STX996，XDS02047)白色晶體固體。TLC單斑Rf0.76(10％ EtOAc/DCM)；HPLC純度＞99％(在10％水-甲醇中tR2.9min)；1H NMR(270MHz，DMSO-d6)δ9.98(1H，s，NH)，7.81(1H，d，J＝8.3Hz，ArH)，7.64(1H，d，J＝7.9Hz，ArH)，7.45(1H，d，J＝7.9Hz，ArH)，7.31(1H，d，J＝8.3Hz，ArH)，7.12(1H，X，J＝7.9Hz，ArH)，2.73(3H，s，CH3)，2.47(3H，s，CH3)，2.44(3H，s，CH3)；APCI-MS 367(MH)+；C16H16ClN2O2S2(MH+)的FAB-HRMS計算值367.0342，測定值367.0342。
N-(2，5-二甲基苯并噻唑-6-基)-N-(3-氯-2-甲基苯基磺?；?-3-氯-2-甲基苯磺酰胺(STX997，XDS02048A)灰白色漿體。TLC單斑Rf0.78(10％ EtOAc/DCM)；HPLC純度85％(在10％水-甲醇中tR4.2min)；1H NMR(270MHz，DMSO-d6)δ8.06(1H，s，ArH)，7.86-7.95(5H，m，ArH)，7.68(1H，s，ArH)，7.52(2H，t，J＝8.2Hz，ArH)，2.83(3H，s，CH3)，2.29(6H，s，2xCH3)，2.05(3H，s，CH3)；APCI-MS 555(MH)+；C23H21Cl2N2O4S3(MH+))的FAB-HRMS計算值555.0040，測定值555.0041。
3-氯-N-(2，5-二甲基苯并噻唑-6-基)-2-甲基苯磺酰胺(STX998，XDS02048B)
白色晶體固體。TLC單斑Rf0.39(10％ EtOAc/DCM)；HPLC純度96％(在10％水-甲醇中tR2.1min)；1H NMR(270MHz，DMSO-d6)δ10.0(1H，s，NH)，7.74(1H，d，J＝7.9Hz，ArH)，7.70(1H，s，ArH)，7.67(1H，d，J＝7.9Hz，ArH)，7.63(1H，s，ArH)，7.33(1H，t，J＝7.9Hz，ArH)，2.75(3H，s，CH3)，2.60(3H，s，CH3)，2.13(3H，s，10 CH3)；APCI-MS 367(MH)+；C16H16ClN2O2S2(MH+)的FAB-HRMS計算值367.0342，測定值367.0350。
2，5-二氯-N-(2，5-二甲基苯并噻唑-6-基)-甲基苯磺酰胺(STX999，XDS02049)白色晶體固體。TLC單斑Rf0.43(10％ EtOAc/DCM)；HPLC純度98％(在10％水-甲醇中tR2.0min)；1H NMR(270MHz，DMSO-d6)δ10.3(1H，s，NH)，7.76(3H，s，ArH)，7.72(1H，s，ArH)，7.67(1H，s，ArH)，2.75(3H，s，CH3)，2.23(3H，s，CH3)；APCI-MS387(MH)+；C15H13Cl2N2O2S2(MH+)的FAB-HRMS計算值386.9795，測定值386.9806。
N-(4-氯-2-甲基-苯并噻唑-5-基)-N-(3-氯-2-甲基苯基磺?；?-3-氯-2-甲基-甲基苯磺酰胺(STX991，XDS02042A)白色粉末。TLC單斑R，0.75(8％ EtOAc/DCM)；HPLC純度＞99％(在10％水-甲醇中tR4.4min)；1H NMR(270MHz，DMSO-d6)δ8.19(1H，d，J＝8.7Hz，ArH)，7.93(4H，d，J＝8.2Hz，，ArH)，7.59(1H，d，J＝8.7Hz，ArH)，7.50(2H，d，J＝8.2Hz，ArH)，2.85(3H，s，CH3)，2.41(6H，s，2xCH3)；APCI-MS 575(MH)+；C22H18Cl3N2O4S3(MH+)的FAB-HRMS計算值574.9494，測定值574.9492。
3-氯-N-(4-氯-2-甲基苯并噻唑-5-基)-2-甲基苯磺酰胺(STX992，XDS02042B)白色晶體固體。TLC單斑Rf0.69(8％ EtOAc/DCM)；HPLC純度99％(在10％水-甲醇中tR2.5min)；1H NMR(270MHz，DMSO-d6)δ10.5(1H，s，NH)，7.96(1H，d，J＝8.7Hz，ArH)，7.73(1H，d，J＝7.9Hz，，ArH)，7.64(1H，6，J＝7.9Hz，ArH)，7.30(1H，d，J＝8.7Hz，ArH)，7.29(1H，t，J＝7.9Hz，，ArH)，2.79(3H，s，CH3)，2.70(3H，s，CH3)；APCI-MS 385(M-H)+；C15H13Cl2N2O2S2(MH+)的FAB-HRMS計算值386.9795，測定值386.9790。
2，5-二氯-N-(4-氯-2-甲基苯并噻唑-5-基)-甲基苯磺酰胺(STX993，XDS02043B)白色晶體固體。TLC單斑Rf0.71(8％ EtOAc/DCM)；HPLC純度99％(在10％水-甲醇中tR5.0min)；1H NMR(270MHz，DMSO-d6)δ10.7(1H，s，NH)，7.97(1H，d，J＝8.6Hz，ArH)，7.71-7.78(3H，m，，ArH)，7.28(1H，6，J＝8.6Hz，ArH)，2.81(3H，s，CH3)；APCI-MS 407(MH)+；C14H10Cl3N2O2S2(MH+)的FAB-HRMS計算值406.9249，測定值406.9234。
N-(4-氯-2-甲基苯并噻唑-5-基)-4-丙基苯磺酰胺(STX994，XDS02044B)白色晶體固體。TLC單斑Rf0.70(8％ EtOAc/DCM)；HPLC純度99％(在10％水-甲醇中tR2.7min)；1H NMR(270MHz，DMSO-d6)δ10.1(1H，s，NH)，7.93(1H，d，J＝8.6Hz，ArH)，7.60(2H，d，J＝8.2Hz，ArH)，7.35(2H，d，J＝8.2Hz，ArH)，7.28(1H，d，J＝8.4Hz，ArH)，2.79(3H，s，CH3)，2.69(2H，t，J＝7.2Hz，CH2)，1.59(2H，m，CH2)，0.86(3H，t，J＝7.2Hz，CH3)；APCI-MS381(MH)+；C17H18ClN2O2S2(MH+)的FAB-HRMS計算值381.0498，測定值381.0484。
N-(4-氯-2-甲基苯并噻唑-5-基)-N-(4-丙基苯基磺?；?-4-丙基苯磺酰胺(STX995，XDS02044A)白色粉末。TLC單斑Rf0.70(8％ EtOAc/DCM)；HPLC純度99％(在10％水-甲醇中tR3.8min)；1H NMR(270MHz，DMSO-d6)δ8.10(1H，d，J＝8.4 25Hz，ArH)，7.74(4H，d，J＝8.1Hz，ArH)，7.50(4H，d，J＝8.1Hz，ArH)，7.08(1H，d，J＝8.4Hz，ArH)，2.91(3H，s，CH3)，2.71(4H，t，J＝7.1Hz，2xCH2)，1.59(4H，m，CH2)，0.86(6H，t，J＝7.1Hz，2xCH3)；APCI-MS 561(M-H)+；C26H28ClN2O4S3(MH+)的FAB-HRMS計算值563.0900，測定值563.0886。
3-氯-2-甲基-N-(2-甲基-苯并噻唑-5-基甲基)-苯磺酰胺(STX1029，XDS 02070A)和3-氯-2-甲基-N，N-二-(2-甲基-苯并噻唑-5-基甲基)-苯磺酰胺(STX1030，XDS 02070B)的合成向在CH3CN中的3-氯-2-甲基苯磺酰胺溶液加入(103mg，0.5mmol)碳酸鉀(100mg)，隨后加入5-溴甲基-2-甲基苯并噻唑(121mg，0.5mmol)。在N2下混合物回流6小時，在乙酸乙酯和水之間分配。用鹽水洗滌有機相，用硫酸鈉干燥然后真空濃縮得到黃色殘留物，用快速色譜法分離殘留物(乙酸乙酯/DCM梯度洗脫)。得到STX1029白色固體。TLC單斑Rf0.55(10％ EtOAc/DCM)；HPLC純度＞99％(在10％水-甲醇中tR2.0min)；1HNMR(270MHz，CDCl3)δ7.89(1H，6，J-7.9Hz，ArH)，7.66(1H，d，J＝7.9Hz，ArH)，7.65(1H，d，J＝1.3Hz，ArH)，7.49(1H，d，J＝7.9Hz，ArH)，7.17(1H，t，J＝7.9Hz，ArH)，7.13(1H，dd，J＝7.9，1.5Hz，ArH)，5.35(1H，t，J＝5.9Hz，NH)，4.24(2H，d，J＝5.9Hz，CH2)，2.79(3H，s，CH3)，2.62(3H，s，CH3)；APCI-MS 367(MH)+；C16H16ClN2O2S2(MH+)的FAB-HRMS計算值367.0342，測定值367.0330。
得到STX1030白色固體。TLC單斑Rf0.50(10％EtOAc/DCM)；HPLC純度99％(在20％水-乙醇中tR6.1min)；1H NMR(270MHz，DMSO-d6)δ7.87(3H，d，J＝8.1Hz，ArH)，7.75(1H，d，J＝8.0Hz，ArH)，7.59(2H，寬w1/2＝1.1Hz，ArH)，7.38(1H，t，J＝8.0Hz，ArH)，7.11(2H，dd，J＝8.1，1.1Hz，ArH)，4.56(4H，s，2xNCH2)，2.78(6H，s，2xCH3)，2.58(3H，s，CH3)；APCI-MS 528(MH)+；C25H23ClN3O2S3(MH+)的FAB-HRMS計算值528.0641，測定值528.0630。
N-吲哚或N-二氫吲哚芳基磺酰胺衍生物的合成 STX832，XDS01165STX981，XDS02019STX982，XDS02020 STX986，XDS02030STX1018，XDS02061 STX1019，XDS02062 STX1020，XDS02063 STX984，XDS02025STX987，XDS02031合成N-吲哚或N-二氫吲哚芳基磺酰胺衍生物的通常方法(STX832，STX981-982，STX984，STX986-987，STX1018-1020)向在DCM中的芳基磺酰氯溶液(1.1當(dāng)量)加入吡啶(2.2當(dāng)量)和催化量的DMAP，隨后加入相應(yīng)的胺(1當(dāng)量)。在氮氣下室溫攪拌反應(yīng)混合物4-6小時，然后在TLC顯示反應(yīng)完成后在乙酸乙酯和5％碳酸氫鈉之間分配。用鹽水洗滌有機層，用硫酸鈉干燥，然后真空濃縮的到粗制產(chǎn)物的固體或濃漿。然后使用快速色譜法(甲醇-DCM梯度洗脫)純化該化合物得到希望的芳基磺酰胺晶體固體。產(chǎn)率范圍50-85％.
