專利名稱：免疫調(diào)節(jié)化合物和相關(guān)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及免疫調(diào)節(jié)化合物和一個相關(guān)方法，重點涉及具有類似于胸腺素α-1(thymosin α-1)活性的化合物。
背景技術(shù)：
胸腺是重要的中樞淋巴器官，位于所有哺乳類動物的頸部或上胸部。在生命的早期胸腺最發(fā)達(dá)。哺乳動物和人類的胸腺在出生時相對重量最大，但絕對重量繼續(xù)增長，直到青春期開始。此后，在整個人類生命期間胸腺持續(xù)變小。通過一系列的有絲分裂，胸腺干細(xì)胞產(chǎn)生大量的小淋巴細(xì)胞(胸腺細(xì)胞)。在分裂和成熟期，分化的胸腺細(xì)胞在胸腺內(nèi)從表層的皮質(zhì)區(qū)移動到髓質(zhì)核。部分胸腺細(xì)胞在胸腺內(nèi)衰亡，但大部分進(jìn)入到外周血和淋巴系統(tǒng)。胸腺內(nèi)少量T淋巴細(xì)胞(5-10％)具有抗原識別功能，能識別外源細(xì)胞或物質(zhì)的抗原部位。某些T淋巴細(xì)胞可以溶解外源組織細(xì)胞，而另外一些T淋巴細(xì)胞能夠識別抗原的外源性，并協(xié)助骨髓介導(dǎo)的淋巴細(xì)胞(B淋巴細(xì)胞)產(chǎn)生特異性抗體。這兩種免疫應(yīng)答的T淋巴細(xì)胞分別被稱為殺傷性T淋巴細(xì)胞和輔助性T淋巴細(xì)胞。它們在組織移植和體液抗體應(yīng)答中起作用。
胸腺素α-1(thymosinα-1)是由胸腺的上皮網(wǎng)狀細(xì)胞合成和分泌的多肽激素。胸腺素α-1在幾個部位發(fā)揮作用(1)在胸腺中的干細(xì)胞前體或未成熟胸腺細(xì)胞中。(2)在外周血中的胸腺產(chǎn)生的淋巴細(xì)胞和干細(xì)胞前體中。胸腺和外周血中的干細(xì)胞前體沒有免疫活性，被稱為T0細(xì)胞。而不同的成熟期的T1和T2則具有相應(yīng)的免疫活性。胸腺素α-1促進(jìn)和加速T0細(xì)胞轉(zhuǎn)變成T1和T2細(xì)胞。此外，胸腺素α-1可通過加速分裂成熟和未成熟胸腺細(xì)胞而增加淋巴細(xì)胞總量。
因為胸腺素α-1具有上述的刺激淋巴細(xì)胞生成的作用，它具有明顯的治療功能。例如，已有報導(dǎo)胸腺素α-1在臨床上成功的用于預(yù)防和治療一級和二級感染性疾病，降低放療和化療的副作用，促進(jìn)傷口愈合，具有抗衰老和增進(jìn)醫(yī)療效果。此外，在手術(shù)和治療過程中胸腺素α-1作為輔助制劑已被成功地用于抗真菌、細(xì)菌和病毒，例如用于治療乙型肝炎和丙型肝炎。
顯然，胸腺素α-1具有可應(yīng)用的生物學(xué)功能。因此，具有與其類似生物學(xué)功能的化合物也會有相應(yīng)的藥用價值。

發(fā)明內(nèi)容
該發(fā)明包括一項或多項下列特征化合物具有氨基酸序列Ser-Asp-Ala-Ala-Val-Asp-Thr-Ser-Ser-Glu-Ile-Thr-Thr-Lys-Asp-Leu-Lys-Glu-Lys-Lys-Glu-Val-Val-Glu-Glu-Ala-Glu-Asn(序列1)，或氨基酸序列X-Ser-Asp-Ala-Ala-Val-Asp-Thr-Ser-Ser-Glu-Ile-Thr-Thr-Lys-Asp-Leu-Lys-Glu-Lys-Lys-Glu-Val-Val-Glu-Glu-Ala-Glu-Asn(序列2)，此處，X為乙?；驓洌蛉我恍蛄信c此氨基酸序列至少有70％以上同源性。在序列中，至少一個或多個肽鍵是由Asp的β-羧基和Ala的α-氨基，Asp的β-羧基和Thr的α-氨基，Asp的β-羧基和Leu的α-氨基，Glu的γ-羧基和Ile的α-氨基，Glu的α-羧基和Lys的ε-氨基，Glu的γ-羧基和Lys的α-氨基，Glu的γ-羧基和Lys的ε-氨基，Glu的γ-羧基和Val的α-氨基，Glu的γ-羧基和Glu的α-氨基，Glu的γ-羧基和Ala的α-氨基，Glu的γ-羧基和Asn的α-氨基，Thr的α-羧基和Lys的ε-氨基，Leu的α-羧基和Lys的ε-氨基，Lys的α-羧基和Lys的ε-氨基，β-Ala的羧基和Ala的α-氨基，β-Ala的羧基和Glu的α-氨基，β-Ala的羧基和Val的α-氨基所構(gòu)成?；衔锟砂谒幱幂d體組份中?；衔锞哂蠩-玫瑰花結(jié)生成或抑制實驗活性，淋巴細(xì)胞增殖活性或多重淋巴細(xì)胞反應(yīng)。化合物可被用于重建動物的免疫功能(如哺乳動物)。


圖1胸腺素α-1(滯留時間27.56分鐘)和本發(fā)明中的一個化合物(滯留時間26.04分鐘)的HPLC圖譜。
圖2A.胸腺素α-1的LCQ電噴霧質(zhì)譜。
圖2B.本發(fā)明中化合物之一胸腺肽β-Asp2，6，15(滯留時間26.04分鐘，圖1)的LCQ電噴霧質(zhì)譜。
圖3.不同濃度胸腺肽β-Asp2，6，15(滯留時間26.04分鐘)和胸腺素α-1的紅細(xì)胞玫瑰花結(jié)生成實驗結(jié)果比較。
圖4.在同一濃度的七個發(fā)明物(胸腺肽β-Asp2，6，15，胸腺肽β-Asp2，胸腺肽β-Asp6，胸腺肽β-Asp15，胸腺肽β-Asp2，6，胸腺肽β-Asp2，15和胸腺肽β-Asp6，15)和胸腺素α-1的紅細(xì)胞玫瑰花結(jié)生成結(jié)果比較。
圖5.本發(fā)明化合物之一胸腺肽β-Asp2，6，15圖示。
圖6.本發(fā)明化合物之一胸腺肽β-Asp2圖示。
圖7.本發(fā)明化合物之一胸腺肽β-Asp6圖示。
圖8.本發(fā)明化合物之一胸腺肽β-Asp15圖示。
圖9.本發(fā)明化合物之一胸腺肽β-Asp2，6圖示。
圖10.本發(fā)明化合物之一胸腺肽β-Asp2，15圖示。
圖11.本發(fā)明化合物之一胸腺肽β-Asp6，15圖示。
具體實施例方式
本發(fā)明可以有很多變化，在此我們給出例子并詳細(xì)討論。然而，我們不會限定本發(fā)明僅此幾種化合物，我們將會合理地包括所有的修飾物，衍生物和替換物。本發(fā)明的范圍將會在權(quán)力要求書中說明。
如前所述，胸腺素α-1是由胸腺的上皮網(wǎng)狀細(xì)胞合成分泌的，具有免疫調(diào)節(jié)活性的28個氨基酸的多肽激素。胸腺素α-1的氨基酸序列如下Ac-Ser-Asp-Ala-Ala-Val-Asp-Thr-Ser-Ser-Glu-Ile-Thr-Thr-Lys-Asp-Leu-Lys-Glu-Lys-Lys-Glu-Val-Val-Glu-Glu-Ala-Glu-Asn(序列3)。