3-氯-2-甲基-N-(2-甲基-1H-吲哚-5-基)-苯磺酰胺(STX832，XDS01165)白色晶體固體。TLC單斑Rf0.68(30％乙酸乙酯/己烷)；HPLC純度＞99％(在4％水-甲醇中tR1.8min)；1H NMR(270MHz，DMSO)δ10.9(1H，s，NH)，9.98(1H，s，NH)，7.72(1H，d，J＝8Hz，ArH)，7.63(1H，d，J＝8Hz，ArH)，7.27(1H，t，J＝8Hz，ArH)，7.07(1H，d，J＝8Hz，ArH)，7.05(1H，d，J＝2Hz，ArH)，6.67(1H，dd，J＝8，2Hz，ArH)，5.99(1H，s，3-H)，2.60(3H，s，CH3)，2.29(3H，s，CH3)；APCI-MS 334(M+)；C16H16ClN2O2S(MH+)的FAB-HRMS計算值335.0621，測定值335.0609。
3-氯-2-甲基-N-(1H-吲哚-5-基)-苯磺酰胺(STX981，XDS02019)白色晶體固體。TLC單斑Rf0.72(6％甲醇/DCM)；HPLC純度98％(在10％水-甲醇中tR2.1min)；1H NMR(270MHz，DMSO)δ11.1(1H，s，NH)，10.1(1H，s，NH)，7.76(1H，d，J＝7.9Hz，ArH)，7.66(1H，d，J＝7.9Hz，ArH)，7.22-7.3225(4H，m，ArH)，6.81(1H，dd，J＝7.9，1.2Hz，ArH)，6.33(1H，寬，3-H)，2.64(3H，s，CH3)；APCI-MS 319(M-H+)；C15H14ClN2O2S(MH+)的FAB-HRMS計算值321.0465，測定值321.0453。
3-氯-2-甲基-N-(1H-吲哚-6-基)-苯磺酰胺(STX982，XDS02020)白色晶體固體。TLC單斑Rf0.88(10％甲醇/DCM)；HPLC純度98％(在20％水-甲醇中tR2.5min)；1H NMR(270MHz，DMSO)δ11.0(1H，s，NH)，10.3(1H，s，NH)，7.80(1H，d，J＝7.9Hz，ArH)，7.67(1H，d，J＝7.9Hz，ArH)，7.31-7.38(2H，m，ArH)，7.26(1H，m，ArH)，7.80(1H，d，J＝1.2Hz，ArH)，6.75(1H，dd，J＝7.9，1.2Hz，ArH)，6.31(1H，broad，3-H)，2.65(3H，s，CH3)；APCI-MS 319(M-H+)；C15H14ClN2O2S(MH+)的FAB-HRMS計算值321.0465，測定值321.0446。
5-(3-氯-2-甲基苯基磺酰氨基)-1H-吲哚-2-羧酸乙酯(STX986，XDS02030)白色晶體固體。TLC單斑Rf0.82(8％甲醇/DCM)；HPLC純度＞99％(在10％水-甲醇中tR2.3min)；1H NMR(270MHz，DMSO)δ11.9(1H，s，NH)，10.3(1H，s，NH)，7.78(1H，d，J＝7.9Hz，ArH)，7.67(1H，d，J＝7.9Hz，ArH)，7.28-7.33(3H，m，ArH)，7.06(1H，d，J＝2.2Hz，ArH)，7.00(1H，dd，J＝8.2，2.2Hz，ArH)，4.32(2H，q，J＝6.9Hz，OCH2)，2.63(3H，s，CH3)，1.31(3H，t，J＝6.9Hz，CH3)；APCI-MS 391(M-H+)；C18H18ClN2O4S(MH+)的FAB-HRMS計算值393.0676，測定值393.0659。
3-氯-2-甲基-N-(2，3-二甲基-1H-吲哚-5-基)-苯磺酰胺(STX1018，XDS02061)白色晶體固體。TLC單斑Rf0.83(30％乙酸乙酯/己烷)；HPLC純度97％(在20％水-甲醇中tR2.9min)；1H NMR(270MHz，DMSO)δ10.6(1H，s，NH)，10.0(1H，s，NH)，7.74(1H，d，J＝7.5Hz，ArH)，7.65(1H，d，J＝7.5Hz，ArH)，157.29(1H，t，J＝8.0Hz，ArH)，7.05(1H，d，J＝8.6Hz，ArH)，6.99(1H，d，J＝1.7Hz，ArH)，6.66(1H，dd，J＝8.6，1.7Hz，ArH)，2.62(3H，s，CH3)，2.25(3H，s，CH3)，2.03(3H，s，CH3)；APCI-MS 349(MH+)；C17H18ClN2O2S(MH+)的FAB-HRMS計算值349.0778，測定值349.0737。
2，5-二氯-N-(2，3-二甲基-1H-吲哚-5-基)-苯磺酰胺(STX1019，XDS02062)白色無定形粉末。TLC單斑Rf0.82(10％乙酸乙酯/己烷)；HPLC純度98％(在20％水-甲醇中tR3.0min)；1H NMR(270MHz，DMSO)δ10.7(1H，s，NH)，10.2(1H，s，NH)，7.80(1H，m，ArH)，7.67-7.70(2H，m，ArH)，7.07(1H，25d，J＝8.5Hz，ArH)，7.05(1H，d，J＝1.7Hz，ArH)，6.73(1H，dd，J＝8.5，1.7Hz，ArH)，2.25(3H，s，CH3)，2.04(3H，s，CH3)；APCI-MS 367(M-H+)；C16H14Cl2N2O2S(M+)的FAB-HRMS計算值368.0153，測定值368.0146。
4-n-丙基-N-(2，3-二甲基-1H-吲哚-5-基)-苯磺酰胺(STX1020，XDS02063)灰白色晶體固體。TLC信號在Rf0.82(10％乙酸乙酯/己烷)；HPLC純度97％(在20％水-甲醇中tR2.9min)；1H NMR(270MHz，DMSO)δ10.6(1H，s，NH)，9.6(1H，s，NH)，7.56(2H，d，J＝8.3Hz，ArH)，7.30(2H，d，J＝8.3Hz，ArH)，7.03(1H，d，J＝8.3Hz，ArH)，6.95(1H，d，J＝1.7Hz，ArH)，6.68(1H，dd，J＝8.3，1.7Hz，35 ArH)，2.56(2H，t，J＝7.3Hz，CH2)，2.24(3H，s，CH3)，2.01(3H，s，CH3)，1.55(2H，六重峰，J＝7.3Hz，CH2)，0.85(3H，t，J＝7.3Hz，CH3)，；APCI-MS 343(MH+)；C19H22N2O2S(M+)的FAB-HRMS計算值342.1402，測定值342.1403。
3-氯-2-甲基-N-(1-乙?；?2，3-二氫-1H-吲哚-5-基)-苯磺酰胺(STX984，XDS02025)白色晶體固體。TLC單斑Rf0.58(5％甲醇/DCM)；HPLC純度95％(在20％水-甲醇中tR2.2min)；1H NMR(270MHz，DMSO)δ10.4(1H，s，NH)，7.80-7.86(2H，m，ArH)，7.71(1H，d，J＝7.8Hz，ArH)，7.36(1H，t，J＝8.0Hz，ArH)，6.93(1H，d，J＝1.8Hz，ArH)，6.83(1H，dd，J＝8.2，1.8Hz，ArH)，4.01(2H，t，J＝8.3Hz，10 CH2)，3.03(2H，t，J＝8.4Hz，CH2)，2.62(3H，s，CH3)，2.09(3H，s，CH3)；APCI-MS 363(M-H+)；C17H18ClN2O3S(MH+)的FAB-HRMS計算值365.0727，測定值365.0796。
5-(3-氯-2-甲基-苯磺酰氨基)-1-乙基-2，3-二氫-1H-二氫吲哚氯(indolium chloride)(STX987，XDS02031)如上文合成STX987的游離堿。得到紫色無定形粉末；TLC單斑Rf0.79(8％甲醇/DCM)；1H NMR(270MHz，CDCI3)δ7.79(1H，d，J＝7.9Hz，ArH)，7.53(1H，d，J＝7.9Hz，ArH)，7.15(1H，t，J＝8.0Hz，ArH)，6.75(1H，d，J＝1.8Hz，ArH)，6.58(1H，dd，J＝8.1，1.8Hz，ArH)，6.35(1H，s，NH)，6.22(1H，d，J＝8.1Hz，ArH)，3.30(2H，t，J＝8.4Hz，CH2)，3.05(2H，q，J＝7.2Hz，CH2)，2.84(2H，t，J＝8.3Hz，CH2)，2.67(3H，s，CH3)，1.11(3H，t，J＝7.2Hz，CH3)。使用HCI-醚溶液處理游離堿得到淡紫色的STX987晶體固體。HPLC純度93％(在20％水-甲醇中tR3.6min)；1H NMR(270MHz，DMSO)δ10.3(1H，s，NH)，7.82(1H，d，J＝8.1Hz，ArH)，7.72(1H，d，J＝8.1Hz，ArH)，7.38(1H，t，J＝8.1Hz，ArH)，6.79-6.89(3H，m，寬，ArH)，3.42(2H，t，J＝8.4Hz，CH2)，3.16(2H，q，J＝7.0Hz，CH2)，2.91(2H，t，J＝8.4Hz，CH2)，2.62(3H，s，CH3)，1.10(3H，t，J＝7.0Hz，CH3)；APCI-MS349(M-HCl-H+)；C17H20ClN2O2S(M-HCl+H+)的FAB-HRMS計算值351.0934，測定值351.0941。