值得注意的是此處所用的“同源性”是指包括在該序列中的氨基酸，但不包括該序列結(jié)構(gòu)的異構(gòu)體。例如，氨基酸序列Ser-Asp-Ala-Ala-Val-Asp-Thr-Ser-Ser-Glu-Ile-Thr-Thr-Lys-Asp-Leu-Lys-Glu-Lys-Lys-Glu-Val-Val-Glu-Glu-Ala-Glu-Asn(序列1)，此處肽鍵是由Asp的β羧基和Ala的α氨基形成的肽鍵，直到與氨基酸序列Ser-Asp-Ala-Ala-Val-Asp-Thr-Ser-Ser-Glu-Ile-Thr-Thr-Lys-Asp-Leu-Lys-Glu-Lys-Lys-Glu-Val-Val-Glu-Glu-Ala-Glu-Asn(序列1)具有100％的序列性。
胸腺素α-1的肽鍵是由氨基酸的α-氨基和相鄰的氨基酸的α-羧基縮和而成。本發(fā)明中的肽類化合物具有類似于胸腺素α-1的生物活性，但具有不同的化學(xué)結(jié)構(gòu)至少一個肽鍵不是由氨基酸的α-氨基和相鄰的氨基酸的α-羧基縮和而成。例如，肽化合物與胸腺素α-1至少有70％以上的同源，并且有一個或一個以上的肽鍵是由Asp的β-羧基和Ala的α-氨基，Asp的β-羧基和Thr的α-氨基，Asp的β-羧基和Leu的α-氨基，Glu的γ-羧基和Ile的α-氨基，Glu的α-羧基和Lys的ε-氨基，Glu的γ-羧基和Lys的α-氨基，Glu的γ-羧基和Lys的ε-氨基，Glu的γ-羧基和Val的α-氨基，Glu的γ-羧基和Glu的α-氨基，Glu的γ-羧基和Ala的α-氨基，Glu的γ-羧基和Asn的α-氨基，Thr的α-羧基和Lys的ε-氨基，Leu的α-羧基和Lys的ε-氨基，Lys的α-羧基和Lys的ε-氨基，β-Ala的羧基和Ala的α-氨基，β-Ala的羧基和Glu的α-氨基，β-Ala的羧基和Val的α-氨基所構(gòu)成。
值得注意的是此處所用“同源性”是指包括在該序列中的氨基酸，不包括該序列結(jié)構(gòu)的異構(gòu)體。例如，氨基酸序列Ser-Asp-Ala-Ala-Val-Asp-Thr-Ser-Ser-Glu-Ile-Thr-Thr-Lys-Asp-Leu-Lys-Glu-Lys-Lys-Glu-Val-Val-Glu-Glu-Ala-Glu-Asn(序列1)，此序列中的一個肽鍵由Asp的β-羧基和Ala的α-氨基形成的肽鍵，該序列與Ser-Asp-Ala-Ala-Val-Asp-Thr-Ser-Ser-Glu-Ile-Thr-Thr-Lys-Asp-Leu-Lys-Glu-Lys-Lys-Glu-Val-Val-Glu-Glu-Ala-Glu-Asn(序列1)(其中一個肽鍵是Asp的β-羧基與Thr的α-氨基形成)兩者具有100％同源性。
此處用“多肽”一詞，在廣義上來講是指一個能夠被一個細(xì)胞基因編碼的氨基酸序列，或者是重組核苷酸序列所編碼的氨基酸序列，或者是能以化學(xué)合成方法得到的氨基酸序列。例如本發(fā)明中的多肽是能夠被化學(xué)合成，其純化物不含脂類、蛋白質(zhì)、核酸或其他細(xì)胞中的物質(zhì)(在細(xì)胞中通常與多肽共存的物質(zhì))。此外，此處所述的多肽可能是大肽的一部分，或是一個完整多肽的一部分。
如上所述，本發(fā)明中的肽化合物具有類似于胸腺素α-1的生物活性。氨基酸序列可以是X-Ser-Asp-Ala-Ala-Val-Asp-Thr-Ser-Ser-Glu-Ile-Thr-Thr-Lys-Asp-Leu-Lys-Glu-Lys-Lys-Glu-Val-Val-Glu-Glu-Ala-Glu-Asn(序列2)，或相應(yīng)的氨基酸序列衍生物(1)該序列至少有70％的同源性化合物；(2)有類似于胸腺素α-1的E玫瑰花結(jié)形成活性(免疫調(diào)節(jié)活性)。此處X為乙酰基或氫；(3)并且有一個或一個以上的肽鍵是由Asp的β-羧基和Ala的α-氨基，Asp的β-羧基和Thr的α-氨基，Asp的β-羧基和Leu的α-氨基，Glu的γ-羧基和Ile的α-氨基，Glu的α-羧基和Lys的ε-氨基，Glu的γ-羧基和Lys的α-氨基，Glu的γ-羧基和Lys的ε-氨基，Glu的γ-羧基和Val的α-氨基，Glu的γ-羧基和Glu的α-氨基，Glu的γ-羧基和Ala的α-氨基，Glu的γ-羧基和Asn的α-氨基，Thr的α-羧基和Lys的ε-氨基，Leu的α-羧基和Lys的ε-氨基，Lys的α-羧基和Lys的ε-氨基，β-Ala的羧基和Ala的α-氨基，β-Ala的羧基和Glu的α-氨基，β-Ala的羧基和Val的α-氨基所構(gòu)成。
本發(fā)明的另一體現(xiàn)形式是肽類化合物氨基酸序列至少75％類似于X-Ser-Asp-Ala-Ala-Val-Asp-Thr-Ser-Ser-Glu-Ile-Thr-Thr-Lys-Asp-Leu-Lys-Glu-Lys-Lys-Glu-Val-Val-Glu-Glu-Ala-Glu-Asn(序列2)。另一種情況是本發(fā)明中肽類化合物是氨基酸序列與X-Ser-Asp-Ala-Ala-Val-Asp-Thr-Ser-Ser-Glu-Ile-Thr-Thr-Lys-Asp-Leu-Lys-Glu-Lys-Lys-Glu-Val-Val-Glu-Glu-Ala-Glu-Asn(序列2)至少80％以上同源性。同樣在不同的形式中本發(fā)明中肽類化合物的氨基酸序列至少有85％同源于X-Ser-Asp-Ala-Ala-Val-Asp-Thr-Ser-Ser-Glu-Ile-Thr-Thr-Lys-Asp-Leu-Lys-Glu-Lys-Lys-Glu-Val-Val-Glu-Glu-Ala-Glu-Asn(序列2)。進(jìn)而本發(fā)明中肽類化合物具有90％同源于X-Ser-Asp-Ala-Ala-Val-Asp-Thr-Ser-Ser-Glu-Ile-Thr-Thr-Lys-Asp-Leu-Lys-Glu-Lys-Lys-Glu-Val-Val-Glu-Glu-Ala-Glu-Asn(序列2)。還有，本發(fā)明中肽類化合物具有與X-Ser-Asp-Ala-Ala-Val-Asp-Thr-Ser-Ser-Glu-Ile-Thr-Thr-Lys-Asp-Leu-Lys-Glu-Lys-Lys-Glu-Val-Val-Glu-Glu-Ala-Glu-Asn(序列2)至少有95％同源性。