1-乙?；?5-氨基二氫吲哚在大氣壓在5％Pd/C(600mg)上將在乙醇-四氫呋喃(100mL∶30mL)中的1-乙?；?-硝基二氫吲哚(1.0g，4.85mmol)溶液在5％Pd/C上氫化2小時，通過Celite過濾然后真空濃縮得到白色固體，將其從乙醇重結(jié)晶。得到白色晶體固體(580mg，68％)。Mp 185-186.5℃(lit 184-185℃，[21])；1H NMR(270MHz，DMSO)δ7.73(1H，d，J＝8.6Hz，ArH)，6.45(1H，s寬，w1/2＝1.8Hz，ArH)，6.33(1H，dd，J＝8.6，1.8Hz，ArH)，4.82(2H，s，NH2)，(2H，t，J＝8.4Hz，CH2)，2.99(2H，t，J ＝8.4Hz，CH2)，2.07(3H，s，CH3)；APCI-MS 175。
1-乙基-5氨基二氫吲哚向在無水THF(10mL)中的1-乙?；?5-氨基二氫吲哚(130mg，0.74mmol)溶液加入LiAIH4(42mg，1.11mmol)。在室溫攪拌混合物6小時，使用飽和的NH4Cl淬滅然后用乙酸乙酯萃取。用鹽水洗滌有機相，用硫酸鈉干燥然后真空濃縮得到紫色殘留物(80mg，67％)使用該殘留物沒有進一步純化。1H NMR(270MHz，DMSO)δ6.56(1H，s，ArH)，6.47(1H，d寬，J＝8.1Hz，ArH)，6.37(1H，d，J＝8.0Hz，ArH)，3.29(2H，s，NH2)，3.20(2H，t，J＝7.6Hz，CH2)，3.02(2H，q，J＝6.9Hz，CH2)，2.86(2H，t，J＝7.6Hz，CH2)，1.17(3H，t，J ＝6.9Hz，CH3)。
5-(3-氯-2-甲基-苯磺酰氨基)-1H-吲哚-3-羧酸甲基酯的合成，STX1050(KRB01132) 5-氨基-1H-吲哚-3-羧酸甲基酯(KRB01131)向在甲醇(40mL)中的5-硝基-1H-吲哚-3-羧酸甲基酯溶液(206mg，0.940mmol)加5％碳載鈀(40mg)然后在H2氣氛下攪拌混合物5小時。通過celite過濾混合物然后蒸發(fā)濾液產(chǎn)生褐色固體，使用該固體沒有進一步純化(173mg，97％)，單斑Rf0.64(乙酸乙酯).1H NMR(d6-DMSO)δ11.50(1H，s，H-H)，7.831H，d，J＝3.2Hz)，7.17(1H，d，J＝2.0Hz)，7.14(1H，d，J＝8.4Hz)，6.56(1H，dd，J＝8.6，2.2Hz)，4.77(2H，s，M-H2)，3.76(3H，s)。
向在二氯甲烷(4mL)中3-氯-2-甲基苯磺酰氯(124mg，0.552mmol)溶液加入吡啶(100uL，1.3mmol)然后在N2下攪拌混合物5分鐘，之后加入5-氨基-1H-吲哚-羧酸甲基酯(100mg，0.526mmol)。在室溫攪拌所得混合物1.5小時，然后加入飽和的NaHCO3(15mL)然后將混合物萃取入乙酸乙酯中(20mL)。用鹽水洗滌有機相，干燥(Na2SO4)，過濾然后蒸發(fā)得到，使用快速色譜法純化殘留物以提供白色固體(129mg，65％)，單斑Rf0.84(乙酸乙酯)，mp 216.8-219.3℃，[22]，HPLC純度99+％(在10％水-甲醇中tR2.07min).1H NMR(d6-DMSO)511.91(1H，s)，10.32(1H，s)，8.03(1H，d，J＝3.0Hz)，7.82(1H，d，J＝7.9Hz)，7.70-7.67(2H，m)，7.37-7.31(2H，m)，6.95(1H，dd，J＝8.6，2.0Hz)，3.77(3H，s)，2.65(3H，s).LCMS377.09.FAB-MS(MH+，C17H15ClN2O4S)計算值378.0441，測定值(found)378.0439。
苯并咪唑芳基磺酰胺衍生物的合成 a)RX，K2CO3，丙酮，室溫或回流 b)H2/5％Pd-C，乙醇-THF室溫或鐵，AcOH-乙醇1 c)ArSO3CI，DCM.吡啶或ArSO3CI，DCM，吡啶/DMAPd)HOBt，THF，室溫 e)N-氯代琥珀酰亞胺，IPA
STX975，XDS02001STX976，XDS02003 STX1121，XDS02102 STX1112，XDS02088 STX1113，XDS02089 STX1114，XDS02090 STX1115，XDS02091 STX1116，XDS02092 STX1110，XDS02084STX1111，XDS02085 STX1119，XDS02100 STX1120，XDS02101STX977，XDS02015 STX1117，XDS02098STX1118，XDS02099 STX879，XDS01173 STX985，XDS020261-烷基-5氨基-2-甲基苯并咪唑和1-烷基-6氨基-2-甲基苯并咪唑的合成向在丙酮(50mL)中的5-硝基苯并咪唑(1.0g，5.6mmol)溶液加入碳酸鉀(1.0g)，隨后加入鹵代烷(1.2-1.5當(dāng)量)。在氮氣下室溫攪拌混合物，在TLC顯示反應(yīng)完成后在乙酸乙酯和水之間分配混合物。用鹽水洗滌有機相，用硫酸鈉干燥然后真空濃縮得到1-烷基-5-硝基-2-甲基苯并咪唑和1-烷基-6-硝基-2-甲基苯并咪唑的混合物。將其溶解在乙醇-四氫呋喃(100mL，2∶1)中并在大氣壓下在5％Pd-C上氫化8小時。在通過celite_過濾后，蒸發(fā)濾液得到黃色固體，用快速色譜法分離(甲醇-DCM梯度洗脫)。得到1-烷基-5氨基-2-甲基苯并咪唑和1-烷基-6氨基-2-甲基苯并咪唑黃色固體或濃漿。
5-氨基-1，2-二甲基苯并咪唑(XDS01191B.XDS02082B)黃色固體，mp 126-127℃(lit.128℃，[23]).TLC單斑Rf0.30(5％甲醇/DCM)；1H NMR(270MHz，DMSO)δ7.08(1H，d，J＝8.7Hz，7-H)，7.65(1H，d，J＝1.5Hz，4-H)，6.50(1H，dd，J＝8.7，1.5Hz，6-H)，4.63(2H，寬，NH2)，3.58(3H，s，NCH3)，2.39(3H，s，CH3)。
6-氨基-1，2-二甲基苯并咪唑(XDS01191A，XDS02082A)黃色固體。TLC單斑Rf0.33(5％甲醇/DCM)；1H NMR(270MHz，DMSO)δ7.13(1H，d，J＝8.4Hz，4-H)，6.48(1H，d，J＝2.0Hz，7-H)，6.43(1H，dd，J＝8.4，2.0Hz，5-H)，4.83(2H，寬，NH2)，3.53(3H，s，NCH3)，2.39(3H，s，CH3)。
5-氨基-1-乙基-2-甲基苯并咪唑(XDS02079B)黃色漿體。TLC單斑Rf0.27(5％甲醇/DCM)；1H NMR(270MHz，DMSO)δ7.12(1H，d，J＝8.3Hz，7-H)，6.68(1H，d，J-2.0Hz，4-H)，6.51(1H，dd，J＝8.3，2.0Hz，6-H)，4.68(2H，寬，NH2)，4.08(2H，q，J＝7.2Hz，NCH2)，2.43(3H，s，CH3)，1.24(3H，t，J＝7.2Hz，CH3)；APCI-MS 175(M+)。
6-氨基-1-乙基-2甲基苯并咪唑(XDS02079A)黃色固體。TLC單斑Rf0.30(5％甲醇/DCM)；1H NMR(270MHz，DMSO)δ7.16(1H，d，J＝8.4Hz，4-H)，6.68(1H，d，J＝1.7Hz，7-H)，6.46(1H，dd，J＝8.4，1.7Hz，5-H)，4.85(2H，寬，NH2)，4.02(2H，q，J＝7.9Hz，NCH2)，2.42(3H，s，CH3)，1.24(3H，t，J＝7.9Hz，CH3)；APCI-MS 175(M+)。
5-氨基-1-異-丁基-2-甲基苯并咪唑(XDS02093B)黃色漿體。TLC單斑Rf0.42(10％甲醇DCM)；1H NMR(400MHz，DMSO)δ7.08(1H，d，J＝8.5Hz，7-H)，6.65(1H，d，J＝1.9Hz，4-H)，6.48(1H，dd，J＝8.5，1.9Hz，6-H)，4.63(2H，broad，NH2)，3.82(2H，d，J＝7.4Hz，NCH2)，2.41(3H，s，CH3)，2.07(1H，m，CH)，0.84(6H，d，J＝7.0Hz，2xCH3)；APCI-MS 204(MH+)6-氨基-1-異-丁基-2-甲基苯并咪唑(XDS02093A)黃色固體。TLC單斑Rf0.45(10％甲醇/DCM)；1H NMR(270MHz，DMSO)δ7.15(1H，d，J＝8.2Hz，4-H)，6.62(1H，d，J＝1.6Hz，7-H)，6.44(1H，dd，J＝8.2，1.8Hz，5-H)，4.83(2H，寬，NH2)，3.79(2H，d，J＝7.7Hz，NCH2)，2.41(3H，s，CH3)，2.10(1H，m，CH)，0.87(6H，d，J＝6.6Hz，2xCH3)；APCI-MS 204(MH+)(5-氨基苯并咪唑-1-基)-乙酸乙脂(XDS02012B)黃色固體。TLC單斑Rf0.36(5％甲醇/DCM)；1H NMR(270MHz，DMSO)δ7.08(1H，d，J＝8.4Hz，7-H)，6.69(1H，d，J＝2.2Hz，4-H)，6.49(1H，dd，J＝8.4，2.2Hz，6-H)，5.02(2H，s，NCH2)，4.68(2H，s，NH2)，4.16(2H，q，J＝7.2Hz，CH2)，2.36(3H，s，CH3)，1.21(3H，t，J＝7.2Hz，CH3)；APCI-MS 234(MH+)。