本發(fā)明中一種多肽氨基酸序列如下Ac-Ser-Asp-Ala-Ala-Val-Asp-Thr-Ser-Ser-Glu-Ile-Thr-Thr-Lys-Asp-Leu-Lys-Glu-Lys-Lys-Glu-Val-Val-Glu-Glu-Ala-Glu-Asn(序列3)。
該序列如圖5所示，一個肽鍵是Asp的β-羧基和Ala的α-氨基；Asp的β-羧基和Thr的α-氨基；Asp的β-羧基和Leu的α-氨基生成(以β-Asp2，6，15表示)。
本發(fā)明化合物之二氨基酸序列如下Ac-Ser-Asp-Ala-Ala-Val-Asp-Thr-Ser-Ser-Glu-Ile-Thr-Thr-Lys-Asp-Leu-Lys-Glu-Lys-Lys-Glu-Val-Val-Glu-Glu-Ala-Glu-Asn(序列3)該序列如圖6所示，有一個肽鍵是由Asp的β-羧基和Ala的α-氨基生成(以β-Asp2表示)。
本發(fā)明化合物之三氨基酸序列如下Ac-Ser-Asp-Ala-Ala-Val-Asp-Thr-Ser-Ser-Glu-Ile-Thr-Thr-Lys-Asp-Leu-Lys-Glu-Lys-Lys-Glu-Val-Val-Glu-Glu-Ala-Glu-Asn(序列3)此處如圖7所示，有一個肽鍵是由Asp的β-羧基和Thr的α-氨基生成(以β-Asp6表示)。
本發(fā)明化合物之四氨基酸序列如下Ac-Ser-Asp-Ala-Ala-Val-Asp-Thr-Ser-Ser-Glu-Ile-Thr-Thr-Lys-Asp-Leu-Lys-Glu-Lys-Lys-Glu-Val-Val-Glu-Glu-Ala-Glu-Asn(序列3)如圖8所示，有一個肽鍵是由Asp的β-羧基和Leu的α-氨基生成(以β-Asp15表示)。本發(fā)明化合物之五氨基酸序列如下Ac-Ser-Asp-Ala-Ala-Val-Asp-Thr-Ser-Ser-Glu-Ile-Thr-Thr-Lys-Asp-Leu-Lys-Glu-Lys-Lys-Glu-Val-Val-Glu-Glu-Ala-Glu-Asn(序列3)此處如圖9所示，有二個肽鍵分別是由Asp的β-羧基和Ala的α-氨基，Asp的β-羧基和Thr的α-氨基生成(以β-Asp2，6表示)。
本發(fā)明化合物之六氨基酸序列如下Ac-Ser-Asp-Ala-Ala-Val-Asp-Thr-Ser-Ser-Glu-Ile-Thr-Thr-Lys-Asp-Leu-Lys-Glu-Lys-Lys-Glu-Val-Val-Glu-Glu-Ala-Glu-Asn(序列3)如圖10所示，有二個肽鍵分別是由Asp的β-羧基和Ala的α-氨基，Asp的β-羧基和Leu的α-氨基生成(以β-Asp2，15表示)。
本發(fā)明化合物之七(胸腺肽β-Asp6，15)氨基酸序列如下Ac-Ser-Asp-Ala-Ala-Val-Asp-Thr-Ser-Ser-Glu-Ile-Thr-Thr-Lys-Asp-Leu-Lys-Glu-Lys-Lys-Glu-Val-Val-Glu-Glu-Ala-Glu-Asn(序列3)如圖11所示，有二個肽鍵分別是由Asp的β-羧基和Thr的α-氨基，Asp的β-羧基和Leu的α-氨基生成(以β-Asp6，15表示)。
本發(fā)明中的多肽是以固相化學(xué)合成法合成，并采用與之相匹配的保護(hù)基團(tuán)。例如本發(fā)明中多肽以固相法在多肽合成儀上自動合成(ABI 431A型，購自Applied Biosystems，F(xiàn)osterCity，California)。本發(fā)明采用Fmoc(9-fluorenylmethoxycarbonyl)-t-butyl化學(xué)。
每次合成使用0.25毫摩爾Fmoc-Asn(Trityl)Wang樹酯(0.40毫摩爾/克，Novabiochem，San Diego，USA)，用FastMoc程序。每個反應(yīng)瓶裝有1.0毫摩爾Fmoc氨基酸。偶聯(lián)劑為HBTU[2-(1H-benzotriazol-1-yl)-1，1，3，3-tetramethyluronium hexafluorophosphate]和HOBt(1-Hydroxybenzotriazole)。Fmoc脫保護(hù)用20％哌啶/NMP(N-metbylpyrrolidone)進(jìn)行。當(dāng)肽鏈在樹酯上連接完畢，最終切割和脫保護(hù)用20毫升三氟乙酸，酚，EDT(1，2-ethanedithiol)和水的混合物(20∶1∶0.5∶1)在室溫進(jìn)行2小時。過濾除去樹酯，用350毫升冷乙醚沉淀肽。沉淀的肽溶解于100毫升20％乙腈水溶液/1.0摩爾NH4OAc，用水稀釋到300毫升然后凍干。粗肽經(jīng)過C18柱反向HPLC(Vydac 218TP 101550)純化。合并純肽餾份(分析HPLC鑒定)并凍干。純化的肽經(jīng)質(zhì)譜鑒定分子量。
每一個肽化合物，胸腺肽β-Asp2，6，15，胸腺肽β-Asp2，胸腺肽β-Asp6，胸腺肽β-Asp15，胸腺肽β-Asp2，6，胸腺肽β-Asp2，15和胸腺肽β-Asp6，15詳細(xì)合成如下以合成胸腺肽β-Asp2，6，15為例，裝有1.0毫摩爾(4倍過量)的每種Fmoc氨基酸反應(yīng)瓶被裝在ABI 431A自動合成儀上。每個氨基酸的α-氨基由Fmoc基團(tuán)保護(hù)。側(cè)鏈官能團(tuán)保護(hù)基10，18，21，24，25，和27位的Glu殘基的γ-羧基為t-butyl酯保護(hù)；14，17，19和20位的Lys殘基的ε-氨基為t-Boc(叔丁氧羰?；?保護(hù)；2，6和15位的Asp殘基的α-羧基為t-butyl酯保護(hù)，而允許其β-羧基進(jìn)行偶聯(lián)；Ser1，8，9和Thr7，12，13的羥基為t-butyl醚保護(hù)；剩余的8個殘基-Val5，20，23，Leu16，Ile11 and Ala3，24，26的側(cè)鏈不需要保護(hù)。反應(yīng)瓶中的Fmoc氨基酸衍生物溶解之后，通過氮氣送入活化器，然后反應(yīng)器中。合成從C-端到N-端進(jìn)行。最終從樹酯切割和脫保護(hù)如前所述。
胸腺肽β-Asp2，胸腺肽β-Asp6，胸腺肽β-Asp15，胸腺肽β-Asp2，6，胸腺肽β-Asp2，15和胸腺肽β-Asp6，15詳細(xì)合成方法與胸腺肽β-Asp2，6，15的合成相同，只是Fmoc Asp氨基酸側(cè)鏈保護(hù)的位置不同，如表1所示。
表1