(6-氨基苯并咪唑-1-基)-乙酸乙脂(XDS02012A)黃色固體。TLC單斑Rf0.40(5％甲醇/DCM)；1H NMR(270MHz，DMSO)δ7.17(1H，d，J＝9.0Hz，4-H)，6.45-6.48(2H，m，5and 7-H)，4.95(2H，s，NCH2)，4.87(2H，s，NH2)，4.17(2H，q，J＝7.1Hz，CH2)，2.36(3H，s，CH3)，1.22(3H，t，J＝7.1Hz，CH3)；APCI-MS 234(MH+)。
5-氨基-1-苯基-2-甲基苯并咪唑(XDS02086B)黃色漿體。TLC單斑Rf0.27(5％甲醇/DCM)；1H NMR(400MHz，DMSO)δ7.26-7.32(2H，m，ArH)，7.23(1H，tt，J＝7.5，2.3Hz，ArH)，7.05-7.09(3H，m，25 ArH)，6.69(1H，d，J＝2.3Hz，4-H)，6.46(1H，dd，J＝8.2，2.3Hz，6-H)，5.30(2H，s，CH2)，4.68(2H，寬，NH2)，2.40(3H，s，CH3)；APCI-MS 238(MH+)。
6-氨基-1-苯基-2-甲基苯并咪唑(XDS02086A)黃色固體。TLC單斑Rf0.30(5％甲醇/DCM)；1H NMR(400MHz，DMSO)δ7.28-7.32(2H，m，ArH)，7.23(1H，tt，J＝7.5，2.3Hz，ArH)，7.17(1H，d，J＝8.2，Hz，ArH)，7.06(2H，m ArH)，6.43-6.46(2H，m，ArH)，5.26(2H，s，CH2)，4.63(2H，s，NH2)，2.40(3H，s，CH3)；APCI-MS 238(MH+)。
5-氨基-4-氯-1，2-二甲基苯并咪唑的制備(XDS02096A)向在IPA(15mL)中的5-氨基-1，2-二甲基苯并咪唑(600mg，3.73mmol)溶液加入N-氯代琥珀酰亞胺(548mg，4.10mmol)?；旌衔镌谑覝財嚢?0分鐘，用DCM(80mL)稀釋并且用5％碳酸氫鈉和水洗滌。將暗褐色溶液用硫酸鈉干燥然后真空濃縮得到褐色殘留物，經(jīng)受快速色譜法的處理(甲醇-DCM梯度洗脫)。得到黃色固體(220mg，33％)。TLC單斑Rf0.69 5(10％甲醇/DCM)；1H NMR(270MHz，DMSO)δ7.16(1H，d，J＝7.9Hz，ArH)，6.72(1H，d，J＝7.9，Hz，ArH)，4.90(2H，s，NH2)，3.64(3H，s，NCH3)，2.40(3H，s，CH3)；APCI-MS196(MH+)。
合成N-苯并咪唑芳基磺酰胺衍生物的通常方法向在DCM中的芳基磺酰氯(1.1當(dāng)量)溶液加入吡啶(2.2當(dāng)量)和催化量的DMAP，隨后加入相應(yīng)的胺(1當(dāng)量)。在氮氣下室溫攪拌反應(yīng)混合物4-16小時，然后在TLC顯示反應(yīng)完成后在乙酸乙脂和5％碳酸氫鈉之間分配。用鹽水洗滌有機層，用硫酸鈉干燥，然后真空濃縮得到粗制產(chǎn)物的固體或濃漿。然后使用快速色譜法純化化合物(甲醇-DCM梯度洗脫)得到芳基磺酰胺晶體固體。產(chǎn)量范圍50-80％。
3-氯-N-(1，2-二甲基-1H-苯并咪唑-6-基)-2-甲基苯磺酰胺(STX975，XDS02001)白色晶體固體。Mp 265-266℃；TLC單斑Rf0.43(5％甲醇/DCM)；HPLC純度＞99％(在10％水-甲醇中tR2.min)；1H NMR(270MHz，DMSO)δ10.4(1H，s，NH)，7.84(1H，d，J＝7.9Hz，ArH)，7.67(1H，d，J＝7.9Hz，ArH)，7.34(1H，d，J＝8.2Hz，ArH)，7.32(1H，t，J＝7.9Hz，ArH)，7.14(1H，d，J＝2Hz，ArH)，6.80(1H，25dd，J＝8.2，2.0Hz，ArH)，3.61(3H，s，NCH3)，2.64(3H，s，CH3)，2.46(3H，s，CH3)；APCI-MS 348(M-H+)；C16H17ClN3O2S(MH+)的FAB-HRMS計算值350.0730，測定值350.0749。
3-氯-N-(1，2-二甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-2-甲基苯磺酰胺(STX976，XDS02003)白色晶體固體。Mp 283-283.5℃；TLC單斑Rf0.38(5％甲醇/DCM)；HPLC純度＞99％(在10％水-甲醇中tR2.0min)；1H NMR(270MHz，DMSO)δ10.3(1H，s，NH)，7.77(1H，d，J＝7.6Hz，ArH)，7.66(1H，d，J＝7.6Hz，ArH)，7.32(1H，d，J＝8.4Hz，ArH)，7.30(1H，t，J＝7.6Hz，ArH)，7.16(1H，d，J＝2Hz，ArH)，6.90(1H，dd，J＝8.4，2.0Hz，ArH)，3.64(3H，s，NCH3)，2.64(3H，s，CH3)，2.44(3H，s，CH3)；APCI-MS 348(M-H+)；FAB-HRMScalcd for C16H17ClN3O2S(MH+)的FAB-HRMS計算值350.0730，測定值350.0747。
3-氯-N-(4-氯-1，2-二甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-2-甲基苯磺酰胺(STX1121，XDS02102B)灰白色晶體固體。TLC單斑0.50(10％甲醇/DCM)；HPLC純度95％(在20％水-甲醇中tR2.1min)；1H NMR(270MHz，DMSO)δ10.1(1H，s，NH)，7.70(1H，dd，J＝7.7，1.7Hz，ArH)，7.56(1H，dd，J＝7.8，1.7Hz，ArH)，7.39(1H，d，J＝8.2Hz，ArH)，7.25(1H，t，J＝7.7Hz，ArH)，7.04(1H，d，J＝8.2Hz，ArH)，3.69(3H，s，10 NCH3)，2.67(3H，s，CH3)，2.51(3H，s，CH3)；APCI-MS 384(MH+)。
N-(1，2-二甲基-1H-苯并咪唑-5-yl)-4-丙苯磺酰胺(STX1112，XDS02088)白色晶體固體。TLC單斑Rf0.38(5％甲醇/DCM)；HPLC純度＞99％(在20％水-甲醇中tR2.1min)；1H NMR(270MHz，DMSO)δ9.90(1H，s，NH)，7.58(2H，d，J＝8.3Hz，ArH)，7.29-7.32(3H，m，ArH)，7.17(1H，d，J＝1.5Hz，ArH)，6.91(1H，dd，J＝8.6，2.0Hz，ArH)，3.64(3H，s，NCH3)，2.55(2H，m，CH2)，2.50(3H，s，CH3)，1.55(2H，六重峰，J＝7.6Hz，CH2)，0.84(3H，t，J＝7.6Hz，CH3)；APC I-MS 344(MH+)。
2，5-二氯-N-(1，2-二甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-苯磺酰胺(STX1113，XDS02089)白色晶體固體。TLC單斑Rf0.67(10％甲醇/DCM)；HPLC純度99％(在20％水-甲醇中tR2.0min)；1H NMR(270MHz，DMSO)δ10.5(1H，s，25NH)，7.84(1H，t，J＝1.4Hz，ArH)，7.68(2H，d，J＝2.0Hz，ArH)，7.35(1H，d，J＝8.5Hz，ArH)，7.21(1H，d，J＝2.0Hz，ArH)，6.97(1H，dd，J＝8.2，2.0Hz，ArH)，3.64(3H，s，NCH3)，2.45(3H，s，CH3)；APCI-MS 370(MH+)。
2，4-二氯-N-(1，2-二甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-苯磺酰胺(STX1114，XDS02090)灰白色晶體固體。TLC單斑Rf0.59(10％甲醇/DCM)；HPLC純度＞99％(在20％水-甲醇中tR2.0min)；1H NMR(270MHz，DMSO)610.4(1H，s，NH)，7.88(1H，d，J＝8.7Hz，ArH)，7.84(2H，d，J＝1.9Hz，ArH)，7.52(1H，dd，J＝8.7，1.9Hz，ArH)，7.33(1H，d，J＝8.5Hz，ArH)，7.20(1H，d，J＝1.7Hz，ArH)，6.95(1H，dd，J＝8.7，1.7Hz，ArH)，3.63(3H，s，NCH3)，2.45(3H，s，CH3)；APCI-MS 370(MH+)。
4-溴-N-(1，2-二甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-2-甲基苯磺酰胺(STX1115，XDS02091)白色晶體固體。TLC單斑Rf0.67(10％甲醇/DCM)；HPLC純度＞99％(在20％水-甲醇中tR2.1min)；1H NMR(270MHz，DMSO)δ10.1(1H，s，5NH)，7.62-7.69(2H，m，ArH)，7.50(1H，dd，J＝8.5，2.2Hz，ArH)，7.32(1H，d，J＝8.5Hz，ArH)，7.14(1H，d，J＝1.9Hz，ArH)，6.89(1H，dd，J＝8.5，1.9Hz，ArH)，3.63(3H，s，NCH3)，2.55(3H，s，CH3)，2.45(3H，s，CH3)；APCI-MS394(MH+)。
N-(1，2-二甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-4-苯基苯磺酰胺(STX1116，XDS02092)白色晶體固體。TLC單斑Rf0.72(5％甲醇/DCM)；HPLC純度＞99％(在20％水-甲醇中tR2.1min)；1H NMR(270MHz，DMSO)δ10.0(1H，s，NH)，7.67-7.82(6H，m，ArH)，7.41-7.50(3H，m，ArH)，7.33(1H，d，J＝8.5Hz，ArH)，7.22(1H，d，J＝1.9Hz，ArH)，6.95(1H，dd，J＝8.5，1.9Hz，ArH)，3.64(3H，s，NCH3)，2.4415(3H，s，CH3)；APCI-MS 378(MH+)。
3-氯-N-(1-乙基-2-甲基-1H-苯并咪唑-6-基)-2-甲基苯磺酰胺(STX1110，XDS02084)灰白色固體。TLC單斑Rf0.45(8％甲醇/DCM)；HPLC純度＞99％(在20％水-甲醇中tR2.2min)；1H NMR(270MHz，DMSO)δ10.4(1H，s，NH)，7.84(1H，d，J＝7.9Hz，ArH)，7.67(1H，d，J＝7.8Hz，ArH)，7.35(1H，d，J＝8.5Hz，ArH)，7.32(1H，t，J＝7.9Hz，ArH)，7.10(1H，d，J＝2.2Hz，ArH)，6.82(1H，dd，J＝8.5，2.1Hz，ArH)，4.09(2H，q，J＝7.1Hz，CH2)，2.61(3H，s，CH3)，2.46(3H，s，CH3)，1.18(3H，t，J＝7.1Hz，CH3)；APCI-MS 364(MH+)。
3-氯-N-(1-乙基-2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-2-甲基苯磺酰胺(STX1111，XDS02085)
灰白色固體。TLC單斑Rf0.42(8％甲醇/DCM)；HPLC純度＞99％(在20％水-甲醇中tR2.2min)；1H NMR(270MHz，DMSO)δ10.3(1H，s，NH)，7.78(1H，d，J＝7.9Hz，ArH)，7.66(1H，d，J＝7.9Hz，ArH)，7.36(1H，d，J＝8.2Hz，ArH)，7.32(1H，t，J＝7.9Hz，ArH)，7.16(1H，d，J＝1.9Hz，ArH)，6.90(1H，dd，J＝7.9，2.0Hz，ArH)，4.12(2H，q，J＝7.1Hz，CH2)，2.64(3H，s，CH3)，2.46(3H，s，CH3)，1.23(3H，t，J＝7.1Hz，CH3)；APCI-MS364(MH+)。
3-氯-N-(1-異丁基-2-甲基-1H-苯并咪唑-6-yl)-2-甲基苯磺酰胺(STX1119，XDS02100)灰白色固體。TLC單斑Rf0.57(8％甲醇/DCM)；HPLC純度99％(在20％水-甲醇中tR2.25min)；1H NMR(270MHz，DMSO)δ10.4(1H，s，NH)，7.80(1H，d，J＝8.9Hz，ArH)，7.66(1H，d，J＝8.8Hz，ArH)，7.36(1H，d，J＝8.5Hz，ArH)，7.29(1H，t，J＝7.9Hz，ArH)，7.03(1H，d，J＝1.9Hz，ArH)，6.84(1H，dd，J＝8.5，1.8Hz，ArH)，3.85(2H，d，J＝7.2Hz，NCH2)，2.61(3H，s，CH3)，2.45(3H，sf CH3)，1.91(1H，m，CH)，0.81(6H，d，J-7.0Hz，2xCH3)；APCI-MS 392(MH+)。
3-氯-N-(1-異丁基-2-甲基-1H-苯并咪唑-5-yl)-2-甲基苯磺酰胺(STX1120，XDS02101)灰白色固體。TLC單斑Rf0.52(8％甲醇/DCM)；HPLC純度99％(在20％水-甲醇中tR2.3min)；1H NMR(270MHz，DMSO)δ10.3(1H，s，NH)，7.80(1H，15d，J＝7.9Hz，ArH)，7.68(1H，d，J＝7.9Hz，ArH)，7.38(1H，d，J-8.8Hz，ArH)，7.33(1H，t，J＝7.9Hz，ArH)，7.16(1H，d，J＝1.9Hz，ArH)，6.90(1H，dd，J＝8.7，1.9Hz，ArH)，3.91(2H，d，J＝7.3Hz，NCH2)，2.62(3H，s，CH3)，2.47(3H，s，CH3)，2.05(1H，m，CH)，0.83(6H，d，J＝7.0Hz，2xCH3)；APCI-MS 392(MH+)。
-乙酸乙酯(STX977，XDS02015)灰白色固體。TLC單斑Rf0.46(6％甲醇/DCM)；HPLC純度＞99％(在10％水-甲醇中tR2.0min)；1H NMR(270MHz，DMSO)δ10.4(1H，s，NH)，7.82(1H，d，J＝8.0Hz，ArH)，7.67(1H，d，J＝8.0Hz，ArH)，7.37(1H，d，J＝8.5Hz，ArH)，7.30(1H，t，J＝8.0Hz，ArH)，7.11(1H，d，J＝2.0Hz，ArH)，6.83(1H，dd，J＝8.5，2.0Hz，ArH)，5.09(2H，s，NCH2)，4.16(2H，q，J＝7.1Hz，CH2)，2.62(3H，s，CH3)，2.45(3H，s，CH3)，1.21(3H，t，J＝7.1Hz，CH3)；APCI-MS 420(M-H+)；C19H21CIN3O4S(MH+)的FAB-HRMS計算值422.0941，測定值(found)422.0942。
-乙酸乙酯(STX978，XDS02017)灰白色固體。TLC單斑Rf0.40(6％methanol/DCM)；HPLC純度99％(在10％水-甲醇中tR2.0min)；1H NMR(270MHz，DMSO)δ10.3(1H，s，NH)，7.80(1H，d，J＝7.9Hz，ArH)，7.67(1H，d，J＝7.9Hz，ArH)，7.29-7.34(2H，m，ArH)，7.18(1H，d，J＝1.7Hz，ArH)，6.90(1H，dd，J＝8.6，1.7Hz，ArH)，5.11(2H，s，NCH2)，4.15(2H，q，J＝7.1Hz，CH2)，2.64(3H，s，CH3)，2.40(3H，s，CH3)，1.19(3H，t，J＝7.1Hz，CH3)；APCI-MS 420(M-H+)；C19H21ClN3O4S(MH+)的FAB-HRMS計算值422.0941，測定值(found)422.0944。
3-氯-N-(1-苯基-2-甲基-1H-苯并咪唑-6-yl)-2-甲基苯磺酰胺(STX1117，XDS02098)灰白色固體。TLC單斑Rf0.70(10％甲醇/DCM)；HPLC純度99％(在20％水-甲醇中tR2.2min)；1H NMR(270MHz，DMSO)δ10.4(1H，s，NH)，7.66(1H，d，J＝7.9Hz，ArH)，7.64(1H，d，J＝7.9Hz，ArH)，7.30-7.39(4H，m，ArH)，7.21(1H，t，J＝7.9Hz，ArH)，7.11(1H，d，J＝2.0Hz，ArH)，7.02-7.06(2H，m，ArH)，6.83(1H，dd，10J＝7.9，2.0Hz，ArH)，5.34(2H，s，NCH2)，2.58(3H，s，CH3)，2.45(3H，s，CH3)；APCI-MS 426(MH+)。
3-氯-N-(1-苯基-2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-2-甲基苯磺酰胺(STX1118，XDS02099)灰白色固體。TLC單斑Rf0.65(10％甲醇/DCM)；HPLC純度99％(在10％水-甲醇中tR2.2min)；1H NMR(270MHz，DMSO)δ10.3(1H，s，NH)，7.80(1H，d，J＝7.9Hz，ArH)，7.67(1H，d，J＝7.9Hz，ArH)，7.25-7.35(5H，m，ArH)，7.19(1H，d，J＝1.9Hz，ArH)，7.06-7.09(2H，m，ArH)，6.87(1H，dd，J＝8.5，1.9Hz，ArH)，5.38(2H，s，NCH2)，2.62(3H，s，CH3)，2.45(3H，s，CH3)；APCI-MS 426(MH+)。
3-氯-N-(2-三氟甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-2-甲基苯磺酰胺(STX879，XDS01173)白色晶體固體。TLC單斑Rf0.58(20％乙酸乙酯/DCM)；HPLC純度99％(在20％水-甲醇中tR2.4min)；1H NMR(270MHz，DMSO)δ13.9(1H，s，NH)，10.7(1H，s，NH)，7.85(1H，d，J＝8.0Hz，ArH)，7.68(1H，d，J＝8.0Hz，ArH)，7.60(1H，d broad，J＝8.1Hz，ArH)，7.34(2H，m，ArH)，7.10(1H，d，J＝8.3Hz，ArH)，2.64(3H，s，CH3)；APCI-MS 388(M-H+)；C15H12ClF3N3O2S(MH+)的FAB-HRMS計算值390.0291，測定值390.0291.