正如前述，以電噴霧質(zhì)譜法鑒定β-Asp2，6，15，β-Asp2，β-Asp6，β-Asp15，β-Asp2，6，β-Asp2， 15。每個肽β-Asp2，6，15，β-Asp2，β-Asp6，β-Asp15，β-Asp2，6，β-Asp2，15，的合成產(chǎn)率和質(zhì)譜分析(MW)如下胸腺肽β-Asp2，6，15的產(chǎn)率為26.0％，MH+＝3108.9(計算分子量為3108.1)；胸腺肽β-Asp2的產(chǎn)率為10.3％，MH+＝3108.6(計算分子量為3108.1)；胸腺肽β-Asp6的產(chǎn)率為8.0％，MH+＝3108.9(計算分子量為3108.1)；胸腺肽β-Asp15的產(chǎn)率為4.8％，MH+＝3108.4(計算分子量為3108.1)；胸腺肽β-Asp2，6的產(chǎn)率為15.8％，MH+＝3107.9(計算分子量為3108.1)；胸腺肽β-Asp2，15的產(chǎn)率為5.5％，MH+＝3107.2(計算分子量為3107.5)；胸腺肽β-Asp6，15的產(chǎn)率為10.1％，MH+＝3108.6(計算分子量為3108.1)。
圖1為胸腺肽β-Asp2，6，15和胸腺素α-1的HPLC圖譜比較。胸腺肽β-Asp2，6，15的滯留時間(26.04分鐘)比胸腺素α-1的滯留時間(27.56分鐘)短，表明了比較好的水溶性。分析HPLC條件如下A液0.1％TFA水溶液；B液70％乙腈/水，0.09％TFA；層析柱Vydac C184.6×250mm；洗脫條件0-20％B，1.0ml/min，洗脫30分鐘。此處注意到多肽β-Asp2，6， 15的產(chǎn)率為26％，比胸腺素α-1的產(chǎn)率19％要高。圖2B是β-Asp2，6，15的質(zhì)譜。圖2A是胸腺α-1的質(zhì)譜。MH+，MH2++，MH3+++和MH4++++分別為3107.5，1554.3，1036.5和777.6。
本發(fā)明中的多肽化合物的生物活性和藥用治療效果可通過多種體外實驗(in vitro)方法檢測，但不限于這些方法。在此，我們選用紅細(xì)胞玫瑰花結(jié)(E-Rosette)生成實驗來評估胸腺肽β-Asp2，6，15，胸腺肽β-Asp2，胸腺肽β-Asp6，胸腺肽β-Asp15，胸腺肽β-Asp2，6，胸腺肽β-Asp2，15和胸腺肽β-Asp6，15的生物活性。
紅細(xì)胞玫瑰花結(jié)(E-Rosette)實驗試劑和材料肝素溶液200單位肝素/毫升生理鹽水。
Alserver′s溶液將氯化鈉(0.42克)，葡萄糖(2.00克)，檸檬酸(0.055克)，檸檬酸二氫鈉(0.766克)溶于100毫升水中，煮沸1小時滅菌。
固定液25％戊二醛，3.5％NaHCO3和Hanks溶液(1∶1∶38)。
Hanks溶液磷酸二氫鉀(KH2PO4，0.06克)，磷酸氫二鈉(Na2HPO4，0.06克)，氯化鉀0.42克，氯化鈉8.00克和葡萄糖1.00克溶于1000毫升水中。用4％Na2HCO3調(diào)pH至7.2-7.3后，滅菌。
染色液將2毫升Gimesa染色液與6毫升Hanks溶液混合，1500rpm/分鐘離心10分鐘，取上清。
Gimesa染色液加33毫升甘油到0.50克Gimesa染料中，加熱到55-60℃使染料溶解。在室溫加入33毫升甲醇，室溫放置24小時。
豬胸腺豬胸腺取自健康的豬。
羊血收集羊靜脈血，并用抗凝劑肝素處理。加入等體積的Alserver′s溶液，儲存于4℃。
制備T-淋巴細(xì)胞溶液將剔除脂肪后新鮮豬胸腺切成小塊，加入適量的Hanks溶液。用100目分子篩過濾懸浮液。將上清液轉(zhuǎn)移到裝有三分之一體積淋巴細(xì)胞分離液的離心管中，在2000rpm離心20分鐘。收集細(xì)胞，懸浮在適量的Hanks溶液中，1500rpm離心3分鐘。此程序重復(fù)3次。淋巴細(xì)胞溶液的終濃度配制成4×106細(xì)胞/毫升Hanks。
制備羊紅細(xì)胞溶液與制備T-淋巴細(xì)胞相同，羊紅細(xì)胞被洗滌3次后，配制成4×107細(xì)胞/毫升Hanks的溶液。
肽樣品溶液用Hanks溶液溶解胸腺肽β-Asp2，6，15或胸腺素α-1，配制成200微克/毫升，20微克/毫升，2.0微克/毫升，0.2微克/毫升和0.02微克/毫升的系列溶液。胸腺肽β-Asp2，胸腺肽β-Asp6，胸腺肽β-Asp15，胸腺肽β-Asp2，6，胸腺肽β-Asp2，15和胸腺肽β-Asp6，15被配制成200微克/毫升的溶液。
方法在試管中加入0.1毫升肽樣品溶液，對照管中加入0.1毫升Hanks溶液。在樣品管和對照管中分別加入0.2毫升4×106細(xì)胞/毫升Hanks的T-淋巴細(xì)胞溶液，37℃保溫1小時。然后加入0.2毫升4×107細(xì)胞/毫升Hanks的羊紅細(xì)胞溶液，溫和混合。500rpm離心3分鐘，4℃放置過夜。去掉上清液，輕微振搖懸浮細(xì)胞，用Gimesa染色液染色。在玻片上數(shù)200個T-細(xì)胞來計算玫瑰花結(jié)細(xì)胞生成比率(RFC％)。
結(jié)果胸腺肽β-Asp2，6，15和胸腺素α-1的紅細(xì)胞玫瑰花結(jié)生成實驗結(jié)果如圖3所示。當(dāng)加入0.1毫升系列稀釋的(從0.02微克/毫升到200微克/毫升)的胸腺肽β-Asp2，6，15或胸腺素α1時，玫瑰花結(jié)細(xì)胞生成比率明顯地增加了16％到35％。在胸腺肽β-Asp2，6，15和胸腺素α1的活性之間，沒有明顯差別。
圖4顯示了胸腺肽β-Asp2，6，15(χ坐標(biāo)樣品8)，胸腺肽β-Asp2(χ坐標(biāo)樣品1)，胸腺肽β-Asp6(χ坐標(biāo)樣品2)，胸腺肽β-Asp15(χ坐標(biāo)樣品3)，胸腺肽β-Asp2，6(χ坐標(biāo)樣品4)，胸腺肽β-Asp2，15(χ坐標(biāo)樣品5)，胸腺肽β-Asp6，15(χ坐標(biāo)樣品6)和胸腺素α-1(χ坐標(biāo)樣品7)的玫瑰花結(jié)細(xì)胞生成比率。當(dāng)加入0.1毫升200微克/毫升的胸腺肽β-Asp2，6，15，胸腺肽β-Asp2，胸腺肽β-Asp6，胸腺肽β-Asp15，胸腺肽β-Asp2，6，胸腺肽β-Asp2，15和胸腺肽β-Asp6，15和胸腺素α-1時，它們之間沒有明顯差別。
因此，由于其免疫調(diào)節(jié)功能，本發(fā)明中這些胸腺肽衍生物具有明顯的治療用途。例如，它們可被用于預(yù)防和治療一級和二級感染，降低放療和化療的副作用，促進(jìn)傷口愈合，抗衰老和增加醫(yī)藥療效。此外，它們還可用于手術(shù)和臨床中的抗真菌、細(xì)菌和病毒的輔助治劑(例如，用于治療乙型肝炎和丙型肝炎)。