3-氯-N-(2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)-2-甲基苯磺酰胺的制備(STX985，XDS02026)在上文描述的條件下，通過HNMR判斷3-氯-2-甲基苯磺酰氯(2當(dāng)量)和2-甲基苯并咪唑(1當(dāng)量)偶合反應(yīng)產(chǎn)生的混合物中3-氯-N-[1-(3-氯-2-甲基苯基磺酰)-2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基]-2-甲基-苯磺酰胺和3-氯-N-[1-(3-氯-2-甲基苯基磺?；?-2-甲基-1H-苯并咪唑-6-基]-2-甲基-苯磺酰胺的比例為1∶1。1H NMR(270MHz，DMSO)δ10.7(2H，s，2xNH)，7.86-7.96(3H，m，ArH)，7.65-7.78(5H，m，ArH)，7.52-7.58(5H，m，ArH)，7.25-7.40(3H，m，ArH)，7.07(2H，t，J＝8.2Hz，ArH)，2.61(3H，s，CH3)，2.58(3H，s，CH3)，2.54(6H，s，2xCH3)，2.39(3H，s，CH3)，2.33(3H，s，CH3)。將混合物(200mg)溶解在THF(15mL)中，加入N-羥基苯并三唑(200mg)。在室溫攪拌48小時后，在乙酸乙酯和5％碳酸氫鈉之間分配混合物。用鹽水洗滌有機相，用硫酸鈉干燥然后真空濃縮得到黃色殘留物，用快速色譜法純化該殘留物(甲醇/DCM梯度洗脫)。得到灰白色無定形粉末。TLC單斑Rf0.38(10％甲醇/DCM)；HPLC純度99％(在10％水-甲醇中tR2.0min in)；1H NMR(270MHz，DMSO)δ12.1(1H，s，NH)，10.3(1H，s，NH)，7.78(1H，d，J＝7.9Hz，ArH)，7.68(1H，d，J＝7.9Hz，ArH)，7.29-7.35(2H，m，ArH)，7.12(1H，s，ArH)，6.83(1H，dd，J＝8.4，1.8Hz，ArH)，2.63(3H，s，CH3)，2.41(3H，s，CH3)；APCI-MS 334(M-H+)；C15H15ClN3O2S(MH+)的FAB-HRMS計算值336.0573，測定值(found)336.0583。
N-苯并咪唑芳基磺酰胺衍生物的合成 a)Raney-Ni，NH2NH2-H2O，乙醇，室溫 b)Ac2O，AcOH，80℃ c)6N HCl，75℃d)3-CI-2-甲基-苯磺酰氯，DCM.吡啶 e)LIAIH4，THF，0℃N1-苯基-苯-1，2，4-三胺向在乙醇-四氫呋喃(150∶50mL)中的2，4-二硝基苯胺溶液(1.5g，5.8mmol)加入水合肼(2mL，65mmol)和蘭尼(氏)鎳(2.0g)。在室溫攪拌反應(yīng)混合物20分鐘，通過Cellite過濾。蒸發(fā)溶劑得到黑色殘留物，用快速色譜法純化殘留物(甲醇-DCM梯度洗脫)。得到黑色晶體固體(1.0g，87％)。Mp 128-129℃；TLC單斑Rf0.46(8％甲醇/DCM)；1H NMR(270MHz，DMSO)δ7.25(2H，t，J＝7.5Hz，ArH)，6.73(1H，s，NH)，6.61(1H，d，J＝8.3Hz，ArH)，6.49-6.55(3H，m，ArH)，5.99(1H，d，J＝2.5Hz，ArH)，5.83(1H，dd，J＝8.2，2.5Hz，ArH)，4.66(2H，s，NH2)，4.44(2H，s，NH2)；APCI-MS198(M-H+).
N-(2-甲基-1-苯基-1H-苯并咪唑-5-基)-乙酰胺將N1-苯基-苯-1，2，4-三胺(800mg，4mmol)溶解在乙酸(10mL)中，向溶液中加入醋酸酐(1.0mL)。在80℃攪拌混合物6小時，冷卻至室溫然后用5％碳酸氫鈉中和，然后用乙酸乙酯萃取。用鹽水洗滌有機相，用硫酸鎂干燥然后濃縮得到殘留物，從乙醇結(jié)晶。得到褐色晶體固體(0.85g，80％)。Mp 231-232℃；TLC單斑Rf0.39(10％甲醇/DCM)；1H NMR(270MHz，DMSO)δ9.92(1H，s，NH)，7.97(1H，d，J＝1.6Hz，ArH)，7.51-7.67(5H，m，ArH)，7.31(1H，dd，J＝8.3，1.9Hz，ArH)，7.04(1H，d，J＝8.3Hz，ArH)，2.41(3H，s，CH3)，2.05(3H，s，CH3)；APCI-MS 264(M-H+)。
2-甲基-1-苯基-1H-苯并咪唑-5-基胺在75℃攪拌在6N HCI(5mL)中的N-(2-甲基-1-苯基-1H-苯并咪唑-5-基)-乙酰胺(800mg，3mmol)溶液3小時，冷卻至室溫然后用碳酸鈉中和至pH 7，然后用乙酸乙酯萃取。用鹽水洗滌有機相，用硫酸鎂干燥然后濃縮得到暗褐色固體(600mg，90％)。Mp 145-146℃；TLC單斑Rf0.47(10％methanol/DCM)；1H NMR(270MHz，DMSO)57.58-7.64(2H，m，ArH)，7.46-7.53(3H，m，ArH)，6.82(1H，d，J＝8.5Hz，ArH)，6.76(1H，d，J＝1.9Hz，ArH)，6.51(1H，dd，J＝8.5，1.9Hz，ArH)，4.78(2H，s，NH2)，2.36(3H，s，CH3)；APCI-MS 223(M+)。
3-氯-2-甲基-N-(2-甲基-1-苯基-1H-苯并咪唑-5-基)-苯磺酰胺(STX1140，XDS02110)使用形成苯磺酰胺通常方法制備該化合物。得到淡粉色晶體固體。Mp 254-256℃；TLC單斑Rf0.62(8％甲醇/DCM)；HPLC純度＞99％(在20％水和甲醇中tR2.6min)；1H NMR(270MHz，DMSO)δ10.4(1H，s，NH)，7.83(1H，dd，J＝8.6，1.8Hz，ArH)，7.69(1H，dd，J＝8.6，1.7Hz，ArH)，7.58-7.63(5H，m，ArH)，7.34(1H，t，J＝8.0Hz，ArH)，7.28(1H，d，J＝1.9Hz，ArH)，6.90-7.00(2H，m，ArH)，2.66(3H，s，CH3)，2.36(3H，s，CH3)；APCI-MS 412。
3-氯-N-[1-(2-羥乙基)-2-甲基-1H-苯并咪唑-6-基]-2-甲基苯磺酰胺(STX1141，XDS02115)在0℃向在無水THF(10mL)中的[6-(3-氯-2-甲基-苯磺酰氨基)-2-甲基-苯并咪唑-1-基]-乙酸乙酯(100mg，0.237mmol)溶液加入LiAIH4(54mg，1.42mmol)。在0℃攪拌混合物0.5小時，用飽和氯化銨溶液淬滅，用6N HCI中和然后用乙酸乙酯萃取。鹽水洗滌有機相，用硫酸鈉干燥然后真空濃縮得到淡粉色晶體固體(82mg，91％)。Mp 213-214.5℃；TLC單斑Rf0.39(12％甲醇/DCM)；HPLC純度＞99％(在20％水-甲醇中tR2.010min)；1H NMR(270MHz，DMSO)δ10.4(1H，s，NH)，7.84(1H，d，J＝7.7Hz，ArH)，7.67(1H，d，J＝7.9Hz，ArH)，7.28-7.35(2H，m，ArH)，7.15(1H，d，J＝1.9Hz，ArH)，6.80(1H，dd，J＝8.5，1.9Hz，ArH)，4.94(1H，t，J＝5.2Hz，OH)，4.10(2H，t，J＝5.0Hz，NCH2)，3.59(2H，q，J＝5.2Hz，CH2)，2.51(3H，s，CH3)，2.47(3H，s，CH3)；APCI-MS380(MH+)。
3-氯-N-[1-(2-羥基-乙基)-2-甲基-1H-苯并咪唑-5-基]-2-甲基苯磺酰胺(STX1142，XDS02116)如上文，用[5-(3-氯-2-甲基-苯磺酰氨基)-2-甲基-苯并咪唑-1-基]-乙酸乙酯(35mg，0.083mmol)的方法制備該化合物。得到白色晶體固體(22mg，89％)。Mp 245-247℃；TLC單斑Rf0.38(12％甲醇/DCM)；HPLC純度＞99％(在20％水-甲醇中tR2.0min)；1H NMR(270MHz，DMSO)δ10.3(1H，s，NH)，7.79(1H，d，J＝8.0Hz，ArH)，7.67(1H，d，J＝8.0Hz，ArH)，7.29-7.35(2H，m，ArH)，7.16(1H，s，ArH)，6.89(1H，d，J＝8.5，ArH)，4.90(1H，t，J＝5.0Hz，OH)，4.14(2H，t，J＝5.0Hz，NCH2)，3.63(2H，q，J＝5.2Hz，CH2)，2.65(3H，s，CH3)，2.48(3H，s，CH3)；APCI-MS 380(MH+)。