值得強(qiáng)調(diào)的是基于體外實驗結(jié)果(例如E玫瑰花結(jié)實驗)本發(fā)明中的多肽單獨或與其他免疫調(diào)節(jié)因子結(jié)合使用，可以推測其在體內(nèi)具有免疫增強(qiáng)的醫(yī)用效果。預(yù)計通過已有的診斷和處理原則本發(fā)明中的主體物質(zhì)在處理疾病或增進(jìn)免疫功能方面的臨床前和臨床上治療方面的應(yīng)用將會被很好的解決。
因此，本發(fā)明中的化合物或多肽將會應(yīng)用于免疫調(diào)節(jié)組份中，如重建生物功能免疫制劑中。舉例來說，重建哺乳動物免疫調(diào)節(jié)功能的一種方法包括給予哺乳動物下列具有免疫調(diào)節(jié)效果的一種化合物或肽，其氨基酸序列如下X-Ser-Asp-Ala-Ala-Val-Asp-Thr-Ser-Ser-Glu-Ile-Thr-Thr-Lys-Asp-Leu-Lys-Glu-Lys-Lys-Glu-Val-Val-Glu-Glu-Ala-Glu-Asn(序列2)，或任一序列(1)與此氨基酸序列至少有70％以上(例如，75％，80％，85％，90％，或95％)同源性，(2)有免疫調(diào)節(jié)活性，例如，紅細(xì)胞玫瑰花結(jié)生成活性。在序列中，X為乙?；驓?，至少一個或多個肽鍵是由Asp的β-羧基和Ala的α-氨基，Asp的β-羧基和Thr的α-氨基，Asp的β-羧基和Leu的α-氨基，Glu的γ-羧基和Ile的α-氨基，Glu的α-羧基和Lys的ε-氨基，Glu的γ-羧基和Lys的α-氨基，Glu的γ-羧基和Lys的ε-氨基，Glu的γ-羧基和Val的α-氨基，Glu的γ-羧基和Glu的α-氨基，Glu的γ-羧基和Ala的α-氨基，Glu的γ-羧基和Asn的α-氨基，Thr的α-羧基和Lys的ε-氨基，Leu的α-羧基和Lys的ε-氨基，Lys的α-羧基和Lys的ε-氨基。
本發(fā)明中化合物也可用于藥物組份。本發(fā)明的藥物組份可以用于任何經(jīng)過實驗證明本發(fā)明化合物有效的動物，最重要的是用于人，但本發(fā)明不限于此。本發(fā)明的藥用組份可以是多肽的中性制劑或鹽類，可作為藥物的鹽類包括游離的氨基和鹽酸、磷酸、乙酸、草酸、酒石酸等生成的鹽類，或游離的羧基和鈉、鉀、銨、鈣、氫氧化鐵、異丙胺、三乙胺、2-乙基氨基乙醇、組氨酸等生成的鹽類。
本發(fā)明中這些胸腺肽衍生物可通過各種方法或途徑達(dá)到藥用的目的，例如，給藥可以是腸道的，皮下，靜脈，肌肉，腹腔或口腔，也可以是口服給藥。藥物劑量將依據(jù)受試者年齡、健康狀況和體重、并行處理的種類、處理頻率和所需效果的性質(zhì)而定。
在此，“藥用”這一術(shù)語是指國家藥品管理局批準(zhǔn)，或列入美國藥典，或其它用于動物，特別是用于人的被公認(rèn)的藥典中。所謂載體即稀釋劑，佐劑，藥物賦形劑。該藥用載體可能是無菌的液體，如水或油，包括來自石油，動物，植物或合成品，如花生油，大豆油，礦物油，芝麻油等，以及聚乙二醇，甘油，乙二醇或其他合成溶劑。當(dāng)藥物組份以靜脈給藥時，水可以作載體。生理鹽水，水溶性葡聚糖和甘油溶液也可用作液體載體，特別是用作注射液。適當(dāng)?shù)乃幤焚x形劑包括淀粉、葡萄糖、半乳糖、蔗糖、明膠、麥芽、米、面、硅膠、天然碳酸鈣、硬脂酸鈉，單硬脂酸甘油酯、滑石粉、氯化鈉、脫脂奶粉、甘油丙二醇、水和乙醇等。該組份(如果需要的話)，也可以含有微量潤濕劑或乳化劑，或PH緩沖液，如乙酸、檸檬酸、或磷酸。抗菌劑如芐基乙醇、或甲基parabens?？寡趸瘎?，如抗壞血酸，或二硫化物。鰲合劑如乙二胺四乙酸。輔助劑，如氯化鈉或葡聚糖也在視野之內(nèi)。此外，安瓶，一次性注射器或多次使用的玻璃和塑料制品也應(yīng)包括在內(nèi)。
藥用組份可以采用不同的形式，如溶液，懸浮液，乳濁液、片劑、丸劑、膠囊、粉劑緩釋配方等。該組份也可以制成栓劑，用傳統(tǒng)的結(jié)合劑和載體，如甘油三酯，微晶纖維素，面黃著膠或明膠?？诜┬屯ǔ：袠?biāo)準(zhǔn)的載體，如藥物級別的甘露醇、半乳糖、淀粉、硬脂酸錳、糖精鈉，纖維素，碳酸錳等。藥物組份的載體在E.W.Marti所著Remington’sPharmaceutical Science”中有詳細(xì)描述。該藥物組份將含有有效量的本發(fā)明中的多肽，最好是純化物，與適當(dāng)量的載體配合，提供一個劑型以便適合于患者用藥。
在另一實體中，依據(jù)通用程序該組份被制備成適用于給動物靜脈用藥(例如人)的藥用制劑。典型例子是把適用于靜脈的組份制成無菌的等滲水緩沖溶液。如果必要的話，該組份也包括溶解劑和一個局部麻醉劑，如利多卡因減輕注射部位的疼痛。一般而言，配料被分別或以單位劑量形式混合在一起提供，例如在氣密封容器中(如安瓶，或標(biāo)示出活性試劑量的包裝物)的凍干粉劑或無水濃縮物。當(dāng)組份以輸注方式用藥時，可用含有藥用級別的水或生理鹽水的輸注瓶。當(dāng)組份以注射方式用藥時，采用注射的無菌水或(生理鹽水)的安瓶，以便在施藥前配料能被充分混合。本發(fā)明中的多肽用量將依據(jù)處理具體疾病的有效性，或疾病的性質(zhì)和狀況而定。
此外，在體外實驗中(如上述討論中所述內(nèi)容)的結(jié)果可被選擇的應(yīng)用于確立合理劑量范圍。本發(fā)明中組份的用藥劑量范圍是足以產(chǎn)生藥效的大劑量，如達(dá)到免疫調(diào)節(jié)的有效劑量。然而，劑量不能大到引起不利的副反應(yīng)，如不希望發(fā)生的交叉副反應(yīng)等。一般而言，正如前文所述，其劑量是隨年齡、身體狀況、患者性別和疾病狀況而變化。還有，免疫耐受和其它可變因素也將影響用藥劑量。此外，在制劑中精確的使用劑量也依賴于用藥途徑，疾病的嚴(yán)重程度而變，而且也應(yīng)取決于從業(yè)醫(yī)生的對具體情況的判斷。
在此，雖然我們已對本發(fā)明做了圖解和詳細(xì)說明，但這些圖解和說明可被認(rèn)為是特殊例子。所有與此發(fā)明中肽化合物相關(guān)的修飾物和衍生物都將受到相應(yīng)的保護(hù)。
序列表<110>李惟，郭莉莉，羅斯克.羅杰<120>免疫調(diào)節(jié)化合物和相關(guān)方法<130>29920-71479<150>PCT/US2003/002627<151>2003-01-29<160>3<170>專利說明3.2<210>1<211>28<212>PRT<213>人工序列<220>
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<220>
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<221>MISC_FEATURE<222>(27)..(28)<223>Glu的γ羧基與Asn的α氨基形成肽鍵<400>1Ser Asp Ala Ala Val Asp Thr Ser Ser Glu Ile Thr Thr Lys Asp Leu1 5 10 15Lys Glu Lys Lys Glu Val Val Glu Glu Ala Glu Asn20 25<210>2<211>28<212>PRT<213>人工序列<220>
<221>MISC_FEATURE<222>(1)..(1)<223>H或N端為乙酰基<220>
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<221>MISC_FEATURE<222>(27)..(28)<223>Glu的γ羧基與Asn的α氨基形成肽鍵<400>2Ser Asp Ala Ala Val Asp Thr Ser Ser Glu Ile Thr Thr Lys Asp Leu1 5 10 15Lys Glu Lys Lys Glu Val Val Glu Glu Ala Glu Asn20 25<210>3<211>28<212>PRT<213>人工序列<220>
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<220>
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<221>MISC_FEATURE<222>(27)..(28)<223>Glu的γ羧基與Asn的α氨基形成肽鍵<400>3Ser Asp Ala Ala Val Asp Thr Ser Ser Glu Ile Thr Thr Lys Asp Leu1 5 10 15Lys Glu Lys Lys Glu Val Val Glu Glu Ala Glu Asn20 2權(quán)利要求
1.化合物結(jié)構(gòu)組成(氨基酸序列)中包括X-Ser-Asp-Ala-Ala-Val-Asp-Thr-Ser-Ser-Glu-Ile-Thr-Thr-Lys-Asp-Leu-Lys-Glu-Lys-Lys-Glu-Val-Val-Glu-Glu-Ala-Glu-Asn(序列1)，或任一序列與此氨基酸序列至少有70％以上同源性的化合物。在序列中，至少一個肽鍵是由Asp的β-羧基和Ala的α-氨基，Asp的β-羧基和Thr的α-氨基，Asp的β-羧基和Leu的α-氨基，Glu的γ-羧基和Ile的α-氨基，Glu的α-羧基和Lys的ε-氨基，Glu的γ-羧基和Lys的α-氨基，Glu的γ-羧基和Lys的ε-氨基，Glu的γ-羧基和Val的α-氨基，Glu的γ-羧基和Glu的α-氨基，Glu的γ-羧基和Ala的α-氨基，Glu的γ-羧基和Asn的α-氨基，Thr的α-羧基和Lys的ε-氨基，Leu的α-羧基和Lys的ε-氨基，Lys的α-羧基和Lys的ε-氨基，β-Ala的羧基和Ala的α-氨基，β-Ala的羧基和Glu的α-氨基，β-Ala的羧基和Val的α-氨基所構(gòu)成。
2.權(quán)利要求1的結(jié)構(gòu)組成中該氨基酸序列或變體中至少一個肽鍵是由Asp的β-羧基和Ala的α-氨基構(gòu)成。
3.權(quán)利要求1的結(jié)構(gòu)組成中該氨基酸序列或變體中至少一個肽鍵是由Asp的β-羧基和Thr的α-氨基形成。
4.權(quán)利要求1的結(jié)構(gòu)組成中該氨基酸序列或變體中至少一個肽鍵是由Asp的β-羧基和Leu的α-氨基構(gòu)成。
5.權(quán)利要求1的結(jié)構(gòu)組成中該氨基酸序列或變體中至少一個肽鍵是由Glu的γ-羧基和Ile的α-氨基構(gòu)成。
6.權(quán)利要求1的結(jié)構(gòu)組成中該氨基酸序列或變體中至少一個肽鍵是由Glu的γ-羧基和Lys的ε-氨基構(gòu)成。
7.權(quán)利要求1的結(jié)構(gòu)組成中該氨基酸序列或變體中至少一個肽鍵是由Glu的γ-羧基和Lys的α-氨基構(gòu)成。
8.權(quán)利要求1的結(jié)構(gòu)組成中該氨基酸序列或變體中至少一個肽鍵是由Glu的γ-羧基和Lys的ε-氨基構(gòu)成。
9.權(quán)利要求1的結(jié)構(gòu)組成中該氨基酸序列或變體中至少一個肽鍵是由Glu的γ-羧基和Val的α-氨基構(gòu)成。
10.權(quán)利要求1的結(jié)構(gòu)組成中該氨基酸序列或變體中至少一個肽鍵是由Glu的γ-羧基和Glu的α-氨基構(gòu)成。
11.權(quán)利要求1的結(jié)構(gòu)組成中該氨基酸序列或變體中至少一個肽鍵是由Glu的γ-羧基和Ala的α-氨基構(gòu)成。
12.權(quán)利要求1的結(jié)構(gòu)組成中該氨基酸序列或變體中至少一個肽鍵是由Glu的γ-羧基和Asn的α-氨基所構(gòu)成。
13.權(quán)利要求1的結(jié)構(gòu)組成中該氨基酸序列或變體中至少一個肽鍵是由Thr的α-羧基和Lys的ε-氨基構(gòu)成。
14.權(quán)利要求1的結(jié)構(gòu)組成中該氨基酸序列或變體中至少一個肽鍵是由Leu的α-羧基和Lys的ε-氨基構(gòu)成。
15.權(quán)利要求1的結(jié)構(gòu)組成中該氨基酸序列或變體中至少一個肽鍵是由Lys的α-羧基和Lys的ε-氨基所構(gòu)成。
16.權(quán)利要求1的結(jié)構(gòu)組成中該氨基酸序列或變體中至少一個肽鍵是由β-Ala的羧基和Ala的α-氨基構(gòu)成。
17.權(quán)利要求1的結(jié)構(gòu)組成中該氨基酸序列或變體中至少一個肽鍵是由β-Ala的羧基和Glu的α-氨基構(gòu)成。
18.權(quán)利要求1的結(jié)構(gòu)組成中該氨基酸序列或變體中至少一個肽鍵是由β-Ala的羧基和Val的α-氨基所構(gòu)成。