苯并噁唑衍生物的合成 STX 839R1＝R2＝H，R3＝CI，R4＝MeSTX 842Ri＝R2＝H，R3＝CI，R4＝MeSTX 840R-|＝R3＝R4＝H，R2＝n-丙基 STX 843R1＝R3＝R4＝H，R2＝n-丙基STX841R1＝R4＝CI，R2＝R3＝H STX 846R-|＝R4＝CI，R2＝R3＝H3-氯-2-甲基-N-(2-甲基-苯并噁唑-6-基)-苯磺酰胺，STX 839(KRB01009)的合成 向在二氯甲烷(3mL)中的3-氯-2-甲基苯磺酰氯(163mg，0.723mmol)溶液加入吡啶(140uL，1.72mmol)然后在N2下攪拌混合物5分鐘，此后加入6-氨基-2-甲基苯噁唑(102mg，0.688mmol)。在室溫攪拌所得混合物1小時，然后加入飽和的NaHCO3溶液(8mL)然后將混合物萃取入乙酸乙酯(15mL)。用鹽水洗滌有機相，干燥(Na2SO4)，過濾然后蒸發(fā)得到殘留物，使用快速色譜法純化殘留物以提供白色固體(151mg，65％)，單斑Rf0.50(60∶40 己烷∶乙酸乙酯)，mp127.1-127.5℃，HPLC純度97％(在10％水-乙腈中tR2.05min)。1H NMR(CDCI3)δ7.85(1H，dd，J＝8.1，1.1Hz)，7.53(1H，dd，J＝8.1，1.3Hz)，7.45＜1H，d，J＝8.4Hz)，7.27(1H，d，J＝2.2Hz)，7.17(1H，t，J＝7.9Hz)，6.93(1H，s，N-tf)，6.86(1H，dd，J＝8.4，2.2Hz)，2.71(3H，s)，2.58(3H，s).LCMS335.14(M-)。FAB-MS(MH+，C15H13ClN2O3S)計算值337.0413，測定值337.0406。
N-(2-甲基-苯并噁唑-6-基)-4-丙基-苯磺酰胺，STX 840(KRB01010)的合成 向在二氯甲烷中(3mL)的4n-丙基苯磺酰氯(163mg，0.744mmol)溶液加入吡啶(140uL，1.72mmol)然后在N2下攪拌混合物5分鐘，在攪拌后加入6-氨基-2-甲基苯并噁唑(105mg，0.709mmol)。室溫攪拌所得混合物1小時，然后加入飽和的NaHCO3溶液(8mL)然后將混合物萃取入乙酸乙酯(15mL)。用鹽水洗滌有機相，干燥(Na2SO4)，過濾然后蒸發(fā)得到殘留物，用快速色譜法純化以提供淡粉紅色固體(164mg，70％)，單斑Rf0.49(60∶40 己烷∶乙酸乙酯)。mp 101.7-102.3℃，HPLC純度99％(在10水-乙腈中tR2.02min)。1H NMR(CDCl3)δ7.61(2H，m)，7.43(1H，dr J＝8.4Hz)，7.37(1H；d，J＝1.8Hz)，7.19(2H，m)，6.83(2H，m)，2.57(5H，m)，1.58(2H，sextet，J＝7.3Hz)，0.88(3H，t，J＝7.3Hz).LCMS329.21(M-).FAB-MS(MH+，C17H18N2O3S)計算值331.1116，測定值(found)331.1107。2，5-二氯-(2-甲基-苯并噁唑-6-基)-苯磺酰胺，STX 841(KRB01011)的合成 向在二氯甲烷中(3mL)的2，5-二氯苯磺酰氯(174mg，0.709mmol)溶液加入吡啶(140uL，1.72mmol)然后在N2下攪拌混合物5分鐘，在攪拌后加入6-氨基-2-甲基苯并噁唑(100mg，0.675mmol)。室溫攪拌所得混合物1小時，然后加入飽和的NaHCO3溶液(8mL)然后將混合物萃取入乙酸乙酯(15mL)。用鹽水洗滌有機相，干燥(Na2SO4)，過濾然后蒸發(fā)得到殘留物，用快速色譜法純化殘留物以提供白色固體(154mg，64％)，單斑Rf0.50(60∶40 己烷∶乙酸乙酯)，mp167.0-167.3℃，HPLC純度97％(在10％水-乙腈中tR1.97min)。1H NMR(CDCI3)δ7.93(1H，d，J＝2.3Hz)，7.47(1H，d，J＝8.6Hz)，7.46-7.40(4H，m)，7.00(1H，dd，J＝8.6，2.0Hz)，2.61(3H，s).LCMS355.07(M-).FAB-MS(MH+，C14H10Cl2N2O3S)計算值356.9867，測定值356.9875。
3-氯-2-甲基-N-(2-甲基-苯并噁唑-5-基)-苯磺酰胺STX 842(KRB01014)的合成 向在二氯甲烷中(2mL)的3-氯-2-甲基苯磺酰氯(96mg，0.43mmol)溶液加入吡啶(80uL，0.40mmol)然后在N2下攪拌混合物5分鐘，在攪拌后加入5-氨基-2-甲基苯并噁唑(60mg，0.40mmol)。室溫攪拌所得混合物1小時，然后加入飽和的NaHCO3溶液(8mL)然后將混合物萃取入乙酸乙酯(15mL)。用鹽水洗滌有機相，干燥(Na2SO4)，過濾然后蒸發(fā)得到殘留物，用快速色譜法純化參禮物以提供白色固體(89mg，64％)，單斑Rf0.52(1∶1 己烷∶乙酸乙酯)，mp 180.2-180.5℃，HPLC純度99％(在10％水-乙腈中tR2.32min)。1H NMR(CDCI3)δ7.82(1H，dd，J＝8.1，1.1Hz)，7.52(1H，dd，J＝7.7，1.1Hz)，7.32(1H，d，J＝8.4Hz)，7.25(1H，d，J-2.9Hz(和CHCl3重疊))，7.14(1H，t，J＝8.1Hz)，6.99(1H，dd，J＝8.4，2.2Hz)，6.67(1H，s，N-H)，2.71(3H，s)，2.58(3H，s)。LCMS335.01(M-)，F(xiàn)AB-MS(MH+，C15H13ClN2O3S)計算值337.0413，測定值337.0420。
N-(2-甲基-苯并噁唑-5-基)-4-丙基-苯磺酰胺，STX 843(KRB01015)的合成 向在二氯甲烷中(2mL)的4n-丙基苯磺酰氯(93mg，0.43mmol)溶液加入吡啶(80uL，1.0mmol)然后在N2下攪拌混合物5分鐘，在攪拌后加入5-氨基-2-甲基苯并噁唑(60mg，0.40mmol)。室溫攪拌所得混合物1小時，然后加入飽和的NaHCO3溶液(8mL)然后將混合物萃取入乙酸乙酯(15mL)。用鹽水洗滌有機相，干燥(Na2SO4)，過濾然后蒸發(fā)得到殘留物，用快速色譜法純化殘留物以提供淡粉紅色油狀物(112mg，85％)，單斑Rf0.53(1∶1 己烷∶乙酸乙酯)。HPLC純度99+％(在10％水-乙腈中tR2.38min)1H NMR(CDCI3)δ7.64(2H，dt，J＝8.1，1.8Hz)，7.31(2H，m)，7.18(2H，d，J＝8.4Hz)，7.06(1H，dd，J＝8.6，2.4Hz)，2.59(5H，m)，1.58(2H，sextet，J＝7.3Hz)，0.89(3H，t，J＝7.3Hz).LCMS329.15(M-).FAB-MS(MH+，C17H18N2O3S)計算值331.1116，測定值331.1118。
2，5-二氯-N-(2-甲基-苯并噁唑-5-基)-苯磺酰胺，STX 846(KRB01016)的合成 向在二氯甲烷中(1.5mL)的2，5-二氯苯磺酰氯(52mg，0.21mmol)溶液加入吡啶(40μL，0.5mmol)然后在N2下攪拌混合物5分鐘，在攪拌后加入5-氨基-2-甲基苯并噁唑(30mg，0.20mmol)。室溫攪拌所得混合物1小時，然后加入飽和的NaHCO3溶液(8mL)然后將混合物萃取入乙酸乙酯(15mL)。用鹽水洗滌有機相，干燥(Na2SO4)，過濾然后蒸發(fā)得到殘留物，用快速色譜法純化殘留物以提供淡粉紅色固體(45mg，63％)，單斑Rf0.53(1∶1 己烷∶乙酸乙酯)，mp193.5-193.9℃，HPLC純度98％(在10％水-乙腈中tR2.27min)。1H NMR(CDCI3)δ7.86(1H，d，J＝2.2Hz)，7.39(4H，m)，7.12(1H，dd，J＝8.4，1.8Hz)，2.58(3H，s).LCMS355.07(M-).FAB-MS(MH+，C14H10Cl2N2O3S)計算值356.9867，測定值356.9878。