19.肽類化合物結(jié)構(gòu)組成的氨基酸序列為X-Ser-Asp-Ala-Ala-Val-Asp-Thr-Ser-Ser-Glu-Ile-Thr-Thr-Lys-Asp-Leu-Lys-Glu-Lys-Lys-Glu-Val-Val-Glu-Glu-Ala-Glu-Asn(序列2)或序列至少有70％類似于該序列的變體，且具有E-玫瑰花活性。在序列中，①X為乙?；騂。②該序列或變體中至少一個肽鍵是由Asp的β-羧基和Ala的α-氨基，一個肽鍵是由Asp的β-羧基和Thr的α氨基，一個肽鍵是由Asp的β-羧基和Leu的α-氨基構(gòu)成，Glu的γ-羧基和Ile的α-氨基，Glu的α-羧基和Lys的ε-氨基，Glu的γ-羧基和Lys的α-氨基，Glu的γ-羧基和Lys的ε-氨基，Glu的γ-羧基和Val的α-氨基，Glu的γ-羧基和Glu的α-氨基，Glu的γ-羧基和Ala的α-氨基，Glu的γ-羧基和Asn的α-氨基，Thr的α-羧基和Lys的ε-氨基，Leu的α-羧基和Lys的ε-氨基，Lys的α-羧基和Lys的ε-氨基，β-Ala的羧基和Ala的α-氨基，β-Ala的羧基和Glu的α-氨基，β-Ala的羧基和Val的α-氨基所構(gòu)成。
20.權(quán)利要求19的結(jié)構(gòu)組成中在該序列或變體中，至少一個肽鍵是由Asp的β-羧基和Ala的α-氨基構(gòu)成，Asp的β-羧基和Thr的α-氨基，和Aspβ-羧基與Leu的α-氨基構(gòu)成。
21.權(quán)利要求19的結(jié)構(gòu)組成中該氨基酸序列或變體中至少一個肽鍵是由Glu的γ-羧基與Ile的α-氨基，Glu的γ-羧基和Lys的α-氨基，Glu的γ-羧基和Lys的ε-氨基，Glu的γ-羧基與Val的α-氨基，Glu的γ-羧基與Glu的α-氨基，Glu的γ-羧基與Ala的α-氨基，Glu的γ-羧基與Asn的α-氨基形成肽鍵。
22.權(quán)利要求19的結(jié)構(gòu)組成中該氨基酸序列或變體中至少一個肽鍵是由Glu的α-羧基與Lys的ε-氨基，Thr的α-羧基與Lys的ε-氨基，Leu的α-羧基與Lys的ε-氨基，Lys的α-羧基與Lys的ε-氨基形成肽鍵。
23.具有氨基酸序列如下的多肽Ser-Asp-Ala-Ala-Val-Asp-Thr-Ser-Ser-Glu-Ile-Thr-Thr-Lys-Asp-Leu-Lys-Glu-Lys-Lys-Glu-Val-Val-Glu-Glu-Ala-Glu-Asn(序列1)，或①具有至少與該序列有70％以上類似性②具有E-玫瑰花結(jié)活性的變體。在序列中，至少一個肽鍵是由Asp的β-羧基和Ala的α-氨基，一個肽鍵是由Asp的β-羧基和Thr的α氨基，一個肽鍵是由Asp的β-羧基和Leu的α-氨基構(gòu)成，Glu的γ-羧基和Ile的α-氨基，Glu的α-羧基和Lys的ε-氨基，Glu的γ-羧基和Lys的α-氨基，Glu的γ-羧基和Lys的ε-氨基，Glu的γ-羧基和Val的α-氨基，Glu的γ-羧基和Glu的α-氨基，Glu的γ-羧基和Ala的α-氨基，Glu的γ-羧基和Asn的α-氨基，Thr的α-羧基和Lys的ε-氨基，Leu的α-羧基和Lys的ε-氨基，Lys的α-羧基和Lys的ε-氨基，β-Ala的羧基和Ala的α-氨基，β-Ala的羧基和Glu的α-氨基，β-Ala的羧基和Val的α-氨基所構(gòu)成。
24.權(quán)利要求23中該氨基酸序列或變體中至少一個肽鍵是由Asp的β-羧基和Ala的α-氨基構(gòu)成。
25.權(quán)利要求23中該氨基酸序列或變體中至少一個肽鍵是由Asp的β-羧基和Thr的α-氨基構(gòu)成。
26權(quán)利要求23中該氨基酸序列或變體中至少一個肽鍵是由Asp的β-羧基和Leu的α-氨基構(gòu)成。
27.權(quán)利要求23中該氨基酸序列或變體中至少一個肽鍵是由Glu的γ-羧基和Ile的α-氨基構(gòu)成。
28.權(quán)利要求23中該氨基酸序列或變體中至少一個肽鍵是由Glu的α-羧基和Lys的ε-氨基構(gòu)成。
29.權(quán)利要求23中該氨基酸序列或變體中至少一個肽鍵是由Glu的γ-羧基和Lys的α-氨基構(gòu)成。
30.權(quán)利要求23中該氨基酸序列或變體中至少一個肽鍵是由Glu的γ-羧基和Lys的ε-氨基構(gòu)成。
31.權(quán)利要求23中該氨基酸序列或變體中至少一個肽鍵是由Glu的γ-羧基和Val的α-氨基構(gòu)成。
32.權(quán)利要求23中該氨基酸序列或變體中至少一個肽鍵是由Glu的γ-羧基和Glu的α-氨基構(gòu)成。
33.權(quán)利要求23中該氨基酸序列或變體中至少一個肽鍵是由Glu的γ-羧基和Ala的α-氨基構(gòu)成。
34.權(quán)利要求23中該氨基酸序列或變體中至少一個肽鍵是由Glu的γ-羧基和Asn的α-氨基構(gòu)成。
35.權(quán)利要求23中該氨基酸序列或變體中至少一個肽鍵是由Thr的α-羧基和Lys的ε-氨基構(gòu)成。
36.權(quán)利要求23中該氨基酸序列或變體中至少一個肽鍵是由Leu的α-羧基和Lys的ε-氨基構(gòu)成。
37.權(quán)利要求23中該氨基酸序列或變體中至少一個肽鍵是由Lys的α-羧基和Lys的ε-氨基構(gòu)成。
38.權(quán)利要求23中該氨基酸序列或變體中至少一個肽鍵是由β-Ala的羧基和Ala的α-氨基構(gòu)成。
39.權(quán)利要求23中該氨基酸序列或變體中至少一個肽鍵是由β-Ala的羧基和Glu的α-氨基構(gòu)成。
40.權(quán)利要求23中該氨基酸序列或變體中至少一個肽鍵是由β-Ala的羧基和Val的α-氨基構(gòu)成。
41.構(gòu)成多肽的氨基酸序列如下Ac-Ser-Asp-Ala-Ala-Val-Asp-Thr-Ser-Ser-Glu-Ile-Thr-Thr-Lys-Asp-Leu-Lys-Glu-Lys-Lys-Glu-Val-Val-Glu-Glu-Ala-Glu-Asn(序列3)此處一個肽鍵是由Asp的β-羧基和Ala的α-氨基，一個肽鍵是由Asp的β-羧基和Thr的α-氨基，一個肽鍵是由Asp的β-羧基和Leu的α-氨基構(gòu)成。
42.構(gòu)成多肽的氨基酸序列如下Ac-Ser-Asp-Ala-Ala-Val-Asp-Thr-Ser-Ser-Glu-Ile-Thr-Thr-Lys-Asp-Leu-Lys-Glu-Lys-Lys-Glu-Val-Val-Glu-Glu-Ala-Glu-Asn(序列3)此處一個肽鍵是由Asp的β-羧基和Ala的α-氨基形成。
43.構(gòu)成多肽的氨基酸序列如下Ac-Ser-Asp-Ala-Ala-Val-Asp-Thr-Ser-Ser-Glu-Ile-Thr-Thr-Lys-Asp-Leu-Lys-Glu-Lys-Lys-Glu-Val-Val-Glu-Glu-Ala-Glu-Asn(序列3)此處一個肽鍵是由Asp的β-羧基和Thr的α-氨基形成。
44.構(gòu)成多肽的氨基酸序列如下Ac-Ser-Asp-Ala-Ala-Val-Asp-Thr-Ser-Ser-Glu-Ile-Thr-Thr-Lys-Asp-Leu-Lys-Glu-Lys-Lys-Glu-Val-Val-Glu-Glu-Ala-Glu-Asn(序列3)此處一個肽鍵是由Asp的β-羧基和Leu的α-氨基形成。
45.構(gòu)成多肽的氨基酸序列如下Ac-Ser-Asp-Ala-Ala-Val-Asp-Thr-Ser-Ser-Glu-Ile-Thr-Thr-Lys-Asp-Leu-Lys-Glu-Lys-Lys-Glu-Val-Val-Glu-Glu-Ala-Glu-Asn(序列3)此處一個肽鍵是由Asp的β-羧基和Ala的α-氨基，一個肽鍵是由Asp的β-羧基和Thr的α-氨基形成。
46.構(gòu)成多肽的氨基酸序列如下Ac-Ser-Asp-Ala-Ala-Val-Asp-Thr-Ser-Ser-Glu-Ile-Thr-Thr-Lys-Asp-Leu-Lys-Glu-Lys-Lys-Glu-Val-Val-Glu-Glu-Ala-Glu-Asn(序列3)此處一個肽鍵是由Asp的β-羧基和Leu的α-氨基形成。
47.構(gòu)成多肽的氨基酸序列如下Ac-Ser-Asp-Ala-Ala-Val-Asp-Thr-Ser-Ser-Glu-Ile-Thr-Thr-Lys-Asp-Leu-Lys-Glu-Lys-Lys-Glu-Val-Val-Glu-Glu-Ala-Glu-Asn(序列3)此處一個肽鍵是由Asp的β-羧基和Thr的α-氨基，一個肽鍵是由Asp的β-羧基和Leu的α-氨基形成。
48.在哺乳動物中重組免疫功能的一種方法，該方法包括施藥給動物有效劑量產(chǎn)生免疫促進(jìn)活性的化合物，該化合物的氨基酸序列如下X-Ser-Asp-Ala-Ala-Val-Asp-Thr-Ser-Ser-Glu-Ile-Thr-Thr-Lys-Asp-Leu-Lys-Glu-Lys-Lys-Glu-Val-Val-Glu-Glu-Ala-Glu-Asn(序列2)，或①至少有70％以上類似于該序列。②具有E玫瑰花結(jié)形成活性的氨基酸序列變體。此處①X為乙?；驓?，②在該氨基酸序列或變體中一個肽鍵是由Asp的β-羧基和Ala的α-氨基，Asp的β-羧基和Thr的α-氨基，Asp的β-羧基和Leu的α-氨基，Glu的γ-羧基和Ile的α-氨基，Glu的α-羧基和Lys的ε-氨基，Glu的γ-羧基和Lys的α-氨基，Glu的γ-羧基和Lys的ε-氨基，Glu的γ-羧基和Val的α-氨基，Glu的γ-羧基和Glu的α-氨基，Glu的γ-羧基和Ala的α-氨基，Glu的γ-羧基和Asn的α-氨基，Thr的α-羧基和Lys的ε-氨基，Leu的α-羧基和Lys的ε-氨基，Lys的α-羧基和Lys的ε-氨基，β-Ala的羧基和Ala的α-氨基，β-Ala的羧基和Glu的α-氨基，β-Ala的羧基和Val的α-氨基所構(gòu)成。
49.具有下列結(jié)構(gòu)式的一種化合物Ac-Ser-Asp-Ala-Ala-Val-Asp-Thr-Ser-Ser-Glu-Ile-Thr-Thr-Lys-Asp-Leu-Lys-Glu-Lys-Lys-Glu-Val-Val-Glu-Glu-Ala-Glu-Asn(序列3)此處一個肽鍵是由Asp的β-羧基和Ala的α-氨基，一個肽鍵是由Asp的β-羧基和Thr的α-氨基，一個肽鍵是由Asp的β-羧基和Leu的α-氨基形成。
50.具有下列結(jié)構(gòu)式的一種化合物Ac-Ala-Ala-Val-Asp-Thr-Ser-Ser-Glu-Ile-Thr-Thr-Lys-Asp-Leu-Lys-Glu-Lys-Lys-Glu-Val-Val-Glu-Glu-Ala-Glu-Asn(序列3)此處一個肽鍵是由Asp的β-羧基和Ala的α-氨基形成。
51.具有下列結(jié)構(gòu)式的一種化合物Ac-Ala-Ala-Val-Asp-Thr-Ser-Ser-Glu-Ile-Thr-Thr-Lys-Asp-Leu-Lys-Glu-Lys-Lys-Glu-Val-Val-Glu-Glu-Ala-Glu-Asn(序列3)此處一個肽鍵是Asp的β-羧基和Thr的α-氨基形成。
52.具有下列結(jié)構(gòu)式的一種化合物Ac-Ala-Ala-Val-Asp-Thr-Ser-Ser-Glu-Ile-Thr-Thr-Lys-Asp-Leu-Lys-Glu-Lys-Lys-Glu-Val-Val-Glu-Glu-Ala-Glu-Asn(序列3)此處一個肽鍵是Asp的β-羧基和Leu的α-氨基形成。
53.具有下列結(jié)構(gòu)式的一種化合物Ac-Ala-Ala-Val-Asp-Thr-Ser-Ser-Glu-Ile-Thr-Thr-Lys-Asp-Leu-Lys-Glu-Lys-Lys-Glu-Val-Val-Glu-Glu-Ala-Glu-Asn(序列3)此處一個肽鍵是由Asp的β-羧基和Ala的α-氨基，一個肽鍵是由Asp的β-羧基和Thr的α-氨基形成。
54.具有下列結(jié)構(gòu)式的一種化合物Ac-Ala-Ala-Val-Asp-Thr-Ser-Ser-Glu-Ile-Thr-Thr-Lys-Asp-Leu-Lys-Glu-Lys-Lys-Glu-Val-Val-Glu-Glu-Ala-Glu-Asn(序列3)此處一個肽鍵是由Asp的β-羧基和Ala的α-氨基，一個肽鍵是由Asp的β-羧基和Leu的α-氨基形成。
55.具有下列結(jié)構(gòu)式的一種化合物Ac-Ala-Ala-Val-Asp-Thr-Ser-Ser-Glu-Ile-Thr-Thr-Lys-Asp-Leu-Lys-Glu-Lys-Lys-Glu-Val-Val-Glu-Glu-Ala-Glu-Asn(序列3)此處一個肽鍵是由Asp的β-羧基和Thr的α-氨基，一個肽鍵是由Asp的β-羧基和Leu的α-氨基形成。
全文摘要
本發(fā)明提供了免疫調(diào)節(jié)化合物和一個相關(guān)方法。
文檔編號C07K14/475GK1819839SQ03826203
公開日2006年8月16日 申請日期2003年1月29日 優(yōu)先權(quán)日2003年1月29日
發(fā)明者李惟, 郭莉莉, 羅杰·W·羅斯克 申請人:李惟, 郭莉莉