所有在上文提及的出版物引入本文作為參考。本發(fā)明所描述的方法和系統(tǒng)的不同修改和變化對于那些本領(lǐng)域技術(shù)人員來說是顯而易見的，沒有脫離本發(fā)明的范圍和精神。雖然連同特定的優(yōu)選具體方案描述了本發(fā)明，但是應(yīng)該理解本發(fā)明及權(quán)利要求不應(yīng)被這些特定的具體方案所限制。毫無疑問，所描述的實施本發(fā)明的方案的不同修改對于那些化學(xué)或相關(guān)領(lǐng)域的技術(shù)人員是顯而易見的，并在以下權(quán)利要求的范圍內(nèi)。
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權(quán)利要求
1.具有式I的化合物 式I其中R1和R2之一為下式的基團 其中R4選自H和烴基，R5是烴基并且L是任選的連接基團，或R1和R2一起形成由以下基團取代的環(huán) 其中R3是氫或取代基，并且其中X選自S，O，NR6和C(R7)(R8)，其中R6選自氫和烴基，其中R7和R8各自獨立地選自H或烴基。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，具有式II 式II
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2的化合物，其中L是不存在的。
4.根據(jù)權(quán)利要求1，2或3的化合物，其中R1和R2一起形成由以下基團取代的環(huán)
5.根據(jù)前述權(quán)利要求任一項的化合物，其中R1和R2一起形成碳環(huán)。
6.根據(jù)前述權(quán)利要求任一項的化合物，其中R1和R2一起形成六元環(huán)。
7.根據(jù)前述權(quán)利要求任一項的化合物，其中R1和R2一起形成芳環(huán)。
8.根據(jù)前述權(quán)利要求任一項的化合物，具有式III 式III。
9.根據(jù)前述權(quán)利要求任一項的化合物，具有式IV 式IV。
10.根據(jù)前述權(quán)利要求任一項的化合物，具有式V 式V。
11.根據(jù)前述權(quán)利要求任一項的化合物，具有式VI 式VI。
12.根據(jù)前述權(quán)利要求1-10任一項的化合物，具有式VII 式VII。
13.根據(jù)前述權(quán)利要求任一項的化合物，其中R3選自氫，烴基，-S-烴基，-S-H，鹵素和氮(R9)(R10)，其中R9和R10獨立地選自氫和烴基。
14.根據(jù)前述權(quán)利要求任一項的化合物，其中R3選自氫，C1-C10烷基，如C1-C6烷基，以及C1-C3烷基。
15.根據(jù)前述權(quán)利要求任一項的化合物，其中R3是-CH3。
16.根據(jù)權(quán)利要求1-7任一項的化合物，具有式VIII 式VIII。
17.根據(jù)權(quán)利要求1-7任一項的化合物，具有式IX 式IX。
18.根據(jù)權(quán)利要求1-7任一項的化合物，具有式X 式X。
19.根據(jù)權(quán)利要求1-7任一項的化合物，具有式XI 式XI。
20.根據(jù)權(quán)利要求16至19任一項的化合物，其中R3選自O(shè)，烴基，和氮(R9)，其中R9選自氫和烴基。
21.根據(jù)前述權(quán)利要求任一項的化合物，其中R3選自氧，C1-C10烯基，如C1-C6烯基，以及C1-C3烯基，NH和N-C1-C10烷基，例如N-C1-C6烷基和N-C1-C3烷基。
22.根據(jù)前述權(quán)利要求任一項的化合物，其中R4選自氫，C1-C10烷基，如C1-C6烷基，以及C1-C3烷基。
23.根據(jù)前述權(quán)利要求任一項的化合物，其中R4是氫。
24.根據(jù)前述權(quán)利要求1-21任一項的化合物，其中R4是下式的基團
25.根據(jù)前述權(quán)利要求任一項的化合物，其中R5是取代的環(huán)。
26.根據(jù)前述權(quán)利要求任一項的化合物，其中R5是碳環(huán)。
27.根據(jù)前述權(quán)利要求任一項的化合物，其中R5是六元環(huán)。
28.根據(jù)前述權(quán)利要求任一項的化合物，其中R5是為芳香環(huán)。
29.根據(jù)前述權(quán)利要求任一項的化合物，其中R5是具有下式的基團。 其中每個R11，R12，R13，R14和R15獨立地選自氫，鹵素，和烴基。
30.根據(jù)權(quán)利要求29的化合物，其中每個R11，R12，R13，R14和R15獨立地選自氫，鹵素，烷基，苯基，O-烷基，O-苯基，腈基，鹵烷基，羧基，-CO2H，CO2烷基，以及NH-乙?；?br> 31.藥物組合物，包括權(quán)利要求1-30任一項的化合物，任選的和藥學(xué)上可接受的載體，稀釋劑，賦形劑或輔料混合。
32.權(quán)利要求1-30任一項的化合物在醫(yī)藥中的用途。
33.權(quán)利要求1-30任一項的化合物在制備用于治療和11β-HSD相關(guān)的病癥或疾病的藥物中的用途。
34.根據(jù)權(quán)利要求33的用途，其中病癥和疾病選自代謝紊亂如糖尿病和肥胖；心血管障礙例如高血壓；青光眼；炎性病癥如關(guān)節(jié)炎或哮喘；免疫紊亂；骨障礙如骨質(zhì)疏松；癌癥；子宮內(nèi)發(fā)育遲緩；表觀鹽皮質(zhì)激素過度綜合癥(AME)；多囊性卵巢綜合征(PCOS)；多毛癥；粉刺；羊水過少或閉經(jīng)；腎上腺皮質(zhì)腺瘤和癌；柯興(氏)綜合征；腦垂體瘤；浸潤性癌；乳癌和子宮內(nèi)膜癌。
35.權(quán)利要求1-30任一項的化合物在制備用于治療和不利的11β-HSD水平相關(guān)的病癥或疾病的藥物中的用途。
36.權(quán)利要求1-30任一項的化合物在制備調(diào)節(jié)11β-HSD活性的藥物中的用途。
37.權(quán)利要求1-30任一項的化合物在制備用于抑制11β-HSD活性的藥物中的用途。
38.一種方法，包括(a)使用一種或多種具有權(quán)利要求1-30任一所定義的化學(xué)式的化合物進行11β-HSD試驗；(b)確定上述一種或多種候選化合物能否調(diào)節(jié)11β-HSD的活性；和(c)選擇一種或多種能調(diào)節(jié)11β-HSD活性的上述候選化合物。
39.一種方法包括(a)使用一種或多種具有權(quán)利要求1-30任一所定義的化學(xué)式的候選化合物進行11β-HSD試驗；(b)確定上述一種或多種候選化合物能否抑制11β-HSD的活性；和(c)選擇一種或多種能夠抑制11β-HSD活性的上述候選化合物。
40.根據(jù)權(quán)利要求38或39的方法鑒別的一種化合物。
41.權(quán)利要求40的化合物在醫(yī)藥中的用途。
42.藥物組合物，包括權(quán)利要求40的化合物，任選的和藥學(xué)上可接受的載體，稀釋劑，賦形劑或輔料混合。
43.權(quán)利要求40的化合物在制備用于治療和11β-HSD相關(guān)的病癥或疾病的藥物中的用途。
44.根據(jù)權(quán)利要求43的用途，其中病癥和疾病選自代謝紊亂如糖尿病和肥胖；心血管障礙例如高血壓；青光眼；炎性病癥如關(guān)節(jié)炎或哮喘；免疫紊亂；骨障礙如骨質(zhì)疏松；癌癥；子宮內(nèi)發(fā)育遲緩；表觀鹽皮質(zhì)激素過度綜合癥(AME)；多囊性卵巢綜合征(PCOS)；多毛癥；粉刺；羊水過少或閉經(jīng)；腎上腺皮質(zhì)腺瘤和癌；柯興(氏)綜合征；腦垂體瘤；浸潤性癌；乳癌和子宮內(nèi)膜癌。
45.權(quán)利要求40的化合物在制備用于治療和不利的11β-HSD水平相關(guān)的病癥或疾病的藥物中的用途。
46.權(quán)利要求33-45任一項的本發(fā)明，其中11β-HSD是11β-HSD1型。
47.權(quán)利要求33-45任一項的本發(fā)明，其中11β-HSD是11β-HSD2型。
48.根據(jù)任何一個實例在上文充分描述的化合物。
49.根據(jù)任何一個實例在上文充分描述的組合物。
50.根據(jù)任何一個實例在上文充分描述的方法。
51.根據(jù)任何一個實例在上文充分描述的用途。
全文摘要
提供具有式I的化合物其中R
文檔編號C07D277/08GK1723022SQ200380105509
公開日2006年1月18日 申請日期2003年10月23日 優(yōu)先權(quán)日2002年10月24日
發(fā)明者N·維克, X·蘇, D·伽尼薩皮萊, A·普羅希特, M·J·里德, B·V·L·波特爾 申請人:斯特里克斯有限公司